慢性脑缺血对大鼠海马α-分泌酶表达和活性的影响

目的探讨慢性脑缺血对大鼠海马α-分泌酶的表达和活性的影响。方法双侧颈总动脉结扎制作大鼠慢性脑缺血模型,分别于术后10 d、30 d、90 d和180 d用Y迷宫测试其学习记忆能力;分别用定量PCR和免疫印迹法检测海马α-分泌酶ADAM 10和ADAM 17m RNA的表达和蛋白含量;用荧光法测定海马α-分泌酶的活性。结果 Y迷宫测试显示模型组术后30 d、90 d和180 d所需的电击次数较对照组逐渐增加(P<0.05;P<0.01)。PCR和免疫印迹结果显示,术后30 d、90 d和180 d海马ADAM 10和ADAM 17m RNA表达及其含量明显降低(P<0.05;P<0.01);酶活性检测显示模型组α-分泌酶活性于术后持续性降低,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论慢性脑缺血下调海马α-分泌酶表达,并抑制其活性,可能在阿尔茨海默病发病过程中有重要意义。

ASTL抗体中和ASTL对人宫颈癌ME-180细胞放射敏感性的影响

目的:探讨龙虾肽酶样金属内肽酶(ASTL)抗体中和ASTL对人宫颈癌ME-180细胞放射敏感性的影响。方法:培养人宫颈癌ME-180、HeLa细胞,根据细胞处理方法的不同,按以下方式进行分组。(1)将ME-180细胞分为4组:对照组、照射组(4 Gy)、ASTL抗体组、ASTL抗体+照射组(4 Gy),采用5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色、3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)实验检测每组细胞的增殖能力与存活情况,并于照射后0、24、48、72 h采用免疫荧光、Western blot实验检测ASTL在细胞中的定位情况。(2)将ME-180细胞分为2组:照射组、ASTL抗体+照射组,分别进行0、2、4、8 Gy照射,并采用克隆形成实验检测每组细胞的增殖能力。(3)将HeLa细胞分为2组:照射组、ASTL抗体+照射组,分别进行0、2、4、8 Gy照射,采用MTT实验检测细胞的存活情况。(4)将ME-180细胞分为2组:短发夹RNA对照组(sh-对照组)、短发夹RNA ASTL转染组(sh-ASTL组),采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot实验检测蛋白激酶B(AKT)等靶基因的表达情况;同时,分别用0、5、10 nmoL/L的抗体处理ME-180细胞,采用Western blot实验检测抗体中和对靶基因表达情况的影响。(5)将ME-180细胞分为2组:对照组、照射组(4 Gy),采用Western blot实验检测ASTL、AKT等靶基因的表达情况。以上照射均使用137Csγ射线照射源,剂量率为1 Gy/min。组间比较采用独立样本t检验。结果:(1)EdU染色实验结果显示,与照射组相比,ASTL抗体+照射组(4 Gy)抑制了ME-180细胞的增殖,差异有统计学意义(t=9.25,P<0.05);MTT实验结果显示,与照射组相比,ASTL抗体+照射组(4 Gy)在照射后24、48、72 h时,ME-180细胞生长速度明显降低,且差异均有统计学意义(t=5.17、10.32、14.27,均P<0.05)。免疫荧光、Western blot实验结果显示,4 Gy照射后24 h时,ME-180细胞中ASTL在细胞质的定位显著增加,照射后48~72 h,ASTL重新定位于细胞膜上。(2)克隆形成实验结果显示,与照射组相比,ASTL抗体+照射组能够抑制8 Gy照射后ME-180细胞的增殖,且差异有统计学意义(t=7.63,P<0.05)。(3)HeLa细胞MTT实验结果显示,与照射组相比,ASTL抗体+照射组能够降低2、4、8 Gy照射后HeLa细胞的存活率,且差异均有统计学意义(t=4.27、9.66、15.71,均P<0.05)。(4)qRT-PCR实验结果显示,ASTL干扰片段转入后,AKT的表达水平下调(t=13.94,P<0.05),同时,Western blot实验结果表明,ASTL干扰或加入ASTL抗体能够降低AKT等靶基因的表达水平。(5)Western blot实验结果显示,与对照组相比,照射组(4 Gy)ASTL、AKT等靶基因的表达水平显著升高。结论:人宫颈癌ME-180细胞的放射敏感性与ASTL的水平相关,ASTL抗体或sh-ASTL能够增强照射后ME-180细胞的放射敏感性。

阿托伐他汀对慢性脑低灌注大鼠海马ADAM10的影响

目的探讨慢性脑低灌注老龄大鼠学习记忆功能、海马解聚索和金属蛋白酶10（a disingtergrin and metalloprotease 10, ADAM 10）mRNA表达变化以及阿托伐他汀对其的影响。方法72只健康雄性Wistar老年大鼠随机分为假手术组、脑低灌注组和阿托伐他汀处理组。制作永久性双侧颈总动脉闭塞（two—vessd occlusion，2VO）模型。阿托伐他汀处理组术后用阿托伐他汀10mg（kg·d）灌胃。采用实时荧光定量聚合酶链反应在模型制作后1、2、4和16周检测双侧海马ADAM10 mRNA表达。结果从模型制作后2周开始，脑低灌注组学习记忆功能较假手术组显著下降（P〈0．05），模型制作后4周和16周时进一步下降（P〈0．01）；阿托伐他汀处理组模型制作后1周、2周和4周时学习记忆功能与脑低灌注组无显著差异，但16周时较脑低灌注组显著改善（P〈0．01）。与假手术组相比，脑低灌注组模型制作后各时间点海马ADAM10 mRNA表达分别下调22％、43％、35％和50％（P均〈0．01），阿托伐他汀处理组海马ADAM10 mRNA的表达在2周时较脑低灌注组增高22％（P〈0．05），其余时间点无显著差异。结论慢性脑低灌注可导致老龄大鼠海马ADAM10 mRNA表达下调，阿托伐他汀在早期可抑制ADAM10 mRNA表达下调。

血管紧张素Ⅱ1型受体相关蛋白研究进展

血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)作为肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)的关键效应因子,与血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensin Ⅱ type 1 receptor,AT1R)结合后,在体内发挥维持体液及电解质平衡、收缩血管、调节血压,促进心肌、肾近端小管以及血管平滑肌细胞增殖,参与肿瘤的发生发展、血管形成和转移等重要作用。最新研究发现,AT1R相关蛋白特异性作用于AT1R蛋白的碳末端,通过调节受体的内化、细胞膜的再通和受体的敏感性对其表达进行控制,发挥相应的生物学作用。本文的重点在于对AT1R相关蛋白的研究进展进行综述,阐述不同AT1R相关蛋白在RAS系统中所起的作用,为RAS系统的进一步研究提供依据。