基于网络药理学和分子对接探讨龙加通络胶囊治疗缺血性中风的分子机制

目的:基于网络药理学和分子对接探讨龙加通络胶囊治疗缺血性中风物质基础及作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、中医药综合数据库(TCMID)以及查阅文献获得穿山龙、刺五加的主要活性成分;使用PharmMapper数据库预测活性成分靶点,利用人类基因综合数据库(GeneCards)和在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)得到疾病相关靶点,对活性成分靶点与疾病靶点取交集后采用DAVID数据库进行基因本体(GO)功能以及京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。最后通过AutoDock Vina软件对关键靶点和化合物进行分子对接批量处理。结果:筛选出穿山龙、刺五加针对缺血性中风的14个活性成分和179个作用靶点。蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络拓扑分析发现白蛋白(ALB)、蛋白激酶B1(AKT1)、胱天蛋白酶3(CASP3)、表皮生长因子受体(EGFR)、酪氨酸激酶(SRC)是穿山龙、刺五加治疗缺血性中风的关键靶点。GO功能分析发现龙加通络胶囊生物过程主要集中在中性粒细胞脱粒、RNA聚合酶Ⅱ启动子转录过程的正调控、凋亡过程的负调控等多个方面;KEGG信号富集分析主要涉及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)、有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)、Ras相关蛋白1(Rap1)等信号通路。分子对接结果显示活性物质与靶点蛋白之间存在较强的结合力,其中薯蓣皂苷与AKT1的结合力最强。结论:穿山龙、刺五加治疗缺血性中风具有多组分、多靶点相互协同的特点,为今后龙加通络胶囊的临床应用提供了理论基础和参考。

龙加通络胶囊多成分的定性及定量研究

采用高效液相色谱-串联质谱技术（HPLC-MS/MS）对龙加通络胶囊多种成分进行定性分析,并建立了其中6种主要药效成分的高效液相色谱-二极管阵列检测/蒸发光散射检测联用（HPLC-DAD/ELSD）定量分析方法。定性分析方法采用Kromasil C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱进行分离,以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱。定性分析结果根据质谱信息对其中18种化合物进行了成分归属,其中7种为文献未报道的化合物。定量分析方法采用相同的色谱柱和流动相在不同的梯度程序下进行梯度洗脱。DAD采用双波长同时检测：紫丁香苷（254 nm）、异嗪皮啶（350 nm）和绿原酸（350 nm）;ELSD检测薯蓣皂苷、原薯蓣皂苷和伪原薯蓣皂苷3种甾体皂苷成分,检测条件为漂移管温度：100℃,气体流速：1.8 L/min,雾化器温度：40℃。定量分析结果显示,6种成分在各自的检测范围内线性关系良好,相关系数（r）为0.999 6-0.999 9;6种成分的平均加标回收率为99.9%-100.6%,相对标准偏差（RSD）为0.90%-1.4%。精密度、重复性以及24 h稳定性考察中,6种成分的RSD均小于2%。该方法准确可靠、重复性好,可用于龙加通络胶囊多成分的质量控制。

龙加通络胶囊UPLC与HPLC指纹图谱的比较

目的:建立龙加通络胶囊的HPLC和UPLC特征指纹图谱分析方法,比较UPLC与HPLC分析龙加通络胶囊指纹图谱的效果,为快速评价龙加通络胶囊的质量,完善其质量控制方法提供依据。方法:UPLC色谱系统采用Agilent Poroshell120 Bonus-RP色谱柱(3.0 mm×50 mm,2.7μm),流动相乙腈-水溶液,梯度洗脱,检测波长203 nm,柱温25℃;HPLC色谱系统采用Agilent Zorbox ODS色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-水溶液,梯度洗脱,检测波长203 nm,柱温35℃;并分别采用UPLC与HPLC对10批龙加通络胶囊进行指纹图谱分析。结果:分别建立了龙加通络胶囊的UPLC与HPLC指纹图谱共有模式。以薯蓣皂苷为参照峰,其中UPLC标识出17个共有峰,HPLC标识出13个共有峰,10批样品的相似度均>0.9。结论:2种方法均可用于龙加通络胶囊质量控制,分离效果好、稳定性高、重复性好,UPLC较HPLC更高效、快速、灵敏。

HPLC-ELSD法测定龙加通络胶囊中的薯蓣皂苷

目的 建立HPLC法测定龙加通络胶囊中薯蓣皂苷.方法 采用Diamonsil C18（4.6 mm×250mm,5mm）色谱柱,流动相为乙腈-水（55∶45）,体积流量1.0 mL/min,设置温度90℃,气流量2.4 L/min,柱温35℃.结果 薯蓣皂苷在1.03～6.18 μg与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 8）,平均回收率100.96％,RSD=1.97％.结论 本方法简便、准确、重复性好,可用于龙加通络胶囊中薯蓣皂苷的质量控制.