红芪HpC4H基因的克隆及其铁盐干预下的表达分析

肉桂酸-4-羟化酶(Cinnamate-4-hydroxylase,C4H)在调节植物生长发育方面具有重要的作用。为探究红芪(Hedysarum polybotrys Hand.-Mazz.)黄酮类成分合成的分子调节机制,本研究以红芪幼苗为材料,通过RACE技术,克隆HpC4H基因,并进行生物信息学分析和表达模式分析。结果显示:HpC4H基因全长为1634 bp,编码477个氨基酸,蛋白分子量为54.94 kD,不含有信号肽和跨膜结构区。亚细胞定位预测显示,该蛋白定位于内质网中,具有C4H保守功能区并属于细胞色素P450超基因家族。序列分析发现,HpC4H氨基酸序列与柠条锦鸡儿(Caragana korshinskii Kom.)的相似性高达92.84%。qRT-PCR结果表明,HpC4H基因在红芪不同组织中的表达模式为:根>茎>叶,同时,该基因的表达量在不同浓度铁盐干预下有上调趋势,推测铁盐可能在调控红芪HpC4H基因表达中发挥一定作用,且低浓度铁盐溶液作用显著。

基于JAK2/STAT3信号通路探讨红芪多糖对糖尿病胃轻瘫大鼠炎症反应的影响

目的研究红芪多糖(hedysarum polybotrys polysacchcaide,HPS)对糖尿病胃轻瘫(diabetic gastroparesis,DGP)大鼠胃黏膜炎症反应的影响及可能作用机制。方法62只雄性Wistar大鼠随机分为Control组12只及造模组50只,除Control组外,其余大鼠采用小剂量多次腹腔注射链脲佐菌素(25 mg·kg^(-1),连续3 d)联合高糖高脂饲料不规则喂养复制DGP模型,将成模大鼠随机分为Model组(灌胃纯净水)、HPS低、中、高剂量组(50、100、200 mg·kg^(-1)·d^(-1))及Metformin组(90 mg·kg^(-1)·d^(-1))分别灌胃处理,Control组给予等体积纯净水灌胃,每日1次,连续8周。HE染色观察各大鼠胃黏膜病理形态;ELISA检测大鼠胃黏膜TNF-α、IL-6、GAS、MTL含量;RT-PCR检测胃黏膜JAK2、STAT3 mRNA表达;Western blot检测胃黏膜JAK2、STAT3蛋白及磷酸化水平。结果与Control组相比,Model组大鼠HE染色胃黏膜有大量炎性细胞浸润;TNF-α、IL-6含量明显增加(P<0.01),GAS、MTL含量明显减少(P<0.01);JAK2、STAT3 mRNA表达明显升高(P<0.05);p-JAK2、p-STAT3明显升高(P<0.01)。与Model组相比,各给药组大鼠胃黏膜炎性表现有所改善;TNF-α、IL-6含量明显减少,GAS、MTL含量明显增加;JAK2、STAT3 mRNA表达明显降低;p-JAK2、p-STAT3表达明显降低(P<0.05)。结论HPS可改善大鼠胃黏膜炎症反应,修复胃黏膜损伤,其机制可能与调控JAK2/STAT3信号通路有关。

基于近红外光谱结合化学计量学的黄芪细粉质量控制方法研究

运用近红外光谱结合化学计量学,建立中药黄芪细粉的一致性测试模型,快速无损地对黄芪细粉质量进行有效控制。应用近红外积分球漫反射方式,基于一致性测试模型,对预处理后的黄芪、红芪细粉及其伪品的光谱指纹图谱进行鉴别,建立黄芪细粉的质量判别模型。结果显示,通过黄芪细粉一致性测试模型的建立与验证,能够对黄芪细粉与红芪、混伪品、劣质品等进行快速识别,建模光谱经矢量归一化预处理,光谱波段选取3741.5~9642.9 cm^(-1),模型判别正确率为100%。所建立的模型能够为难以从外观进行质量判别的黄芪细粉提供一种新的质量控制方法。

红芪多糖对糖尿病胃轻瘫大鼠氧化应激的影响

目的研究红芪多糖对糖尿病胃轻瘫(DGP)大鼠氧化应激的影响,探讨其改善DGP的作用机制。方法72只雄性Wistar大鼠随机分空白组12只和造模组60只,造模组采用一次性大剂量腹腔注射链脲佐菌素联合高糖高脂饲料不规则喂养制备DGP模型。将成模大鼠随机分为模型组、阳性药组和红芪多糖高、中、低剂量组,阳性药组予枸橼酸莫沙必利3.5 mg/kg灌胃,红芪多糖高、中、低剂量组予红芪多糖溶液200、100、50 mg/kg灌胃,空白组和模型组予等体积纯净水灌胃,每日1次,连续8周。观察大鼠一般状况,测定胃排空及小肠推进率;ELISA检测血清活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、8-羟基脱氧鸟苷酸(8-OHdG)含量;HE染色观察小肠组织病理变化;qRT-PCR检测小肠组织Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、核因子E2相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)和硫氧还蛋白(Trx)mRNA表达;Western blot检测小肠组织谷胱甘肽转移酶(GST)和醌氧化还原酶1(NQO1)蛋白表达。结果与空白组比较,模型组大鼠一般状况较差,随机血糖显著升高(P<0.01),体质量、胃排空率、小肠推进率均显著降低(P<0.01),血清ROS、MDA、8-OHdG含量显著增加(P<0.05,P<0.01),SOD含量显著减少(P<0.01);小肠组织腺体结构破坏,黏膜消失,有大量炎性细胞浸润,小肠组织Keap1 mRNA表达显著升高(P<0.01),Nrf2、HO-1、Trx mRNA及GST、NQO1蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠一般状况好转,随机血糖显著降低(P<0.01),红芪多糖高剂量组和阳性药组大鼠体质量、胃排空率、小肠推进率显著升高(P<0.01),血清ROS、MDA、8-OHdG含量显著减少(P<0.05,P<0.01),SOD含量显著增加(P<0.05,P<0.01);小肠黏膜损伤程度明显减轻,腺体结构逐渐完整,小肠组织Keap1 mRNA表达显著降低(P<0.01),Nrf2、HO-1、Trx mRNA及GST、NQO1蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论红芪多糖可通过控制血糖,促进胃排空,改善氧化应激反应及修复小肠黏膜损伤,发挥改善DGP作用。

红芪多糖对糖尿病胃轻瘫大鼠胃窦组织平滑肌细胞焦亡的影响

目的以胃窦组织平滑肌细胞焦亡为切入点,探讨红芪多糖干预糖尿病胃轻瘫(DGP)的作用机制。方法60只SPF级雄性Wistar大鼠随机选取10只为空白组,其余50只采用一次性大剂量腹腔注射链脲佐菌素联合高脂高糖饲料不规则喂养制备DGP模型。将成模大鼠随机分为模型组、莫沙必利组和红芪多糖低、中、高剂量组。莫沙必利组予枸橼酸莫沙必利分散片3.5mg/kg灌胃,红芪多糖低、中、高剂量组分别予红芪多糖50、100、200 mg/kg灌胃,空白组和模型组予等体积纯净水灌胃,每日1次,连续8周。检测大鼠随机血糖及体质量,测定胃排空率;HE染色观察胃窦组织病理形态;TUNEL染色检测胃窦组织平滑肌细胞DNA损伤情况;RT-qPCR和Western blot检测胃窦组织NOD样受体蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、焦孔素D(GSDMD)和白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA和蛋白表达。结果与空白组比较,模型组大鼠各时点随机血糖显著升高(P<0.01),体质量、胃排空率显著降低(P<0.01),胃窦组织平滑肌细胞胞膜完整性丧失,大面积黏膜上皮细胞坏死脱落,有大量炎性细胞浸润,细胞损伤率显著升高(P<0.01),NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1βmRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠给药8周后随机血糖显著降低(P<0.01),体质量、胃排空率显著升高(P<0.01),胃窦组织NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1βmRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),红芪多糖中、高剂量组和莫沙必利组胃窦组织平滑肌细胞损伤率显著降低(P<0.05,P<0.01),黏膜损伤和炎性细胞浸润有不同程度缓解。结论红芪多糖可改善胃动力、促进胃排空、缓解DGP进程,其机制可能与抑制胃窦组织平滑肌细胞焦亡有关。

红芪多糖通过调控HIF-1信号通路对急性放射性肺炎小鼠的保护作用

目的探讨红芪多糖对急性放射性肺炎小鼠的保护作用及其机制。方法小鼠随机分为空白组、模型组、吡非尼酮组(200 mg/kg)、红芪水煎液组(5000 mg/kg)和红芪多糖低、中、高剂量组(15、30、60 mg/kg),每组24只。预防给药7 d后,除空白组外,其余各组小鼠照射16 Gy全胸X线进行造模,继续给药7 d。各组于造模前进行CT影像学检测,造模后第6天进行肺功能及CT影像学检测。最后一次给药30 min后,采用ELISA法检测血清TNF-α、IL-6、MDA水平及SOD、GSH-Px活性,HE染色观察肺组织病理形态变化,Western blot法检测肺组织TNF-α、mTOR、HIF-1α、VEGF蛋白表达,RT-qPCR法检测肺组织mTOR、VEGF、HIF-1αmRNA表达。结果红芪多糖可在一定程度上改善急性放射性肺炎小鼠的精神状态、活动量、皮毛光泽。与模型组比较,红芪多糖高剂量组小鼠每分钟通气量增加(P<0.01),小鼠肺脏CT值和肺系数降低(P<0.05,P<0.01);红芪多糖中、高剂量组小鼠血清TNF-α、IL-6、MDA水平降低(P<0.05,P<0.01),SOD、GSH-Px活性升高(P<0.05,P<0.01),肺组织病理炎性反应减轻,肺泡炎病理评分降低(P<0.05,P<0.01),肺组织mTOR、VEGF、HIF-1αmRNA表达和TNF-α、mTOR、HIF-1α、VEGF蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论红芪多糖可能通过调控HIF-1信号通路来防治小鼠急性放射性肺炎的发生发展。

浸种温度对红芪(Hedysarum polybotrys)种子发芽的影响

采用初始温度不同的水浸红芪(Hedysarum polybotrys)种荚12h,然后发芽,以不浸种为对照,旨在探寻提高种子发芽质量的预处理方法,为规范化生产提供科学依据。结果表明:红芪种子发芽率进程符合Logistic方程,浸种荚对红芪种子发芽特性具有极显著影响。与对照比较,在20~80℃的水中自然冷却浸种12h均不同程度改善了种子发芽特性。随水温的提高,种子发芽质量先提高后下降;当水温为60℃时发芽质量最佳,发芽率、发芽势和发芽指数分别达80.7%、34.7%和4.994,较对照发芽率34.7%、发芽势4.0%和发芽指数1.865分别增加46.0%、30.7%和3.128;但当水温达80℃时,发芽质量出现下降趋势,但仍显著高于对照和20℃水浸处理的水平。60℃热水浸种12h可软化红芪种荚,增强种子吸水吸胀能力,并稀释降低发芽抑制物,有效提高种子出苗质量和育苗成效。水浸种预处理还可有效精选种子,但经浸种后的种子需拌土小心播种,严防机械损伤。

多序岩黄芪化学成分研究

目的 研究多序岩黄芪的化学成分。方法 用柱色谱分离 ,用理化性质及波谱方法鉴定结构。结果 从多序岩黄芪中分离鉴定了 5个化合物 :红芪木脂素A( 1) ,异甘草素 ( 2 ) ,7 羟基 4′ 甲氧基异黄酮 ( 3) ,毛蕊异黄酮 ( 4 )和芒柄花素 ( 5 )。结论 化合物 1为新化合物 ,命名为红芪木脂素A。

红花岩黄芪化学成分研究

目的 :对红花岩黄芪化学成分进行研究。方法 :用溶剂法、色谱法提取、分离红花岩黄芪化学成分 ,用波谱法鉴定其结构。结果 :从红花岩黄芪中分离得到 7个化合物 ,碳三十醇 (1) ,二十四碳酸 (2 ) ,5 ,7 二羟基 4′ 甲氧基 6 ,8 二异戊烯基异黄酮 (3) ,对香豆酸二十二酯 (4 ) ,豆甾醇 (5 ) ,5 ,7 二羟基 4, 甲氧基 6 异戊烯基异黄酮 (6 ) ,咖啡酸二十四酯 (7)。结论 :化合物 3和 4为新天然产物 。

多序岩黄芪化学成分研究

目的 :研究多序岩黄芪的化学成分。方法 :用柱色谱分离 ,用理化性质及波谱方法鉴定结构。结果 :分离鉴定了 3 羟基 9 甲氧基紫檀烷 (I) ,3 羟基 9 甲氧基香豆苯醚 (Ⅱ ) ,3,9 二羟基香豆苯醚 (Ⅲ ) ,β 谷甾醇 (Ⅳ ) ,胡萝卜苷 (V)等 5个成分。结论 :化合物Ⅱ ,Ⅲ ,V为首次从该植物中分离得到。

红芪多糖RHG的分离纯化及化学结构

甘肃产的名贵中药材红芪（ＨｅｄｙｓａｒｕｍｐｏｌｙｂｏｔｒｙｓＨａｒｄ．Ｍａｚ）的根经热水提取，醇析、脱除蛋白质、ＤＥＡＥＳｅｐｈａｄｅｘＡ２５离子交换色谱及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ７５柱色谱分离得一水溶性多糖ＲＨＧ。用电泳及凝胶过滤法鉴定为均一组分，系由单一葡萄糖残基构成。平均分子量１４×１０４。经甲基化、高碘酸钠氧化、Ｓｍｉｔｈ降解、ＮＭＲ和ＩＲ分析以及ＫＩＩ２反应证明其化学结构是以αＤ（１→４）葡萄糖为主链。

多序岩黄芪化学成分研究

目的 :研究多序岩黄芪的化学成分。方法 :用色谱法分离 ,用波谱方法及理化性质鉴定结构。结果 :分离鉴定了 5个化合物 :N ,N ,N 三甲基 色氨酸内铵盐 (下箴桐碱 ) (1) ,3 甲氧基 4 羟基 反式苯丙烯酸正十八醇酯 (2 ) ,5 ,7,4′ 三羟基 二氢黄酮 5 O β D 吡喃葡萄糖基 7 O β D 吡喃葡萄糖苷 (3) ,3,4 ,5 三甲氧基桂皮酸甲酯(4) ,香草酸 (5 )。结论 :化合物 1,2和 3为首次从该植物中分离得到 ,其中化合物 1和 2为首次从岩黄芪属植物中分离得到。

催化光度法测定中药红芪中痕量硒

探讨了ＮａＮＯ３Ｓｅ（Ⅳ）Ｆｅ（Ⅱ）络合物体系催化光度法测定痕量硒的实验条件，并测定了中药红芪中硒的含量．在湿法分解样品时，加入铜稳定剂以固定硒，防止硒在样品分解时损失．

中药红芪的化学成分研究

从红芪的乙醇提取物中分离出琥珀酸,用GC-MS法从红芪有机酸的甲酯化物中鉴定了8种成分。

生长年限及坡向对红芪产量和品质的影响

为比较分析不同生长年限及不同坡向红芪(Hedysarum polybotrys Hand.-Mazz.)产量和主要功效成分含量,以甘肃武都产红芪为材料,采用紫外分光光度法测定其黄酮含量,采用苯酚-硫酸法测定其多糖含量。结果表明:生长年限及坡向对红芪产量和品质均有显著影响。半阳坡栽培条件下,1～4年内,不同生长年限红芪产量和品质也不同;其中,2年生根干重、黄酮和多糖含量分别是1年生的4.41倍、1.26倍和1.26倍,3年生根干重、黄酮和多糖含量分别是2年生的1.36倍、1.53倍和1.14倍,4年生根干重、黄酮和多糖含量分别是3年生的1.22倍、0.91倍和1.01倍。2年生栽培条件下,阳坡红芪产量、黄酮和多糖含量分别是半阳坡的1.09倍、1.26倍和1.10倍;4年生野生条件下,阳坡红芪产量、黄酮和多糖含量分别是半阳坡的1.49倍、1.30倍和1.12倍。综合分析红芪栽培的产投效益及功效价值,该地区红芪生长年限应以3年为宜,栽培地以阳坡为宜。另外,红芪产量和品质与其根径、根长具有显著相关性,在生产中,红芪根径和根长可作为其等级分级的感观性依据。

红芪总黄酮对过氧化氢致脐静脉内皮细胞损伤的抗氧化作用

目的:研究红芪总黄酮对过氧化氢(H2O2)诱导脐静脉内皮细胞损伤的保护作用。方法:化学发光法检测红芪总黄酮对氧自由基的清除能力。建立H2O2致脐静脉内皮细胞损伤模型,化学比色法检测乳酸脱氢酶(LDH),丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,单细胞凝胶电泳法检测对细胞DNA损伤的影响。结果:红芪总黄酮可清除氧自由基。100μmol/L H2O2诱导脐静脉内皮细胞4 h,细胞液LDH、细胞内MDA含量升高SOD活性降低,DNA损伤明显。红芪总黄酮可明显抑制MDA损伤,显著降低LDH释放及细胞内MDA含量,提高SOD活性。结论:红芪总黄酮对H2O2诱导脐静脉内皮细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高脐静脉内皮细胞的抗氧化能力有关。

红芪、黄芪水提液体外清除自由基作用的研究

采用Fenton反应建立羟基自由基(.OH)模型,利用邻苯三酚在碱性环境中自氧化产生超氧阴离子自由基(O2-.)模型,研究了红芪、黄芪水提液体外清除自由基的活性.结果表明:2种水提液在生药浓度为5～80mg.mL-1的剂量范围内对.OH的清除效果呈明显的量效依赖关系,其IC50分别为红芪水提液8.686mg.mL-1和黄芪水提液16.662mg.mL-1;二者在生药浓度为25～200mg.mL-1的剂量范围内对O2-.的清除效果呈现明显的量效依赖关系,其IC50分别为红芪水提液176.636mg.mL-1和黄芪水提液185.123mg.mL-1.红芪、黄芪水提液均具有一定的体外清除自由基活性,且红芪的清除效果优于黄芪,因此在以自由基为诱因的疾病防治中建议优先选用红芪.

红芪多糖对db/db小鼠糖尿病心肌病心肌NF-κB p65与MMP-9表达的影响

目的:观察红芪多糖(HPS)对db/db小鼠心肌组织核转录因子(NF-κB p65)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白与mRNA表达的影响,探讨其防治心肌间质纤维化可能的作用机制.方法 :将60只雄性db/db小鼠随机分为5组:HPS高、中、低剂量组,罗格列酮组与模型组;12只雄性db/m小鼠为正常组.干预组小鼠连续灌胃8周,于干预前后每2周测空腹血糖、体质量各1次.第8周末心脏取血后,取心脏左室心肌组织,分别用于Masson染色、电镜观察心脏超微结构以及Western blotting、逆转录-免疫酶联反应(RT-PCR)法检测其NF-κB p65、MMP-9的蛋白与mRNA表达情况.结果:HPS干预8周后,与模型组比较:HPS高、中剂量组与罗格列酮组小鼠血糖下降明显(P<0.05),干预组小鼠体质量变化无明显差异(P>0.05);Masson染色可见亮绿色胶原纤维在心肌细胞间及血管周围明显增多且呈堆积状分布;电镜观察可见HPS高剂量组与罗格列酮组小鼠心肌组织内线粒体数量与破坏程度、糖原颗粒及脂滴沉积现象均有明显改善;Western blotting、RT-PCR检测结果显示,HPS高剂量组、罗格列酮组小鼠心肌组织中NF-κB p65、MMP-9的蛋白与mRNA表达量均明显降低(P<0.05).结论:HPS可降低db/db小鼠心肌组织中NF-κB p65、MMP-9蛋白与mRNA的表达水平,减轻其炎症反应状态,对心肌的间质纤维化病变具有一定的防治作用.

红芪总黄酮对氧化低密度脂蛋白致内皮细胞损伤的保护作用

目的:研究红芪总黄酮对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导脐静脉内皮细胞损伤的保护作用。方法:建立ox-LDL致脐静脉内皮细胞损伤模型,化学比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、一氧化氮(NO)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性。结果:红芪总黄酮可显著降低ox-LDL损伤脐静脉内皮细胞的LDH释放,使细胞分泌的NO含量升高,提高细胞内SOD及NOS活性。结论:红芪总黄酮对ox-LDL诱导脐静脉内皮细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高脐静脉内皮细胞的抗氧化能力有关。

红芪总黄酮对离心运动大鼠骨骼肌的抗氧化作用

目的：研究红芪总黄酮对大鼠离心运动后骨骼肌抗氧化能力的影响。方法：72只Wistar大鼠随机分为安静对照组（ Control group，CG）、离心运动组（ Eccentric Group，EG）和离心运动＋药物预处理组（Drug pretreatment group，DPR）。依据运动后时间点不同再次分为运动前1 h和运动后1，24，48 h 4个亚组，每组6只。离心运动前3天，药物预处理组大鼠每日定时给予0．2mg／kg红芪总黄酮灌胃，其余各组大鼠给予等量生理盐水灌胃。力竭运动后，取各组大鼠腓肠肌，分别检测乳酸脱氢酶（LDH）、活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果：离心运动后，大鼠骨骼肌组织中LDH，ROS和MDA含量与运动后明显升高，而SOD活性下降（ P＜0．01～0．05）。红芪总黄酮可延缓离心运动后大鼠骨骼肌ROS、MDA及LDH含量的积累并提高SOD活性，与相应对照组比较，差异具有显著性（ P＜0．05）。结论：红芪总黄酮可有效防止高强度运动后氧化应激所导致的骨骼肌损伤。