芪玉三龙方通过Wnt5a/β-catenin信号通路逆转上皮—间充质转化抑制肺癌细胞侵袭和转移

目的从细胞水平探讨芪玉三龙方是否通过Wnt5a/β-catenin信号通路抑制上皮—间充质细胞转化,抑制肺癌转移。方法将重组慢病毒转染小鼠肺癌细胞建立稳定过表达Wnt5a的细胞系,同时构建Wnt5a干扰和空载细胞株。qRT-PCR法检测Wnt5a、β-catenin mRNA的表达水平。CCK8、EdU实验检测肺癌细胞的增殖活性,Transwell实验检测肺癌细胞的迁移和侵袭能力。Western blot法检测Wnt5a、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1、Vimentin、N-cadherin、E-cadherin、Snail蛋白表达水平。结果与对照组比较,芪玉三龙方组Wnt5a、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1蛋白表达水平下降(P<0.05),细胞增殖活性、侵袭和迁移能力显著降低(P<0.05)。Wnt5a过表达组中Vimentin、N-cadherin、Snail表达水平增加(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平下降(P<0.05),细胞增殖活性、侵袭和迁移能力显著增强(P<0.05);Wnt5a干扰组Vimentin、N-cadherin、Snail表达水平下降(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.05),细胞增殖活性、侵袭和迁移能力显著下降(P<0.05),明显抑制EMT的发生。芪玉三龙方处理后,Wnt5a过表达组Wnt5a、β-catenin、c-Myc、Cyclin D1、Vimentin、N-cadherin、Snail表达水平下降(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.05),细胞增殖活性、侵袭和迁移能力得到抑制。结论芪玉三龙方可能通过Wnt5a/β-catenin信号通路逆转上皮—间充质转化,抑制肺癌细胞增殖和转移。

小青龙方加减联合特异性免疫治疗小儿过敏性哮喘的疗效及其对肺功能的影响

探究小青龙方加减联合特异性免疫治疗小儿过敏性哮喘的疗效及其对肺功能的影响。方法 以近两年收治的80例小儿过敏性哮喘作为分析对象,随机设置各40例,两组采取不同治疗方式,并对比出最后的治疗效果等。结果 观察组患儿的整体治疗效果均优于对照组(P<0.05)。结论 对上述分析的患儿来分析,小青龙方加减联合特异性免疫治疗效果理想,值得推广采纳。

基于网络药理和细胞实验探索芪玉三龙方治疗非小细胞肺癌的机制

目的采用网络药理学和细胞实验探究芪玉三龙方治疗非小细胞肺癌的潜在作用机制。方法利用中药系统药理学数据库与分析平台和中医药整合数据库检索芪玉三龙方成分筛选靶点,通过美国肿瘤基因组图谱数据库获得肺癌靶点基因。构建蛋白相互作用网络,并采用基因本体数据库和京都基因和基因组百科全书数据库进行富集分析。对核心靶蛋白与化合物进行分子对接分析,并以A549细胞进行实验验证。结果芪玉三龙方对于非小细胞肺癌的潜在有效靶点162个,蛋白相互作用网络分析得到核心靶点基因20个,主要的生物学过程为对缺氧的反应、MAPK级联、炎症反应,主要的功能通路为钙信号通路、TNF信号通路、IL-17信号通路、细胞周期。分子对接结果表明,MMP9-槲皮素、PPARG-异鼠李素、PTGS2-刺芒柄花素、JUN-刺芒柄花素之间存在有效的结合亲和力。在A549细胞实验中,PCR和Western blot分析结果表明,芪玉三龙方含药血清能够促进PPAR-γmRNA和蛋白表达(P<0.05),抑制c-JUN、COX-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论芪玉三龙方通过影响A549肺癌细胞的凋亡、侵袭和肿瘤血管生成及炎症进程达到干预肺癌的作用。

双龙方干预骨髓间充质干细胞分化过程的蛋白表达

目的:研究中药复方双龙方(人参,丹参)干预骨髓间充质干细胞(MSCs)定向分化过程的蛋白表达;方法:采用双龙方含药血清对中国小型猪MSCs定向诱导分化为心肌样细胞的过程进行人工干预。对分化前后细胞蛋白进行二维电泳分离,PDQuest软件分析蛋白点的表达情况;对差异蛋白进行质谱分析并加以鉴定。结果:成功鉴定16个蛋白,通过对成功鉴定的蛋白功能进行数据库检索,表明这些蛋白的差异表达可能与中药干预过程有关;结论:双龙方含药血清对MSCs体外定向分化过程有一定的辅助作用;同时表明蛋白质组学技术可以应用于细胞增殖、分化和凋亡等过程的机理分析。

基因芯片用于组分中药新双龙方的配伍机制研究

采用基因芯片技术研究了中药新双龙方及其有效组分人参总皂苷和丹参总酚酸治疗急性心肌梗塞(AMI)大鼠的作用机制.以结扎大鼠冠脉左前降支的方法制备急性心梗模型,采用大鼠全基因组表达谱芯片分别筛选出AMI大鼠给药前及新双龙方与组分给药后的差异表达基因(Ratio>2或<0.5),通过对4组差异基因的综合分析,比较了新双龙方与组分作用方式的异同,从分子调控水平上探讨复方配伍后的增效作用,同时对与药效作用机理直接相关的钙离子转运相关的Cacna1d基因和血管修复相关的Flnb基因进行了实时荧光逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)定量.结果表明,新双龙方与2种有效组分对心梗大鼠基因表达的影响不同.对差异基因的聚类分析以及药物的调控作用比较结果均表明复方比组分的疗效更好;通路分析结果表明,新双龙方与组分均主要通过调控钙信号转导通路、丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路(MAPK)信号等通路发挥药效作用,且复方涉及更多通路;筛选出了复方与组分共同调控的靶点基因,其在3组中具有不完全相同的表达趋势,但复方具有更积极的调控作用.本研究结果从分子调控角度证实了复方新双龙方的配伍优势.

芪龙方抑制实验性大鼠胃癌发生及抗始发突变的作用

芪龙方能显著降低ＭＮＮＧ诱发的新生大鼠慢性萎缩性胃炎、胃粘膜异型增生及腺胃癌的发生率，且呈剂量依赖性。证明芪龙方具有较好的癌化学预防作用。芪龙方对致突变物诱导的ＴＡ_（９８）、ＴＡ_（１０２）的回复突变率和环磷酸胺诱发的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核形成率有显著的抑制作用。提示芪龙方对于癌的始发阶段有较强的抑制作用。

芪龙方防治MNNG诱发的大鼠胃癌及对病变胃基因表达的影响

目的:研究芪龙方对胃癌癌前疾病/胃癌的防治作用及芪龙方对病变胃粘膜 p53,c-myc,H-ras等基因表达的影响,以期从分子水平解释该药物的作用机理。方法:取新生3天的 Wistar 大鼠60只,随机分为5组,每组12只。每天每只用N。甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)溶液40μg/0.1ml 灌胃,连续10天。药物高、中、低治疗组每只分别灌服芪龙方液0.1g/0.1 ml、0.05 g/0.1 ml、0.025 g/0.1 ml。阳性对照组灌服增生平液每只0.05 g/0.1 ml,以上各组均每天1次。至第21天断乳后,阴性对照组动物灌服生理盐水10ml/kg 体重,药物高、中、低剂量组分别灌服芪龙方液10 g/kg、5 g/kg、2.5 g/kg 体重。阳性对照组灌服增生平液5 g/kg 体重,均每天1次,连续给药24周,至第56周末处死动物,胃标本常规石蜡包埋、切片,苏木素-伊红(HE)染色。对 p53,c-myc,H-ras 基因斑点杂交。结果:阴性对照组胃组织肉眼即见肿瘤。光镜下发现95%标本有萎缩性胃炎或伴胃粘膜异型增生,38%的标本发现胃腺瘤或胃腺癌。芪龙方各剂量能显著降低MNNG 诱发的大鼠胃粘膜异型增生、胃腺癌和腺胃癌的发生率(与阴性对照组比较,P<0.05),尤其是芪龙方高剂量组,未发现有腺瘤或胃癌,呈现较好的剂量效应关系。芪龙方各剂量组病变胃 p53、c-myc、H-ras 基因表达较阴性对照组均明显下降,且有明显的剂量效应关系。并且基因表达的降低与大鼠胃癌发生率减少相一致。结论:芪龙方对 MNNG 诱发的大鼠胃癌胃有较好的防治作用及对 p53,c-myc、H-ras 基因表达与胃癌发生率呈正相关。芪龙方用药后上述癌基因表达受到抑制、胃癌发生率下降,随用药剂量增加,癌基因的表达量明显下降。这从分子水平部分解释了癌基因表达与胃癌发生的关系以及芪龙方的作用机理。

双龙方对犬心脏血流动力学及心肌耗氧量的影响

目的 研究双龙方对麻醉开胸犬心脏血流动力学及心肌耗氧量的影响,探索其对心脏功能的药理作用及作用机制。方法 观察麻醉犬冠状动脉血流量、心肌耗氧量和心率等指标的变化。结果 双龙方具有增加犬冠状动脉血流量、降低心率等作用。结论 双龙方对犬心脏血流动力学及心肌耗氧量有调整和改善作用。

黄精地龙方对体外培养分化的SH-SY5Y细胞Aβ25-35损伤中的保护作用研究

目的探讨黄精地龙方（RPEWM）对体外培养分化的SH-SY5Y细胞Aβ25-35损伤的影响。方法 SH-SY5Y细胞经维甲酸诱导分化,再经Aβ25-35造成细胞老年痴呆（AD）损伤,观察不同浓度RPEWM提取液对损伤后的细胞形态学、细胞增殖情况及培养液中MDA、LDH含量,细胞中SOD、GSH-Px活性和细胞内游离钙含量、Caspase-3酶活性的影响。结果 RPEWM提取液在10-125 mg/L浓度范围内能明显抗细胞AD损伤,促进细胞增殖;RPEWM提取液30,60,90 mg/L均能明显降低MDA、LDH含量及细胞内钙离子、Caspase-3酶活性,升高细胞内SOD、GSH-Px酶活性,且呈剂量依赖性。结论 RPEWM对分化的SHSY5Y细胞Aβ25-35损伤有良好的保护作用,对AD有一定治疗作用。

黄精地龙方对体外培养SH-SY5Y细胞Aβ_(25-35)损伤钙调节相关酶活性及钙离子浓度的影响

目的探讨黄精地龙方(RPEWM)对体外培养分化的SH-SY5Y细胞Aβ_(25-35)损伤中的细胞钙调节相关酶活性及游离钙离子(Ca^(2+))浓度的影响。方法 SH-SY5Y细胞经维甲酸诱导分化,再经Aβ_(25-35)造成细胞老年痴呆(AD)损伤,在细胞AD损伤同时加入RPEWM提取液保护。观察该方对损伤后的细胞增殖,细胞凋亡,细胞Ca^(2+)-ATPase、Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATPase活性及游离钙离子浓度的影响。结果 RPEWM提取液可明显抗细胞AD损伤、抗调亡,促进细胞增殖;能升高细胞内Ca^(2+)-ATPase、Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATPase活性,降低Ca^(2+)浓度,且呈剂量依赖关系。结论 RPEWM对分化的SH-SY5Y细胞Aβ_(25-35)损伤有良好的保护作用,对AD有一定治疗效果。

旌德隐龙方氏与清代徽州宗族组织的扩大

毗邻徽州的宁国府旌德县方氏,通过重修家谱和兴建统宗祠,在清代前期完成了宗族整合。但山区开发的进程造成各支派实力的消长,使得旌德方氏的统宗行为难以维系,并推动其大宗隐龙方氏加强内部整合和寻求象征资源。隐龙方氏通过与徽州方氏联宗,在歙淳方氏真应庙会谱中占有一席之地,获得了东南区域方氏群体的认同,此举措对于维系其在旌德方氏族内的影响力产生了积极作用。通过对隐龙方氏参与会谱的利益动机加以分析,可以在歙淳方氏宗族组织扩大的表象下,对清代徽州宗族组织的扩大有更全面的认知。

芪归地龙方配合西药治疗缺血性脑卒中64例

目的:对芪归地龙方配合西药治疗缺血性脑卒中进行临床观察及疗效分析。方法:128例缺血性脑卒中患者,随机分为治疗组(常规西药治疗基础上,加用芪归地龙方)和对照组(常规西药治疗)各64例,治疗4周,观察2组治疗情况,并对临床疗效进行对照分析。结果:与对照组相比,治疗组的总有效率显著升高(P<0.05),治疗期间无明显不良反应。结论:芪归地龙方配合西药治疗缺血性脑卒中疗效较好,患者的预后质量得到明显改善。

小青龙方加减联合脱敏治疗过敏性哮喘临床疗效分析

目的:分析小青龙方加减联合脱敏治疗过敏性哮喘的临床效果。方法:西医常规治疗基础上应用小青龙方加减联合脱敏治疗与西医常规治疗对照研究。结果:(1)治疗1年后,两组治疗前后症状改善均明显,其中治疗组临床控制72.4%、显效10.4%、有效13.8%、无效3.4%、总效率为96.6%;对照组临床控制60.0%,显效16.7%,有效16.7%,无效6.6%,总效率为93.4%;两组疗效组间比较差异均无显著性(P>0.05)。(2)停止治疗连续观察临床控制病例1年后,治疗组临床控制76.2%、显效19.0%、有效4.8%、无效0%、控显率95.2%,对照组临床控制0%、显效83.3%、有效16.7%、无效0%、控显率83.3%,两组控显率比较差异有显著性(P<0.05),治疗组明显优于对照组。结论:在改善过敏性哮喘患者临床症状方面,应用小青龙方加减联合脱敏治疗具有显著疗效,停药后维持治疗效果时间长,复发少。

小青龙方加减联合特异性免疫治疗小儿过敏性哮喘的疗效及其对肺功能的影响

目的:研究小青龙方加减联合特异性免疫治疗小儿过敏性哮喘的疗效及其对肺功能的影响。方法:选取128例过敏性哮喘患儿为研究对象,采用随机数字表法分为治疗组和对照组各64例。治疗组给予小青龙方加减方联合特异性免疫治疗,对照组给予特异性免疫治疗,观察比较两组患者疗效,检测治疗前及治疗1年后,肺功能指标[最大呼吸第1s呼出气量(FEV1)、用力肺活量(FVC)、FEV1/FVC(FEV1%)]、免疫细胞因子[血清白细胞介素-4(IL-4)、血清γ干扰素(IFN-γ)]水平。结果:经过治疗,观察组患者总有效率为98.44%,优于对照组的89.06%,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗1年后,两组患者FEV1、FVC、FEV1%均较治疗前显著增高,且治疗组增幅大于对照组(P<0.05)。两组患者血清IFN-γ水平较治疗前增高,IL-4水平则较治疗前降低,且治疗组改变幅度大于对照组(P<0.05)。结论:小青龙方加减联合特异性免疫对提高小儿过敏性哮喘疗效、改善患儿肺功能和免疫功能均有一定疗效,值得临床推广应用。

小青龙方对支气管哮喘急性发作期PDCD5水平的调节作用

目的:观察在常规治疗基础上加用小青龙方治疗支气管哮喘急性发作期寒哮证患者的临床效果。方法:将40例寒哮型支气管哮喘急性发作期患者随机分为试验组和对照组各20例。试验组在常规西药治疗基础上联合小青龙方治疗,对照组给予常规西药治疗,2组疗程均为10天。观察2组患者治疗前后中医证候积分,程序化细胞死亡因子5(PDCD5),白细胞计数、中性粒细胞嗜酸性粒细胞与肺功能指标[1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV_1%)、1秒用力呼气容积占用力肺活量比率(FEV_1/FVC)、25%肺活量时用力呼气流速占预计值百分比(FEF25%)、50%肺活量时用力呼气流速占预计值百分比(FEF50%)]的变化。结果:治疗后,2组中医证候积分、PDCD5水平均较治疗前下降(P<0.01),试验组中医证候积分、PDCD5水平均低于对照组(P<0.01,P<0.05)。2组肺功能指标FEV_1%、FEV_1/FVC、FEF25%、FEF50%均较治疗前升高(P<0.05,P<0.01),试验组各指标值均高于对照组(P<0.05)。2组治疗前后白细胞计数、中性粒细胞比率、嗜酸性粒细胞比率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗前后PDCD5表达水平与FEV_1%、FEV_1/FVC均呈负相关(P<0.05,P<0.01)。结论:PDCD5参与了哮喘的气道炎症过程,其表达异常可能与哮喘未控制有关,可能成为临床上协助评估哮喘控制情况的指标或治疗的靶点。小青龙方可能通过调节PDCD5水平而有效控制哮喘发作,改善肺功能。

苗药青龙方不同提取物的镇痛抗炎作用实验研究

目的:探索苗药青龙方不同极性溶剂提取物的镇痛和抗炎活性。方法:以热板法和醋酸扭体法进行镇痛实验、二甲苯致小鼠耳肿胀实验,对青龙方的水提取物、乙醇提取物进行镇痛抗炎作用实验研究。结果:水提取物能提高小鼠痛阈值,对醋酸致小鼠扭体反应有一定抑制作用,对二甲苯致小鼠耳廓肿胀具抑制作用;乙醇提取物显著提高小鼠痛阈值,对醋酸致小鼠扭体反应具显著抑制作用,对二甲苯致小鼠耳廓肿胀有明显抑制作用。结论:同剂量下,乙醇提取物的镇痛抗炎作用优于水提取物的镇痛抗炎作用。

辛龙方联合甲氨喋呤治疗强直性脊柱炎39例

目的:观察辛龙方联合甲氨喋呤治疗强直性脊柱炎的临床疗效。方法:选择郑州市中医院骨伤科收治的强直性脊柱炎患者,按随机数字表法随机分为两组。对照组给予甲氨喋呤,1次5～10 mg,1 d 1次,1周1～2次,口服;治疗组在对照组治疗基础上给予自拟辛龙方(穿山龙、制附子、黄芪、茯苓、细辛、白芍、桂枝、白术、炙甘草、生姜片)水煎服,1 d 1剂,分2次温服。两组均治疗1个月为1个疗程,治疗1个疗程判定疗效。结果:治疗组痊愈32例,好转4例,无效3例,有效率为92. 3%;对照组痊愈34例,好转4例,无效6例,有效率为88. 4。两组对比,差别有统计学意义(P <0. 05)。结论:辛龙方联合甲氨喋呤治疗强直性脊柱炎疗效确切。