龙胆苦苷和龙胆碱的生物转化和药理活性研究进展

龙胆苦苷是重要的环烯醚萜类成分之一,是龙胆属植物的主要活性成分,具有促进胃排空和肠蠕动,还有保肝、镇痛、抗炎等作用。龙胆碱具有抗炎、解热、镇静催眠、抗惊厥等作用。龙胆苦苷等环烯醚萜类化合物在植物内生真菌、人体肠内菌等生物转化作用下可以转化成龙胆碱和新的活性成分。笔者将龙胆苦苷和龙胆碱近年在药理活性、生物转化和体内代谢研究进行综述,为进一步开发利用环烯醚萜类成分及其代谢产物提供一定的理论依据。

龙胆碱镇静催眠作用及对小鼠脑内5-HT、GABA含量的影响

目的探讨龙胆碱的镇静、催眠作用,并观察其对脑内递质5-HT、GABA含量影响,初步探讨龙胆碱镇静催眠作用的机制。方法腹腔注射不同剂量的龙胆碱溶液,观察其对ICR小鼠自主活动的影响,协同戊巴比妥钠对小鼠的催眠作用;ELASA法测定脑匀浆液中GABA、5-HT含量。结果龙胆碱高、低(200 mg/kg、50 mg/kg)均能减少小鼠自主活动次数(P<0.05),增加阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡的只数并延长小鼠睡眠时间,龙胆碱能够增加脑内GABA含量,但对5-HT含量无影响。结论龙胆碱具有良好的镇静、催眠作用,其作用与增加脑内GABA含量有关。

龙胆碱对高热惊厥模型大鼠海马区神经元损伤的保护作用研究

目的:探讨龙胆碱对反复高热惊厥所致大鼠海马CA1区神经元及超微结构损伤的保护作用。方法:采用热水浴法诱导大鼠高热惊厥模型,腹腔注射龙胆碱进行干预治疗。21日龄大鼠经筛选后随机分为三组:正常对照组(NG组,n=15)、高热惊厥组(FC组,n=15)、龙胆碱干预组(GT组,n=15)。HE染色及透射电镜法观察各组大鼠海马CA1区神经元病理及超微结构改变。结果:HE染色及透射电镜的观察显示龙胆碱治疗组较惊厥组大鼠在细胞及细胞器水平惊厥性脑损伤的程度轻,统计结果表明,干预组损伤的神经元及细胞器个数少,差异具有显著性(P<0.05)。结论:龙胆碱能显著减轻高热惊厥所致的海马CA1区神经元病理学损伤,但不能完全逆转高热惊厥所致的重度脑损伤。

龙胆碱对膝骨关节炎的影响

目的观察龙胆碱对软骨细胞的活性及对膝骨关节炎大鼠的影响。方法培养软骨细胞,采用脂多糖诱导软骨细胞建立体外炎症模型,将软骨细胞分为正常组、模型组(LPS 8μg/m L)、龙胆碱组(LPS 8μg/m L+龙胆碱100μmol/L),MTT法检测各组软骨细胞存活率。SD大鼠膝关节腔内注射木瓜蛋白酶制备膝骨关节炎动物模型,随机分为正常组、模型组、双氯芬酸钠组(5 mg/kg)、龙胆碱(20 mg/kg)组、龙胆碱(40 mg/kg)组,1次/d,连续给药21 d。排水法测定各组大鼠的足跖肿胀体积,ELISA法测定大鼠血清及关节液中IL-6、IL-1β、TNF-α水平,HE染色观察膝关节滑膜组织病理损伤。结果与正常组比较,模型组软骨细胞存活率降低(P<0. 01),龙胆碱干预后增加(P<0. 01)。龙胆碱干预后,膝骨关节炎大鼠足跖肿胀减轻,血清及关节液中炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α水平降低(P<0. 01),膝关节滑膜组织病理损伤减轻。结论龙胆碱可降低膝骨关节炎大鼠血清及关节液中炎症因子水平和滑膜炎症,减轻足跖肿胀的症状,对膝骨关节炎大鼠有显著的治疗作用。

龙胆碱对高热惊厥模型大鼠脑内氨基酸类神经递质含量及海马区GABA_B、Glu受体的影响

目的通过对脑内类氨基酸含量的及相应受体的测定,推测龙胆碱对脑损伤保护作用的可能机制。方法 21日龄Wister大鼠100只,经筛选后随机分为空白对照组、模型组(FS组)、龙胆碱高剂量组(GT1组)、龙胆碱低剂量组(GT2),热水浴法诱导高热惊厥模型,采用茚三酮染色法,借助全自动生化分析仪,计算脑组织氨基酸含量:氨基酸含量(mg/g湿组织)=每20μl上清液中氨基酸的含量/20×上清液总量(μl)/脑组织湿重(g)。免疫组化法观察海马区GABAB、Glu受体蛋白表达变化。结果 GT各组大鼠脑组织中Glu含量高于模型组,GABA含量低于FS组,Asp、Gly与FS组无显著性差异。GT1、GT2与FS组相比,差异具有显著性(P<0.05);GABA蛋白表达,GT1、GT2组在海马CA1～CA3区GAB-AB蛋白表达明显高于FC组,但低于对照组,差异具有显著性;Glu各组间比较,差异均无显著性。结论龙胆碱对惊厥所致的脑损伤的保护作用机制与脑内神经递质GABA、Glu改变有关,GABA递质的增高与GABAB受体的相应增加是其作用的机制之一。

龙胆碱对反复高热惊厥大鼠血清IL-8、TNF-α和IFN-α水平的影响

目的:探讨龙胆碱对发育期大鼠反复惊厥后血清中IL-8,TNF-α及IFN-α水平的影响。方法:100只21日龄健康Wistar大鼠经筛选后,随机分为正常对照组、惊厥模型组(FS组)、龙胆碱高剂量组(GT1)、龙胆碱低剂量组(GT2)四组。通过热水浴法制作发育期大鼠惊厥动物模型。其中治疗组大鼠在每次惊厥前分别给予腹腔注射龙胆碱注射液(50 mg.kg-1,200 mg.kg-1);惊厥组及对照组大鼠腹腔注射等量生理盐水,隔日1次,连续10次。记录各组惊厥的潜伏期、惊厥持续时间。ELISA法检测各组大鼠血清IL-8,TNF-α和IFN-α水平的变化。结果:GT1、GT2组与FS组大鼠比较:惊厥潜伏期有显著性差异(P<0.05),惊厥持续时间差异有显著性(P<0.01);GT1、GT2与FS组之间比较,IL-8、TNF-α的含量下降,改变有明显性差异(P<0.05);IFN-α无显著性差异(P>0.05);GT1组与GT2组间无显著性差异(P>0.05)。结论:龙胆碱具有一定的抗惊厥作用,其作用机制与体内细胞因子的改变有关。

龙胆碱的抑菌活性研究

目的研究龙胆碱对细菌和真菌有无抑制作用,为开发中草药单体活性成分治疗由细菌或真菌引起的妇科常见疾病提供理论依据。方法采用药物二倍稀释法和菌落计数法相结合的方法。结果龙胆碱对以金黄色葡萄球菌为代表的革兰氏阳性菌和以大肠杆菌、铜绿假单胞菌为代表的革兰氏阴性菌,以及以白色念珠菌为代表的真菌均有不同程度的抑制作用。最低抑菌浓度：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及铜绿假单胞菌为0.875 0～1.750 mg/m L,白色念珠菌为0.903 7～1.807 mg/m L。结论龙胆碱对革兰氏阴性菌及革兰氏阳性菌均有一定的抑制作用。

高速逆流色谱法分离纯化龙胆碱性乙醇提取物中的龙胆碱

[目的]建立从龙胆碱性乙醇提取物中分离龙胆碱的高速逆流色谱(HSCCC)方法。[方法]采用高速逆流色谱仪分离纯化龙胆碱性乙醇提取物中的龙胆碱,通过优化溶剂系统,以正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水(5∶5∶4∶6)为溶剂体系,上相为固定相,下相为流动相,仪器转速为850 r/min,流速为1.5 m L/min,温度为25℃,检测波长为280 nm。[结果]龙胆碱性乙醇提取物经过D151弱酸性阳离子交换树脂富集(20%乙醇洗脱部分),再采用HSCCC技术进行分离纯化,制备得到的98.8%纯度的龙胆碱。[结论]该方法稳定、回收率高,可高效地从龙胆碱性乙醇提取物中分离龙胆碱。

龙胆碱对高热惊厥大鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的探讨龙胆碱对发育期大鼠反复惊厥后海马神经元凋亡的影响。方法采用热水浴法制备大鼠惊厥模型,用TUNEL法测定海马区神经元凋亡情况。结果模型组较多神经细胞核呈棕褐色阳性反应,凋亡细胞面积显著增加,平均灰度明显增强;龙胆碱高、低剂量组细胞核棕褐色的阳性目标面积较模型组,平均灰度明显降低,与模型组比较有显著性差异,龙胆碱高、低剂量组之间差异无显著性。结论龙胆碱具有一定的抗凋亡作用,该作用可能是龙胆碱发挥抗惊厥性脑损伤作用的机制之一。

水黄连中龙胆碱的分离和鉴定

水黄连(水灵芝)为龙胆科獐牙菜属多年生草本鱼胆草(Swertia davidi Franch.)的干燥全草,味极苦。我省来凤县用水黄连注射剂,治疗附件炎、肠炎、肝炎等。据报道,水黄连含有熊果酸。我们对水黄连进行了提取和分离,得到一种白色针状结晶,经鉴定,该结晶为龙胆碱(Gentianine)。用以提取的药材为来凤县产水黄连全草。将水黄连粉碎,取300克,加浓氨水80毫升,拌匀,静置4小时,加氯仿2500毫升,冷浸3天,过滤。

正交试验优选龙胆中龙胆碱提取工艺

目的:优选龙胆中龙胆碱的最佳提取工艺。方法:以龙胆碱含量为指标,以氨水浓度、乙醇浓度、醇氨比例、提取时间为考察因素,采用正交试验优选最佳提取工艺。结果:最佳提取工艺为龙胆药材加10倍量的溶剂(95%乙醇-20%氨水(3∶1)),80℃回流提取2次,每次1h。结论:该工艺稳定、合理、可行,适用于工业化生产。

龙胆碱的解热作用及机制研究

目的:比较龙胆水提液,龙胆碱及龙胆苦苷解热作用的差异,初步探讨龙胆碱的解热作用机制。方法:雄性SD大鼠,经筛选后随机分为空白对照组、发热模型组、龙胆碱组,龙胆苦苷组及龙胆水提组,采用干酵母皮下注射方法制备发热模型,于模型制备后6 h,分别ip龙胆碱溶液(100 mg.kg-1)、龙胆苦苷溶液(200 mg.kg-1)及ig龙胆水煎液(4 000 mg.kg-1)后分别于各个时间点监测直肠温度,比较三者作用的差异性;采用放射免疫法测定大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)及下丘脑内环磷酸腺苷(cAMP)、前列腺素E2(PGE2)含量。结果:龙胆碱、龙胆苦苷、龙胆水提液,均能降低发热模型大鼠体温,三者对体温指数(TRI9)的影响分别为:0.86±0.32,1.56±0.27,1.47±0.31,与模型组比较,其差异具有显著性(P≤0.05);放射免疫结果显示,给药组IL-6,PGE2含量分别为(42.46±3.84),(103.30±7.38)ng.L-1,含量明显低于模型组,其差异具有显著性(P<0.05)。结论:龙胆碱、龙胆苦苷及龙胆水提液均具有一定的解热作用,但龙胆碱的解热作用强于后者,龙胆碱可能是中药龙胆解热作用的更直接物质;龙胆碱的解热作用机制可能与降低血清中IL-6水平,进而影响下丘脑PGE2含量有关。

龙胆碱在大鼠体内的药动学特征及透过血脑屏障的研究

目的:利用高效液相色谱(HPLC)法研究龙胆碱的药动学特征及判断其是否透过血脑屏障。方法:大鼠经尾静脉注射龙胆碱后,断尾取血,离心后分离血清,经固相萃取柱(SPE)沉淀蛋白。色谱柱为Diamonsil-C1(8250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水(梯度洗脱),全波长扫描,流速为1.0mL·min-1。在此基础上,采用腹腔注射龙胆碱后断头取脑,用HPLC法测定脑中龙胆碱含量,依据龙胆碱给药剂量与脑内含量的值推算龙胆碱是否透过血脑屏障。结果:龙胆碱线性回归方程为A=2.445×107c-44388.6(r=0.9997,n=6),表明龙胆碱血清浓度在3.125×10-4～0.1mg·mL-1范围内与峰面积积分值线性关系良好;最低检出浓度为0.02μg·mL-1;主要药动学参数t1/2a=8.62min,t1/2β=116.64min,AUC=3.57mg·min·mL-1,CL(s)=28.05mg2·kg-1·mL-1·min-1。在大鼠脑内能检测到龙胆碱,且其含量随给药剂量增加而增加。结论:静脉注射龙胆碱的大鼠其体内药动学呈开放二室模型;龙胆碱能透过血脑屏障。

龙胆碱对反复高热惊厥大鼠的解热抗惊厥作用机制探讨

目的:探讨龙胆碱对反复高热惊厥大鼠的抗惊厥作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为健康对照组、模型组、龙胆碱高、低剂量组,各15只。除健康对照组外,其余大鼠均按照文献方法制作高热惊厥大鼠模型。大鼠隔日诱导惊厥1次,共诱导10次,20 d。龙胆碱高、低剂量组每次惊厥后立即分别给予龙胆碱生理盐水溶液200,50 mg.kg-1,ip,模型组和健康对照组立即给予同体积生理盐水。观察各组大鼠惊厥潜伏期和惊厥持续时间;末次惊厥24 h后检测血清白细胞介素-1,6,8(IL-1,IL-6,IL-8),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),干扰素-α(IFN-α)水平及脑组织匀浆中环磷酸腺苷(cAMP),前列腺素E2(PGE2)水平。结果:龙胆碱高、低剂量组大鼠惊厥潜伏期明显长于模型组(P<0.05);惊厥持续时间明显短于模型组(P<0.01)。(P<0.05);龙胆碱高、低剂量组血清IL-1,IL-6,IL-8,TNF-α,脑组织PGE2水平明显低于模型组(P<0.05)且高剂量组低于低剂量组(P<0.05)。结论:龙胆碱具有解热抗惊厥作用,其作用机制与体内细胞因子改变进而影响下丘脑PGE2水平相关。

龙胆苦苷的肠内菌群代谢研究

目的 :研究体外培养的大鼠肠内菌对龙胆苦苷的代谢及大鼠灌服龙胆苦苷经体内肠菌代谢后血清中的药物成分变化。方法 :用HPLC法测定肠内菌培养液中和大鼠灌服龙胆苦苷后血清中的龙胆苦苷及其代谢产物龙胆碱、龙胆醛的含量。结果 :血清中第 2天检测到龙胆碱和龙胆醛 ,而龙胆苦苷的含量在第 3天呈下降趋势 ;肠内菌体外培养液中龙胆苦苷含量的下降和龙胆碱与龙胆醛含量的上升呈同步变化。结论 :龙胆碱和龙胆醛是龙胆苦苷体内代谢的重要生物活性产物。

龙胆苦甙的人肠内菌代谢实验观察

目的 :通过离体实验观察人肠内菌对龙胆苦甙的代谢。方法 :采用人新鲜粪便厌氧培养 ,HPL C法定量测定代谢产物。结果 :龙胆苦甙经人肠内菌代谢生成龙胆碱和龙胆醛等主要产物。结论 :龙胆苦甙易被人肠内菌代谢 ,其代谢模式可能为龙胆苦甙→龙胆碱→龙胆醛。