基于TGF-β1/Smads通路探讨龟鹿补肾丸对COPD大鼠气道重塑的影响

目的探究龟鹿补肾丸对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠气道重塑的干预作用及其机制。方法将60只SPF级SD大鼠随机分为正常对照组,模型组,龟鹿补肾丸低、中、高剂量(1.8 g/kg、3.6 g/kg、7.2 g/kg)组和氨茶碱(30.0 mg/kg)组,每组10只。采用气管内滴注脂多糖联合烟熏法复制COPD模型,自第29天起给予正常对照组、模型组灌胃生理盐水,其余各治疗组分别给予相应药物,连续给药28 d。实验第57天检测肺功能、肺组织病理学变化;ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中MMP-9、MMP-12、TIMP-1含量;IHC法检测肺组织TGF-β1、COL-I、α-SMA的表达;Western blot法检测肺组织TGF-β1、p-Samd2、p-Samd3的表达。结果与正常对照组相比,模型组大鼠呼气峰流速(PEF)、吸气峰流速(PIF)、每分钟通气量(MV)、呼出50%潮气量时呼气流速(EF50)下降,肺组织炎性细胞浸润明显,平均肺泡数(MAN)减少、肺平均内衬间隔值(MLI)增加,气道胶原纤维沉积明显增多,肺泡灌洗液(BALF)中MMP-12、TIMP-1含量升高,肺组织TGF-β1、p-Samd2、p-Samd3、COL-I、α-SMA表达上调。经龟鹿补肾丸干预后,可升高PIF、PEF、MV、EF50,减轻肺组织炎性细胞浸润,MAN值增加,MLI值减少,抑制胶原沉积,降低MMP-12、TIMP-1含量,下调肺组织TGF-β1、p-Samd2、p-Samd3、COL-I、α-SMA的表达。结论龟鹿补肾丸可以改善COPD模型大鼠的肺功能,减轻气道重塑程度,其机制可能与调节TGF-β1/Smads信号通路有关。

龟鹿补肾丸对过敏性哮喘大鼠气道炎症和Th1/Th2失衡的影响

目的探讨龟鹿补肾丸对过敏性哮喘模型大鼠气道炎症及Th1/Th2失衡的影响。方法48只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组、地塞米松阳性药物组、龟鹿补肾丸低、中、高剂量组。除正常对照组外,其余各组采用卵蛋白(OVA)致敏激发制备大鼠过敏性哮喘模型。各给药组从激发第1天开始给予相应药物进行干预。末次激发10 min记录大鼠引喘潜伏期和哮喘症状评分。末次雾化激发24 h后,检测外周血总白细胞数、分类和肺泡灌洗液(BALF)总白细胞数,ELISA法检测血清IgE水平和BALF中的IL-4、IL-5和IL-13和IFN-γ水平,HE染色和ABPAS染色分别观察肺组织炎症改变和气道酸性黏液分泌变化。qPCR法测定肺组织的T-bet、GATA-3的基因表达水平。结果与模型组比较,龟鹿补肾丸能显著降低过敏性哮喘大鼠症状评分、延长引喘潜伏期(P<0.01或P<0.05),显著降低BALF、外周血的总白细胞数以及外周血的淋巴细胞百分比、嗜酸性粒细胞百分比及中性粒细胞百分比(P<0.01或P<0.05),减少支气管周围炎性细胞浸润,酸性黏液物质阳性面积显著减小(P<0.01),明显降低过敏性哮喘大鼠外周血IgE水平(P<0.01),显著升高BALF中IFN-γ水平,降低IL-4、IL-5和IL-13水平(P<0.01或P<0.05),肺组织的T-bet mRNA表达水平显著升高,而GATA-3 mRNA表达水平显著降低(P<0.01或P<0.05)。结论龟鹿补肾丸能减轻过敏性哮喘大鼠气道炎症,其机制可能与抑制GATA-3 mRNA表达,促进T-bet mRNA表达,调节Th1/Th2失衡以缓解过敏性哮喘Th2型炎症有关。

超高效液相色谱-质谱法同时检测龟鹿补肾丸中龟甲胶、鹿角胶成分

建立检测龟鹿补肾丸中龟甲胶、鹿角胶成分的超高效液相色谱-质谱方法。恒温酶解样品中的胶类特征性肽段,采用超高效液相色谱-质谱识别技术分别对龟甲胶和鹿角胶进行鉴别,ESI+电离模式进行多响应监测。结果表明,本方法重复性好,精密度和稳定性考察RSD均小于6.0%,龟甲胶及鹿角胶检出限分别为0.02 mg/mL和0.01 mg/mL。用建立的检测方法测定6批次龟鹿补肾丸样品,均检测出了龟甲胶及鹿角胶特征性成分。说明该方法简便准确,灵敏度高,适用性强,可为龟鹿补肾丸中胶类成分的质量管控提供依据。

龟鹿补肾丸的质量控制

目的:建立龟鹿补肾丸的定性鉴别和定量测定方法。方法:采用TLC法对龟鹿补肾丸进行定性鉴别:用HPLC法测定该制剂中淫羊藿苷的含量。结果:薄层色谱法可鉴别出该制剂中的陈皮、黄芪、酸枣仁和淫羊藿。HPLC法含量测定中,淫羊藿苷的浓度在1～30μg·ml^(-1)范围内呈良好线性,样品的平均加样回收率为99.87%,RSD为2.5%。结论:建立的定性和定量方法均具有专属性好、准确和可靠的特点,可作为该制剂的质量控制方法。

龟鹿补肾丸的主要药效学研究

目的 :研究龟鹿补肾丸的补肾药理作用。方法 :观察药物对免疫和内分泌功能、生殖附性器官生长发育的影响。结果 :龟鹿补肾丸能提高小鼠炭粒廓清能力 ;提高幼年雄性小鼠的生殖附性器官精液囊、睾丸和包皮腺重量指数 ;延长小鼠游泳时间 ;改善肾阳虚大鼠内分泌功能 ;提高去势小鼠生殖附性器官精液囊和包皮腺的重量指数。结论 :龟鹿补肾丸具有雄激素样作用。

薄层扫描法测定龟鹿补肾丸中大黄素的含量

目的：研究龟鹿补肾丸中大黄素的含量测定方法。方法：采用薄层扫描法测定龟鹿补肾丸中大黄素的含量。结果：以对照品点样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，作回归分析，得回归方程Y=715．05X＋30．07，r=0．9994，大黄素点样量在0．21～1．05μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系；稳定性试验RSD为1．98％；重现性考查RSD为2．33％；精密度测定RSD为2．37％；平均回收率为97．96％，RSD为1．98％；测定龟鹿补肾丸大黄素的平均含量为0．02696mg／g。结论：该测定方法结果稳定、重现性好，可作为该制剂的质量控制方法。

龟鹿补肾丸诱发排卵的临床研究

目的 :观察中成药龟鹿补肾丸治疗功能性无排卵患者的促排卵作用。方法 :将 6 0例功能性无排卵患者 (均属中医肾阳虚型 )随机分为两组 ,每组各 30例 ,治疗组服用龟鹿补肾丸 ,对照组服用克罗米酚、已烯雌酚、安宫黄体酮 ,B超观测排卵情况及主卵泡增长等指标。结果 :两组患者主卵泡直径明显增大 ,治疗前后比较 ,差异有显著性意义 (P <0 0 1) ;两组治疗后比较 ,差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。治疗组观察 16 6个月经周期 ,出现排卵周期 82个 ,痊愈率达 70 % ,妊娠率达 5 6 1% ;对照组观察 175个月经周期 ,出现排卵周期 90个 ,痊愈率达 76 7% ,妊娠率达 33 3%。两组总有效率比较 ,差异无显著性意义 (P >0 0 5 ) ,但妊娠率比较 ,差异有显著性意义 (P <0 0 5 )。结论 :龟鹿补肾丸具有促进卵泡发育成熟、诱发排卵及提高妊娠率的作用。

HPLC测定龟鹿补肾丸中淫羊藿苷的含量

目的建立RP—HPLC法龟鹿补肾丸中有效成分淫羊藿苷含量的测定方法。方法采用HPLC法，色谱柱为Hypersil ODS（250mm×4．0mm，5μm）柱，流动相为乙腈-水（27：73），检测波长为270nm。结果淫羊藿苷线性范围0．0264～0．528μg/ml，r=0．9995（n=5）；回收率为100．17％（n=5），RSD为1．0％。结论测定方法简便、稳定，能有效地控制该制剂的质量。

龟鹿补肾丸治疗围绝经期抑郁症疗效观察

目的:探讨龟鹿补肾丸治疗围绝经期抑郁症的临床疗效。方法:观察组30例口服龟鹿补肾丸、对照组30例口服尼尔雌醇,共8周。结果:观察组治疗后FSH、LH显著降低(P<0.05),E2升高(P<0.05),与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:龟鹿补肾丸治疗围绝经期抑郁症有效。

龟鹿补肾丸和龟鹿补肾口服液对肾上腺皮质系统影响的研究

本文研究了龟鹿补肾丸和龟鹿补肾口服液对肾上腺皮质系统的影响。实验证明,两者均有增重小白鼠肾上腺和提高血清皮质醇水平的作用,明显抑制氢化可的松导致的阳虚小白鼠的体重下降和其脾脏、肾上腺的萎缩,提高阳虚证小白鼠的自主活动次数和延长小白鼠低温游泳的存活时间。

补肾调冲汤联合龟鹿补肾丸对肾阳虚型围绝经期功能失调性子宫出血患者症状改善及血清性激素水平的影响

目的 探讨补肾调冲汤联合龟鹿补肾丸对肾阳虚型围绝经期功能失调性子宫出血(PDUB)患者症状改善及血清性激素水平的影响。方法 选取2016年4月至2018年2月本院治疗的86例PDUB患者,依据随机数表法分为两组,各43例。对照组予以米非司酮治疗,观察组在此基础上给予补肾调冲汤联合龟鹿补肾丸治疗。统计两组不良反应发生情况,并对比治疗前后四肢不温、夜尿频多、精神萎靡、腰膝酸软等中医症状积分及血清性激素水平[孕酮(P)、促黄体生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)、雌激素(E2)]变化。结果 治疗后,观察组精神萎靡、四肢不温、夜尿频多、腰膝酸软积分分别为(0.87±0.24)分、(0.76±0.21)分、(0.64±0.20)分、(0.76±0.34)分,均低于对照组(1.85±0.52)分、(1.57±0.34)分、(1.08±0.37)分、(1.06±0.43)分,差异均有统计学意义(均P<0.05);治疗后,观察组FSH、LH、P、E2水平分别为(4.79±1.54)IU/L、(4.24±1.26)IU/L、(6.38±1.35)nmol/L、(171.06±14.66)pmol/L,均低于对照组(7.26±1.72)IU/L、(6.61±1.46)IU/L、(9.82±1.87)nmol/L、(268.25±18.46)pmol/L,差异均有统计学意义(均P<0.05);观察组不良反应发生率2.33%(1/43),与对照组11.63%(5/43)相比,差异无统计学意义(χ2=2.867,P=0.090)。结论 补肾调冲汤与龟鹿补肾丸联合治疗肾阳虚型PDUB,可明显改善患者症状,并降低血清性激素水平。

龟鹿补肾丸促进卵泡发育的临床研究

目的 :研究龟鹿补肾丸促进卵泡发育的临床效果。方法:参与本研究的功能性无排卵患者共60例(均属脾肾阳虚型),随机分成研究组和对照组(均n=30),研究组口服龟鹿补肾丸,对照组口服戊酸雌二醇片、枸橼酸氯米芬及黄体酮胶囊,超声监测主卵泡增长、子宫内膜生长及排卵情况。结果:两组患者卵泡直径明显增大,治疗前后比较,差异有统计学意义(P<0.01),组间比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后两组患者总有效率比较,差异无统计学意义(P>0.05),妊娠率比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:龟鹿补肾丸具有促进卵泡发育及提高妊娠率的作用。

龟鹿补肾丸治复发性口疮

复发性口疮好发于口腔粘膜,常有单个或多个淡黄色的小溃疡面,时发时愈,缠绵不除。中医称“口疮”或“口疳”,历代医家均认为心脾湿热或阴虚火旺。但从临床观察,每用清热降火或滋阴清热之品,只能暂时取效,不易根治。笔者在临床中用龟鹿补肾丸治腰腿痛时发现同时治愈复发性口疮,随即观察20余例均获显效。

补肾调冲汤联合龟鹿补肾丸治疗失调性子宫出血54例

目的探讨补肾调冲汤联合龟鹿补肾丸治疗肾阳虚型围绝经期功能失调性子宫出血(PDUB)的临床效果。方法选取2014年10月—2017年3月南阳市张仲景国医院107例PDUB患者,按照随机数表法分为观察组(54例)与对照组(53例)。两组入院后均行宫腔镜子宫内膜电切术,术后给予米非司酮治疗,在此基础上,对照组给予龟鹿补肾丸治疗,观察组给予龟鹿补肾丸联合补肾调冲汤治疗。对比两组治疗后中医症状(四肢不温、精神萎靡、夜尿频多及腰膝酸软)评分、性激素〈黄体生成激素(LH)、卵泡生成激素(FSH)、雌二醇(E2)、孕酮(P)〉水平、生活质量(SF-36)评分。结果治疗后观察组四肢不温、精神萎靡、夜尿频多及腰膝酸软症状评分较对照组低(P<0.05);两组治疗前血清LH、FSH、E2、P水平比较无显著差异(P>0.05),治疗后观察组血清LH、FSH、E2、P水平较对照组低(P<0.05);治疗前两组SF-36评分比较无显著差异(P>0.05),治疗后观察组SF-36评分较对照组高(P<0.05)。结论给予PDUB患者补肾调冲汤联合龟鹿补肾丸治疗,可有效缓解患者临床症状、促进性激素水平改善,进而有利于提高生活质量。

固冲调经汤联合龟鹿补肾丸治疗围绝经期崩漏34例

目的探讨固冲调经汤联合龟鹿补肾丸治疗围绝经期崩漏的临床疗效。方法选取2016年3月—2018年7月围绝经期崩漏患者68例,依照治疗方案不同分组,各34例。参照组以龟鹿补肾丸治疗,试验组予以固冲调经汤联合龟鹿补肾丸治疗。观察对比2组临床治疗效果、治疗前及治疗3个月后中医证候积分改变。结果试验组治疗总有效率94. 12%(32/34)高于参照组76. 47%(26/34),P <0. 05;治疗3个月后试验组中医证候积分低于参照组,P <0. 05。结论固冲调经汤联合龟鹿补肾丸治疗围绝经期崩漏患者,临床疗效显著,可有效缓解患者临床症状,值得推广应用。

龟鹿补肾丸和龟鹿补肾口服液对雄性生殖系统影响的研究

龟鹿补肾丸和龟鹿补肾液明显增加未成熟的小白鼠和去势大白鼠附性器官的重量;龟鹿补肾液能明显增强正常雄性和去势大白鼠的交配能力,随着剂量的加大,能提高未成熟大白鼠血清睾酮水平,而龟鹿补肾丸的影响不如龟鹿补肾液。

HPLC测定龟鹿补肾丸中淫羊藿苷的含量

目的 建立龟鹿补肾丸中淫羊藿苷的含量测定方法。方法 样品采用甲醇提取 ,高效液相色谱法测定。色谱条件为 :HypersilODS柱 (2 5 0mm× 4 .6mmi.d.,5 μm) ,以甲醇 水 (5 5 0 ∶4 5 0 )为流动相 ,检测波长为 2 70nm ;流速为 1ml/min。结果 在 0 .338～ 8.4 5 μg范围内 ,淫羊藿苷进样量与色谱峰面积呈良好的线性关系 ,r =0 .9998;平均回收率为 10 0 .3% ,RSD =1 1% (n =5 )。结论 本法简便实用 ,分析结果准确可靠 ,可作为龟鹿补肾丸的质量控制方法。