Occurrence of Clostridium perfringens contamination in poultry feed ingredients:Isolation, identification and its antibiotic sensitivity pattern

This work has been undertaken to study the occurrence of Clostridium perfringens contamination in the poultry feed ingredients and find out its in-vitro antibiotic sensitivity pattern to various antimicrobial drugs. Two hundred and ninety-eight poultry feed ingredient samples received at Poultry Disease Diagnosis and Surveillance Laboratory, Namakkal, Tamil Nadu in South India were screened for the presence of C. perfringens. The organisms were isolated in Perfringens agar under anaerobic condition and subjected to standard biochemical tests for confirmation. In vitro antibiogram assay has been carried out to determine the sensitivity pattern of the isolates to various antimicrobial drugs. One hundred and one isolates of C. perfringens were obtained from a total of 298 poultry feed ingredient samples. Overall positivity of 33.89% could be made from the poultry feed ingredients. Highest level of C. perfringens contamination was detected in fish meal followed by bone meal, meat and bone meal and dry fish.Antibiogram assay indicated that the organisms are highly sensitive to gentamicin(100%), chlortetracycline(96.67%), gatifloxacin(93.33%), ciprofloxacin(86.67%), ofloxacin(86.67%) and lincomycin(86.67%). All the isolates were resistant to penicillin-G. Feed ingredients rich in animal proteins are the major source of C. perfringens contamination.

产氢菌Clostridium butyricum P22的分离鉴定及其产氢特性研究

从连续生物制氢反应器中分离得到高效产氢细菌P22,利用微生物自动鉴定仪并结合菌株16S rDNA序列分析,将其鉴定为Clostridium butyricum P22。同时还进一步研究了碳源、氮源、初始pH值和培养温度对菌株P22产氢活性的影响。结果表明:该菌株能利用多种碳源氮源产氢,当以葡萄糖作为产氢底物时,其最大产氢量和产氢速率分别为为301.7 mL/g-glucose(2.42 mol/mol-glucose)、31.1 mL(/g-glucose.h)。发酵液的初始pH和培养温度严重影响产氢菌活性,初始pH6.47、35℃培养为该菌种较为适宜的产氢条件。利用Arrehnius方程以葡萄糖为底物拟合得到该菌株产氢反应的活化能为70.7 kcal/mol。经能量分析,Clostridium butyricum P22产氢过程中葡萄糖能量回收率为20.6%。该菌株在生物制氢中具有很好的应用发展前景。

鸡源产气荚膜梭菌分离鉴定和药敏试验及枯草芽孢杆菌对其抑制作用

为探究产气荚膜梭菌在黄羽肉鸡重要养殖区域的流行及耐药情况,采集广东、广西等华南地区,安徽、江苏、福建等华东地区6个规模化肉鸡养殖场9份肠道病变样品进行分离鉴定和毒素分型检测、耐药性分析,琼脂扩散试验检测野外分离枯草芽孢杆菌BSGZ7对产气荚膜梭菌的抑菌效果。结果显示,从肠道样品中分离到7株A型和2株G型产气荚膜梭菌,9株分离菌和1株标准菌均对阿莫西林、青霉素、头孢噻肟、氨苄西林、头孢氨苄、氟苯尼考、头孢曲松具有较高的敏感性,对庆大霉素、卡那霉素、四环素、多西环素、链霉素、磺胺异恶唑、林可霉素、红霉素、多黏菌素B等抗菌药物普遍耐药,枯草芽孢杆菌BSGZ7发酵液均对10株菌有抑菌效果。结果表明枯草芽孢杆菌对产气荚膜梭菌具有一定抑菌作用,有望成为防控鸡坏死性肠炎的新型绿色安全的抗菌制剂,同时也为临床上鸡坏死性肠炎的防控和治疗提供了参考依据。

鸡源产气荚膜梭菌的分离鉴定及耐药性研究

目的:对鸡源产气荚膜梭菌进行分离、鉴定和耐药性研究,以深入了解其生物学特性和潜在威胁。方法:利用TSC琼脂、血琼脂、硫酸亚铁牛乳培养基等进行分离培养,通过形态观察、生化特性鉴定,以及PCR鉴定和耐药性试验等多种方法,系统性地分析产气荚膜梭菌的性状和特性。结果:分离得到的3株产气荚膜梭菌经PCR鉴定均确认为A型。生化鉴定结果显示了其在碳源代谢上的多样性。毒素分型和16S rRNA基因分析验证了其种属身份,同时揭示了它们在分子水平上的相似性。耐药性试验结果表明,这些分离株对庆大霉素、卡那霉素、新霉素、多黏霉素B和复方新诺明表现出耐药性,对头孢唑啉、头孢曲松、头孢呋辛、氨苄青霉素和哌拉西林等抗生素则表现出高度敏感性。结论:本研究全面研究了鸡源产气荚膜梭菌的分子生物学特性,强调了其在碳源代谢和抗药性方面的多样性,为防控鸡源产气荚膜梭菌感染提供了重要的基础数据,同时为未来深入探究其致病机制和合理使用抗生素提供了科学依据。

辽宁绒山羊产气荚膜梭菌的分离鉴定与耐药性分析

研究对疑似产气荚膜梭菌感染的辽宁绒山羊病例样本进行细菌分离鉴定,以期为辽南地区辽宁绒山羊养殖过程中科学防治产气荚膜梭菌病提供参考。试验采集腹泻辽宁绒山羊的粪便肛拭子和腹泻病死羊肠道内容物,结合临床症状进行染色镜检、PCR扩增、测序及药敏试验。结果显示,样本经细菌分离培养、染色镜检、鉴别培养、PCR鉴定确诊为产气荚膜梭菌感染。药敏试验结果显示,分离株对红霉素、四环素、诺氟沙星等耐药,对氟苯尼考、氯霉素和哌拉西林等敏感。研究表明,导致该辽宁绒山羊养殖场内羊腹泻及死亡的病原为产气荚膜梭菌,可根据药敏试验结果进行用药,避免出现耐药性影响治疗效果。

牦牛源A型产气荚膜梭菌的分离鉴定及生物学特性研究

【目的】2023年4月至2023年5月,西藏拉萨市多地出现牦牛严重腹泻、便血甚至死亡的现象。试验旨在确定牦牛腹泻的病原菌并研究其生物学特性,以期为该地区牦牛腹泻病的防治提供参考。【方法】采集新鲜牦牛腹泻粪便样品进行厌氧培养,通过培养特性及染色镜检进行初步鉴定;对可疑阳性菌株进行生化特性、多重PCR毒素基因分型及cpe、netB、cpb2毒素鉴定,并进行cpa、cpb2、16S rRNA基因的遗传进化分析、部分分离株生长曲线测定及动物致病性试验;采用K-B法测定分离株的体外药物敏感性,统计不同分离株的多重耐药结果。【结果】从样品中分离纯化得到8株分离菌,在厌氧培养基中生长旺盛,在TSC培养基、5%脱纤维绵羊血平板、卵黄琼脂培养基上均呈现与产气荚膜梭菌相似的典型菌落,革兰染色为紫色大杆菌,初步判定为产气荚膜梭菌,命名为XZ-1~XZ-8。分离株生化检测结果与产气荚膜梭菌相符;分离株均携带cpa和cpb2基因,为A型产气荚膜梭菌;16S rRNA基因分析结果显示,8株分离株与产气荚膜梭菌参考株的相似性为97.3%~100%,在系统进化树中处于同一分支,而与屎肠球菌、大肠杆菌参考株处于不同分支;分离株cpa和cpb2基因存在一定的变异性。生长曲线显示,3株分离株(XZ-1、XZ-4、XZ-7)生长规律基本一致,其中0~4 h为迟缓期,4~8 h为对数期,8~22 h为稳定期,22 h后开始进入衰亡期。动物致病性试验结果显示,分离株对昆明小鼠具有较强的致病性。分离株对苯唑西林、红霉素、氯霉素、氧氟沙星、米诺环素、头孢哌酮、利福平及罗红霉素敏感,对青霉素、哌拉西林、羧苄西林、麦迪霉素、头孢曲松等22种药物均存在不同程度的耐药性,存在多重耐药性,其中XZ-7株耐药数量多达11种,6重以上耐药的菌株占75.0%。【结论】本研究成功从拉萨严重腹泻、血便牦牛粪样中分离出8株A型产气荚膜梭菌,分离株对小鼠具有较强的致病性,对青霉素、哌拉西林、羧苄西林等药物存在不同程度的耐药性。研究结果为该地区牦牛腹泻病防控提供了参考依据。

新疆喀什某规模化安格斯牛场犊牛产气荚膜梭菌的分离鉴定及耐药性分析

【目的】产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,CP)是一种革兰阳性厌氧菌,可导致犊牛猝死、出血性坏死性肠炎、肠毒血症等,对犊牛健康造成巨大影响。本研究旨在了解新疆喀什地区某规模化肉牛场安格斯犊牛产气荚膜梭菌流行现状及耐药情况,为该地区由产气荚膜梭菌引起的疾病的治疗提供科学依据。【方法】试验采集20份组织样品及6份圈舍粪土样品,采用分离培养、形态学观察、染色镜检、生化试验等方法进行细菌分离鉴定,并采用K-B纸片法进行药敏试验,PCR检测分离菌的毒力型及耐药基因。【结果】分离菌在FTG液体培养基中出现浑浊并产生大量气体,在TSC培养基中长出黑色边缘整齐的圆形菌落,在绵羊血平皿上长出具有典型的双溶血环菌落,革兰染色镜检可见菌体粗短、成单个或双个排列的革兰阳性直杆菌,形态学及镜检结果符合产气荚膜梭菌特点。26份样品中共分离出10株产气荚膜梭菌,检出率为38.46%。经毒素基因分型鉴定,其中,A型产气荚膜梭菌9株,检出率为90.0%,D型产气荚膜梭菌1株,检出率为10.0%。药敏试验结果显示,分离株对卡那霉素耐药率最高,为80.0%;对庆大霉素和林可霉素耐药率为50.0%,而其对美罗培南、头孢吡肟、氟苯尼考及多西环素敏感。耐药基因检测结果表明,bla TEM基因检出率最高,为100.0%;bla SHV、qnrA和aac(6′)-Ⅰb-cr基因检出率分别为20.0%(2/10)、10.0%(1/10)和20.0%(2/10);未检出bla CTX-M和qnrS 2种耐药基因。【结论】新疆喀什地区安格斯犊牛产气荚膜梭菌感染主要以A型为主,耐药情况严重,且存在多重耐药。试验结果可为后期产气荚膜梭菌流行病学研究和防控提供科学依据。

1株猪源A型产气荚膜梭菌的分离鉴定及致病性研究

【目的】探究A型产气荚膜梭菌在仔猪腹泻中的致病性,为A型产气荚膜梭菌感染所致腹泻的诊断和治疗提供理论依据和参考。【方法】通过培养特性和革兰染色镜检对分离菌进行初步鉴定,通过生化试验、毒素基因PCR扩增、16S rRNA序列比对并构建进化树对可疑菌株进一步鉴定,利用药敏试验和动物回归试验研究分离菌株的耐药性和致病性。【结果】分离菌株在TSN平板上呈黑色菌落,在血平板上呈α、β双溶血环,革兰染色呈紫色粗大杆菌。生化试验结果显示,分离菌株葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、还原性硝酸盐试验、H_2S试验和明胶液化均呈阳性,甘露醇、吲哚试验和水杨酸结果呈阴性。16S rRNA序列比对结果显示,分离菌与NCBI数据库中已公布的产气荚膜梭菌16S rRNA基因序列相似性均>99%,鉴定该菌株为产气荚膜梭菌。PCR扩增出plc及cpb2基因,表明该菌株为携带β2毒素的A型产气荚膜梭菌。药敏试验结果显示,分离菌株对青霉素G、庆大霉素、林可霉素、磺胺异噁唑、环丙沙星、诺氟沙星耐药。动物回归试验结果显示,攻菌后仔猪粪便中可检出大量产气荚膜梭菌,该菌株可引起仔猪腹泻,死亡率达50%;死亡仔猪剖检可见小肠充血、出血、鼓气,从脾脏、小肠中可分离出产气荚膜梭菌,且在损伤严重的空肠肠段中分离出高载量A型产气荚膜梭菌。【结论】本试验成功分离出1株A型产气荚膜梭菌,可引起新生仔猪发病,致病性较强,该研究结果为A型产气荚膜梭菌感染仔猪的诊断、流行病学调查、治疗提供了参考依据。

黄牛源产气荚膜梭菌分离株基因组的生物信息学分析

本研究自猝死海南黄牛的组织器官中分离到2株A型产气荚膜梭菌,命名为ZWCP209和ZWCP210。基因组拼接结果显示其基因组大小处于3.4~3.5 Mb之间,tRNA和CDS数量稳定。多位点序列分析(MLST)显示,测序菌株属于同种新ST型。从NCBI数据库中获取27株牛源产气荚膜梭菌的基因组,与测序分离株共同进行生物信息学分析:共检测到13种耐药基因,其中四环素类耐药基因tetA(P)和tetB(P)的携带率最高(79.4%),值得关注的是,本研究中2株海南黄牛分离株均携带了7种以上的耐药基因,其中包括非兽用抗生素噁唑烷酮的耐药基因optrA。泛基因组分析结果显示以上菌株的基因组中共含有7 345个基因,核心基因数量占比22.94%;在核心基因组和plc基因的系统进化分析中,两海南黄牛分离株处于同一分支,并具有相同的毒力因子,具有极高的同源性。本研究为国内首次对海南黄牛产气荚膜梭菌进行全基因组序列测定与生物信息学分析,对牛产气荚膜梭菌病的防治与基因组研究具有参考价值。

牦牛源腐败梭菌病的病原分离鉴定及生物学信息分析

为了研究青海果洛地区牦牛源腐败梭菌病的生物学特性,对青海省果洛州玛沁县兽医站送检的3份病死牦牛脏器样本进行细菌分离培养、鉴定及生物学特性分析,并对分离的病原菌株进行了PCR特异性扩增及系统发育树比对。结果表明,从病死牛脾脏中分离到的菌种为革兰氏阳性大杆菌,该菌在pH 8.0的VF厌气肝汤中生长良好,在PH8.0的羊血琼脂培养基上能长出光滑凸起、边缘圆润并伴有溶血现象的菌落;将分离菌纯培养物递倍稀释后经皮下注射0.2 mL昆明系小白鼠,小鼠在24 h内全部死亡;从生长曲线可看出0~2 h为迟缓期,>2~14 h为对数期,>14~24 h为平稳期,24 h之后开始衰退。经特异性扩增得到与预期结果相符的大小为1 300 bp的ɑ毒素条带,16SrRNA扩增得到1 450 bp的目的条带,进化发育树分析结果显示该分离菌为腐败梭菌。经实验室分离鉴定,并结合分子生物学实验结果,确诊为牦牛腐败梭菌病,此诊断结果为该地区疫病的防控提供了技术支撑。

新疆牧区羊产气荚膜梭菌病分离及鉴定

【目的】旨在探究新疆牧区羊产气荚膜梭菌病流行情况。【方法】于2023年春、秋季期间对来自新疆不同地区牧区羊群中疑似梭菌感染死亡羊150余份病料进行病原菌分离鉴定。采用人工感染试验和细菌鉴定仪、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)分别对其进行致病性检测和细菌鉴定。【结果】共分离出羊产气荚膜梭菌病16株,动物试验显示,分离菌株可引起小鼠死亡,致死率达80%。【结论】羊产气荚膜梭菌病在新疆牧区时有发生,做好免疫接种及科学管理,对控制羊梭菌病行之有效。

一株丁酸梭菌的分离鉴定及生物学特性研究

本试验通过厌氧培养法从健康鸡的新鲜粪便中分离筛选得到1株菌株,从形态学观察、生理生化试验和16S rDNA基因序列分析等方面对菌株进行鉴定,确定该菌株为丁酸梭菌。对其生物学特性进一步研究,发现该菌株能够产生乙酸、丁酸等挥发性脂肪酸,对产气荚膜梭菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌等多种肠道致病菌均有一定的抑菌能力。综上所述,该菌株在生长、抗逆、产酸、抑菌方面表现较好,具有很好的应用价值。

酒窖底泥中丁酸梭菌的分离及其特性研究

通过厌氧培养法从酒窖底泥中分离得到14个菌株,生理生化实验和16SrDNA序列分析鉴定出2株丁酸梭菌。选取丁酸梭菌菌株B1研究了其生长特性和安全性,体外研究表明其具有较强的耐酸、耐胆汁和耐抗生素能力,并能显著抑制常见肠道致病菌的生长,具有作为饲用微生态制剂应用的潜力。

鸡源高产淀粉酶丁酸梭菌的分离鉴定

为了获得产淀粉酶的丁酸梭菌,本研究从鸡小肠表面黏液中进行丁酸梭菌的分离与筛选,首先对样品进行80℃水浴10min除去非芽孢菌后,然后接种到TSN培养基进行菌株的分离与筛选。对分离到的菌株进行菌落形态、显微形态初步观察,然后对疑似丁酸梭菌的菌株进行产酸能力和淀粉酶酶活检测,最后对既产酸又高产淀粉酶的菌株进行生理生化鉴定和16SrDNA序列分析。结果表明分离到一株革兰氏阳性厌氧菌C.B1,菌体呈短杆状,能形成圆形或椭圆形芽孢,生理生化结果也符合丁酸梭菌的基本特征,16SrDNA序列长度为1 450bp,与丁酸梭菌的同源性高达99%以上,因此确定该分离菌株为丁酸梭菌,为进一步开发新的微生态制剂奠定了基础。

鸡产气荚膜梭菌的分离鉴定及药敏试验

为确定广东韶关地区两个养殖密度较大鸡场病死鸡的患病病原,根据临床症状、剖检病变疑似坏死性肠炎,每场各分离到1株细菌,通过对细菌分离株进行形态培养、生化鉴定、牛乳汹涌发酵试验、PCR种特异性和毒素型鉴定等试验,鉴定2个分离株均为A型产气荚膜梭菌。对分离株进行药敏试验,测定了临床上常用的抗菌药物添加剂对两株产气荚膜梭菌的最小抑菌浓度(MIC),结果显示恩拉霉素和维吉尼亚霉素对两分离株具有良好的抑菌效果,黄霉素、吉他霉素、硫酸黏杆菌素对个别菌株具有抑菌作用,而那西肽则无明显抑菌作用。研究结果可为鸡坏死性肠炎的临床防控提供参考。

鸡产气荚膜梭菌的分离鉴定及药敏试验

为调查湖北地区健康鸡群中产气荚膜梭菌的分布状况,从规模化养鸡场采集鸡肛门棉拭子样品,应用厌气肉肝汤和CW琼脂培养基培养、紫牛乳反应、革兰染色及生化试验进行细菌的分离鉴定,应用多重PCR方法对分离菌株进行基因分型,并对分离菌株进行体外药敏试验。结果从120份样品中分离到9株(7.5%)产气荚膜梭菌,多重PCR都只扩增出α条带,毒素基因分型结果均为A型。药敏试验结果显示,分离菌株对链霉素、新霉素、丙氟哌酸、环丙沙星耐药,对丁胺卡那霉素,氯洁霉素中度敏感,对氨苄西林、阿莫西林、四环素、头孢噻肟高度敏感。

一株A型肉毒梭状芽孢杆菌的分离与鉴定

从四川成都、重庆、若尔盖,新疆乌鲁木齐,宁夏固原共采集土样319份进行肉毒梭状芽孢杆菌的分离。在若尔盖土样中分离到一株厌氧芽孢杆菌,按《伯杰细菌鉴定手册》(第八版)的方法进行了生物学测定、生理生化试验,并测定了其 DNA 中 G+C mol 为24.9%,鉴定为肉毒梭状芽孢杆菌,经血清学试验进一步鉴定为 A 型肉毒梭菌,编号为 As-3。

羊源C型产气荚膜梭菌的分离鉴定、药敏试验及免疫治疗

从陕北某绵羊养殖场猝死绵羊的肝脏和脾脏中分离得到1株细菌,通过细菌培养特性、菌体形态、菌落特征、染色特性、生化试验、外毒素测定、毒素类型的PCR检测和药敏试验等鉴定,结果表明,该分离菌为革兰氏阳性大杆菌,生长特性和生化试验结果符合产气荚膜梭菌的所有特点;该菌可产生致小白鼠死亡的外毒素,PCR检测结果证实外毒素为α毒素和β毒素;药敏试验结果表明,该菌对环丙沙星、诺氟沙星等抗生素高度敏感,对庆大霉素、卡那霉素等抗生素不敏感。表明该菌为引起绵羊猝狙的C型产气荚膜梭菌,用羊梭菌疫苗紧急免疫羊群并配合应用抗生素治疗能有效控制该病的流行。

山羊“猝死症”病原菌的分离鉴定

对 3只突然死亡山羊的脏器进行了细菌学检查 ,分离到一种革兰氏阳性大杆菌 ,单在或成双 ,多为短链 ,无荚膜 ,有运动力 ;进行厌氧培养 ,在普通培养基上菌落呈不规则网状 ,分枝从中央向四周延伸 ,边缘不齐 ;血液琼脂平板厌氧培养 48h ,形成边缘不整齐、微隆起、淡灰色、周围有β溶血环的菌落 ;经生化鉴定为腐败梭菌。该菌可致死小白鼠 ,对环丙沙星、阿米卡星等药物敏感。

浙江省牛犬猝死症病原菌分离鉴定及其药敏试验

对浙江省 2 0 0 3年 3～ 4月发生的牛、犬猝死综合征 (sudden deathsyndrome ,SDS)的病原体进行了分离和鉴定 ,并检测了分离菌株对不同药物的敏感性。采集 2 6头牛、2 2头猝死犬的心血 ,以及心、肝、脾、肺、肌肉组织和粪便标本 ,并同时进行尸检。采用多种培养基分离培养病原菌。根据菌落特征、革兰染色镜检和ATB半自动细菌鉴定仪检测结果鉴定病原菌的种属。用药敏试条和ATB半自动细菌鉴定仪进行上述菌株对1 0种抗生素的体外药敏试验。从 84 .6 %病牛 (2 2 / 2 6 )、72 .7%病犬 (1 6 / 2 2 )中检出魏氏梭菌 (Clostridiumwelchii) ,但未检出炭疽杆菌 ,表明魏氏梭菌是牛、犬SDS的病原体。病牛真胃、小肠和心冠状沟 ,以及病犬小肠、肝脏出现明显的点状出血 ,这可能与其死亡直接相关。所分离的魏氏梭菌对青霉素和林可霉素耐药 ,但对其它 8种抗生素敏感 。