三相法提取猪肝酯酶及其在制备D -7-ACA中的应用

酯酶广泛存在于动物、植物和微生物中,具有作用范围广、底物特异性高等特点。该酶能够催化许多含有酯、酰胺、硫酯或乙酰基的化合物的水解与合成,在生物催化领域具有重要的用途。对来源于猪肝中的酯酶采用三相分离的方法进行了提取,并利用猪肝酯酶的水解特性,研究了其催化7-氨基头孢烷酸(7-ACA)脱乙酰基制备去乙酰基-7-氨基头孢烷酸(D-7-ACA)的过程。主要研究结果:确立了三相法分离提取猪肝酯酶的方法,考察了有机溶剂种类、有机溶剂用量、硫酸铵浓度以及体系的pH和提取温度等条件对三相法分离提取猪肝酯酶的影响。实验结果表明在硫酸铵质量分数为45%、异丁醇与水相之比为1∶1、pH7.0、温度为30℃的条件下,酶活回收率为54.84%,纯化倍数为6.32倍。以猪肝酯酶为催化剂,研究了猪肝酯酶催化7-ACA脱乙酰基制备D-7-ACA,在pH7.5、温度35℃、底物浓度2%、酶添加量30 U/mL的反应条件下,7-ACA转化率达到94.33%。

巴西橡胶树ACA/ECA基因家族鉴定及分析

Ca^(2+)是植物细胞的第二信使,Ca^(2+)-ATPase(ACA/ECA)作为Ca^(2+)运输的重要蛋白,在保证细胞内钙离子的平衡和植物非生物胁迫方面发挥着至关重要的作用。为了研究巴西橡胶树中Ca^(2+)-ATPase(ACA/ECA)的生物学功能,以模式植物拟南芥的ACA/ECA蛋白序列为探针,从橡胶树基因组中鉴定得到45个ACA/ECA基因家族成员,其中ACA成员38个,ECA成员7个。利用Expasy、Plant-mPLoc等工具对45个成员的理化性质、基因结构、染色体定位、系统进化和表达进行全面分析。理化性质分析表明:各成员编码蛋白的氨基酸数目为86~1142个,氨基酸分子量在10048.04~125412.75 Da之间,蛋白产物多定位于细胞质膜,有少量成员定位于内质网、叶绿体、液泡和细胞核。在进化方面,ACA/ECA家族成员明显聚于ACA和ECA两个分枝,2个分支中橡胶树始终与木薯紧靠,表明在系统进化过程中橡胶树与木薯存在较近的亲缘关系。染色体定位结果显示:ACA/ECA家族的45个成员不均匀地分布在橡胶树的14条染色体和1个contig上,其中2号和9号染色体上成员分布最多,为11个。表达分析显示:部分成员在不同组织中的表达存在显著差异,HbACA31在叶片中表达丰度最高,HbACA36在胶乳中表达丰度最高,并且HbACA36经乙烯利刺激处理后在胶乳中的表达明显上调。另外,本研究还分析了割胶对ACA/ECA家族成员基因表达的影响,发现HbACA36在PR107和热研8-79两个橡胶树品种割胶过程中均处于较高的表达水平,并且在高产品种热研8-79开割过程中明显上调表达,推测HbACA36参与橡胶树产胶排胶调控,并在其中起重要作用。本研究结果首次揭示了橡胶树ACA/ECA家族成员的理化性质和表达模式,为进一步研究ACA/ECA基因在巴西橡胶树中的生物学功能,特别是橡胶树产胶调控方面的功能奠定基础。

中西医结合治疗对原因不明复发性流产血清同型半胱氨酸(Hcy)、抗心磷脂抗体(ACA)水平的影响

目的：探讨分析中西医结合治疗对原因不明复发性流产患者血清同型半胱氨酸（Hcy）、抗心磷脂抗体（ACA）水平的影响。方法：选择医院收治的原因不明复发性流产患者103例，将其随机分为观察组53例、对照组50例，对照组采取传统保胎方案以及肝素钙治疗，观察组在对照组基础上给予固肾安胎方治疗，比较两组临床疗效、Th1／Th2细胞因子、血清Hcy以及ACA表达变化情况。结果：观察组治疗总有效率显著高于对照组（P〈0．05）；两组患者治疗前IL-12、IL10水平无显著差异（P〉0．05），治疗后两组患者IL-12水平显著降低（P〈0．05），而IL-10水平显著升高（P〈0．05），且观察组变化程度显著优于对照组（P〈0．05）；治疗前两组患者血清Hcy水平无显著差异（P〉0．05），治疗后两组患者血清Hcy水平显著降低（P〈0．05），且治疗后观察组血清Hcy水平显著低于对照组（P〈0．05）；治疗前两组患者ACA阳性率无显著差异（P〉0．05），治疗后观察组患者ACA阳性率显著降低（P〈0．05），而对照组与治疗前比较降低程度无显著差异（P〉0．05），治疗后观察组患者ACA阳性率显著低于对照组（P〈0．05）。结论：中西医结合治疗原因不明复发性流产具有着显著的临床疗效，可有效调节机体Th1、Th2细胞因子平衡，并降低母体血清Hcy水平以及ACA表达阳性率，从而有效促进成功妊娠。

ACA基因启动子的克隆及功能初探

根据已知的ACA基因的 5 '端序列设计三个基因特异的反向引物 (GSP_1,GSP_2 ,GSP_3)分别与 11个简并引物 (AD1_AD11)配对 ,进行热不对称嵌套PCR(ThermalasymmetricinterlacedPCR ,TAIL_PCR)扩增 ,获得了ACA基因起始密码子上游约70 0bp的片段。为检测其表达特性 ,构建了该片段与Gus嵌合基因的表达载体pBpAG ,在真空条件下通过农杆菌介导 ,转化了植物的叶、果实、种子三种不同组织 ,Gus瞬时表达染色结果显示 ,该DNA片段具有种子特异的启动子活性。对该启动子的一些顺式元件进行了讨论。

ACA离子取代凝胶多价离子置换性能研究

考察了海藻酸 -壳聚糖 -海藻酸 ( ACA)离子取代凝胶对几种二价金属离子的置换行为。实验结果表明 ,海藻酸钙凝胶和海藻酸 -壳聚糖 -海藻酸凝胶微球 ( ACA- Ca)也能吸附 Pb2 +、Cu2 +和 Al3+,其中 Pb2 +、Cu2 +和 Al3+取代了凝胶中的 Ca2 +,并且其置换速率要大大快于离子交换树脂 ,而其平衡取代量与 ACA微胶囊相当 ,因此 ,海藻酸钙凝胶也能作为离子吸附剂应用于吸附某些重金属离子。此外 ,Pb2 +也能置换海藻酸锌中的 Zn2 +,Ca2 +能置换海藻酸亚铁中的 Fe2 +。Pb2 +对海藻酸钙凝胶中的 Ca2 +的置换不仅包括Pb2 +对 Ca2 +的置换 ,还存在对 Pb2

AsAb、AcA与反复自然流产关系的探讨

目的 探讨抗精子抗体 (AsAb) ,抗心磷脂抗体 (AcA)与反复自然流产的关系。方法 采用ELISA法测定反复自然流产病人血清中AsAb、AcA的含量。结果 流产组血清AsAb、AcA明显高于对照组 (P <0 .0 1) ,出现显著性差异。结论 抗精子抗体和抗心磷脂抗体与反复自然流产有着密切的关系。

GL-7-ACA酰化酶基因克隆及在大肠杆菌中的表达

本文报道了利用BamHI酶解的载体pBR322 DNA与Sau3A部分酶解的假单胞菌Ps.130染色体DNA片段构建重组质粒,并用^(32)P标记的寡核苷酸探针从3205个含有外源片段的重组质粒中检测得到7株阳性克隆株。进一步经^(125)I一标记的抗体/抗原放射免疫反应、GL-7-ACA酰化酶活力测定以及酶反应产物的纸谱色层分析,由上述7株阳性株中鉴定出3株能在大肠杆菌中表达酰化酶活力的基因克隆株。对该3株菌的重组质粒——pMR 5、pMR 6和pMR7 DNA的初步凝胶电泳分析表明,pMR 5和pMR 7质粒中插入片段的分子量为6.8kb,质粒pMR 6则带有5.7kb的外源片段。实验还比较了重级质粒pMR5在8株不同的大肠杆菌宿主菌中,GL-7-ACA酰化酶的表达水平。

产GL-7-ACA酰化酶重组大肠杆菌的构建和表达

为了实现GL 7 ACA酰化酶在大肠杆菌中的成功表达 ,将GL 7 ACA酰化酶基因用PCR的方法去除其信号肽序列 ,并将其连接到质粒pET 2 8a ,通过筛选得到了表达GL 7 ACA酰化酶的重组菌BL2 1 (DE3) /pET ACY。分别考察了诱导温度、菌浓 (OD60 0 )、诱导剂IPTG的用量等因素对重组菌表达GL 7 ACA酰化酶的影响。在优化条件下 ,GL 7 ACA酰化酶酶活可达 2 66U/L。GL 7 ACA酰化酶经一步DEAE Sepharose纯化即可达到 80 %的纯度 ,酶活收率为 5 0 %。

脑梗死患者血清中ACA、hs-CRP和Hcy含量变化的相关性探讨

目的:通过对脑梗死患者血清中抗心磷脂抗体(ACA)、高敏C-反应蛋白(hs-CRP)、同型半胱氨酸(Hcy)含量检测,探讨脑梗死的发生机制及与其相互关系。方法:分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、放射免疫分析(RIA)、时间偏振荧光化学发光分析对210例脑梗死患者和30例正常对照者血清中的ACA、hs-CRP、Hcy含量进行检测,比较脑梗死组与正常对照组间各指标的差异性,并对脑梗死患者三项指标之间(ACA、hs-CRP、Hcy)进行相关性检验。结果:脑梗死患者组血清中ACA、hs-CRP、Hcy含量与正常对照组比较有显著性差异(P<0.001);脑梗死患者组血清hs-CRP与Hcy水平比较呈正相关(r1=0.714);ACA与hs-CRP和Hcy比较呈正相关(r2=0.893、r3=0.597)。结论:脑梗死患者血清ACA、hs-CRP、Hcy含量变化与其发生、发展密切相关,是发生脑梗死独立的危险因素,三项联检更有利于脑梗死的早期诊断、治疗和预后判断。

洞室围岩变形预测的ACA-LSSVM模型及工程应用研究

现场监测获得的围岩变形信息,从宏观上反映了洞室的力学性态变化。为克服人工神经网络方法的过学习问题,提出了一种新的洞室围岩变形预测模型——进化支持向量机模型。该模型利用蚁群算法来搜索支持向量机的惩罚因子和核函数参数,避免了人为选择参数的盲目性,提高了支持向量机的推广预测能力。应用该非线性智能预测方法,滚动预测围岩变形量,能及时发现异常情况,从而调整和优化施工步序,维护洞室的稳定性。将该方法用于锦屏一级水电站工程洞室变形预测,结果表明,该方法具有科学可靠、实时性的优点,具有广泛的应用前景。

7-ACA清洁生产的潜力研究

7-ACA是头孢菌素关键性中间体。近年来,头袍菌素类抗生素使用越来越多,临床应用证明它是一类抗菌谱广、抗菌活性强,疗效高和毒性低的抗生素。然而,中国在7-ACA生产过程中普遍面临着污染重、废弃物成分复杂、治理难度大的发展"瓶颈"。本文从清洁生产源头消减的角度,分析了7-ACA清洁生产的潜力与机会,并在国内7-ACA生产现状下,提出了化学法清洁生产方案的建议。

β-葡萄糖苷酶ACA微胶囊固定化实验研究

对壳聚糖为壁材的共价交联固定、海藻酸钠为壁材的包埋固定及壳聚糖和海藻酸钠共用的新型复合载体(ACA)固定的β-葡萄糖苷酶进行了对比研究,得出ACA微胶囊固定化的酶具有较好的催化活性、重复使用和低温贮藏性能。醋酸和戊二醛及CaCl2的浓度、壳聚糖和海藻酸钠用量、引发和交联时间对ACA微胶囊固定酶的形态和性能影响较大,葡萄糖转化率随醋酸与戊二醛和CaCl2浓度的增加、壳聚糖和海藻酸钠用量的增大、交联和引发时间的延长呈先增大后减小的变化趋势,并于不同特定值达到最大。

牛ACAS2基因的克隆、序列分析及染色体物理定位

以中国西门塔尔牛肝脏组织为材料,运用同源序列克隆技术并结合RT-PCR技术,对牛ACAS 2基因的部分cDNA进行了克隆与序列分析,应用SUN bRH 7000型辐射杂种板对分离的牛ACAS 2基因进行了染色体定位。结果显示,本研究所获得的长为1 535 bp的cDNA序列为牛ACAS 2基因的部分编码序列,该段序列与人(G enB ank登录号:NM-139274)和小鼠(G enB ank登录号:NM-019811)的ACAS 2基因mRNA序列的相似性分别为91%和88%;牛ACAS 2基因被定位于牛的13号染色体上,与该染色体上的标记D IK 4350的距离为1.51 cR。

GL-7-ACA酰化酶基因片段的酶谱分析及基因定位

本文报道了从假单胞菌130菌株(Pseudomonas sp.130)染色体上克隆得到的6.8kb的GL-7-ACA酰化酶基因片段的限制酶谱,基因定位以及在不同的大肠杆菌基因启动子控制下酰化酶基因的表达水平。结果表明,所克隆的片段上,不存在EcoR Ⅰ、Hind Ⅱ、Cla Ⅰ切点,分别具有一个Hpa Ⅰ、两个Xho Ⅰ、三个BamH Ⅰ以及四个Pst Ⅰ切点,同时初步确定了这些酶切位点之间的相对位置。经过一系列次级克隆研究,GL-7-ACA酰化酶基因已被定位在3.0kb的B_2-B_3-Hpa Ⅰ片段上。实验比较了以pACYC184、pDR540、pUC10等为载体的次级克隆株(分别为pMR9、pMR10和pMR11)在大肠杆菌中酰化酶基因的表达水平,测定数据表明tac启动子的启动活力比tet启动子强,即pMR10的产酶量比pMR9高一倍,而当tac启动子前再串接一个lac启动子时(pMR11),产酶水平并不进一步提高。本文还对假单胞菌基因在大肠杆菌中的表达进行了讨论。

基于AFSA-ACA自适应模糊滑模的采煤机滚筒液压调高控制

为研究采煤机滚筒在不同复杂工况下的位置跟踪控制,以液压机构的工作原理为基础,建立了滚筒液压调高机构的数学模型。基于自适应模糊微分积分滑模鲁棒性强的优点,提出了在鱼群-蚁群融合算法优化滑模控制器参数条件下的滚筒位置跟踪控制方案,并分析了滚筒在采用一般滑模控制器及自适应模糊微分积分滑模控制器下位置跟踪的特点。仿真结果表明:采用结合融合算法优化的自适应模糊微分积分滑模控制器的滚筒调高机构对内部参数摄动及外部时变干扰具有较好的鲁棒性,能够实现位置跟踪控制。

国产固定化GL-7-ACA酰化酶制备7-ACA的工艺优化

通过对国产固定化GL-7-ACA酰化酶和游离酶的表观米氏常数(Km)及最大反应速度(Vm)的测定.结果表明:固定化GL-7-ACA酰化酶的Km和Vm值分别为8.69 mm o l.L-1和76μm o l.g-1m i-n 1,均较游离酶高;在对酶促反应的关键参数底物质量浓度、转化温度、转化pH进行优化后,用固定化GL-7-ACA酰化酶在底物GL-7-ACA质量浓度30 g.L-1、转化温度25℃、转化pH 8.0的条件下转化GL-7-ACA制备7-ACA可连续操作150批以上,转化率和收率均达95%以上.

情报学学科结构的ABCA及ACA对比研究——以2000-2010年数据为例

以SCI&SSCI 2000-2010年间情报学的相关数据为样本,结合传统的ACA(作者共被引)方法,以ABCA(作者文献耦合分析)方法为研究视角,探析2000-2010情报学的学科结构,并进行ABCA与ACA的比较研究。研究探测到了情报学的几位具有较强研究活力以及广泛影响力的学者,如Thelwall,M、Leydesdorff,L、Cronin,B、White,HD、Meho,LI等。探寻到情报学的7个主要研究主题:科学计量学、网络资源管理与配置、信息检索、信息系统、知识管理、用户交互与服务、科学评价,其中科学计量学和网络资源管理与配置是2个主流研究主题;研究认为,各研究主题之间的融合还有待于进一步加强。在研究主题探测方面,ABCA是以当前活跃的作者的角度进行分析;ACA则是以对情报学产生持续影响的作者为角度。ABCA可以探寻到更多的研究主题,但ABCA与ACA探测到的主题内容没有太大出入。

基于ACA-BFA算法的PMSM自适应模糊滑模控制

为研究永磁同步电机(PMSM)在无速度传感器工况下的速度跟踪估计,以PMSM的工作原理为基础,建立内埋式PMSM的数学模型。基于自适应模糊微分积分滑模(AFDI-SMC)鲁棒性强的优点,提出了在蚁群-细菌觅食(ACA-BFA)融合算法优化滑模控制器参数条件下采用旋转高频电压注入法对电机转速进行估计的无速度传感器控制方案,并分析了电机在高低速运行时的特点。实验结果表明,采用ACA-BFA融合算法优化滑模控制器参数并结合高频电压注入法的自适应模糊滑模控制系统在加载高速(2 000 r/min)运行时的绝对误差为60 r/min,转速相对误差为3%,稳定运行时转子位置最大误差约为4°(电角度)合2°(机械角度);加载低速(50 r/min)运行时的绝对误差为8 r/min,转速相对误差为16%,稳定运行时转子位置最大误差约为5°(电角度)合2.5°(机械角度)。

磷酸铵镁沉淀法预处理7-ACA综合废水试验研究

采用磷酸铵镁（MAP）沉淀法对高氨氮7-ACA综合废水进行了预处理试验研究,以Na2HPO4和MgCl2.6H2O作为沉淀剂,探讨了初始反应pH值、n（Mg2＋）：n（PO43-）/：n（NH4＋）投配比及反应时间等因素对氨氮去除效果的影响。结合结晶物SEM分析,确定预处理的最佳工艺条件为：初始反应pH 9.0、n（Mg2＋）：n（PO43-）：n（NH4＋）投配比1.0：1.1：1和反应时间20 min。平行试验结果表明,在最佳工艺条件下,当进水氨氮浓度为1 020~1 190 mg/L时,处理后出水氨氮浓度为小于150.0 mg/L,氨氮去除率在85.0%以上,残磷量小于40.0 mg/L,为7-ACA综合废水的后续生化处理创造了有利条件。

基于八叉树建模和ACA的三维管路路径规划

传统的三维管路路径规划算法存在等分栅格建模时间长、占用存储空间大、蚁群算法搜索效率低等问题。为此,提出一种基于八叉树建模和改进蚁群算法的路径规划算法。采用八叉树模型进行环境建模,由动态启发信息指导生成初始解,使搜索路径的概率选择机制更合理,通过更新排列前w位和后h位的蚂蚁路径信息素,缩小算法的存储空间,避免搜索规则过度使用。仿真实验结果证明,该算法收敛快速,求解效率较高。