奶牛乳腺组织蛋白质样品的制备及2-DE图谱分析

本研究以奶牛乳腺组织为对象,采用了普通离心、超速离心、2-D clean-up kit和TCA/丙酮沉淀方法制备蛋白质样品,经二维凝胶电泳(2-DE)获得蛋白表达图谱。根据凝胶图谱上蛋白质斑点判断图谱的质量,并运用PDQuest7.4软件分析图谱。结果显示:普通离心法制备的蛋白样品的凝胶图谱蛋白质斑点较为清晰,但横向条纹较多;超速离心法纯化蛋白样品的图谱,蛋白斑点清晰且可检测到较多的斑点;TCA/丙酮沉淀和2-D clean-up kit方法纯化蛋白样品的凝胶图谱条纹减少,蛋白斑点清晰,但可检测到的斑点数量有所减少。研究表明,超速离心方法纯化的蛋白质样品适合建立奶牛乳腺组织的蛋白质表达图谱。

2-DE技术中疏水性和碱性蛋白质的研究进展

双向凝胶电泳(2-DE)具有高分辨率、高通量等特点,已被广泛地用于蛋白质组的分离.但是它在分离疏水性蛋白质和碱性蛋白质时却遇到了极大的挑战.然而,疏水性与碱性蛋白质在全蛋白质中占相当大的比例,且具有很重要的生物学意义.因而,近年来,越来越多的研究者将目标瞄准这些蛋白质,并且取得了一些令人鼓舞的进展:用亚细胞预分离技术,顺序提取法等方法来富集疏水性蛋白质,用一些新的有效的增溶剂如硫脲,ASB-14等来改善疏水性蛋白质的溶解,应用这些技术2-DE可分辨出总平均疏水值达0.80的蛋白质;在碱性蛋白质分离方面,通过等电聚焦预处理,使用窄pH梯度胶条等大大地改善了碱性蛋白质在2-DE中的分离,能分辨出等电点达11.7的蛋白质.现对2-DE技术中疏水性和碱性蛋白质分离的研究进展进行综述.

人支气管上皮组织癌变各阶段2-DE图谱及差异分析

背景与目的:支气管上皮细胞的癌变是一个多基因参与、多阶段的复杂过程,但癌变机理仍不清楚,应用蛋白质组学技术研究此过程有可能识别癌变相关蛋白质,对揭示肺鳞癌癌变机制具有重要的意义。本研究的目的是优化支气管上皮组织的蛋白质样品制备方法,建立人支气管上皮癌变各阶段组织的2-DE图谱并进行差异分析,为鉴定肺鳞癌癌变相关蛋白质奠定基础。方法:收集、筛选人支气管正常上皮、鳞状上皮化生、不典型增生和上皮浸润癌组织标本。改良的脱氧胆酸-三氯醋酸(deoxycholate-trichloroaeticacid,DOC-TCA)法提纯支气管上皮总蛋白质,应用固相pH梯度双向凝胶电泳分离各阶段组织的总蛋白质,凝胶经银染显色后,用ImageMaster2D软件分析图谱,比较差异表达蛋白质。应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtime-of-flightmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质指纹图谱(peptidemassfingerprint,PMF),然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质。结果:应用改良的DOC-TCA法提纯总蛋白质进行双向电泳,获得了分辨率高、重复性好的人支气管上皮组织的双向电泳图谱,支气管正常上皮、鳞状上皮化生、不典型增生和上皮浸润癌组织凝胶的平均蛋白质点数依次为1189.50±39.89、1227.

食品过敏原指纹图谱快速检测研究(一)——鲫鱼、鲢鱼总蛋白2-DE指纹图谱分析

目的建立一种简捷、准确、快速检测食品过敏原的方法。分析鲫鱼和鲢鱼总蛋白2-DE(2- dimension electrophoresis)指纹图谱,确定食品过敏原指纹图谱快速检测的可行性。方法取新鲜鲫鱼和鲢鱼,去内脏和鱼鳞,在预冷的丙酮中搅碎,用丙酮去脂,PBS抽提总蛋白,PBS透析,冻干得初提样品。用Clean—up Kit 试剂盒对两种鱼的总蛋白初提样品进行精提。双向电泳第一向IEF选择13 cm非线性胶条(pH=3-10),采用溶胀方法上样,达到平衡后转移胶条进行第二向SDS-PAGE垂直电泳(10％),银染,脱色后扫描图像进行计算机分析处理。结果 2-DE图像显示鲫鱼和鲢鱼总蛋白主要是中等分子量蛋白,呈弱酸性和弱碱性,其蛋白点既有相同点也有差异点。结论通过2-DE指纹图谱分析完全可以区分这两种不同的鱼类,对于差异性蛋白点可以给出明确的判定。

食品过敏原指纹图谱快速检测研究(二)——河虾总蛋白2-DE指纹图谱重现性分析

目的建立一种简捷、准确、快速检测食品过敏原的方法。分析河虾总蛋白2-DE(2-DimensionElectrophoresis)指纹图谱的重现性,确定食品过敏原指纹图谱快速检测的可行性。方法新鲜河虾,去头和虾皮,搅碎后丙酮去脂,PBS抽提总蛋白,冻干后为初提样品,试剂盒精提,双向电泳IEF选择11cm和13cm两种不同厂家、规格的非线性胶条(pH=3～10)溶胀上样,平衡后转移胶条在不同厂家、型号的电泳槽中进行第二向SDS-PAGE垂直电泳(10%),银染和考染后扫描图像进行计算机分析处理。结果2-DE谱图显示河虾总蛋白分布较广,其高丰度蛋白主要是一些大分子量酸性蛋白。不同电泳系统,选用不同规格的IPG胶条所得河虾总蛋白2-DE指纹谱图具有良好的重现性。银染灵敏度较高,更适合食品过敏原指纹图谱的快速检测。结论食品过敏原总蛋白2-DE指纹图谱具有良好的重现性和稳定性,可以用于食品过敏原的快速检测。

纳米铜对大鼠肝脏毒性的蛋白质组2-DE图谱分析

为获取纳米铜对大鼠肝脏毒性的蛋白质组表达图谱,试验通过构建大鼠纳米铜中毒模型,采用双向凝胶电泳技术获取了大鼠纳米铜中毒组和对照组肝脏的蛋白质2-DE图谱,结合PDQuest 8.0软件分析发现200mg/kg纳米铜组大鼠肝脏2-DE图谱中有27个蛋白质斑点表达上调,16个蛋白质斑点表达下调,共有43个差异蛋白质点。试验利用蛋白质组学技术研究大鼠纳米铜肝脏蛋白质组学,为在蛋白质水平阐明纳米铜的毒性作用机制奠定基础。

桃树枝条皮层响应低温的特异蛋白质2-DE分析

低温是限制桃树生长、发育、繁殖以及地理分布的一个重要环境因子。明确桃响应低温胁迫的分子调控机制有可能为培育和筛选出相对抗寒的桃品系提供研究基础。以抗寒性较强的秋燕桃为试材,将一年生休眠枝条置于-5(CK),-15,-25℃低温处理48 h,应用双向电泳技术(Two-dimensional electrophoresis,2-DE)测定枝条皮层蛋白质表达变化情况。结果显示:通过质谱鉴定发现,有150个蛋白质点的表达丰度在低温胁迫后发生明显变化,丰度显著上调的有97个,丰度显著下调的有53个,通过蛋白质组数据检索成功地鉴定了其中的20个蛋白,发现这些蛋白质主要参与氨基糖和核苷酸糖代谢、蔗糖和淀粉代谢、氨基酸代谢、MAPK信号通路、苯丙氨酸代谢和DNA的复制等代谢过程。利用RT-PCR验证了Alpha淀粉酶(M5VVU6)、叶绿素a/b结合蛋白(M5WUQ0)和环氧化物水解酶(D8L7V9)蛋白编码的基因,随着低温胁迫的增加而上调表达。研究结果暗示了这些代谢途径和3个特异蛋白可能在桃的抗寒机制中起重要作用。

2-DE、CDFI、PW和CDPI诊断原发性肝癌

目的 :观察分析CDFI和CDPI对HCC血供的特点以及PW探测肿瘤血流动力学改变。方法 :对 1 39例HCC的 1 94个瘤体进行CDFI和CDPI观察 ,应用PW对每例最大瘤体 6种血流参数进行控测 ,对V1 、RI进行分析。结果 :CDFI对肿瘤血流显示率为 94.3 % ;CDPI为 97.4 % ;PW检出搏动性血流频谱为 93 .5 % ,Vmax为 1 4 5cm·s- 1 ,最小为 1 2cm·s- 1 (78.3± 8.4) ;最大RI0 .83 ,最小 0 .2 3(0 .61± 0 .1 3) ,其中RI>7.0占 71 .5 % ,搏动性与持续性水纹状血流频谱同时检出率为 48.2 %。结论 :①对HCC瘤体观察所获血流信息CDPI较CDFI敏感 ,PW探及搏动性血流频谱的检出具有确诊意义 ;②瘤体的血供以动脉为主 ,部分为动脉与静脉双重血供 ;③血流动力学改变绝大多数为高速高阻型 ,亦有低速低阻型。

大鼠侧脑室注射瘦素对卵巢摘除给予雌激素子宫腔液2-DE图谱分析

瘦素(leptin)通过动物下丘脑-垂体轴对其生殖活动予以调节,但瘦素通过下丘脑对子宫调节作用仍不清楚.本研究在大鼠侧脑室微量注射瘦素6 h后,采用双向凝胶电泳(2-DE)结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术分离、鉴定了卵巢摘除给予雌激素的子宫腔液蛋白质表达谱.我们获得了分辨率较高、重复性较好的2-DE图谱;质谱分析结合Swiss Prot蛋白数据库检索,共鉴定了24个差异表达的蛋白质与生理盐水注射(对照)比较,侧脑室微量注射瘦素引起22个蛋白质分子显著上调,2个显著下调.重要的是,在上调的蛋白质分子中包括转铁蛋白、基质金属蛋白酶7、膜联蛋白A1、补体B因子、磷酸甘油酸酯变位酶1、烯醇酶、冠蛋白-1A等15个蛋白质分子,下调的2个蛋白质分子是补体C3、溶解物载体家族4成员3.这些蛋白质分子涉及细胞分化、细胞迁移、细胞凋亡,以及炎症反应等功能.实验结果提示,瘦素可能通过下丘脑-垂体轴参与免疫调节、雌性生殖及炎症反应等,从而对子宫发挥调节作用.本研究将为加深对瘦素调节子宫作用的认识,并为深入研究女性生殖系统疾病提供新的启示.

卵泡液蛋白质组学2-DE体系的构建与应用

卵泡液是在卵泡形成过程中生成的,作为卵母细胞生长和分化的培养基,直接或间接影响卵母细胞的生育力和发育潜能,其成分非常复杂。本研究通过调整,优化2-DE技术条件,建立了相对稳定的卵泡液蛋白质2-DE技术,获得了卵泡液蛋白质组表达图谱,并用PDQuest软件进行了图像分析,用MALDI-TOF MS鉴定了9个蛋白点,其中有四种为新鉴定的在卵泡液中表达的蛋白质。结果表明,该体系稳定性、重复性好,为进一步开展卵泡液蛋白质组学的相关研究奠定了基础。

蛋白质样本制备及IEF时样本上样对乳腺癌蛋白质2-DE分离结果的影响

目的通过对蛋白质样本制备及IEF蛋白质上样时几个重要环节进行探讨，为乳腺癌组织蛋白质样本2-DE分离结果优化提供重要的实验与理论的依据。方法通过Bio-Rad公司提供的试剂盒对乳腺癌组织进行总蛋白提取、蛋白质纯化、蛋白质定量，并分别对处理前后的乳腺癌蛋白质样本进行SDS-PAGE与2-DE分离。结果乳腺癌组织蛋白质的等电点主要集中在p15～8范围内，SDS-PAGE、蛋白质样本纯化与定量等措施及适当的IEF上样体积与上样量可获得良好的2-DE蛋白质分离结果。结论样本制备是2-DE蛋白质分离的关键，准确的取材、蛋白质样本的SDS-PAGE质量监测、适量的样本上样体积与上样量、适当的pH值范围的IPG胶条的选择以及采用蛋白质纯化试剂盒对蛋白质样本进行纯化与浓缩是整个实验成功的保证。

5-苯基-[1,4]硫氮杂卓并[2,3,4-de]菲啶-7(9H)-酮的合成研究

以2-甲硫基苯胺为原料,通过酰化、碘环化以及分子内氧化偶联反应,合成了5-苯基-[1,4]硫氮杂卓并[2,3,4-de]菲啶-7(9H)-酮(4)。在最佳的反应条件下,化合物4总收率为48.1%。中间产物及目标产物的结构经由IR、NMR和MS得以确证。

基于改进NSGA-2-DE算法的综合能源系统运行优化

针对综合能源系统污染物排放系数高、能源利用率低的问题,建立了一种含多种蓄能装置的冷热电联供型综合能源系统运行优化模型.以系统运行成本和环境成本最小为目标,基于改进NSGA-2-DE算法进行优化求解,得到系统运行方案的Pareto最优解集,并通过TOPSIS法得到最佳运行方案.以实际综合能源系统为例进行算例分析,结果表明:所提方法与传统的供能系统相比具有节能环保的优点,与传统算法相比计算时间缩短了45.56 s、运行成本和环境成本分别下降了5.2%和18.7%.

2-DE、CDFI、CDPI和PW对移植肾的动态观察

目的 探讨4种方法对移植肾动态观察的价值。方法 对移植肾应用4种方法联合观察，对其所获资料，综合分析，明确诊断。结果 （1）18例19次肾移植术后发生BARl例，AR4例，HAR和AR手术切除移植肾各1例，病理诊断分别符合HAR和AR。移植肾无功能3例；（2）目前存活15～56个月17例（94．4％），死亡1例（5．6％）；（3）并发症主要有移植肾自发性破裂，消化道出血，肾周积液，肾静脉血栓，输尿管扩张、肾盂积水。结论 （1）移植肾术后早期超声检查多呈弥漫性病变样改变，此后正常者逐渐代偿性增大，失功者逐渐缩小，血供明显减少；（2）AR主要显示为移植肾体积增大，实质增厚，锥体增大，肾窦变小，肾内血管变细，血流灌注减少，高流速高阻力，RI〉0．8；（3）超声检查安全无创，简便快捷，可重复，获取信息量多，进行动态观察，综合分析，为诊治、评估疗效及预后提供客观依据。

两种花吊丝竹叶片蛋白提取方法的2-DE比较

以2年生花吊丝竹的扦插苗为研究材料,对2种方法(TCA/酚提结合法和PEG法)提取的蛋白质的2-DE差异进行研究.结果表明:PEG法的5个组分的条带差异明显,全蛋白得到了有效分离,在F3中富集到了2条高丰度蛋白带;2种方法的2-DE图谱的均一性分析发现,PEG法中F3富集了高丰度蛋白,提高了2-DE中蛋白质的检测率和分辨率,PEG法中F1-F5共检测的蛋白总数超过了1700个,但是相邻组存在一定的重叠率,而TCA丙酮/酚提结合法只检测到约571个蛋白点,5个组与NF平均有439个蛋白点匹配,达到77.9%以上;质谱鉴定了5种差异蛋白,生物信息学分析发现这5种蛋白是糖酵解、糖异生和ATP合成的重要辅酶.2种方法的比较发现,PEG法能够将花吊丝竹叶片全蛋白中高丰度蛋白单一富集在16%的组分中,从而显著提高了2-DE的分辨率,再通过质谱技术能够检测到更多的影响生物体生长发育的低丰度蛋白,所以PEG法是一种切实可行的且较为理想的蛋白质提取方法.

柿种质资源果实CO_(2)脱涩特性评价

研究常温条件下CO_(2)处理对120份柿果实单宁含量、硬度、可溶性固形物的影响,探究CO_(2)脱涩后柿果实品质的变化。结果表明,CO_(2)处理可显著降低柿果实中的单宁含量,根据脱涩与否可将120份种质资源分为2大类(未脱涩种质和脱涩种质)。未脱涩种质47份(39.16%),脱涩种质73份(60.84%)。未脱涩种质可分为2类:返涩种质(‘朱罐罐’‘都江堰干柿’等)占总资源的3.33%和无法脱涩种质(‘临潼挂干柿’‘从化柿’等)占总资源的35.83%,其中返涩现象是CO_(2)脱涩处理中首次被发现。脱涩种质可分为2类:易脱涩种质(‘荥阳水柿’‘蜜蜜罐’等)和难脱涩种质(‘小广扁柿’‘什样柿’等),其中易脱涩种质35份,难脱涩种质38份,分别占总脱涩种质的47.93%和52.07%。以上结果表明大部分柿种可以通过CO_(2)处理完成脱涩。通过单宁含量、硬度变化以及可溶固形物含量变化分析,发现18个种质包括‘上虞方柿’‘兰田南王水花柿’‘么心柿’‘西畴水柿’‘柏东-01’‘松阳扁柿’‘垣曲八月红’‘杭州牛心柿’‘小红柿’‘永济木柿’‘王后柿’‘沙谷1号’‘堂上蜂屋’‘秋蒸饼’‘乾县木娃柿’‘小合柿’‘照天红’‘临潼鸡心黄’在脱涩过程中硬度以及可溶性固形物含量下降不显著,并且能够很好地保持柿果实的商品性,有利于后续的贮藏销售。

联用2-DE和MALDI-TOF-MS技术筛查胃癌组织和血清中的差异蛋白质

目的 分别建立肠型、弥漫型胃癌组织和血清双向凝胶电泳图谱,鉴定差异表达蛋白,从中发现有意义的胃癌肿瘤相关标志物.方法 采用双向凝胶电泳（two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis,2-DE）分离组织和血清总蛋白,经硝酸银染色,分析选取有表达差异的蛋白质点,通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS）鉴定差异蛋白.结果 获得重复性和分辨率较好的胃癌组织和血清双向凝胶电泳图谱,经MALDI-TOF-MS鉴定得到20种蛋白,在7例（58.3%）肠型胃癌组织中均有硒结合蛋白1（SBP1）表达,KIAA基因家族蛋白在弥漫型胃癌组织和血清中均有表达.结论 建立了弥漫型肠型胃癌组织和血清双向凝胶电泳图谱,获得了差异蛋白质点,为寻找胃癌的特异蛋白质作为胃癌肿瘤标志物奠定了基础.

基于GPR-DE模型的CO_(2)-原油体系最小混相压力研究

在对中外35个CO_(2)驱油藏注入气体组分、油藏温度、原油组分、注入气体临界温度和最小混相压力进行数据统计和处理的基础上,结合高斯过程回归(GPR)与差分进化算法(DE),建立了预测CO_(2)-原油体系最小混相压力的新模型——GPR-DE模型。利用统计误差和图形误差评价GPR-DE模型的精确度,利用实验数据和敏感性分析对模型结果进行了验证,并与现有模型的预测结果进行对比。结果表明,GPR-DE模型与其他模型相比,精确度更高、应用范围更广,平均绝对相对误差仅为2.060%,标准差仅为0.0532。GPR-DE模型不仅可以预测CO_(2)-原油体系最小混相压力,还可以预测其他气体与原油体系最小混相压力。

从等离子体物理中提出的广义Korteweg-de Vries方程解的L^2一致稳定性(英文)

本文研究由等离子体物理提出的广义ＫｄＶ方程的解的Ｌ２一致稳定性，讨论了这种方程的初值问题．首先建立了几个与通常能量估计不同的整体估计，随后证明了解的Ｌ２一致稳定性．

聚2,5-呋喃二甲酸乙二醇酯/纳米二氧化钛/硅藻土复合材料的制备和表征

以2,5-呋喃二甲酸二甲酯(DMFD)、乙二醇(EG)为原料,原位添加扩链剂均苯四甲酸二酐(PMDA)、纳米二氧化钛(TiO_(2))、硅藻土(DE),以钛酸四丁酯为催化剂,采用酯交换-熔融缩聚法制备聚2,5-呋喃二甲酸乙二醇酯(PEF)/TiO_(2)/DE复合材料。通过核磁共振波谱仪(NMR)、傅里叶变换衰减全反射红外光谱仪(ATR-FTIR)、X射线衍射仪(XRD)和热重分析仪(TGA)等技术手段对其结构、热学性能、力学性能、气体渗透性能及紫外屏蔽性能进行表征。结果表明,PEF/TiO_(2)/DE复合材料被成功制备,且TiO_(2)及DE均为物理掺杂。DE粒子在PEF/TiO_(2)/DE复合材料内部分散良好。所有聚酯粉末为无定形聚集态结构。与PEF相比,PEF/TiO_(2)/DE复合材料的5%质量损失温度(Td,5%)、分解速率最快温度(Tdmax)分别提升12.1℃和8.4℃。PEF/TiO_(2)/DE复合材料的拉伸模量及抗冲击强度最高分别达到2657 MPa和3.2×10^(4)J/m^(2)。纳米TiO_(2)和DE的引入调控了PEF/TiO_(2)/DE复合材料对CO_(2)、O_(2)的渗透性,CO_(2)屏障改善系数(BIF_(CO_(2)))由PEF/TiO_(2)的3.02变为1.37~4.64,O_(2)屏障改善系数(BIFO_(2))由PEF/TiO_(2)的1.36变为0.7~2.07;此外,纳米TiO_(2)的加入赋予PEF良好的紫外屏蔽性能:PEF/TiO_(2)复合材料的紫外屏蔽率由PEF的45.38%提高至83.85%,提高了85%,PEF/TiO_(2)/DE复合材料的紫外屏蔽性能均大于84%。