TFAP2A对肾小球硬化相关基因ADCK4转录调控机制的研究

目的探索细胞中TFAP2A对局灶节段性肾小球硬化(FSGS)相关基因含aarF结构域的激酶4(ADCK4)的转录调控机制及TFAP2A与ADCK4是否存在特定的结合区域。方法生物信息学分析肾小球硬化基因火山图,ADCK4及TFAP2A表达水平的关系。JASPAR数据库预测ADCK4基因转录起始位点-464 bp/+206 bp区域包含TFAP2A转录因子结合位点;TFAP2A siRNA浓度分别为5、10、15µmol/L,TFAP2A过表达质粒质量浓度分别为50、100、300µg/L,通过双萤光素酶报告基因实验验证TFAP2A对ADCK4基因启动子水平的调控作用。TFAP2A siRNA及TFAP2A过表达质粒转染细胞,实时荧光定量PCR检测TFAP2A、ADCK4 mRNA表达,蛋白免疫印迹实验检测TFAP2A、ADCK4蛋白表达。染色质免疫沉淀试验验证TFAP2A与ADCK4启动子的特定区域结合。结果生物信息学分析显示FSGS肾组织中RNA-Seq RNA表达上调的基因273个,表达下调的基因219个;ADCK4与TFAP2A表达水平呈正相关(P<0.01)。双萤光素酶报告基因实验证明TFAP2A siRNA浓度为10、15µmol/L的ADCK4启动子相对萤光素酶活性增强,TFAP2A过表达质粒质量浓度为100、300µg/L的ADCK4启动子萤光素酶活性降低(P<0.05)。与对照组相比,实验组ADCK4 mRNA和蛋白表达水平升高;过表达实验中,与对照组比较,实验组ADCK4 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。染色质免疫沉淀试验发现TFAP2A能与ADCK4启动子的特定区域结合。结论转录因子TFAP2A负向调控ADCK4基因表达,增加了调控足细胞重要基因的转录因子成员。

Rapid Convergence of a New Wave Iterative Algorithm Used to Model a Patch Structure

The wave iterative method is a numerical method used in the electromagnetic modeling of high frequency electronic circuits. The object of the authors＇ study is to improve the convergence speed of this method by adding a new algorithm based on filtering techniques. This method requires a maximum number of iterations, noted Nmax, to achieve the convergence to the optimal value. This number wilt be reduced in order to reduce the computing time. The remaining iterations until Nmax will be calculated by the new algorithm which ensures a rapid convergence to the optimal result.

辅酶Q相关性肾病综合征4例报告并文献复习

目的了解儿童辅酶Q相关性肾病综合征的临床特征,提高对该疾病的认识。方法报告4例辅酶Q相关性肾病综合征病儿的临床资料;在PubMed数据库检索相关病例进行文献复习,总结其临床表现、病理特点、基因突变及药物治疗反应等。结果本文4例病儿均为男性,发病年龄10个月~10岁;1例表现为肾病综合征样蛋白尿,余3例均为糖皮质激素(激素)耐药型肾病综合征。基因检测显示2例为ADCK4基因突变,另2例为COQ2基因突变。3例病儿予辅酶Q10治疗后随访,尿蛋白均减少;另1例未予辅酶Q10治疗,病情进展迅速,最终死亡。PubMed数据库检索出55例ADCK4基因突变及25例COQ2基因突变相关性肾病综合征病儿,分析显示辅酶Q相关性肾病综合征病儿临床多表现为激素耐药型肾病综合征,肾脏病理活检主要为局灶性节段性肾小球硬化,早期口服辅酶Q10治疗可以减轻蛋白尿。结论辅酶Q相关性肾病综合征发病早,表现为肾病综合征或肾病样蛋白尿,早期应用辅酶Q10治疗有一定的效果;ADCK4基因c.826G>C和c.1035+8C>A复合杂合突变、COQ2基因c.518G>A和c.912+1(IVS5)de1G杂合突变在激素耐药型肾病综合征中均为首次报道。

ADCK4相关肾小球病8例分析

目的分析8例含aarF域激酶4（aarF domain containing kinase 4，ADCK4）相关肾小球病患儿临床特征及基因突变的特点，以提高对该疾病的认识。方法应用二代测序技术对69例表现为激素耐药肾病综合征（steroid resistant nephritic syndrome，SRNS）的原发性肾病综合征患儿或原因不明的持续性蛋白尿患儿进行肾脏疾病相关单基因的基因测序，并进行相关的生物信息学分析，用Sanger法对有意义的致病位点进行验证，并对其父母也做相关位点的验证；整理并分析ADCK4基因突变患儿的临床资料（起病年龄、临床表现、肾脏病理等）。结果69例患儿中有8例携带ADCK4基因突变，其中6例纯合突变（3例为c．748G〉C纯合突变，3例为c．737G〉A纯合突变），2例复合杂合突变（1例为c．748G〉C和c．737G〉A复合杂合突变，1例为c．551A〉G和c．737G〉A复合杂合突变），这3个突变位点均为未见相关疾病报道的错义突变，经PolyPhen2、SIFT和Mutation Taster预测均为致病性突变，所编码的氨基酸均较为保守；8例患儿平均起病年龄6岁7个月（2岁至11岁8个月），其中4例表现为SRNS，4例表现为蛋白尿，均无肾外症状，肾脏病理以局灶性节段性肾小球硬化（FSGS）为主，3例患儿在起病时即已进入终末期肾病（ESRD），l例于起病5年后进入ESRD，1例起病2年后进入ESRD，7例患儿给予过免疫抑制治疗，其中6例均无明显效果，1例对激素和他克莫司获得部分疗效，目前4例患儿行腹膜透析，1例于起病7个月后肾移植，基因诊断明确后，均予以大剂量辅酶Q10口服治疗，部分患儿获得一定疗效。结论ADCK4基因缺陷在表现为SRNS的原发性肾病综合征患儿和不明原因持续蛋白尿的患儿中并不少见，其起病年龄相对较大，肾外表型较少，病理上多表现为FSGS，部分患儿起病隐匿，仅有蛋白尿，临床不易早期发现。激素及免疫抑制剂对患儿的治疗效果较差，辅酶Q10补充治疗对于部分患儿有一定效果。新发现的3个ADCK4基因的错义突变丰富了ADCK4致病基因突变谱系，且其中C0748G〉C和c．737G〉A或为中国汉族人群的致病热点突变。