内蒙古地区骆驼斯氏副柔线虫(Parabronema skrjabini)病调查

本文报告了对内蒙古地区4个骆驼主产区不同品种、年龄、体质骆驼的斯氏副柔线虫(Parabromemaskr jabini)病流行病学调查结果。共剖检骆驼30只,结果表明骆驼对斯氏副柔线虫的感染率为100%,最高感染强度为7611条。证实斯氏副柔线虫是引起骆驼拉稀的主要原因,并提出了防制建议。

鼠疫媒介蚤簇鬃客蚤Xenopsylla skrjabini的生活史及叮人吸血实验

本项实验的目的是观察鼠疫媒介蚤簇鬃客蚤Xenopsylla skrjabini Ioff, 1928的生活史并证实该蚤是否能叮人吸血.标本采自新疆克拉玛依市艾里克湖畔的大沙鼠Rhombomys opimus体上.在26±0.5℃,RH 80%±5% 条件下,以小白鼠为供血动物,在实验室进行人工饲养繁殖.用刚羽化2～3天的子1代成虫在4人的前臂和踝部皮肤上做叮人吸血试验.结果显示,幼虫期11天,蛹期12天（10～15天）,卵期（包括孕卵期）6天,完成一个生活史周期平均需29天.60只受试蚤（22♂♂,38♀♀）中,能叮人吸血者29只（10♂♂,19♀♀）,吸血率为48.3%.簇鬃客蚤在上述实验条件下,完成一个生活史周期平均历经29天.该蚤两性均能叮人吸血,吸血率为48.3%.

Effects of gentiana scabra bage on expression of hepatic type Ⅰ,Ⅲ collagen proteins in Paragonimus skrjabini rats with liver fibrosis

Objective:To exploit- the effects of gentiana scabra bage on the expression of hepatic collagen proteins in Paragonimus skrjabini rats with liver fibrosis.Methods:Immunohistochemical technique was used to observe the changes of content of hepatic type Ⅰ,Ⅲ collagen proteins in Paragonimus skrjabini rats with Liver fibrosis before and after the gentiana scabra bage treatmeat.Results:Comparing with the model group,changes of hepatic tvpe Ⅰ and type Ⅲ collagen proteins in gentiana scabra bage treated group were significantly weakened.Conclusions:Gentiana scabra bage treatment can reduce the content of hepatic type Ⅲ and type Ⅰ collagen protein significantly in Paragonimus skrjabini rats with liver fibrosis,thereby,playing the role against hepatic fibrosis.

并殖吸虫分类上的特点,包括斯氏并殖(P.skrjabini)的补充报导

我们在1930年在广东省先后发现了四种并殖吸虫,其中除威氏并殖(Paragonimuswestermani)外,其余三种均为前人所未见过的。在这些新发现的种类中,我们首先进行描述由鼠体取出的并殖,由于成虫与各期幼虫均初次在广州河南岛的怡乐村发现,因而乃定名为怡乐村并殖(P.iloktsuenensis)(陈心陶,1940,1940a)。接着我们开始进行整理第二种的材料。正在进行中,我们见到了宫崎氏发表的日本的新种肺吸虫大平并殖(P.ohirai Miyazaki,1939)。在详细比较其形态后。

三氯苯达唑治疗大鼠斯氏狸殖吸虫感染的实验观察

目的：观察三氯苯达唑对大鼠斯氏狸殖吸虫感染的治疗效果。方法：从四川威远县和重庆万盛区采集的溪蟹中分离斯氏狸殖吸虫囊蚴，腹腔内注射感染大鼠。感染后１月和２月分别用总剂量为３００ｍｇ／ｋｇ，２ｄ分服，４５０ｍｇ／ｋｇ，３ｄ分服和６００ｍｇ／ｋｇ，３ｄ分服的三氯苯达唑治疗。结果：治后１月解剖，活虫减少率依次为５０％、８０％和８７％，并在肌肉、肝脏、腹腔、胸腔和肺部均发现虫体明著缩小（约１．５ｍｍ）呈灰白色的死虫。对照组大鼠肺部可见较大的黑色虫囊，内含活的成虫及虫卵。治疗组大鼠肺部虫囊大多数萎缩，成为出血及坏死性病灶。结论：三氯苯达唑对斯氏狸殖吸虫有良好的杀虫作用。

斯氏狸殖吸虫抗原分析和血清学诊断方法的研究

[目的 ]分析斯氏狸殖吸虫囊蚴、童虫和成虫各期抗原和建立特异性抗原的斯氏狸殖吸虫病血清学诊断方法。 [方法 ]用SDS PAGE分离斯氏狸殖吸虫的各虫期抗原 ,经免疫印迹识别成虫期特异性诊断抗原。采用电洗脱技术分离 10～ 30kDa蛋白组分 ,建立纯化抗原的dot ELISA血清学诊断斯氏狸殖吸虫病。 [结果 ]斯氏狸殖吸虫病患者血清与成虫抗原的 10～ 30kDa显示较多免疫识别带 ,主带为 2 2、2 4和 2 6kDa。与血吸虫病和华支睾吸虫病患者血清的交叉反应带出现于 6 0～ 90kDa。斯氏狸殖吸虫成虫 10～ 30kDa抗原的dot ELISA与成虫粗抗原的ELISA检测 2 8例疑诊病人血清 ,两法阳性率间差异无显著性。而检测 38例感染其它吸虫和肺部疾病患者血清 ,粗抗原的ELISA交叉反应率为 13 2 % (5 /38)。 [结论 ]斯氏狸殖吸虫成虫 10～ 30kDa抗原的dot ELISA为斯氏狸殖吸虫病高度特异和敏感的血清学诊断方法。

神农架林区并殖吸虫病自然疫源地调查

目的探讨神农架林区并殖吸虫病疫源地的分布情况,为预防控制并殖吸虫病提供科学依据。方法应用DIG-FA-kit检测神农架林区人群血清抗体,并与常规ELISA相比较;同时调查中间宿主、动物宿主感染情况。结果共采集人群血清样本1 128份,阳性76份,阳性率为6.74%,ELISA平行对照试验阳性符合率为98.7%。第一中间宿主螺的感染率为0.91%,第二中间宿主淡水蟹感染囊蚴为3.21个/只,动物宿主猫和果子狸的自然感染率为51.72%和15.79%。结论 DIG-FA-kit具有较好的灵敏度和特异性,适合于流行区临床检验和大规模流行病学调查。调查区域有第一、第二中间宿主和保虫宿主的存在,为斯氏狸殖吸虫病自然疫源地。

斯氏狸殖吸虫幼虫排泄分泌抗原Dot-ELISA诊断肺吸虫病研究

目的 探索斯氏狸殖吸虫幼虫排泄分泌抗原的免疫诊断价值。方法 采用斯氏狸殖吸虫幼虫排泄分泌抗原Dot-ELISA检测 2 8例斯氏狸殖吸虫病人血清、6份日本血吸虫病人血清、4份华支睾吸虫病人血清、2 0份健康人血清中抗斯氏狸殖吸虫幼虫排泄分泌抗原的抗体IgG。结果 斯氏狸殖吸虫幼虫排泄分泌抗原与 2 8例斯氏狸殖吸虫病人血清均呈阳性反应 ,与其它 2种吸虫病和健康人血清未发生反应。结论 斯氏狸殖吸虫幼虫排泄分泌抗原Dot -ELISA为诊断肺吸虫病敏感。

斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段的克隆和序列分析

目的 克隆斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段 ,获得其序列 ,并进行序列分析。方法 利用简并引物 ,进行RT PCR ,扩增斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段。TA克隆装入pUCm T载体 ,进行鉴定、测序 ;利用DNASIS程序推导其所编码的氨基酸序列 ,并与相关虫种半胱氨酸蛋白酶进行氨基酸序列的同源性分析。结果 RT PCR扩增出了一 5 0 0bp左右的cDNA片段 ,对阳性克隆测序后获得其核酸序列 ,长 498bp。推导出的氨基酸序列长 166;氨基酸序列的同源性分析显示 ,该序列与相关虫种半胱氨酸蛋白酶存在着很高的同源性 ,组成半胱氨酸催化三联体的半胱氨酸、组胺酸和天冬酰胺残基高度保守。

免疫组化技术对斯氏狸殖吸虫成虫免疫诊断相关抗原的初步研究

目的初步分析斯氏狸殖吸虫成虫表膜和肠相关抗原,探讨肺吸虫病的免疫诊断的特异性诊断抗原。方法斯氏狸殖吸虫成虫制备成15μm的冰冻切片,肺吸虫患者血清识别斯氏狸殖吸虫成虫特异性抗原,采用免疫金标记和免疫酶标记检测技术对抗原进行定位,激光共聚焦显微镜技术进行半定量分析以及免疫透射电镜对其细微结构的观察。分实验组和对照组。结果肺吸虫患者血清识别的斯氏狸殖吸虫成虫抗原定位于虫体的表膜和肠腔,表膜抗原半定量分析平均灰度值为80.65,肠腔抗原半定量分析平均灰度值为71.26,电镜下可见胶体金附着于肠腔和表膜的双层结构。结论肺吸虫患者血清识别的斯氏狸殖吸虫成虫抗原都为表膜相关抗原和肠相关抗原,因此与肺吸虫病免疫诊断相关的诊断抗原为虫体表膜和肠上皮产生的相关蛋白。

斯氏狸殖吸虫病53例临床资料分析

目的探讨食源性斯氏狸殖吸虫病的流行病学特征、临床表现及误诊的原因。方法回顾性分析2003-2006年53例住院治疗的斯氏狸殖吸虫病的临床资料。结果53例斯氏狸殖吸虫病患者中,城镇居民占54.7%(29/53),儿童占83%(44/53),主要因生食或半生食溪蟹和生饮溪水而感染。临床表现复杂多样,以胸肺型和脑型为主,嗜酸性粒细胞增多者占62.3%(33/53),痰、粪检查均未发现虫卵,皮下包块活检后病理检查主要表现为嗜酸性肉芽肿和隧道样改变,误诊率达41.5%。吡喹酮治疗取得较好疗效。结论斯氏狸殖吸虫病流行呈"城镇"化态势,临床医生应提高对斯氏狸殖吸虫病的认识。吡喹酮可作为斯氏狸殖吸虫病治疗首选药物,而预防本病的关键措施是加强健康教育工作,不生食或半生食溪蟹。

六地卫氏并殖吸虫及斯氏狸殖吸虫种间和种内虫体重复DNA序列的比较

从湖南、广东两省六地采集卫氏并殖吸虫和斯氏狸殖吸虫,分别制备各地虫体基因组DNA,用 BamHI、HaeⅢ及 HindⅢ 3种限制性内切酶消化,琼酯糖凝胶电泳后,比较酶切片段长度。结果显示两种虫种间重复 DNA序列带型有明显的差异,而同种虫种不同地区虫体的重复 DNA序列带型则多数相同或完全相同。

斯氏狸殖吸虫半胱氨酸蛋白酶基因克隆及由体定位

目的 克隆斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶cDNA片段,并研究该酶在斯氏狸殖吸虫的表达部位。方法 通过RT-PCR方法扩增斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶cDNA片段,TA克隆入pUCm-T载体,鉴定、测序;利用DNASIS程序推导其编码氨基酸序列,并比较分析与其相关虫种半胱氨酸蛋白酶氨基酸序列同源性。采用地高辛标记原位杂交技术检测该酶基因在斯氏狸殖吸虫成虫的表达及组织定位。结果 经RT-PCR和对阳性克隆鉴定、测序后获得一cDNA序列,长495bp;同源性分析结果显示,该序列与相关虫种的半胱氨酸蛋白酶存在较高同源性,组成半胱氨酸催化三联体的半胱氨酸、组胺酸和天冬酰胺残基高度保守。原位杂交结果显示斯氏狸殖吸虫成虫的肠管上皮呈阳性着色。结论 克隆获得了斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶cDNA片段,该片段包含了与半胱氨酸蛋白酶活性和空间结构相关的重要基因位点。斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶的表达部位主要为肠管上皮。

肺吸虫病金标渗滤试剂盒检测人、鼠斯氏狸殖吸虫抗体的研究

目的探讨斯氏狸殖吸虫病敏感性和特异性较好的免疫学诊断技术。方法采用金标渗滤法(DIGFA-kit)检测秦巴山区十堰市居民、实验大鼠和对照组感染旋毛虫大鼠、感染血吸虫兔、粪检确诊蛔虫病人和正常健康大鼠血清Ig G抗体。结果 DIGFA-kit检测十堰市居民和实验大鼠血清斯氏狸殖吸虫Ig G抗体的检出率分别为4.9%和97.6%。从第2周开始,实验大鼠即能测出抗体,第4-9周达高峰。对照组除1份血吸虫兔血清阳性外均为阴性。结论金标渗滤试法对斯氏狸殖吸虫病血清Ig G抗体的检测有较好的敏感性和特异性。

我国五省斯氏并殖吸虫群体DNA序列分析的研究

目的 主要研究我国五省(广东、福建、云南、湖北、四川)斯氏并殖吸虫各群体之间的遗传差异以及四川并殖吸虫独立性问题,并探讨异盘、宫崎、泡囊并殖吸虫在并殖属中的分类地位。方法 以GNT-K法抽提基因组DNA后,用特异引物,PCR扩增ITS2和部分CO1基因,将PCR扩增产物纯化后直接进行测序或克隆后测序,分析序列的同源性,并构建种系发生树。结果 从DNA序列结果来看,5省斯氏并殖吸虫群体之间存在的遗传性差异较小,其中四川并殖吸虫与斯氏并殖吸虫之间存在的遗传性差异亦小。遗传关系均比较接近。泡囊并殖吸虫在种系发生树上位于斯氏并殖吸虫各地域株之间。在种系发生树上,日本的宫崎并殖吸虫亦位于斯氏并殖吸虫各地域株之间,并且与福建地域株最为接近。异盘并殖吸虫在种系发生树上虽与斯氏并殖吸虫各地域株之间距离较远,但相对卫氏并殖吸虫而言,仍与斯氏并殖吸虫遗传距离较近。结论 广东、福建、云南、湖北和四川5省斯氏并殖吸虫群体均属斯氏并殖吸虫同一虫种,由于受地理因素影响,种内存在着不同的地域株。四川并殖吸虫与斯氏并殖吸虫系同种异名。泡囊并殖吸虫与日本的宫崎并殖吸虫很可能是斯氏并殖吸虫的同种异名。异盘并殖吸虫在形态上与种系发生树上,与斯氏并殖吸虫亲缘关系近于卫氏并殖吸虫,分类地位处于两?

斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA的克隆和表达

目的 克隆斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段 ,并进行原核表达。方法 利用简并引物 ,进行RT -PCR ,扩增斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段。TA克隆装入 pUCm -T载体 ,进行鉴定、测序 ;利用DNASIS程序推导其所编码的氨基酸序列 ,并与相关虫种半胱氨酸蛋白酶进行氨基酸序列的同源性分析。将获得的cDNA片段克隆入Pin PointTMXa- 1T表达载体 ,经过筛选后 ,在大肠杆菌中进行原核表达。通过SDS -PAGE电泳和Westernblot方法鉴定表达产物 ,并检测所表达融合蛋白的免疫反应性。结果 RT -PCR扩增出了一 5 0 0bp左右的cDNA片段 ,对阳性克隆测序后获得其核酸序列 ,长 4 98bp。推导出的氨基酸序列长 16 6 ;氨基酸序列的同源性分析显示 ,该序列与相关虫种半胱氨酸蛋白酶存在着很高的同源性 ,组成半胱氨酸催化三联体的半胱氨酸、组氨酸和天冬酰胺残基高度保守。原核表达中 ,对表达产物的鉴定结果和免疫反应性检测结果均显示 ,目的克隆在 33kDa处有一明显条带。结论 本实验克隆获得了斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段 ,其序列中包含了与该酶活性有关的重要位点。原核表达获得一 33kDa的融合蛋白 ,该融合蛋白具有免疫反应性。

斯氏肺吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶cDNA片段的克隆和序列分析

目的 克隆斯氏肺吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶cDNA片段 ,并对其进行测序和序列分析。方法 利用简并引物 ,进行RT PCR ,扩增斯氏肺吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶cDNA片段。TA克隆装入pUCm T载体 ,进行鉴定、测序 ;利用DNASIS程序推导其所编码的氨基酸序列 ,并与相关虫种半胱氨酸蛋白酶进行氨基酸序列的同源性分析。结果 RT PCR扩增出了一约5 0 0bp的cDNA片段 ,对阳性克隆测序后获得其核酸序列 ,长 4 95bp。将推导的氨基酸序列作同源性分析显示 ,该序列与相关虫种半胱氨酸蛋白酶存在着较高的同源性 ,组成半胱氨酸催化三联体的半胱氨酸、组胺酸和天冬酰胺残基高度保守。结论 克隆获得了斯氏肺吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶cDNA片段 ,该片段包含了与半胱氨酸蛋白酶活性和空间结构相关的重要基因位点。

从形态变化,生活史和DNA检测排除泡囊狸殖的独立性研究

目的通过形态观察、生活史循环试验和分子生物学鉴定研究泡囊狸殖吸虫的独立性问题。方法从三元区采集溪蟹分离得到泡囊狸殖吸虫囊蚴和斯氏狸殖吸虫囊蚴，进行形态观察。以泡囊狸殖吸虫虫卵投放到调查过无泡囊狸殖吸虫的疫区中感染螺蛳，继而感染溪蟹，稍后检查蟹体内所获囊蚴是否保持泡囊狸殖吸虫形态还是同斯氏狸殖吸虫囊蚴近似。提取斯氏狸殖吸虫囊蚴和泡囊狸殖吸虫囊蚴的基因组DNA，用特异引物，PCR扩增其ITS2基因并将PCR扩增产物纯化后测序，然后通过GenBank的B1ast程序分析基因序列的同源性，并应用MEGA3．0软件中的ME程序构建种系发生树。结果泡囊狸殖吸虫囊蚴与斯氏狸殖吸虫囊蚴形态差异明显，但观察到泡囊狸殖吸虫囊蚴在从蟹体分离后0．5～2h内有57．14％变成同斯氏狸殖吸虫囊蚴近似的特征。将泡囊狸殖吸虫虫卵投放到自然环境进行生活史循环试验，从收集的溪蟹中只分离到斯氏狸殖吸虫囊蚴而没有发现泡囊狸殖吸虫囊蚴。基因同源性比较结果显示：泡囊狸殖吸虫与斯氏狸殖吸虫的ITS2基因同源性为100％，碱基差异为0，没有基因差异。结论虽然泡囊狸殖吸虫囊蚴和斯氏狸殖吸虫囊蚴的形态特征有较明显的差别，但放置一段时间后，57．14％的泡囊狸殖吸虫囊蚴变成与斯氏狸殖吸虫囊蚴形态相似的特征。从用泡囊狸殖吸虫虫卵进行生活史循环试验中收集的溪蟹体内没有发现泡囊狸殖吸虫囊蚴。ITS2基因序列的同源性比较分析发现斯氏狸殖吸虫和泡囊狸殖吸虫的基因高度同源，而且种系发生树也显示二者之间无明显的遗传分化。因此，斯氏狸殖吸虫和泡囊狸殖吸虫为同一物种，泡震狸殖吸虫不具有虫种独立性。

斯氏狸殖吸虫精子形成的透射电镜观察

用透射电镜观察了斯氏狸殖吸虫精细胞的变化和精子的主要形态结构特征。从而揭示了该虫精子形成的过程。证实了斯氏狸殖吸虫的精细胞和精子有顶体结构。成熟的精子可分为头部和尾部。头部由核质充满,核质可延伸至精子尾部中段的前端。头尾之间为连接段。尾部又由中段和末段组成。尾部的中段起始部的两侧各有一条轴丝。每条轴丝各由9对外周微管和2个中央微管组成,在每2条中央微管的外围,均由一个纤维鞘包绕,其间形成一个车轮样的9+2微管系统结构,其腹侧排列着线粒体。尾部的末段,主要为2条紧靠的轴丝。

三氯苯达唑治疗斯氏狸殖吸虫病的初步观察

目的 观察三氯苯达唑对人体斯氏狸殖吸虫病的治疗作用。 方法 用三氯苯达唑治疗 4例斯氏狸殖吸虫病患者 ,随访 6～ 10个月 ,观察患者的症状、体征和胸部X线表现及嗜酸性粒细胞等的变化情况。 结果 经治疗后 ,全部患者的症状如皮下游走性包块与体征及胸部X线表现 ,肺部浸润及胸腔积液均消失 ,嗜酸性粒细胞恢复正常。患者服药过程中及随访时均未出现任何不良反应。 结论 三氯苯达唑治疗斯氏狸殖吸虫病具有疗效好、疗程短、耐受性极好的优点。