西安市宠物犬吉氏巴贝斯虫病病例的统计分析

为进一步了解犬吉氏巴贝斯虫病的发病规律和临床表现,本试验对61例西安市某动物医院犬吉氏巴贝斯虫病确诊病例进行统计分析。结果显示,该病可在多个品种、不同年龄段的犬只中进行传播,其中1~3岁易感性更高;犬只在一年四季均可感染该病,其中秋季更易感;该病的临床症状主要表现为黏膜苍白、黏膜黄染、血红蛋白尿、高热和脾肿大;患犬血涂片检查均可在红细胞内观察到吉氏巴贝斯虫虫体,部分可见异常红细胞;多数患犬在临床检查中都会出现红细胞压积(HCT)、血红蛋白(HGB)浓度、红细胞(RBC)数和血小板(PLT)数降低的现象;部分患犬还会出现炎症感染,肝、肾损伤和离子紊乱等情况。该结果为犬吉氏巴贝斯虫病的临床诊断提供了可靠的数据参考,对提升该病的诊断效率有一定的临床意义。

1例三氮脒结合3种抗生素联用治疗犬吉氏巴贝斯虫病例报告

患犬由于食欲减退前来就诊,在体格检查结果前提下通过实验室仪器检查及影像学排查确定贫血为造成患犬临床症状的病理性因素。围绕贫血原因,依托细胞学检查结果及PCR检查确诊为吉氏巴贝斯虫感染。在本病例中尝试使用强力霉素、恩诺沙星、甲硝唑3种抗生素连用配合兽用三氮脒进行治疗,持续治疗近3个月后可控制感染,但很快出现复发,后通过传统治疗方案控制病情。该文最后针对不同的吉氏巴贝斯虫治疗方案结合病例具体情况进行比较和讨论,得出强力霉素、恩诺沙星、甲硝唑3种抗生素联用不适合作为吉氏巴贝斯虫治疗的首选方案,具体疗效需要更多数据支撑。

犬吉氏巴贝斯虫的人工感染及治疗试验

为进一步证实犬吉氏巴贝斯虫（Ｂａｂｅｓｉａｇｉｂｓｏｎｉ）的致病作用，筛选较为理想的治疗药物，将１２只杂种狼犬均分为摘脾组与不摘脾组，进行了吉氏巴贝斯虫人工感染试验。人工感染犬临床症状与自然感染犬无明显差异，表现为体温升高、红细胞减少、Ｈｂ降低及虫血症等，摘脾组较不摘脾组虫血症和症状的出现早１～２ｄ。将此１２只人工感染犬及６７只自然感染犬随机分成４组，分别以贝尼尔（Ｂｅｒｅｎｉｌ）、阿卡普林（Ａ－ｃａｐｒｉｎｕｍ）、蒿甲醚（Ａｒｔｅｍｔｈｅｒｉｎ）和磷酸伯氨喹（Ｐｒｉｍａｑｕｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔｅ）４种药物进行治疗比较试验，结果以蒿甲醚疗效最好，用药后第２天虫体转阴率达７０％，第３天Ｈｂ由２８ｇ／Ｌ上升到６４ｇ／Ｌ，奏效迅速。

北京地区25例犬吉氏巴贝斯虫病例分析

为调查北京地区犬吉氏巴贝斯虫病的感染与治疗情况,2014年10月至2016年1月期间,本试验对中国农业大学动物医院就诊的25例犬吉氏巴贝斯虫感染病例进行调查统计,记录其临床症状,分析全血细胞计数(Complete Blood Count,CBC)、生化检测结果和三氮脒的治疗效果。结果显示,25例患犬均出现不同程度的贫血,73.3%(11/15)的患犬出现了免疫介导性溶血性贫血(Immune mediated hemolytic anemia,IMHA),使用三氮脒和输血疗法治疗后,71.2%(10/14)的患犬取得良好的疗效,但目前跟踪的病例中,21.4%(3/14)的患犬已复发。

青海西宁藏獒巴贝西虫病的血清学调查

用基于重组的犬B.gibsoni P50蛋白作为ELISA诊断抗原,对来自青海省西宁地区的5个藏獒养殖基地的118份藏獒血清,进行了犬巴贝西虫病的血清学诊断。经过对所收集的118份牧羊犬血清抗体的检测,共检出牧羊犬阳性血清12份,阳性率为10.17%。结果初步表明,西宁地区部分藏獒养殖基地中存在犬B.gibsoni感染。

利用BgAMA-1抗原建立吉布森巴贝斯虫的ELISA诊断方法

本研究利用基因重组技术,构建并表达吉布森巴贝斯虫的重组顶膜抗原-1(BgAMA-1),将BgAMA-1作为诊断抗原,建立针对吉布森巴贝斯虫的ELISA诊断方法。结果显示,构建的重组表达质粒得以表达,建立的ELISA方法在血清学诊断中有较好的特异性。

吉氏巴贝斯虫cDNA探针的制备及杂交试验

本实验将－6．6kb的吉氏巴贝斯虫cDNA片段以光照活化法标记光敏生物素，制备成光敏生物素探针。与吉氏巴贝斯虫基因组DNA、伊氏锥虫基因组DNA、大白细胞DNA的斑点杂交试验表明，该探针可与0．001ng以上量的吉氏巴贝斯虫DNA杂交，而不与任何浓度的伊氏锥虫DNA和犬DNA杂交，具有很高的敏感性和特异性。

长角血蜱侵袭致藏獒“蜱麻痹”和巴贝斯虫感染的诊治

对卫辉市某2.5月龄的以后肢麻痹为特征的藏獒进行临床检查、血液涂片染色镜检、血液常规检测、蜱形态学观察和蜱种鉴定。结果表明:藏獒红细胞内有大量犬巴贝斯虫寄生,血液常规检查白细胞数升高,血红蛋白含量正常,感染蜱为长角血蜱。最终确诊为长角血蜱侵袭致藏獒"蜱麻痹"和巴贝斯虫感染。应用伊维菌素、血虫净等药物进行治疗,3d后该犬病情基本好转,血常规检查白细胞恢复正常。

一例犬吉氏巴贝斯虫感染引起的免疫介导溶血性贫血的诊治

犬免疫介导溶血性贫血是一种与自身红细胞抗体有关的溶血性贫血,发病原因可分为原发性和继发性,论文主要介绍了一例由吉氏巴贝斯虫感染后继发的犬自身免疫溶血性贫血的诊断、治疗和预后。

克隆表达的犬吉氏巴贝斯虫重组GST-P130kDa用于血清学诊断

利用抗体法(picoBlueTMImmunscreeningKit,应用B.gibsoni感染血清)从犬吉氏巴贝斯虫(B.gibsoni)裂殖子mRNA制备的吉氏巴贝斯虫cDNA文库中进行免疫筛选,选出目的基因相cDNA片段(阳性克隆)。测序验证后将该cDNA(基因)克隆至原核表达载体pGEX4T3,构建重组质粒,在大肠杆菌E.coli(DH5a)中以GST融合蛋白的形式表达(SDSPAGE分析证明);表达产物为130kDa的可溶性融合蛋白。免疫学分析(Westernblot和ELISA)结果表明,犬吉氏巴贝斯虫重组GSTP130kDa融合蛋白(rBgGSTP130kDa)能与犬吉氏巴贝斯虫(B.gibsoni)感染血清起反应,且与犬巴贝斯虫(B.canis)无交叉反应。本试验利用犬吉氏巴贝斯虫重组BgGSTP130kDa融合蛋白(作为重组抗原)检测巴西(n=310)、日本(n=100)和中国(n=114,n=30)等国随机采集的自然感染狗血清,其结果为巴西狗血清阳性率为55%、日本为8%、中国为1～9%;其结果与间接荧光抗体法(IFAT)结果为一致(作为验证)。结果表明重组BgGSTP130kDa融合蛋白具有较强的免疫原性和特异性,可用于吉氏巴贝斯虫病的诊断,这为吉氏巴贝斯虫病的早期诊断和深入研究犬吉氏巴贝斯虫病的特异性重组抗原及重组疫苗奠定基础。

巴贝斯虫病在南京宠物犬中流行情况的调查

通过对南京市部分宠物门诊2002年8月-2005年8月3年病例的不完全统计、分析,犬巴贝斯虫病在南京市区一年四季均可发生。其中,秋季最多,春季次之,冬季偶尔可见;5月和10月高发,形成全年的双峰曲线。传播媒介主要为血红扇头蜱。犬巴贝斯虫病的发生与环境气候因素、人类活动有密切关系。

吉氏巴贝斯虫cDNA文库的构建

用离心柱层析法除去以反转录合成的吉氏巴贝斯虫双链ｃＤＮＡ的短片段，加ＥｃｏＲＩ粘性末瑞，再以ＮｏｔＩ酶切，定向克隆到λｇｔ１１Ｓｆｉ－ＮｏｔＩ载体ＤＮＡ的ＬａｃＺ基因内。体外包装后，感染Ｙ１０９０菌，构建成含３．２８×１０５个重组子的表达型吉氏巴贝斯虫ｃＤＮＡ文库。酶切鉴定表明，白斑噬菌体ＤＮＡ均含有大小不等的ｃＤＮＡ片段，免疫学筛选显示文库中表达阳性的重组子数占总重组子数的８．９％。

吉氏巴贝斯虫实验动物模型的研究

用吉氏巴贝斯虫感染置换了犬红细胞的 SCID鼠 ,吉氏巴贝斯虫在 SCID鼠体内得到高水平的生长和增殖。虫体大小比在犬体内略增大 ,而且繁殖型虫体增多 ,常在一个红细胞内寄生有 2、4、8、16和 32个虫体。在感染的第 10天前后 ,末梢血液中红细胞的染虫率高达 12 %左右。从 SCID鼠末稍血液能检出虫体的期限为 15～ 18天左右。从而成功地建立了吉氏巴贝斯虫的实验动物模型。

中国犬吉氏巴贝斯虫srRNA的序列测定及其在PCR诊断上的应用

用特异引物ＢＧ－１和ＢＧ－２从南京株吉氏巴贝斯虫ｃＤＮＡ文库中克隆出ｓｓｒＲＮＡ序列，测定了该序列的核苷酸组成。通过基因库同源性查询表明，该序列与美洲株吉氏巴贝斯虫ｓｓｒＲＮＡ具有８７％的同源性。本实验通过优化ＢＧ－１和ＢＧ－２引物对ｓｓｒＲＮＡ基因的扩增反应条件，建立了对吉氏巴贝斯虫的特异、敏感的诊断方法。

地高辛标记C15A核酸探针检测牛巴贝斯虫

为了提高牛巴贝斯虫核酸探针的检测性能，制备了地高辛标记的牛巴贝斯虫Ｃ１５Ａ核酸探针。该探针检测牛巴贝斯虫ＤＮＡ的灵敏度为３２ｐｇ，检测探针ＤＮＡ的灵敏度为０．１ｐｇ；检测其他对照血液原虫（双芽巴贝斯虫、边缘无浆体、瑟氏泰勒虫、伊氏锥虫、卵圆巴贝斯虫）和牛血细胞的ＤＮＡ，均未出现非特异性反应。与光敏生物素标记的牛巴贝斯虫Ｃ１５Ａ核酸探针比较，光敏生物素标记探针能检出１０％带虫血１２．５μＬ，而地高辛标记探针能检出１０％带虫血０．０１５μＬ，且杂交背景浅，显色深。

吉布森巴贝虫顶膜抗原-1基因的表达及表达产物的生物学活性

通过免疫筛选法,从构建的犬吉布森巴贝虫cDNA基因表达文库中筛选到1个cDNA克隆,此cDNA核苷酸全长2 108 bp,包含1个完整的开放阅读框,编码蛋白的分子质量约为62 ku。经过分析,此蛋白(BgAMA-1)与其他巴贝虫属的顶膜抗原-1具有较高的同源性。为了研究其生物学活性,以此cDNA为模板,利用PCR扩增BgAMA-1的全基因,并将其克隆到pGEX-4T-3载体上,构建了原核表达载体pGEX-4T-3/BgAMA-1。通过Western-blotting对表达并纯化的重组蛋白的生物学活性进行分析。结果显示,构建的pGEX-4T-3/BgAMA-1能在大肠杆菌DH5α中表达,所获的重组抗原BgAMA-1在Western-blotting上仅与吉布森巴贝虫感染犬血清发生反应,证实其具有种特异性,在诊断方面可能有一定的应用价值。

吉氏巴贝斯虫单克隆抗体制备的研究

应用淋巴细胞杂交瘤技术制备杂交瘤细胞株 ,经间接萤光抗体法筛选和克隆 ,获得了 5株能稳定分泌吉氏巴贝斯虫特异性抗体的杂交瘤细胞株 ,分别命名为C3B5、M8B7、E9C5、G6 D8、H2 A7。经过鉴定 ,这 5株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体亚类及相对分子质量分别为IgG2b,1 8× 1 0 4 ;IgG2a,1 8× 1 0 4 ;IgG1 ,1 8× 1 0 4 ;IgM ,3 2× 1 0 4 ;IgM ,1 8× 1 0 4 。腹水效价为 1∶1 0 4 ～ 1∶1 0 5。其中E9C5杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体是一种保护性抗体 ,经对实验感染吉氏巴贝斯虫小鼠体内虫体的杀虫试验证明具有较强的杀灭作用。

一例犬吉氏巴贝斯虫病的诊治

随着家庭宠物犬养殖数量的急剧增加,犬吉氏巴贝斯虫的发病率也随之升高,患犬如治疗不及时可在数日内因贫血死亡,严重威胁犬只生命安全。本文就一例苏格兰牧羊犬感染吉氏巴贝斯虫病的诊治做一介绍,为临床提供参考。

犬吉氏巴贝斯虫截短型抗原BgTRAP的重组表达及其在诊断上的初步应用

吉氏巴贝斯虫Bg TRAP蛋白是一个重要的诊断抗原候选分子。为建立一种实用的犬吉氏巴贝斯虫血清学诊断方法,本研究选取Bg TRAP C-末端跨膜区前,包含TSP功能区和抗原区的411个氨基酸的编码基因片段,重组表达了一个可溶性截短型Bg TRAP抗原,解决了完整蛋白重组表达纯化的困难。免疫荧光试验表明,截短型抗原具有良好的抗原性。纯化的截短型抗原作为酶联免疫试验诊断抗原,可清晰地区分阴性及阳性犬血清,并与其他病原感染无交叉反应,具有良好的特异性。犬感染吉氏巴贝斯虫系列血清检测表明,该抗原可检测早期感染(4 d)和感染200 d以后的样本。结果提示,重组Bg TRAP截短型抗原可作为一种诊断制剂检测犬吉氏巴贝斯虫抗体。

一例犬吉氏巴贝斯虫病的诊治

3岁雄性贵宾犬,体重3.20 kg,免疫完全,未绝育,从未进行过体内外驱虫,院内散养。主诉最近2周发现犬的精神状态渐差,进食量逐渐减少。为了对其进行诊治,采用体格检查、血液学检查以及影像学检查的方法进行诊断,并根据诊断结果进行治疗,结果表明,该犬感染吉氏巴贝斯虫且并发肝脏损伤,通过采取输血、驱虫等治疗措施,患犬的临床症状消失,镜检外周血虫体消失,治疗后未见复发。说明临床上可通过血液学检测对犬的吉氏巴贝斯虫感染进行确诊,且输血结合驱虫治疗可有效治疗该病。