龙柴方治疗慢性乙型病毒性肝炎的研究进展

龙柴方是南京中医药大学金实教授的经验方,治疗慢性乙型病毒性肝炎的效果较好,具有清热解毒、疏肝健脾的功效,能够抗化学性肝损伤、促进肝细胞生长、抑制乙型病毒性肝炎肝病毒复制的作用。该文就慢性乙型病毒性肝炎病因病机、龙柴方组方、龙柴方临床疗效、龙柴方治疗慢性乙型病毒性肝炎的实验研究作一综述。

HPLC法同时测定龙柴方及其组方药材黄芩中4种黄酮

目的建立HPLC测定龙柴方及其组方药材黄芩中4种黄酮类成分的量的方法,控制该方药的质量。方法ODS C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇和0.4%的磷酸水溶液,梯度洗脱;柱温为30℃;体积流量1 mL/min;检测波长278 nm。结果此方法可以使样品达到基线分离,阴性样品无干扰,黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的进样量分别在0.102 6～1.026μg(r=0.996)、0.025 1～0.251μg(r=0.998)、0.010 52～0.105 2μg(r=0.998)及0.008 86～0.088 6μg(r=0.999)范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系;平均回收率分别为102.37%(RSD为1.600%)、101.31%(RSD为1.740%)、99.58%(RSD为0.886%)及100.92%(RSD为2.186%)(n=5)。结论该方法分离良好、精密准确,可用于龙柴方及其组方药材黄芩的质量控制。

金实教授应用龙柴方辨治肝炎肝纤维化经验

金实教授是南京中医药大学教授、主任医师、博士研究生导师,江苏省重点学科中医内科学学科带头人,江苏省中医药学会肝病专业委员会名誉主任委员。从事中医临床、教学和科研工作40余载,临床经验丰富,治学严谨,擅长治疗风湿免疫性疾病、自身免疫性肝病、病毒性肝炎,肝硬化等疾病。笔者有幸侍诊左右,现将金实教授治疗慢性肝炎肝纤维化经验介绍如下,以飨同道。

高效液相色谱法同时测定龙柴方中槲皮素、山柰素、异鼠李素

目的 建立高效液相色谱法测定龙柴方中槲皮素、山柰素、异鼠李素的方法,控制该方药的质量.方法 ODSC18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为甲醇和0.4％的磷酸水溶液,梯度洗脱；柱温为30℃；体积流量1mL/min;检测波长360 nm.结果 样品达到基线分离,槲皮素、山柰素、异鼠李素分别在0.5 ～4.8 μg （r=0.9999）、0.2～2.4 μg （r=0.999 8）、0.2 ～4.0 μg （r=0.9997）范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系；平均回收率分别为101.24％（RSD为2.52％）、100.53％（RSD为1.34％）和101.77％（RSD为2.66％）（n=5）.结论 该方法分离良好、精密准确,可用于龙柴方的质量控制.

“龙柴方”治疗慢性乙型肝炎25例临床研究

目的:客观评价龙柴方免煎颗粒对慢性乙型肝炎的临床疗效。方法:将48例符合诊断标准的患者随机分为治疗组和对照组,治疗组(25例)口服龙柴方免煎颗粒,对照组(23例)口服苦参素胶囊,疗程均为12周。观察治疗前后2组患者临床症状、肝功能、血清乙型肝炎病毒标志物、乙肝病毒定量的变化。结果:治疗组症状积分改善总有效率96.00%,明显优于对照组的73.91%;2组患者ALT、AST均较治疗前显著降低,组间比较无明显差异;在血清病毒标志物及乙肝病毒转阴方面及总疗效比较,组间无显著性差异。结论:龙柴方免煎颗粒对慢性乙型肝炎具有客观疗效,其疗效与苦参素相当,在症状学改善方面显优,并提示能够改善肝功能,对乙肝病毒标志物及病毒定量方面有一定的抑制作用。

龙柴方提取液及其含药血清对CCL_4诱导肝细胞损伤保护作用的研究

目的:探讨龙柴方提取液及其含药血清对CCL4诱导肝细胞损伤保护作用。方法:培养L-02型肝细胞,12h后用四氯化碳(CCL4)体外诱导肝细胞损伤,分为正常模型对照组、7组不同浓度龙柴方药液组和正常对照组,继续培养12h,MTT检测各组细胞存活力;同时,诱导肝细胞损伤模型制成后,分为CCL4模型组、正常血清对照组、龙柴方血清组、益肝灵血清组,继续培养12h,MTT检测细胞各组存活力。结果:CCL4模型组及各药液组细胞OD值均低于正常对照组(P<0.01),除龙柴方最高浓度组低于模型组外(P>0.05),其余6药液组细胞OD值均高于CCL4模型组;龙柴方血清组及益肝灵血清组细胞OD值明显高于CCL4模型组和正常血清组(P<0.05),以龙柴方血清组效果为优。结论:龙柴方提取液具有抗肝细胞损伤和促进肝细胞生长的药理作用。

胶束毛细管电泳测定龙柴方及其组方药材黄芩中4种黄酮的含量

目的:建立胶束电动毛细管色谱二极管阵列检测法(MEKC-DAD)同时测定龙柴方及其组方药材黄芩中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素含量的方法。方法:以40 mmol/L磷酸氢二钠-15 mmol/L硼砂-40 mmol/L十二烷基硫酸钠-15%乙腈-7.5%丙醇(pH 8.6)为电泳介质,未涂渍标准熔融石英毛细管(64.5 cm×75μm,有效长度56 cm)为分离通道,分离电压为20 kV,检测波长为280 nm,毛细管温度为25℃,压力进样为5 kPa,6 s。结果:此方法可以使样品达到基线分离,阴性样品无干扰,4种黄酮的浓度与峰面积的线性关系良好(r>0.9991);加样回收率为96.20%～103.65%。结论:该方法分离良好、精密准确,可用于龙柴方及其组方药材黄芩的内在质量控制。

金实运用龙柴方治疗慢性乙型病毒性肝炎经验

介绍金实教授运用龙柴方治疗慢性乙型病毒性肝炎的临床经验。认为慢性乙型病毒性肝炎属中医学"湿热疫毒"范畴,聚湿、热、郁、瘀、毒5种因素为患,其中以毒为本,邪毒深伏营血,诸邪交织,或湿热蕴邪,或瘀血阻络,或肝郁气滞,病情反复发展,迁延难愈;以龙柴方加减治疗,旨在化解瘀毒。

MEKC-DAD法同时测定龙柴方中4种成分的含量

目的：建立胶束电动毛细管色谱二极管阵列检测法（MEKC—DAD）同时测定龙柴方中特女贞苷、红景天苷、齐墩果酸、熊果酸含量的方法。方法：以60mmol／L硼砂-10mmol／L十二烷基硫酸钠（SDS）-30mmol／L羟丙基-β-环糊精（HP-／3-CD）-10％甲醇（pH=9．1）为电泳介质，未涂渍标准熔融石英毛细管（64．5cm×75I．zm，有效长度56cm）为分离通道，分离电压为20kV，检测波长为210nm，毛细管温度为25℃，压力进样为5kPa，6S。结果：样品达到基线分离，4种指标成分的浓度与峰面积的线性关系良好（r〉0．994），加样回收率为99．66％一101．21％。结论：该方法分离良好、精密准确，可用于龙柴方的内在质量控制。

高效液相色谱法同时测定龙柴方及其组成药甘草中甘草苷等5种指标成分的含量

目的建立HPLC测定龙柴方及其组方药材甘草中5种指标成分含量的方法,控制该方药的质量。方法 ODS C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈和0.05%的磷酸水溶液,梯度洗脱;柱温为30℃;流速1 mL.min-1;检测波长237 nm。结果此方法可以使样品达到基线分离,阴性样品无干扰,甘草苷、异甘草苷、甘草素、甘草酸和异甘草素分别在0.156 8～1.568μg(r=0.999 7)、0.157 1～1.571μg(r=0.999 8)、0.155 8～1.558μg(r=0.999 6)、0.187 1～1.871μg(r=0.996 9)和0.158 1～1.581μg(r=0.999 5)内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系;平均回收率分别为101.47%(RSD=1.272%)、101.09%(RSD=1.937%)、101.14%(RSD=2.388%)、100.38%(RSD=1.448%)及100.86%(RSD=1.759%)(n=5)。结论该方法分离良好、精密准确,可用于龙柴方及其组方药材甘草的质量控制。

龙柴方中黄芩、垂盆草总黄酮的提取纯化工艺

目的:优选龙柴方中黄芩、垂盆草总黄酮的提取纯化工艺。方法:以总黄酮含量为指标,采用正交试验法优选总黄酮提取纯化工艺条件。大孔树脂纯化总黄酮,以静态吸附及解析试验筛选树脂型号;通过动态吸附相关指标考察最佳洗脱条件。结果:最佳提取工艺为15倍量60%乙醇,85℃水浴回流提取2次,每次2 h。最佳纯化工艺条件为采用AB-8型大孔树脂,上样浓度为0.11 g.mL-1,吸附速度3 BV.h-1,5 BV水洗除杂,8 BV 70%乙醇洗脱。结论:优选工艺得到的总黄酮含量较高,工艺简单,适宜工业化生产。

龙柴方治疗乙肝肝纤维化疗效机制的理论探讨

肝纤维化常见于不同原因引起的慢性肝脏疾病病程中,进一步发展可形成肝硬化,严重影响患者健康,抗肝纤维化是慢性肝病的重要治疗措施,临床证实肝纤维化与一定程度的肝硬化都是可逆的,尤其是中医药具有较好的综合疗效。文章就龙柴方对乙肝肝纤维化的疗效作用,从中医学对肝纤维化病因病机认识、龙柴方的立法依据、组方意义及组分药物的现代药理研究等角度进行了分析研讨,为解释和揭示龙柴方对乙肝肝纤维化发挥的疗效作用提供一定的理论依据。

HPCE测定龙柴方及组方药甘草中5种指标成分的含量

目的:建立高效毛细管电泳(HPCE)法,同时测定龙柴方及其组方药材甘草中5种指标成分含量,控制该方药的质量。方法:40mmol/L硼砂-10mmol/L磷酸二氢钠-10%甲醇(p H=8.2)为电泳介质,未涂渍标准熔融石英毛细管(64.5cm×75μm,有效长度56cm)为分离通道,分离电压为20k V,检测波长为254nm,毛细管温度为20℃,压力进样为5k Pa×6s。结果:此方法可以使样品达到基线分离,阴性样品无干扰,5种指标成分的浓度与峰面积的线性关系良好(r>0.9950);加样回收率为95.00%-100.90%。结论:该方法分离良好、精密准确,可用于龙柴方及其组方药材甘草的质量控制。

龙柴方总萜部位中熊果酸、齐墩果酸在大鼠体内的药动学研究

目的建立大鼠灌胃龙柴方总萜有效部位后血浆中熊果酸、齐墩果酸的HPLC测定方法,并研究其药动学。方法大鼠灌胃龙柴方总萜有效部位(2 g.kg-1)后,不同时间点眼眶后静脉丛取血,制备血浆,血浆样品经甲醇沉淀蛋白,HPLC-UV测定血浆浓度。色谱柱:Kromasil-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:甲醇-0.04%磷酸水溶液(88∶12);流速:0.8 mL.min-1;检测波长:220 nm;柱温:35℃;进样量:20μL。熊果酸、齐墩果酸血药浓度-时间数据用药动学软件3P97处理。结果熊果酸和齐墩果酸的线性范围分别为7.40～111.0,7.07～106.05 mg.L-1,定量下限分别为1.04,1.60 mg.L-1,日内、日间精密度(RSD)均小于10%,方法回收率分别为93.5%～100.6%和95.3%～98.6%,提取回收率分别为73.54%～74.36%和73.75%～75.21%。熊果酸、齐墩果酸在大鼠体内的血药浓度-时间过程均符合二房室模型,其中熊果酸Ka=(6.26±1.22)h-1,AUC=(1482.58±18.37)mg.h.L-1,Cmax=(61.54±4.92)mg.L-1,Tmax=(0.50±0.00)h;齐墩果酸Ka=(7.22±1.71)h-1,AUC=(419.40±8.35)mg.h.L-1,Cmax=(49.09±3.92)mg.L-1,Tmax=(0.50±0.00)h。结论该法准确可靠,专属性强,适用于熊果酸及齐墩果酸在大鼠体内的血药浓度测定及药代动力学研究。大鼠灌胃龙柴方总萜有效部位后血浆中熊果酸和齐墩果酸的质量浓度存在双峰现象,熊果酸的2次吸收稍好于齐墩果酸。

龙柴方含药血清联合恩替卡韦对HepG2.2.15肝癌细胞中P-糖蛋白和PI3K/AKT信号通路的影响

目的观察龙柴方对恩替卡韦抗乙型肝炎病毒(HBV)效果的影响,并探讨可能作用机制。方法24只SD大鼠随机分为空白组和龙柴方低、中、高剂量组,每组6只。龙柴方低、中、高剂量组大鼠分别给予龙柴方药液9.84、19.68、39.36 g/(kg·d)灌胃,空白组给予和龙柴方中剂量组等量生理盐水灌胃,连续给药7天后制备含药血清。将HepG2.2.15肝癌细胞分为空白对照组(等量培养基)、空白血清组(100%空白血清∶培养基=1∶9)、恩替卡韦组(15μmol/ml恩替卡韦∶培养基=1∶9)及恩替卡韦+龙柴方低、中、高剂量血清组(15μmol/ml恩替卡韦∶100%龙柴方低、中、高剂量含药血清∶培养基=1∶1∶8),培养24 h。MTT法检测各组细胞存活率,荧光定量PCR法测定HBV DNA表达量;ELISA法测定乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)表达量;Western blot法检测P-糖蛋白(P-gp)、蛋白激酶B(AKT)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、同源性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)蛋白表达。结果各组HepG2.2.15细胞存活率差异均无统计学意义(P>0.05)。与空白血清组比较,恩替卡韦+龙柴方中、低剂量血清组HBV DNA水平、HBeAg表达量明显降低(P<0.01)。与空白组对照比较,恩替卡韦+龙柴方中剂量血清组HBsAg表达量降低(P<0.05)。与空白血清组和恩替卡韦组比较,恩替卡韦+龙柴方低剂量血清组PI3K蛋白表达降低,恩替卡韦+龙柴方中剂量血清组PI3K、AKT、P-gp蛋白表达均降低,PTEN蛋白表达升高(P<0.05或P<0.01)。与恩替卡韦组+龙柴方高剂量血清组比较,恩替卡韦组+龙柴方中剂量血清组HBV DNA水平降低,PTEN蛋白表达升高(P<0.05或P<0.01)。结论龙柴方对恩替卡韦抗HBV产生增效作用,其机制可能与上调PETN蛋白,抑制PI3K/AKT信号通路,从而下调P-gp表达有关,且以中剂量效果最佳。

龙柴方对阿德福韦酯耐药增敏作用的理论机制探讨

阿德福韦酯(ADV)耐药是慢性乙型肝炎(CHB)临床治疗中的常见问题,目前现代医学缺乏特异性对策,而中医药在此方面则逐渐表现出一定优势。本文就龙柴方对CHB治疗作用及其对ADV耐药增敏作用从中医药对ADV耐药的认识、龙柴方组方结构和意义、龙柴方对ADV耐药增敏的理论机制及其组分药物相关药理研究作用等方面进行分析,认为该方对ADV发挥的增敏作用,是建立在中医的理、法、方、药的理论基础之上,且与辨证用药的传统中药功效理论及所含药物的药理作用相关。

龙柴方的高效液相色谱指纹图谱

建立了龙柴方的高效液相色谱指纹图谱,并比较了龙柴方合煎液与合并液的指纹图谱。采用ODS C18色谱柱,以乙腈︰0.1%磷酸为流动相,梯度洗脱,检测波长254 nm。以黄芩苷为参照峰,测定龙柴方的指纹图谱,并作聚类法分析和相似度评价。初步建立了以15个共有峰为特征指纹信息的龙柴方HPLC指纹图谱,结果显示合煎液与合并液的指纹图谱有一定差异。

龙柴方对慢性乙型肝炎(肝郁脾虚证)肝功能及乙肝病毒标志物的影响

目的:观察龙柴方汤剂对慢性乙型肝炎(肝郁脾虚证)患者的临床疗效。方法:选取2016年4月～2017年4月我院消化内科收治的64例乙型肝炎患者作为研究对象。按照随机数字法将分为观察组(33例)采用龙柴方进行治疗;对照组(31例)采用复方益肝灵片进行治疗。观察两组患者治疗前后肝功能、乙肝病毒等改变。结果:两组患者治疗后观察组总有效率87.88%显著高于对照组64.52%,差异具有统计学意义(P<0.05)。两组患者治疗前后中医证候积分均有降低,且观察组降低水平更为显著,差异具有统计学意义(P<0.05)。两组患者治疗前后AST、ALT、γ-GT、TBIL、DBIL水平均有降低,且观察组降低水平更为显著(P<0.05)。两组患者治疗前后观察组HBsAg、HBeAg、HBV-DNA转阴率;HBsAb、HBeAb、HBcAb转阳率均高于对照组,其中HBeAg以及HBV-DNA转阴率显著高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:龙柴方治疗慢性乙肝(肝郁脾虚证)患者临床疗效确切,能够有效改善肝组织损伤以及抑制病毒复制。

龙柴方对慢性乙型肝炎患者肝损伤的保护作用机制分析

目的:观察龙柴方治疗慢性乙型肝炎(Chronic Hepatitis B,CHB)患者疗效并初步分析其保护肝组织的作用机制。方法:选取我院2014年3月~2016年7月CHB患者114例,根据随机数字表法分为观察组和对照组。对照组(57例)采用苦参素胶囊治疗,观察组在对照组基础上加服龙柴方免煎颗粒。连续治疗3个月,观察两组治疗中医证候疗效,以及治疗前后血清HBV-DNA、HBsAg、HBeAg水平、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平。结果:治疗后,观察组总有效率(94.74%)显著高于对照组(71.93%)(P<0.05);治疗前,两组HBV-DNA、HBsAg和HBeAg水平没有明显差异(P>0.05),治疗后均显著下降(P<0.05),且观察组治疗后各病毒标志物水平显著低于对照组(P<0.05);两组治疗前后血清ALT、AST、SOD、MDA水平没有明显差异(P>0.05),治疗后,ALT、AST、MDA水平显著降低(P<0.05),SOD水平显著上升(P<0.05),且观察组上升或下降幅度显著大于对照组(P<0.05)。结论:龙柴方治疗CHB患者疗效显著,可有效降低血清HBV-DNA、HBsAg、HBeAg水平,抑制病毒复制,并通过升高SOD水平、降低MDA水平保护肝组织,降低肝损伤指标水平。

柴胡加龙骨牡蛎汤加减方配合耳穴方案治疗围绝经期睡眠障碍的疗效

目的 分析柴胡加龙骨牡蛎汤加减方配合耳穴方案治疗围绝经期睡眠障碍患者的疗效。方法 根据随机数表法,将2019年10月—2021年10月在医院救治的82例围绝经期睡眠障碍患者分为观察组和对照组,每组41例。对照组采用常规治疗,观察组另采用柴胡加龙骨牡蛎汤加减方配合耳穴方案治疗。比较两组患者睡眠质量、临床疗效以及血清指标。结果 治疗后观察组睡眠质量相比对照组较好(P<0.05);观察组临床疗效相比对照组较高(P<0.05);治疗后观察组5-羟色胺(5-hydroxytryptamine, 5-HT)以及多巴胺(Dopamine, DA)均相比对照组较高(P<0.05)。结论 经中医治疗,效果显著,可有效调节神经功能,减轻睡眠障碍。