龙陵山羊种质特性探究

龙陵山羊又称龙陵黄山羊,属肉皮兼用型,生长快,肉质细嫩,屠宰率高,抗湿力强,板皮坚实致密,具有优良的种质特性。通过龙陵山羊的生长发育指标、生产性能指标以及生理指标的测定,对龙陵山羊的种质特性进行一个全面的探究。

龙陵黄山羊羊源E.coli ClpV1基因缺失株构建及部分生物学特性分析

为了探讨龙陵黄山羊羊源E.coli ClpV1基因对E.coli部分生物学特性的影响,试验以腹泻龙陵黄山羊肛门拭子为病料进行细菌分离鉴定;从分离菌中挑选对卡那霉素和大观霉素均敏感的原菌株E.coli D1,运用CRISPR/Cas9技术构建缺失株E.coliΔClpV1-D1;连续传15代后运用PCR方法检测缺失株E.coliΔClpV1-D1遗传稳定性;挑取原菌株E.coli D1与缺失株E.coliΔClpV1-D1单克隆接种于LB液体培养基中培养,在24 h内每隔1 h测定其生长速度;30℃培养72 h后采用结晶紫染色法测定原菌株E.coli D1与缺失株E.coliΔClpV1-D1生物被膜形成能力;采用MTT法测定原菌株E.coli D1与缺失株E.coliΔClpV1-D1在第3,6,9,12小时时的细胞存活率;分别取1.0×10^(5)cfu/mL、1.0×10^(8)cfu/mL浓度的原菌株E.coli D1与缺失株E.coliΔClpV1-D1对昆明小鼠进行腹腔注射,24 h后记录各组小鼠死亡数量,进行致病性分析。结果表明:从16份肛门拭子病料中分离得到12株E.coli;运用CRISPR/Cas9技术成功构建出缺失株E.coliΔClpV1-D1;缺失株E.coliΔClpV1-D1连续传15代后仍能稳定遗传;原菌株E.coli D1和缺失株E.coliΔClpV1-D1在24 h内生长速度无显著差异(P>0.05);缺失株E.coliΔClpV1-D1的生物被膜形成能力显著低于原菌株E.coli D1(P<0.05);在测定的4个时间段缺失株E.coliΔClpV1-D1对IPEC-J2细胞毒性减弱,两种浓度的缺失株对小鼠的致死率均显著低于原菌株(P<0.05)。说明缺失ClpV1基因对E.coli生长速度无明显影响,但会降低其生物被膜形成的能力和致病性。

龙陵黄山羊杂交后代羯羊在低热河谷地区的育肥性能研究

为研究龙陵黄山羊杂交后代羯羊的舍饲育肥和屠宰性能,本试验选择6月龄、体况良好、体重为(14.63±1.35)kg的龙陵黄山羊、波尔山羊×龙陵黄山羊F1代、努比山羊×龙陵黄山羊F1代羯羊各12只,分为3个处理组(龙陵黄山羊组、波龙杂交羊组、努龙杂交羊组),每组2个重复,每个重复6只羊。试验期共180 d,分为前期、中期和后期3个阶段,每个阶段60 d。结果表明:在试验中期,波龙杂交羊组和努龙杂交羊组羊的体重高于龙陵黄山羊组(P<0.05);在试验前、中、后期,3组试验羊的干物质日采食量逐渐提高(0.81、0.94、1.09 kg/d);试验期间,波龙杂交羊组的平均日增重高于龙陵黄山羊组(P<0.05);在试验中期,波龙杂交羊组的平均日增重较龙陵黄山羊组和努龙杂交羊组分别提高68.76%和21.01%(P<0.05),且波龙杂交羊组的耗料增重比最低;波龙杂交羊组和努龙杂交羊组的胴体净肉重较龙陵黄山羊组分别提高了10.89%和9.38%(P<0.05),努龙杂交羊组的胴体净肉率高于龙陵黄山羊组(P<0.05),胴体重、骨重、屠宰率、净肉率和肉骨比在各组间无显著差异。由此可见,波尔山羊×龙陵黄山羊F1代杂交羊在3个试验阶段均表现出较好的育肥性能且周岁屠宰性能最佳,高能低蛋白质饲粮可以较好缓解舍饲育肥羊对低热河谷地区高温气候的应激反应。

龙陵黄山羊保护与开发利用并驾齐驱

龙陵黄山羊是龙陵县特有的地方优良品种,介绍了龙陵黄山羊的基本情况、经营主体培育情况、带动农民增收情况,在龙陵黄山羊种质资源鉴定及保护中所做的大量基础性技术工作,种质资源开发利用方面采取的有效措施,使龙陵黄山羊这一地方特色资源取得新突破,为全省地方特色养殖业发展和山羊养殖提供了模式参考。

龙陵黄山羊屠宰性能及肉质研究

对不同月龄的龙陵黄山羊进行了胴体和肉质理化特性的分析测定，结果得出，８月龄和１８月龄龙陵黄山羊屠宰率和净肉率分别为４５．５２％±３．４９，３２．６２％±０．６４和４８．５１％±１．７２，３７．５１％±０．５２，显示出良好的胴体品质。不同月龄间羊肉的水分、干物质、肌间脂肪含量和肉色差异显著（Ｐ＜０．０５）．背最长肌肌纤维直径分别为５７．１２μｍ和６２．８７μｍ。蛋白质中赖氨酸和组氨酸的含量丰富，８月龄占羊肉蛋白质７．７３％±０．５１和２．５６％±０．２９，１８月龄占羊肉蛋白质８．１６％±０．３８和２．８５％±０．１２均高于理想蛋白中的含量．

龙陵黄山羊羔羊的屠宰性能及肉质理化特性研究

对白天放牧,晚上补饲的6月龄龙陵黄山羊羔羊的屠宰特性及肉质理化特性进行研究。11头龙陵黄山羊用于本试验,所有试验山羊14日龄去势,90日龄断奶。断奶后采用"白天放牧、晚上补饲"的半放牧饲养方式,补充饲料粗蛋白18.5%,代谢能12.5 M J/kg。饲养至6月龄屠宰,测定屠宰性能和背最长肌理化特性。屠宰性能试验结果显示,宰前活重、胴体重、净肉重、屠宰率和净肉率分别为18.5 kg,8.8 kg,6.03 kg,47.51%和32.38%。背最长肌理化特性结果显示,粗水分、粗蛋白、粗脂肪、粗灰分的百分含量和pH值分别为78.04%,18.67%,1.81%,1.02%和6.86。试验结果显示,6月龄龙陵黄山羊羔羊具有较高的屠宰率和良好的产肉性能,肉质的各项理化指标均在正常范围内。

云南龙陵黄山羊的核型及C－带和Ag－NOR_s研究

采用外周血淋巴细胞培养及染色体分带技术，分析了龙陵黄山羊的核型，Ｃ—带和银染核仁组织区（Ａｇ—ＮＯＲ＿ｓ），结果表明：龙陵黄山羊染色体数为２ｎ＝６０，常染色体及Ｘ染色体为端部着丝粒染色体，Ｙ染色体最小，为中部着丝粒染色体。常染色体着丝粒区均显示Ｃ—带，性染色体未显Ｃ—带．雌性银染核仁组织区（Ａｇ—ＮＯＲ＿ｓ）分布于Ｎｏ．１，２，３，４，５，２５号染色体，雄性分布于Ｎｏ．１，２，２５号染色体，显示了性别及分布多态性。研究还发现三种不同的联合（ＡＳＳＯＣＩＡＴＩＯＮ）。

云南地方云岭黑山羊和龙陵黄山羊生长及屠宰性能的研究

试验对成年云南地方云岭黑山羊和龙陵黄山羊的生长及屠宰性能进行研究。新出生的云岭黑山羊和龙陵黄山羊各16只用于本试验。试验山羊采用白天放牧、晚上补饲的半放牧饲养方式,补充饲料粗蛋白18.5%、代谢能12.5MJ/kg。饲养360d后,屠宰云岭黑山羊和龙陵黄山羊各8只。结果表明:虽然云岭黑山羊出生体重显著高于(P=0.03)龙陵黄山羊,但成年羊屠宰体重2品种差异不显著(P>0.05)。胴体品质和组成各项指标云岭黑山羊与龙陵黄山羊差异不显著。非胴体组织器官相对重量,云岭黑山羊除肠重比显著大于龙陵黄山羊外(P=0.03),其他指标2品种差异不显著。本试验表明,成年云岭黑山羊与龙陵黄山羊生长及屠宰性能相似,均具备培育肉用山羊的良好条件。

云南地方云岭黑山羊和龙陵黄山羊肉品质的研究

本试验对半放牧饲养条件下云南地方成年云岭黑山羊和龙陵黄山羊肉的理化特性和风味品评进行研究。新出生的云岭黑山羊和龙陵黄山羊各16头用于本试验。试验山羊90日龄断奶后采用"白天放牧、晚上补饲"的半放牧饲养方式,补充饲料粗蛋白18.5%、代谢能12.5 MJ/kg。饲养360 d后,选择体重最接近的云岭黑山羊和龙陵黄山羊各8头屠宰,取背最长肌分析肉品质。试验结果显示,宰后45 min,云岭黑山羊背最长肌的肉色评分(P=0.04)、CIELAB L*(P=0.05)、a*(P<0.01)、b*(P=0.03)、H°(P=0.03)显著低于龙陵黄山羊。宰后24 h云岭黑山羊背最长肌CIELAB a*(P=0.02)、b*(P=0.04)和C(P=0.03)显著低于龙陵黄山羊。云岭黑山羊背最长肌的剪切力显著低于龙陵黄山羊(P=0.05)。云岭黑山羊背最长肌粗脂肪含量(P=0.04)和香味评分(P=0.03)显著大于龙陵黄山羊。以上结果显示,云岭黑山羊与龙陵黄山羊相比,具有较高粗脂肪含量和较优的风味,但肉色偏浅。

成年龙陵黄山羊的屠宰性能及肉质理化特性研究

对白天放牧,晚上补饲的24月龄成年龙陵黄山羊的屠宰性能及肉质理化特性进行研究。6头龙陵黄山羊用于试验,所有试验山羊14日龄去势,90日龄断奶。断奶后采用"白天放牧、晚上补饲"的半放牧饲养方式,补充饲料粗蛋白18.5%,代谢能12.5 MJ/kg。饲养至24月龄屠宰,测定屠宰性能和背最长肌理化特性。屠宰性能试验结果显示,宰前活重、胴体重、净肉重、屠宰率和净肉率分别为38.13 kg,21.15 kg,15.67 kg,55.46%和41.10%。背最长肌的理化特性结果显示,粗水分、粗蛋白、粗脂肪、粗灰分的百分含量和pH值分别为75.04%,20.99%,2.86%,0.97%,6.42。试验结果显示,成年龙陵黄山羊在较大月龄(24月龄)有较高的产肉量,肉质的各项理化指标均在正常范围内。

云南地方云岭黑山羊和龙陵黄山羊羔羊生长及屠宰性能的研究

本试验对云南地方云岭黑山羊和龙陵黄山羊羔羊的生长及屠宰性能进行研究。新出生的云岭黑山羊和龙陵黄山羊各16只用于本试验。试验山羊采用白天放牧、晚上补饲的半放牧饲养方式,补充饲料粗蛋白18.5%、代谢能12.5MJ/kg。饲养150d后,屠宰云岭黑山羊和龙陵黄山羊各8只。结果显示,云岭黑山羊出生体重显著高于(P=0.03)龙陵黄山羊,但断奶体重2个品种差异不显著(P>0.05)。云岭黑山羊宰前体重(P=0.05)、宰后空体重(P=0.05)、热胴体重(P=0.04)、胴体脂肪重(P=0.02)和胴体脂肪沉积率(P=0.03),显著大于龙陵黄山羊。云岭黑山羊肝重比(P=0.03)、肠重比(P=0.03)和胃重比(P<0.01)显著大于龙陵黄山羊。本试验表明,云岭黑山羊较龙陵黄山羊更具备生产羔山羊肉的潜能。

云南龙陵黄山羊线粒体DNA限制性酶切分析

采用碱性变性法提取来自于龙陵县不同地区的１８只黄山羊个体的线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ），并用ＡｐａⅠ，ＡｖａⅠ，ＢａｍＨⅠ，ＢｃｌⅠ，ＢｇｌⅠ，ＢｇｌⅡ，ＣｌａⅠ，ＤｒａⅠ，ＥｃｏＲⅠ，ＥｃｏＲⅤ，ＨａｅⅠ，ＨｉｎｄⅢ，ＫｐｎⅠ，ＰｓｔⅠ，ＰｖｕⅡ，ＳａｃⅠ，ＳａｌⅠ，ＳｍａⅠ，ＳｔｕⅠ和ＸｈｏⅠ等２０种限制性内切酶进行酶切分析．结果发现龙陵黄山羊线粒体ＤＮＡ的分子量大小约为１５８Ｋｂ；不同酶的酶切位点分别为：ＤｒａⅠ有７个酶切位点，ＡｖａⅡ有６个酶切位点，ＥｃｏＲⅤ和ＳｔｕⅠ共有５个酶切位点，ＨｉｎｄⅢ和ＨｅａⅡ有４个酶切位点，ＢａｍＨⅠ，ＢｇｌⅡ，ＰｓｔⅠ和ＰｖｕⅡ有３个酶切位点，ＡｐａⅠ，ＣｌａⅠ有２个酶切位点，其余有１个酶切位点．

龙陵黄山羊遗传多样性同功酶电泳研究

采用常规水平式淀粉胶蛋白电泳技术，对３８只龙陵黄山羊个体的３９个遗传座位的血液同功酶的多态性进行了研究。结果发现，ＡＫＰ、ＣＥＳ－Ｉ、ＥＳＤ、ＧＯＩ、ＬＡＰ、ＭＤＨ、ＭＥ和ＮＰ等８个座位具多态性，多态座位ＡＫＰＯ、ＣＥＳ－ＩＩ、ＦＳＤＡ、ＧＯＩＢ、ＬＡＰＡ、ＭＤＨＡ、ＭＥＡ和ＮＰＡ的基因频率较高；多态座位百分比Ｐ＝０２０５１，平均杂合度Ｈ＝００９０６±００２６５。结果表明，云南龙陵黄山羊与已检测的其它山羊比较。

龙陵黄山羊胚胎移植试验

从龙陵黄山羊的群体中选出20只供体和74只受体,分别用5.0 mg和6.0 mg国产FSH对供体羊进行超排处理。用阴道海绵栓+PMSG对受体羊进行同期发情处理,供体羊配种后第7天回收胚胎,按形态学将胚胎分级并对黄体记数,结果表明,5.0 mg、6.0 mg组黄体数分别为(11.90±0.32)枚、(9.80±0.69)枚,两组黄体数差异不显著;5.0 mg组的只均回收胚胎数为(7.40±0.34)枚,6.0 mg组为(4.50±1.24)枚,二者差异显著;把可用胚胎119枚移植给54只受体羊,移植产羔率为67%。

不同膻味水平的龙陵黄山羊肝组织转录组SNP分析

为加强山羊肉类的质量,探究膻味相关差异基因,对3个品种共14只羊的总膻味值进行显著性差异检验发现,高膻味水平(总膻味值大于771.845)和低膻味水平(总膻味值低于771.845)龙陵黄山羊总膻味值差异显著(P<0.05)。通过对高膻味水平和低膻味水平的龙陵黄山羊肝组织进行转录组测序,将获得的数据进行SNP检测,并利用GO富集和KEGG富集分析SNP所在基因。结果表明,高膻味水平的龙陵黄山羊特有的SNP有411973个,低膻味水平的龙陵黄山羊特有的SNP有444638个,2者共有SNP 856611个;GO富集分析发现,SNP所在基因大量富集在生物进程和细胞组成中;KEGG富集分析发现,SNP所在基因显著富集在磷脂酰肌醇信号系统、补体和凝血级联、胰岛素抵抗、拼接体、自噬-动物、辅因子的生物合成、内质网中的蛋白质加工、胞吞作用、AMPK信号通路;对脂肪酸生物合成通路中的6个基因SNP分析发现,有7个SNP位于同义编码区,其中有2个SNP引起了氨基酸的改变。

龙陵黄山羊生长曲线拟合与分析

为了比较Von Bertalanffy、Gompertz、Logistic 3种非线性生长曲线模型对龙陵黄山羊生长曲线的拟合效果,试验测定了90只(公母各45只)龙陵黄山羊初生及3,6,9,12,18,24,36月龄体重,采用拟合度(R)、均方误差(MSE)、平均绝对误差(MAE)作为3种生长曲线模型的评价指标,采用拟合估计值与实测值之间的Pearson相关系数作为模型有效性的检验指标,确定最适拟合龙陵黄山羊生长曲线的模型。结果表明:Von Bertalanffy模型估计龙陵黄山羊公母羊拐点月龄分别为3.96,4.53月龄,拐点体重分别为13.12,12.33 kg,且母羊比公羊更早达到成熟体重。公母羊生长曲线均以Von Bertalanffy模型拟合效果最优,其R值最大(公母羊分别为0.988 3,0.986 9),MSE值(公母羊分别为3.176 7,3.419 8)和MAE值(公母羊分别为1.153 8,1.290 0)最小。3种模型公母羊估计值与体重实测值的Pearson相关系数均以Von Bertalanffy模型最大,公母羊分别为0.994 2,0.993 5。说明VonBertalanffy模型对龙陵黄山羊生长曲线的拟合效果最好。

龙陵黄山羊成纤维细胞系的建立及其生物学特性分析

实验采用龙陵黄山羊耳缘组织块贴壁培养法首次对龙陵黄山羊成纤维细胞进行体外培养,通过原代培养、传代培养、冷冻保存建立了龙陵黄山羊耳缘成纤维细胞系;并对其细胞形态、细胞活率、细胞核型等生物学特性进行了分析。结果表明:细胞倍增时间48 h,生长曲线为"S"型;染色体中正常二倍体染色体2n=60所占比例为91.68%。

不同地理条件和营养水平对龙陵黄山羊生产性能的影响

为研究适宜龙陵黄山羊生长的地理环境和饲粮营养水平,在3个地理条件不同的羊场同时进行动物试验,每个场分2组,分别饲喂低能低蛋白日粮和高能高蛋白日粮,每组2~3个重复,每个重复6~8只龙陵黄山羊,试验时间90 d。结果表明:低营养水平下,中海拔组和低海拔组的平均日增重、精料日均摄入量和干物质日均摄入量均极显著高于高海拔组(P<0.01)。中海拔组料重比显著低于高海拔组(P<0.05),极显著低于低海拔组(P<0.01)。低海拔组的精料增重比极显著高于高海拔组(P<0.01)和中海拔组(P<0.01)。高营养水平下,中海拔组和低海拔组的平均日增重、精料日均摄入量、干物质日均摄入量均极显著高于高海拔组(P<0.01)。综上,龙陵黄山羊在年均气温约20℃的中海拔和低海拔地区,生产性能优于高海拔地区;高营养日粮有利于提高龙陵黄山羊的生产性能。

不同养殖方式对龙陵黄山羊羊肉脂肪酸含量的影响

对全舍饲、放牧+补饲12月龄龙陵黄山羊背最长肌的脂肪酸含量进行了测定分析。结果表明:两组共检出23种脂肪酸,其中有15种相同脂肪酸;两组间α-亚麻酸、n3多不饱和脂肪酸差异极显著(P<0.01);肉豆寇酸、棕榈酸、油酸、亚油酸、花生四烯酸、脂肪酸总量、单不饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸差异显著(P<0.05);其余脂肪酸均无显著性差异(P>0.05)。上述结果表明:两组间所含脂肪酸的种类及含量不同;放牧+补饲组饲养方式所得羊肉营养价值更高;龙陵黄山羊肉膻味小。