基于血浆代谢组学和网络药理学探讨芎芷地龙汤治疗偏头痛的作用机制

目的:基于网络药理学和血浆代谢组学探讨芎芷地龙汤(Xiongzhi Dilong decoction,XZDLD)对降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)诱导的偏头痛的作用机制。方法:采用超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱法(ultra-high-performance liquid chromatography-linear trap quadrupole orbitrap mass spectrometry,UPLC-LTQ-Orbitrap-MS)对XZDLD的化学成分进行鉴定。经硬脑膜套管注射CGRP建立偏头痛大鼠模型,通过观察大鼠偏头痛样行为、测定机械痛阈和温度痛阈评估XZDLD治疗偏头痛的疗效。基于网络药理学和血浆代谢组学的联合分析识别其治疗偏头痛的关键靶点,并应用蛋白免疫印迹法和免疫组织化学对相关蛋白进行验证。结果:应用UPLC-LTQ-Orbitrap-MS共识别出方中38个化合物。与模型大鼠相比,XZDLD各组在前30分钟显著改善了偏头痛样行为(均P<0.05),并在第19‒22天提高了机械痛阈(均P<0.05),在第20‒22天提高了温度痛阈(均P<0.05)。基于网络药理学识别出128个XZDLD治疗偏头痛的潜在靶点。基于血浆代谢组学识别出在对照组、模型组和XZDLD组中有17种不同的内源性代谢产物,主要与色氨酸和酪氨酸代谢途径相关。将二者联合分析后确定了6个关键靶点进行验证:MAOA、MAOB、CYP1A1、CYP1A2、CYP1B1和ADH1C。与模型组相比,XZDLD显著降低了MAOA、MAOB和CYP1B1蛋白的表达(P=0.024;P=0.004;P=0.039),并升高了CYP1A1、CYP1A2和ADH1C的表达(P=0.033;P=0.045;P=0.027)。结论:芎芷地龙汤可以改善大鼠偏头痛样行为,提高痛阈,其作用机制可能与调节色氨酸和酪氨酸代谢途径有关,为其临床应用提供依据,同时为偏头痛研究提供思路。

芎龙汤颗粒剂对癌症患者免疫功能影响的观察

芎龙汤颗粒剂由川芎、地龙、延胡、葛根、牛膝等组成，具有活血化瘀、清热解毒作用．对21例癌症术后患者进行治疗前后的免疫功能追踪，发现癌症病人自然杀伤细胞活性（NKC）明显低于对照组，治疗后明显提高；癌症病人循环免疫复合物（CIC）明显高于对照组，治疗后明显下降．

芎龙汤、地黄汤的反突变作用研究

本实验以“细胞突变试验”作为肿瘤成因多阶段学说的起始阶段的模型，观察自制芎龙汤和地黄汤对它们的影响。结果提示，活血化瘀方剂芎龙汤有中等度反突变作用，补气养阴方剂地黄汤无反突变作用。

芎芷地龙汤对偏头痛模型动物血液和脑干中β-EP、CGRP的影响

目的研究芎芷地龙汤对偏头痛模型体内β-内啡肽(β-EP)、钙素基因相关肽(CGRP)的影响。方法健康雄性SD大鼠随机分为生理盐水组、模型组、舒马普坦组、中药治疗组,每组12只。皮下注射硝酸甘油(NTG)注射剂复制实验性偏头痛动物模型,经药物干预后在4h、6h两个时间点测定各组血液和脑干中β-EP、CGRP的含量。结果中药治疗组和舒马普坦组血浆和脑组织中β-EP含量升高,两个时间点的含量与模型组比较有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。中药治疗组和舒马普坦组血浆和脑组织中CGRP含量降低,两个时间点的含量与模型组比较有显著性差异(P<0.01)。结论芎芷地龙汤可以下调由硝酸甘油诱导的CGRP异常升高的水平,可以上调由硝酸甘油诱导的β-EP异常减少的水平。

芎龙汤与地黄汤抗癌机理对比研究

作者通过测定血液流变学、微量元素以及细胞突变试验等指标对比观察了自制芎龙汤(活血化瘀)与地黄汤(益气养阴)的抗癌作用机理。结果表明,两方对癌症患者血液流变性均有一定的双相调节作用,但芎龙汤对纤维蛋白原量和细胞沉降率高值组有明显的降低作用,而地黄汤则无此作用;芎龙汤中含钙、锰、锌、锶等微量元素较多,地黄汤含铁较多;芎龙汤有较好的反细胞突变作用,地黄汤则没有这一作用。说明两方抗癌作用机理有明显的差异。

芎芷地龙汤不同时间预防给药对偏头痛动物模型痛阈及血管活性物质的影响

目的:研究芎芷地龙汤不同时间预给药对偏头痛动物模型痛阈及血管活性物质的影响。方法:将健康雄性SD大鼠,随机分为生理盐水组、模型组、舒马普坦组、中药治疗组,每组8只,给药干预后,皮下注射硝酸甘油注射剂10 mg/kg制作偏头痛动物模型,在皮下注射药物后2 h后测定,电子式机械测痛仪测定机械痛阈值,温度刺激仪测定温度痛阈值;硝酸还原法进行测定血浆NO浓度;ELISA法测定血浆CGRP、Neurokinin A、Endothelin-1(ET-1)、TXB2、6-Keto-PGF1α含量。结果:给予硝酸甘油后,模型组与生理盐水组比较,机械痛阈(1 d P<0.01,3 d P<0.05,7 d P<0.05)和温度痛阈(1 d P<0.01,3 d P<0.01,7 d P<0.01)均降低,血浆NO浓度升高(1 d P<0.01,3 d P<0.01,7 d P<0.01),血浆ET-1浓度降低(1 d P<0.05,3 d P<0.05,7 d P<0.01),血浆CGRP含量降低(1 d P<0.01,3 d P<0.01,7 d P<0.05),血浆NKA含量升高(1 d P<0.01,3 d P<0.01,7 d P<0.01),血浆TXB2含量降低(1 d P<0.01,3 d P<0.01,7 d P<0.05),血浆6-Keto-PGF1α含量降低(1 d P<0.05,3 d P<0.05,7 d P<0.01);预防给药后,芎芷地龙汤组和模型组比较,机械痛阈和温度痛阈均显著升高(3d P<0.01,7d P<0.05),NO浓度显著降低(3 d P<0.01,7 d P<0.01),血浆ET-1浓度升高(3 d P<0.01,7 d P<0.05),血浆CGRP浓度升高(7d P<0.01),NKA含量有所降低(1 d P<0.05,3 d P<0.05,7 d P<0.01),血浆TXB2含量有所增高(3d P<0.05,7 d P<0.01),血浆6-KetoPGF1α有所增高(3d P<0.05,7 d P<0.05)。结论:预防给药3天、7天,芎芷地龙汤均可以提高动物病理状态下的痛阈值,可减弱由NTG诱发的NO的升高水平,可升高由NTG诱发的TXB2降低水平,缓解由NTG诱发的6-Keto-PGF1α的降低水平,升高由NTG诱发的ET-1含量降低水平,减弱由NTG诱发的NKA的释放水平;预防给药7天后,芎芷地龙汤可以升高由NTG诱发的血浆CGRP降低水平。整体来分析,预防给药7天效果好于预防给药3天、1天。

芎芷地龙汤对偏头痛风热证Glu-NMDAR-nNOS通路的影响

目的:探讨偏头痛受风热侵袭后机体发生痛觉敏化的病理机制及芎芷地龙汤对模型的治疗机理。方法:使用热风及硝酸甘油协同诱导建立大鼠偏头痛风热证模型,观察2 h内搔头次数,用免疫组化法测定三叉神经脊束核GLU、NR2B、n NOS表达情况。结果:偏头痛模型组、偏头痛风热证组2 h内搔头次数明显增多,与正常组、风热组、中药治疗组相比,差异有统计学意义(P<0.01);偏头痛模型组、偏头痛风热证组三叉神经脊束核尾部GLU表达、NR2B表达、n NOS表达均明显上调,与正常组、风热组、中药治疗组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:风热对正常机体无影响,而对硝酸甘油致偏头痛模型病理状态有显著影响,说明风热外袭致偏头痛痛觉敏化的发生,芎芷地龙汤能明显改善偏头痛动物模型的行为学症状,减少动物的阳性反应次数,减少三叉神经颈复合体中Glu、NR2B、n NOS表达。

芎芷地龙汤对偏头痛模型动物血液和脑干中NO、NOS的影响

目的研究芎芷地龙汤对偏头痛模型体内NO、NOS的影响。方法健康雄性SD大鼠随机为4组:生理盐水组、模型组、舒马普坦组、中药治疗组。皮下注射NTG注射剂复制实验性偏头痛动物模型,经药物干预后在4小时、6小时两个时间点测定各组血液和脑干中NO、NOS的含量。结果(1)模型组血浆和组织中NO含量升高,且4小时高于6小时,两个时间点的含量与生理盐水组比较均有显著性差异(P<0.01);中药组和舒马普坦组血浆和组织中NO含量降低,两个时间点的含量与模型组比较均有显著性差异(P<0.05)。(2)模型组血浆和组织中NOS含量升高,且4小时高于6小时,两个时间点的含量与生理盐水组比较有显著性差异(P<0.05);中药组和舒马普坦组血浆和组织中NOS含量降低,两个时间点的含量与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。结论芎芷地龙汤可以下调由硝酸甘油诱导的NO、NOS异常升高的水平,这种作用可以遏制偏头痛发病过程中一系列级联反应的恶性循环,从而发挥抗偏头痛的作用。

芎芷地龙汤对偏头痛风热证血管活性物质的影响

目的探讨芎芷地龙汤对偏头痛风热证血管活性物质的影响。方法使用热风及硝酸甘油协同诱导建立大鼠偏头痛风热证模型,观察2 h内搔头次数,用放免法测定血浆中内皮素(ET)、降钙素基因相关肽(CGRP)、血栓素A2(TXA2)、前列环素(PGI2)含量。方法偏头痛模型组血浆TXB2、ET、CGRP含量升高,6 Keto PGF1α含量降低,与正常组、风热组相比差异有统计学意义(P<0.05);偏头痛风热证组血浆TXB2、ET、CGRP含量继续升高,6 Keto PGF1α含量继续降低,与正常组、偏头痛模型组比较有统计学意义(P<0.05或P<0.01);经过治疗后血浆TXB2、ET、CGRP、6 Keto PGF1α含量回复,与偏头痛风热证组及偏头痛模型组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论风热对正常机体无影响,而对硝酸甘油致偏头痛模型病理状态有显著影响,偏头痛模型受风热外袭后血管活性物质严重失衡,芎芷地龙汤能明显改善偏头痛风热证动物模型血管活性物质失衡状态。

加减芎龙汤分经论治对偏头痛预防性治疗的临床研究

目的:观察加减芎龙汤分经论治对预防偏头痛发作的临床疗效。方法:将60例需预防性治疗的偏头痛患者随机分为两组,对照组以必需的止痛剂加西比灵为主。治疗组以必需的止痛剂配合加减芎龙汤为主,3月为1个疗程,分别在1月、2月、3月及6月进行疗效评定。结果:两种治疗方法在偏头痛缓解期均能起到缩短头痛发作的持续时间,减少头痛发作的次数以及必需止痛剂的使用次数,在为期3月的治疗过程中,随治疗时间的延长,效果逐渐加强,并且在治疗的后期使用加减芎龙汤较使用西比灵效果更佳,在随访期两种治疗方法仍有持续的预防发作的效果,但均有反弹趋势,发作时间及发作频率两组无差异,但使用加减芎龙汤组能明显减少使用止痛药次数。治疗组总有效率93.3%,对照组为76.6%,两组比较具有统计学差异。结论:加减芎龙汤分经论治预防偏头痛疗效满意。

芎芷地龙汤对偏头痛模型导水管周围灰质c-fos和β-EP蛋白共存表达的影响

目的:研究芎芷地龙汤对偏头痛模型导水管周围灰质c-fos和β-EP蛋白共存表达的影响。方法:健康雄性SD大鼠随机为4组:生理盐水组、模型组、舒马普坦组、中药治疗组。皮下注射NTG注射剂复制实验性偏头痛动物模型,经药物干预后在4h、6h两个时间点取材,采用免疫组化双标染色法测定导水管周围灰质c-fos和β-EP的免疫阳性神经元的兴奋状态及其共存表达情况。结果:模型组c-fos阳性细胞数和β-EP阳性细胞数增多,4h多于6h,两个时间点的阳性细胞数与生理盐水组比较有显著性差异(P<0.01)。中药组和舒马普坦组c-fos阳性细胞数减少,两个时间点的阳性细胞数与模型组比较有显著性差异(P<0.01);中药组β-EP阳性细胞数增多,两个时间点的阳性细胞数与模型组比较有显著性差异(P<0.01);舒马普坦组β-EP阳性细胞数增多,两个时间点的阳性细胞数与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:芎芷地龙汤可以减少由硝酸甘油诱导的致痛物质c-fos的表达,增加抗痛物质β-EP的表达,从而进一步减少三叉神经脊束核神经元的兴奋性,阻止痛觉信息的传递。

加减芎龙汤防治瘀血型偏头痛46例

目的:观察芎龙汤治疗瘀血型偏头痛的疗效。方法:对照组给予西比灵胶囊,治疗组服用芎龙汤(川芎、葛根、延胡、牛膝、地龙、细辛等)加减治疗。结果:发作期治疗组与对照组总有效率无明显差异(P>0.05);预防性治疗中,与对照组相比治疗组总有效率明显提高,具有统计学差异(P<0.05)。结论:芎龙汤治疗瘀血型偏头痛疗效确切,有效率高。

芎芷地龙汤对偏头痛风热证模型NO、NOS、cGMP的影响

目的探讨芎芷地龙汤对偏头痛风热证一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、环鸟苷酸(cGMP)的影响。方法使用热风及硝酸甘油协同诱导建立大鼠偏头痛风热证模型,观察2 h内搔头次数,用放免法测定血浆中环鸟苷酸的含量,用硝酸还原酶法测定血浆中一氧化氮的含量,用比色法测定血浆中一氧化氮合酶的含量。结果偏头痛模型组血浆NOS、NO、cGMP含量升高,与正常组、风热组相比差异有统计学意义(P<0.01);偏头痛风热证组血浆NOS、NO、cGMP含量继续升高,与正常组比较有统计学意义(P<0.01);与偏头痛模型组比较有统计学意义(P<0.05);经过治疗后血浆NOS、NO、cGMP含量恢复,与偏头痛风热证组及偏头痛模型组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论风热对正常机体无影响,而对硝酸甘油致偏头痛模型病理状态有显著影响,偏头痛模型受风热外袭后血浆NOS、NO、cGMP含量持续升高,芎芷地龙汤能明显改善偏头痛风热证动物模型血浆中升高的NOS、NO、cGMP含量。

芎芷地龙汤对偏头痛模型大鼠脑组织c-fos和CGRP蛋白表达的影响

目的观察芎芷地龙汤对偏头痛模型大鼠脑组织c-fos和降钙素基因相关肽(CGRP)蛋白表达的影响,探讨芎芷地龙汤对偏头痛的作用机制。方法将健康雄性SD大鼠48只,随机分为生理盐水组、模型组、舒马普坦组、中药治疗组,每组12只,给药干预后,皮下注射硝酸甘油注射剂10 mg/kg制作偏头痛动物模型,在皮下注射药物后4 h、6 h两个时间点取材,免疫组化法测定三叉神经脊束核和中脑导水管周围灰质c-fos和CGRP免疫阳性细胞表达情况。结果三叉神经脊束核阳性细胞表达:中药治疗组cfos、CGRP阳性细胞数在4 h和6 h两个时间点均较模型组显著减少(P<0.01);导水管周围灰质阳性细胞表达:中药组c-fos、CGRP阳性细胞数在4 h和6 h两个时间点与模型组比较均显著性减少(P<0.01)。结论芎芷地龙汤可减少NTG诱发的三叉神经脊束核c-fos免疫阳性细胞表达,进而减弱三叉神经血管系统的激活,也可减弱中脑导水管周围灰质c-fos免疫阳性细胞表达,阻止伤害性信息的进一步传递;可减少三叉神经脊束核和中脑导水管周围灰质CGRP阳性细胞的表达。

芎芷地龙汤不同时间预防给药对偏头痛动物模型iNOS mRNA、c-fos mRNA表达的影响

目的观察芎芷地龙汤不同时间预给药对偏头痛动物模型iNOS mRNA、c-fos mRNA表达的影响。方法将健康雄性SD大鼠36只,随机分为0.9%氯化钠注射液组(6只)、模型组(6只)、舒马普坦组(6只)、中药1d预给药组(6只),中药3d预给药组(6只)、中药7d预给药组(6只),按照预定给药,造模结束后2 h取材,real-time PCR法测定三叉神经节、三叉神经脊束核丘脑、硬脑膜c-fos mRNA、iNOS mRNA表达情况。结果与0.9%氯化钠注射液组比较,模型组iNOS mRNA在三叉神经节、三叉神经脊束核、硬脑膜表达水平明显升高,在丘脑表达水平明显降低(P<0.01),给药干预后,三叉神经节、三叉神经脊束核、硬脑膜iNOS mRNA表达水平均降低,其中以预防给药7日组和舒马普坦组明显降低(P<0.01);丘脑iNOS mRNA表达水平有所升高,但各组与模型组差异均无统计学意义(P>0.05)。与0.9%氯化钠注射液组比较,模型组c-fos mRNA在三叉神经节、三叉神经脊束核表达水平明显升高,在丘脑、硬脑膜表达水平降低;给药干预后,c-fos mRNA在三叉神经节、三叉神经脊束核表达水平降低,以预防给药7d组和舒马普坦组降低明显(P<0.05或P<0.01);c-fos mRNA在丘脑、硬脑膜表达水平升高,其中以预防给药7d组和舒马普坦组升高幅度显著(P<0.05)。结论芎芷地龙汤预防给药可以减少NTG诱发的三叉神经节、三叉神经脊束核c-fos mRNA、iNOS mRNA表达,可以减少硬脑膜iNOS mRNA表达,而以预防给药7d效果好于预防给药3d、1d。

芎芷地龙汤对偏头痛模型三叉颈复合体PKCγ、NMDAR1作用的研究

目的研究芎芷地龙汤对偏头痛动物模型三叉颈复合体内PKCγ、NMDAR1的影响。方法将健康雄性SD大鼠随机分为生理盐水对照组、偏头痛模型组、芎芷地龙汤组、舒马普坦组,每组8只。给药干预后,皮下注射硝酸甘油注射剂10 mg/kg制作偏头痛动物模型,在皮下注射药物后4 h后采集标本,用Western印迹分析法测定三叉颈复合体内NMDAR1、PKCγ、p NMDAR1(Ser896)、p PKCγ(Thr514)蛋白表达水平。结果偏头痛模型组三叉神经脊束核PKCγ、NMDARl含量与生理盐水对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),而p PKCγ(Thr514)、p NMDAR1(Ser896)含量较生理盐水对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.01),给予药物干预后,芎芷地龙汤组和舒马普坦组PKCγ、NMDARl含量与偏头痛模型组比较无统计学意义(P>0.05),而p PKCγ(Thr514)、p NMDAR1(Ser896)含量较偏头痛模型组显著降低,芎芷地龙汤组、舒马普坦组与偏头痛模型组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论偏头痛伤害性信号的传导与三叉颈复合体内PKCγ和NMDARl磷酸化蛋白表达增多有关,芎芷地龙汤和舒马普坦均可抑制三叉颈复合体PKCγ和NMDARl磷酸化蛋白表达。

芎芷地龙汤对偏头痛模型中脑导水管周围灰质c-fos和NOS蛋白共存表达的影响

目的研究芎芷地龙汤对偏头痛模型中脑导水管周围灰质c-fos和NOS蛋白共存表达的影响。方法健康雄性SD大鼠随机为4组:生理盐水组、模型组、舒马普坦组、中药治疗组。皮下注射NTG注射剂复制实验性偏头痛动物模型,经药物干预后在4小时、6小时两个时间点取材,采用免疫组化双标染色法测定导水管周围灰质c-fos和NOS的免疫阳性神经元的兴奋状态及其共存表达情况。结果模型组c-fos阳性细胞数和NOS阳性细胞数增多,4小时多于6小时,两个时间点的阳性细胞数与生理盐水组比较有显著性差异(P<0.01)。中药组和舒马普坦组c-fos阳性细胞数和NOS阳性细胞数减少,两个时间点的阳性细胞数与模型组比较有显著性差异(P<0.01)。结论芎芷地龙汤可以减少由硝酸甘油诱导的致痛物质c-fos、NOS的表达,从而进一步减少导水管周围灰质神经元的兴奋性,阻止痛觉信息的传递。

芎芷地龙汤对偏头痛模型三叉神经脊束核c-fos和NOS蛋白共存表达的影响

目的:研究芎芷地龙汤对偏头痛模型三叉神经脊束核c-fos和NOS蛋白共存表达的影响。方法:健康雄性SD大鼠随机为4组:生理盐水组、模型组、舒马普坦组、中药组。皮下注射NTG注射剂复制实验性偏头痛动物模型,经药物干预后在4h、6h两个时间点取材,采用免疫组化双标染色法测定三叉神经脊束核细胞癌基因fos(celluar oncogene,c-fos)和一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的免疫阳性神经元的兴奋状态及其共存表达情况。结果:模型组c-fos阳性细胞数和NOS阳性细胞数增多,4h多于6h,两个时间点的阳性细胞数与生理盐水组比较有显著性差异(P<0.01)。中药组和舒马普坦组c-fos阳性细胞数和NOS阳性细胞数减少,两个时间点的阳性细胞数与模型组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:芎芷地龙汤可以减少由硝酸甘油诱导的致痛物质c-fos、NOS的表达,从而进一步减少三叉神经脊束核神经元的兴奋性,阻止痛觉信息的传递。

芎芷地龙汤对偏头痛模型三叉神经脊束核c-fos和β-EP蛋白共存表达的影响

目的研究芎芷地龙汤对偏头痛模型三叉神经脊束核c-fos和β-EP蛋白共存表达的影响。方法健康雄性SD大鼠随机为4组:生理盐水组、模型组、舒马普坦组、中药治疗组。皮下注射NTG注射剂复制实验性偏头痛动物模型,经药物干预后在4h、6h两个时间点取材,采用免疫组化双标染色法测定三叉神经脊束核c-fos和β-EP的免疫阳性神经元的兴奋状态及其共存表达情况。结果模型组c-fos阳性细胞数增多,两个时间点的阳性细胞数与生理盐水组比较有显著性差异(P<0.01);模型组β-EP阳性细胞数4h增多,6h减少,两个时间点的阳性细胞数与生理盐水组比较没有显著性差异。中药治疗组和舒马普坦组c-fos阳性细胞数减少,两个时间点的阳性细胞数与模型组比较有显著性差异(P<0.01),中药治疗组β-EP阳性细胞数增多,两个时间点的阳性细胞数与模型组比较有显著性差异(P<0.05,P<0.01);舒马普坦组β-EP阳性细胞数增多,两个时间点的阳性细胞数与模型组比较有显著性差异(P<0.01)。结论芎芷地龙汤可以减少由硝酸甘油诱导的致痛物质c-fos的表达,增加抗痛物质β-EP的表达,从而进一步减少三叉神经脊束核神经元的兴奋性,阻止痛觉信息的传递。