丹参通络解毒汤中羟基红花黄色素A和丹酚酸B的含量测定

目的运用高效液相色谱法(HPLC)同时测定丹参通络解毒汤中羟基红花黄色素A(HSYA)和丹酚酸B(Sal B)含量。方法采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱,流动相乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长280 nm。结果 HSYA在21.2~63.3μg/mL呈良好的线性关系(r=0.999 6),平均回收率为99.23%,RSD为1.15%。Sal B在16.8~50.4μg/mL呈良好的线性关系(r=0.999 5),平均回收率为99.01%,RSD为1.12%。结论此方法简便、准确、重复性好,可作为丹参通络解毒汤的质量控制的检测方法。

HPLC法同时测定蝎龙酒中芍药苷、羟基红花黄色素A和阿魏酸

目的建立蝎龙酒(全蝎、当归、白芍、红花、地龙、威灵仙、杜仲等)中芍药苷、羟基红花黄色素A和阿魏酸的测定方法。方法采用反相高效液相色谱法进行定量分析,用Inertsil C8-3柱,乙腈-0.1%磷酸-四氢呋喃(18∶80∶2)为流动相,体积流量为1.0 mL/min,检测波长为340 nm。结果芍药苷、羟基红花黄色素A和阿魏酸的线性范围分别为46.69～466.95μg/mL、11.13～111.35μg/mL和4.84～48.4μg/mL;平均加样回收率分别为101.08%、99.85%和100.34%(n=6)。结论此法简便、准确,具有良好的重复性和回收率,适用于蝎龙酒中3种成分的同时测定。

HPLC波长切换法同时测定金嗓散结胶囊中的(R,S)-告依春、羟基红花黄色素A、丹酚酸B、木蝴蝶苷B和木蝴蝶苷A

目的:建立金嗓散结胶囊中(R,S)-告依春、羟基红花黄色素A、丹酚酸B、木蝴蝶苷B和木蝴蝶苷A的同时测定方法。方法:采用HPLC法,应用Agilent HC-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;以甲醇-乙腈(3∶1)与0.4%磷酸溶液为流动相,进行梯度洗脱;流速为1.0 m L·min^(-1);供试品采用50%甲醇超声提取。结果:(R,S)告依春、羟基红花黄色素A、丹酚酸B、木蝴蝶苷B和木蝴蝶苷A的线性范围分别为4.150~83.00、5.120~102.4、11.07~221.4、4.590~91.80、8.140~162.8μg·m L^(-1),相关系数分别为0.999 2、0.999 9、0.999 4、0.999 7、0.999 5;5种成分分离良好,阴性对测定无干扰,平均加样回收率及相应的RSD分别为99.06%(1.27%)、99.54%(1.15%)、98.19%(0.89%)、97.88%(1.71%)、97.22%(0.99%)。结论:所建立的方法可用于金嗓散结胶囊的质量控制。

羟基红花黄色素A对小鼠肝癌移植瘤NF-κB信号通路的影响

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对小鼠H22肝癌移植瘤NF-κB信号通路的影响。方法建立H22移植性肝癌小鼠模型50只,随机分为HSYA高剂量组(4.5 mg/kg)、HSYA中剂量组(2.25 mg/kg)、HSYA低剂量组(1.125 mg/kg)、阳性对照组(50mg/kg)和生理盐水对照组,给药14d。免疫印迹检测核转录因子-κB(NF-κB)p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκB-α)及NF-κB抑制蛋白(IκB-α)的水平。结果 HSYA高、中、低剂量组能够下调细胞核p65蛋白的表达,抑制活化p65核移位,抑制IκB-α的磷酸化和胞质内IκB-α的降解即降低NF-κB的转录活性,尤以中剂量组效果最显著。结论 HSYA能抑制小鼠肝癌移植瘤NF-κB的转录活性。

羟基红花黄色素A对心肌缺血再灌注损伤大鼠血清炎性因子及心肌组织NF-κB表达的影响

目的探讨羟基红花黄色素A对心肌缺血再灌注损伤大鼠血清炎性因子及心肌组织核因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法将50只雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组(模型组)、尼莫地平组(阳性药对照组,20 mg/kg)、羟基红花黄色素A高剂量组(20 mg/kg)、羟基红花黄色素A低剂量组(10 mg/kg),每组10只。所有大鼠均灌胃给药,每日1次。给药14 d后,以结扎SD大鼠冠状动脉左前降支建立心肌缺血再灌注损伤模型。各组大鼠缺血30 min再灌注120 min后,检测各组大鼠心脏功能,并采集颈总动脉血液,测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)等炎性因子,同时取大鼠心肌组织,光镜下观察心肌组织结构,并采用Western Blotting法检测心肌NF-κB、NF-κB抑制蛋白激酶α(IκBα)、NF-κB抑制蛋白激酶β(Iκκβ)等表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠左室舒张末期压力(LVEDP)升高,左室收缩压(LVSP)降低,血清TNF-α、IL-6、CRP炎性因子水平升高,心肌组织NF-κB蛋白表达升高,IκBα、Iκκβ蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,羟基红花黄色素A高剂量组、低剂量组及尼莫地平组大鼠LVEDP降低,LVSP升高,血清TNF-α、IL-6、CRP炎性因子水平均降低,心肌组织NF-κB蛋白表达均降低,IκBα、Iκκβ蛋白表达均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论羟基红花黄色素A对心肌缺血再灌注损伤大鼠具有保护作用,其作用机制可能与调控炎性因子及NF-κB信号通路有关。

羟基红花黄色素A对脑缺血大鼠皮层炎症信号转导途径相关因子的抑制作用

羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)是红花中的单体有效成分。本研究采用线栓法制备大鼠永久性脑缺血模型,观察HSYA对永久性脑缺血大鼠炎症信号转导途径相关因子的抑制作用。于缺血后3、6、12和24 h取大脑皮层。Western blotting检测细胞核及胞浆核转录因子κB(NF-κB)p65及胞浆磷酸化IκB-α(pIκB-α)蛋白水平表达;Trans AM试剂盒检测NF-κB DNA结合活性;RT-PCR检测炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10转录水平表达。结果表明,大鼠脑缺血后多次静脉注射HSYA(10 mg.kg-1),能显著抑制p65核转位以及IκB-α的磷酸化,降低NF-κB DNA结合活性,并降低促炎因子TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达,升高抗炎因子IL-10 mRNA表达水平。提示HSYA的抗脑缺血作用可能与其抑制炎症信号途径中NF-κB激活及炎性因子转录水平表达有关。

羟基红花黄色素A对实验性心肌梗死大鼠的保护作用及机制

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对大鼠缺血心肌的保护作用及其作用机制。方法通过结扎大鼠左冠状动脉前降支造成急性心肌缺血模型,观察HSYA对大鼠心肌梗死面积(MIS),血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)、6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)、血栓烷B2(TXB2)和血管紧张素(Ang)的影响。结果与模型组比较,HSYA明显减小急性心肌梗死大鼠MIS,显著提高血清NOS活性,明显增加NO及6-Keto-PGF1α的量,显著降低血清CK-MB、LDH、TXB2及Ang水平。结论HSYA对急性缺血心肌具有保护作用,其机制与HSYA调节NO、6-Keto-PGF1α、TXB2和Ang的水平,从而增加心肌供血供氧,减轻心肌细胞损伤、凋亡有关。

HPLC同时测定心可宁胶囊中羟基红花黄色素A和丹酚酸B的含量

目的建立同时测定心可宁胶囊中羟基红花黄色素A和丹酚酸B含量的方法。方法采用高效液相色谱法(HPLC),色谱柱为Agilent Zorbax Extend C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温30℃,流动相为甲醇-0.5%磷酸(35:65),流速1.0 ml/min,检测波长403 nm(羟基红花黄色素A)、286 nm(丹酚酸B),进样量10μl。结果羟基红花黄色素A在0.1184～0.8880μg的范围内呈良好的线性关系(r=0.9994),丹酚酸B在0.8390～6.2925μg的范围内呈良好的线性关系(r=0.9998);羟基红花黄色素A平均加样回收率为99.17%(n=6),RSD为0.87%,丹酚酸B平均加样回收率为99.41%,RSD为0.87%。结论该方法操作简便、准确、重复性好,可用于心可宁胶囊的质量控制。

羟基红花黄色素A与芍药苷联用对脑缺血再灌注大鼠脑组织p-AKT蛋白的影响

目的探讨羟基红花黄色素A(HSYA)与芍药苷(PF)联用对脑缺血再灌注大鼠脑组织磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的影响。方法将160只SD大鼠随机分成HSYA组(5 mg·kg^(-1))、PF组(5 mg·kg^(-1))、预防治疗组(HSYA+PF,各5 mg·kg^(-1))、治疗组(HSYA+PF,各5 mg·kg^(-1))、银杏内酯组(5 mg·kg^(-1))、模型组、假手术治疗组(HSYA+PF,各5 mg·kg^(-1))、假手术空白组。采用右侧大脑中动脉线栓法(MACO)复制急性局灶性脑缺血再灌注模型,预防治疗组从造模前3 d开始通过尾静脉注射给药,余各组造模后连续给药7 d。再灌注6 h后及取材前进行神经行为评分;氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察并测定脑梗死面积百分比;HE染色观察各组大鼠海马区病理组织学变化;免疫组化法检测脑组织皮层区p-AKT蛋白表达情况。结果与假手术组比较,其余各组首次神经行为评分均显著增加(P<0.05);与模型组比较,预防治疗组首次神经行为评分显著降低(P<0.05),各给药组治疗后神经行为评分显著降低(P<0.05)。与假手术组比较,模型组脑梗死面积百分比显著增大(P<0.05);与模型组比较,各给药组脑梗死面积百分比显著减小(P<0.05)。与模型组比较,预防治疗组、治疗组、银杏内酯组的脑组织皮层内p-AKT阳性细胞表达率显著升高(P<0.05),而HSYA组、PF组与模型组的差异无统计学意义(P>0.05);与治疗组比较,预防治疗组的p-AKT阳性细胞表达明显增加(P<0.05)。结论 HSYA与PF联用较单用对脑缺血再灌注损伤有更强的保护作用,这可能与其上调PI3K/AKT通路中p-AKT蛋白的表达量有关,且预防用药的保护作用更强。

羟基红花黄色素A对老龄大鼠膝关节骨性关节炎的干预效果及作用机制

目的研究羟基红花黄色素(HSY)A对老龄大鼠膝关节骨性关节炎(KOA)的干预效果及作用机制。方法选取60只大鼠随机分为正常组12只,其余48只大鼠建立膝关节骨性关节炎模型,建模完成后,在造模动物中抽取4只及正常组抽取1只处死,观察造模是否成功,将剩余44只模型大鼠随机分为模型组、HSYA低、中、高剂量组各11只,HSYA低剂量组注射20μl浓度为2.5 mg/kg HSYA,HSYA中剂量组注射20μl浓度为5 mg/kg HSYA,HSYA高剂量组注射20μl浓度为10 mg/kg HSYA,其余两组各给予等量生理盐水,观察各组关节直径、足趾容积、炎症因子、基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-13、基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP)-1表达、核因子(NF)-κB通路蛋白相对表达量。结果与正常组相比,模型组、HSYA低剂量组、HSYA中剂量组、HSYA高剂量组膝关节直径、足趾容积、白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6、IL-17水平及MMP-3、MMP-13、TIMP-1、核因子κB抑制因子(IκB)α、NF-κB P65表达均明显升高(P<0.05)。与模型组相比,HSYA低、中、高剂量组膝关节直径、足趾容积、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-17水平及MMP-3、MMP-13、TIMP-1、IκBα、NF-κB P65表达均明显降低(P<0.05),与HSYA低剂量组相比,HSYA中、高剂量组膝关节直径、足趾容积、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-17水平及MMP-3、MMP-13、TIMP-1、IκBα、NF-κB P65表达均明显降低(P<0.05)。与HSYA中剂量组相比,HSYA高剂量组膝关节直径、足趾容积、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-17水平及MMP-3、MMP-13、TIMP-1、IκBα、NF-κB P65表达均明显降低(P<0.05)。结论HSY A可调控KOA关节至今、足趾容积、缓解炎症反应,其机制可能与NF-κB通路有关。

红花黄色素对氧自由基引起人红细胞膜损伤的保护作用

目的:研究羟基红花黄色素A(HSYA)和红花黄色素B(SYB)对超氧阴离子自由基(O2-.)引发的人红细胞膜氧化损伤的保护作用。方法:采用邻苯三酚制备人红细胞膜过氧化损伤模型,研究HSYA和SYB对人红细胞膜氧化损伤的影响。结果:O2-.能引起红细胞膜脂质过氧化,使膜流动性下降。而红细胞膜经过一定量的HSYA和SYB预处理后,膜流动性提高。结论:HSYA和SYB对氧自由基引发的红细胞膜损伤具有一定的保护作用。

食品添加剂红花黄色素化学成分的HPLC-ESI-MS分析

目的:采用HPLC-ESI-MS分析方法,鉴定其化学成分。方法:高效液相色谱采用Phenomenex Gemini-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),以0.01%三氟乙酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,检测波长为全波长;质谱使用ESI离子源,正、负离子分别检测。结果:通过质谱分析以及参照相关文献共鉴定出11个成分,其中羟基红花黄色素A和脱水红花黄色素B为期主要的有效成分。结论:该方法灵敏度高、分离度好,为红花黄色素物质基础的研究提供一种快速准确的分析方法。对比了现行最新红花黄色素标准,建议现行红花黄色素标准规定的有效成分修改为羟基红花黄色素A和脱水红花黄色素B。

HPLC法测定瘀血痹颗粒中丹酚酸B、羟基红花黄色素A、姜黄素和齐墩果酸含量

目的建立一种可用于瘀血痹颗粒中丹酚酸B、羟基红花黄色素A、姜黄素和齐墩果酸含量测定的HPLC法。方法采用Shimadzu CLC-ODS C_(18)色谱柱;以乙腈(流动相A)-0.3%磷酸溶液(流动相B)为流动相,程序洗脱;测定波长:丹酚酸B为286 nm,羟基红花黄色素A为403 nm,姜黄素为430 nm,齐墩果酸为205 nm;体积流量1.0 mL·min^(-1);柱温30℃;进样体积:10μL。结果丹酚酸B、羟基红花黄色素A、姜黄素和齐墩果酸分别在质量浓度0.0966~9.6600、0.1258~12.5800、0.0981~9.8100、0.9580~95.8000μg·mL^(-1)内具有良好的线性,平均回收率分别为99.89%、100.39%、99.94%和100.01%,RSD值分别为0.60%、0.99%、1.01%和0.71%。结论该方法适用于瘀血痹颗粒制剂的质量控制。

红花水提物中羟基红花黄色素A和脱水红花黄色素B在大鼠体内的药代动力学研究

目的:探讨红花水提物中羟基红花黄色素A(HSYA)和脱水红花黄色素B(AHSYB)在大鼠体内的药代动力学特征。方法:红花水提物大鼠灌胃给药后,HPLC测定血浆中HSYA和AHSYB的含量,运用非房室模型经Win Nonlin 5.2软件求取药动学参数。结果:HSYA和AHSYB在大鼠体内的主要药动学参数Cmax、Tmax、t1/2z、AUC0→t和AUC0→∞分别为(4.14±0.42)和(1.87±0.29)μg/m L、30和20min、(96.78±9.32)和(83.46±7.53)min、(512.18±74.15)和(221.95±22.34)μg·min·m L-1、(584.78±86.58)和(242.42±23.27)μg·min·m L-1。结论:Cl、t1/2z等数据比较表明红花水提物中HSYA与AHSYB的药代动力学类似,两者在大鼠体内的吸收均较快,代谢也均较慢。

HPLC同时测定冠心康颗粒中芍药苷、丹酚酸B和羟基红花黄色素A的含量

目的建立同时测定冠心康颗粒中芍药苷、丹酚酸B和羟基红花黄色素A含量的方法。方法采用Welchrom C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,以乙腈（A）-0.1%磷酸（B）为流动相,梯度洗脱;流速：1.0 m L·min^-1;检测波长：230 nm。结果芍药苷在7.02-52.64μg·m L^-1内呈良好的线性关系（r=0.999 7）,平均回收率为99.3%,RSD为1.2%;丹酚酸B在23.19-173.90μg·m L^-1内呈良好的线性关系（r=0.999 7）,平均回收率为98.2%,RSD为1.1%;羟基红花黄色素A在4.47-33.50μg·m L^-1内呈良好的线性关系（r=0.999 3）,平均回收率为98.0%,RSD为1.0%。结论本法简便、灵敏、准确、重复性好,可用于冠心康颗粒的质量控制。

HPLC-DAD法测定脑血栓片中苦杏仁苷、羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B和丹参酮Ⅱ_A

目的建立测定脑血栓片中苦杏仁苷、羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B和丹参酮ⅡA的HPLC-DAD法。方法采用HPLC-DAD法,Agilent Poroshell 120 SB-C18色谱柱（100 mm×4.6 mm,2.7μm）;流动相：甲醇–0.2%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长分别为210 nm（苦杏仁苷）、403 nm（羟基红花黄色素A）、230 nm（芍药苷）、321 nm（阿魏酸）、286 nm（丹酚酸B）、270 nm（丹参酮ⅡA）;体积流量：0.7 m L/min;柱温：30℃;进样量3-5μL。结果苦杏仁苷、羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B和丹参酮ⅡA 6个成分的线性范围分别为11.90-1 158.90、9.14-91.39、11.70-1 173.50、4.04-1 011.00、3.97-992.20、4.40-551.00 ng;平均回收率分别为96.47%、96.92%、99.96%、97.20%、97.57%、96.50%,RSD值分别为1.3%、1.6%、1.3%、1.7%、1.9%、0.7%。结论所建立的方法可同时测定脑血栓片中苦杏仁苷、羟基红花黄色素A、芍药苷、阿魏酸、丹酚酸B和丹参酮ⅡA。

羟基红花黄色素A、芍药苷单用及联合对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织NF-κB及炎症因子的影响

目的:探讨羟基红花黄色素A、芍药苷单用及联合用药对脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法:120只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、银杏内酯5mg/kg组、羟基红花黄色素A 5mg/kg组、芍药苷5mg/kg组和羟基红花黄色素A与芍药苷联合用药组(5mg/kg+5mg/kg)。采用线栓法建立大鼠局部脑缺血再灌注模型(MCAO)。脑缺血1h再灌注6h后进行神经功能缺失评分及尾静脉注射给药;给药7天后,再次进行神经功能缺失评分;氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测梗死面积;酶联免疫法(ELISA)测定脑组织中IL-1β和TNF-α含量;免疫组化法(ICH)检测缺血脑组织中核转录因子NF-κB/p65的表达情况。结果:与假手术组比较,模型组大鼠治疗前神经功能评分均明显高于假手术组;用药7天后,与模型组比较,银杏内酯组(5mg/kg)、羟基红花黄色素A组(5mg/kg)、芍药苷组(5mg/kg)和合用组(5mg/kg+5mg/kg)的神经功能评分均降低,脑梗死面积显著减少,脑组织IL-1β和TNF-α含量明显减少,海马组织NF-κB p65表达明显减弱;且合用组对炎症因子表达的抑制效应更加明显。结论:羟基红花黄色素A与芍药苷联合用药对脑缺血再灌注大鼠的脑损伤具有协同保护作用,且显著优于单独使用,协同作用与下调脑组织中NF-κB的表达,减少炎性因子IL-1β和TNF-α的生成,从而减轻脑缺血后脑组织的继发性炎症反应,发挥对脑组织的保护作用有关。

HPLC法同时测定复方丹参口服液中羟基红花黄色素A和丹酚酸B的含量

目的：建立同时测定复方丹参口服液中羟基红花黄色素A和丹酚酸B含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为SHIMADZU ODS-C18,流动相为甲醇-0.5%磷酸（35∶65,V/V）,流速为1.0 ml/min,检测波长为403 nm（羟基红花黄色素A）、286nm（丹酚酸B）,柱温为35℃,进样量为20μl。结果：羟基红花黄色素A、丹酚酸B检测质量浓度线性范围分别为2.01~20.10、39.80~398.00μg/ml（r均为0.999 9）;精密度、稳定性、重复性试验的RSD〈2%;加样回收率分别为98.26%~101.25%、98.70%~101.35%,RSD分别为0.94%、0.71%（n=9）。结论：该方法简便可行、重复性好,可用于复方丹参口服液中羟基红花黄色素A和丹酚酸B的含量测定。

HPLC同时测定蝎龙接骨散中羟基红花黄色素A和阿魏酸的含量

目的:建立蝎龙接骨散中羟基红花黄色素A和阿魏酸的测定方法。方法:采用反相高效液相色谱法法进行定量分析,用Inertsil C8-3柱,乙腈-0.2%磷酸-四氢呋喃(28∶70∶2)为流动相,流速1.0 mL·min-1,检测波长340 nm。结果:羟基红花黄色素A和阿魏酸的线性范围分别为11.13～111.35 mg·L-1和3.42～34.2 mg·L-1;平均加样回收率分别为100.35%,99.23%。结论:此法简便、准确,具有良好的重复性和回收率,适用于蝎龙接骨散中羟基红花黄色素A和阿魏酸的同时测定。

HPLC同时测定白癜风丸中羟基红花黄色素A和丹酚酸B的含量

目的:建立同时测定白癜风丸中羟基红花黄色素A和丹酚酸B含量的测定方法。方法:采用Welchrom C18色谱柱,流动相乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱,流速1.0 m L·min^(-1),检测波长280 nm。结果:羟基红花黄色素A在4.91~36.86 mg·L^(-1)呈良好的线性关系(r=0.999 5),平均回收率99.12%,RSD 0.9%。丹酚酸B在14.99~112.42 mg·L^(-1)呈良好的线性关系(r=0.999 7),平均回收率为98.79%,RSD 1.0%。结论:该方法简便、准确、重复性好,可用于白癜风丸的质量控制。