水稻OsWNK基因超量表达载体的构建及转化

选取一个受褐飞虱(Nilaparvata lugensStal)诱导的蛋白激酶基因O sWNK,将该基因的全长cDNA片断通过酶切、连接、转化,连接到pCAMB IA1301质粒表达载体上,成功构建了O sWNK基因的超量表达载体pCAM-B IA1301∶OsWNK.将pCAMB IA1301∶OsWNK电击转入农杆菌细胞中,并将转化好的农杆菌与H1493的愈伤组织共同培养,通过抗生素筛选、PCR鉴定,证明已经获得了转基因植株.

一个水稻OsWNK基因的分离及表达分析

在褐飞虱取食后的水稻cDNA差减文库中筛选到与拟南芥AtWNK1激酶基因高度同源的EST(GenBank登录号:BU572310),以该EST为探针,从褐飞虱取食后的水稻cDNA文库中分离到OsWNK基因的全长cDNA,该基因编码一个含677个氨基酸残基的蛋白激酶,与以前克隆出的一种拟南芥蛋白激酶基因(GenBank登录号:DQ837532)只有3个氨基酸残基的差异。Northern杂交结果显示,在褐飞虱取食后,该基因的表达上升。表明该激酶基因参与褐飞虱取食的应答反应,可能与水稻抗褐飞虱有关.

水稻WNK mRNA在水稻根中的表达

[目的]在对OsWNK基因的生化特性有了一定了解的基础上,研究OsWNK在水稻根组织的表达,为进一步研究基因OsWNK的功能奠定基础。[方法]利用RNA原位杂交技术,通过制备OsWNK基因的正反义地高辛标记的RNA探针,与水稻根内靶基因转录表达产物进行原位杂交定位。[结果]在根尖生长点部位的OsWNK表达最旺盛,而在伸长区的细胞中,OsWNK的表达量很低。另外,在根冠中几乎没有OsWNK的表达。[结论]OsWNK在根尖生长点的大量分布说明OsWNK在植物快速生长的组织和细胞中表达比较高,推测此基因可能与生长点细胞频繁的细胞分裂有关。