吴茱萸碱对H_(2)O_(2)诱导ARPE-19细胞的炎症反应、细胞凋亡和SIRT1表达的影响

目的 探究吴茱萸碱对H_(2)O_(2)刺激下人视网膜色素上皮细胞ARPE-19的炎症反应和细胞凋亡的影响,阐明去乙酰化酶1(SIRT1)在其中的作用和相关机制。方法 分别采用不同浓度的H_(2)O_(2)(0,25,50,100,200,400μmol/L)和不同浓度的吴茱萸碱(0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0μmol/L)处理ARPE-19细胞,CCK-8法筛选H_(2)O_(2)和吴茱萸碱的最佳作用浓度。使用H_(2)O_(2)(200μmol/L)与不同浓度的吴茱萸碱(2.5,5,10,20μmol/L)联合处理ARPE-19细胞,Western blot法检测细胞中SIRT1蛋白表达情况。按处理方式的不同将ARPE-19细胞分为二甲基亚砜处理的对照组、200μmol/L H_(2)O_(2)处理组(H_(2)O_(2)组)、200μmol/L H_(2)O_(2)与不同浓度吴茱萸碱处理组(H_(2)O_(2)+吴茱萸碱10μmol/L组、H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组)及100μmol/L的SIRT1抑制剂Sirtinol拮抗组(H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L+Sirtinol组),处理24 h后,ELISA法检测各组ARPE-19细胞上清液中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)水平,Annexin V-FITC/PI染色检测各组ARPE-19细胞的凋亡率,Western blot法检测各组ARPE-19细胞中核因子-κB p65(NF-κB p65)、环氧化酶-2(COX-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)、Caspase-3、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达情况。结果 200μmol/L的H_(2)O_(2)对ARPE-19细胞的生长抑制相对稳定。0,2.5,5.0,10.0,20.0μmol/L的吴茱萸碱对ARPE-19细胞活力无明显影响(P均>0.05),40μmol/L吴茱萸碱可明显降低ARPE-19细胞活力(P均<0.05)。H_(2)O_(2)组和H_(2)O_(2)+吴茱萸碱各组ARPE-19细胞中SIRT1蛋白相对表达量均明显低于对照组(P均<0.05);H_(2)O_(2)+吴茱萸碱5μmol/L组、H_(2)O_(2)+吴茱萸碱10μmol/L组和H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组中SIRT1蛋白相对表达量均明显高于H_(2)O_(2)组(P均<0.05),且H_(2)O_(2)+吴茱萸碱10μmol/L组和H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组升高更明显。与对照组比较,H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+吴茱萸碱10μmol/L组、H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组和H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L+Sirtinol组细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6水平和COX-2、NF-κB p65、Bax蛋白相对表达量及Cleaved Caspase-3/Caspase-3、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值均明显升高(P均<0.05), Bcl-2蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05);与H_(2)O_(2)组比较,H_(2)O_(2)+吴茱萸碱10μmol/L组、H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组中TNF-α、IL-1β、IL-6水平和COX-2、NF-κB p65、Bax蛋白相对表达量及Cleaved Caspase-3/Caspase-3、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值均明显降低(P均<0.05),Bcl-2蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05);H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L+Sirtinol组中TNF-α、IL-1β、IL-6水平和COX-2、NF-κB p65、Bax蛋白相对表达量及Cleaved Caspase-3/Caspase-3、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值均明显高于H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组(P均<0.05), Bcl-2蛋白相对表达量明显低于H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组(P<0.05),各指标与H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+吴茱萸碱10μmol/L组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 吴茱萸碱可在体外通过上调SIRT1表达来抑制NF-κB通路、线粒体介导的凋亡通路和PI3K/Akt通路,从而减轻H_(2)O_(2)刺激下ARPE-19细胞的炎症反应,减少细胞凋亡。

ARP协议仿真实验设计与实现

ARP协议是TCP/IP协议栈中重要的协议之一,掌握其工作原理对于理解局域网底层通信逻辑至关重要。文章不仅分析了同网段通信时ARP协议的工作原理,而且还分析了跨网段通信时ARP协议的工作原理,并给出了相关仿真实验过程。研究对于更好地理解和掌握ARP协议,解决在现实中遇到的网络问题具有实践指导意义。

红景天苷脂质体的构建及其对高糖诱导ARPE-19细胞氧化损伤的保护作用

目的 构建红景天苷脂质体(SAL-LIPS),对其进行评价,并研究SAL-LIPS在高糖(HG)环境下对人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞氧化损伤的保护作用。方法 采用乙醇注入法制备SAL-LIPS,通过透射电镜观察其形态,测定粒径、多分散系数(PDI)并考察制剂的体外释放及稳定性。HG诱导ARPE-19细胞建立氧化应激细胞模型,检测不同浓度的SAL-LIPS对损伤细胞活力的影响,并检测不同组别细胞ROS水平、MDA含量、血管内皮因子(VEGF)和缺血诱导因子(HIF-1α)的表达。结果 制备的SAL-LIPS呈圆球状,平均粒径为(112.1±2)nm,平均PDI为0.204±0.02,与红景天苷原料药相比具有缓释作用,稳定性较好。在50~100 μmol·L^(-1)内SAL-LIPS可以显著改善HG诱导的ARPE-19细胞的活力。与空白对照组比较,HG组显著升高ARPE-19细胞内ROS水平、MDA含量,同时增强了VEGF和HIF-1α的表达;与HG组ARPE-19细胞比较,HG+低浓度SAL-LIPS组和HG+高浓度SAL-LIPS组显著降低了细胞内ROS水平、MDA含量,同时减少了VEGF和HIF-1α的表达。结论 所构建的SAL-LIPS具有良好的缓释作用和稳定性,可以改善HG诱导ARPE-19细胞发生的氧化应激,发挥抗氧化作用。

基于PERK/ATF4/CHOP信号通路研究滋阴明目方含药血清对衣霉素诱导的ARPE-19细胞的作用机制

目的研究滋阴明目方含药血清对衣霉素诱导ARPE-19细胞的影响及其可能机制。方法构建细胞内质网应激损伤模型,将ARPE-19细胞分为空白组、模型组、空白血清组、滋阴明目方含药血清组、牛磺熊去氧胆酸组。对细胞进行形态观察,CCK-8检测细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测细胞蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)蛋白的表达。结果选用浓度50μmol/L衣霉素干预ARPE-19细胞造模。观察细胞形态发现,滋阴明目方含药血清组和牛磺熊去氧胆酸组ARPE-19细胞较模型组细胞数量增多,生长较均匀,漂浮的死亡ARPE-19细胞及碎片减少。与空白组相比,模型组和空白血清组的细胞存活率下降(P<0.01),凋亡率明显上升(P<0.01),PERK、ATF4、CHOP蛋白表达上调(P<0.01)。与模型组相比,滋阴明目方含药血清组细胞存活率上升(P<0.01),凋亡率明显下降(P<0.01),PERK、ATF4、CHOP蛋白表达下调(P<0.01)。结论滋阴明目方含药血清可以减少ARPE-19细胞内质网应激损伤模型的凋亡,其分子机制与调控PERK-ATF4-CHOP信号通路有关。

非接触共培养体系下抑制ARPE-19中CAMKⅡ表达对HUVECs迁移和侵袭及管腔形成的影响

目的:探讨非接触共培养体系下抑制人视网膜色素上皮细胞(ARPE)中Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CAMKⅡ)表达对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移、侵袭、管腔形成的影响。方法:将过表达CAMKⅡ-δ的ARPE-19样本进行RNA测序,应用生物信息学分析差异基因参与的功能。使用transwell小室构建ARPE-19和HUVECs非接触共培养体系,根据实验干预措施分为:空白组:仅接种未共培养的HUVECs,无ARPE-19细胞;对照组:ARPE-19和HUVECs细胞均使用完全培养基进行共培养;AIP组(CAMKⅡ抑制组):ARPE-19使用含有AIP(160 nmol/L)的完全培养基,HUVECs使用完全培养基,进行共培养。检测HUVECs迁移、侵袭和管腔形成能力的变化,并通过Western blotting检测CAMKⅡ/AMPK/mTOR/VEGFA蛋白表达水平。结果:生信分析发现差异基因参与细胞生长与死亡和细胞运动等生物学过程。划痕和transwell迁移实验均表明AIP组的HUVECs相对迁移率均明显低于对照组(均P<0.05)。而侵袭和小管形成实验表明,AIP组的相对侵袭率和相对管腔形成率较对照组无明显改变(均P>0.05)。Western blotting结果表明AIP组CAMKⅡ、P-mTOR、VEGFA蛋白表达较对照组均明显下调,而P-AMPK蛋白表达较明显上调(均P<0.05)。结论:在非接触共培养体系下抑制ARPE-19细胞中CAMKⅡ表达可以显著降低HUVECs迁移能力,但不能改变侵袭和管腔形成能力,这可能是通过AMPK/mTOR/VEGFA信号通路实现的。

ARP沥青混合料在国省干道车辙处治中的应用研究

本文依托某国省干道养护工程,对ARP外掺剂对沥青混合料性能影响进行了探究,并与常规的SBS改性沥青混合料进行对比。首先基于Sup25级配,对ARP沥青混合料和常规SBS沥青混合料进行了配合比设计,确定其级配和最佳油石比;然后对其常规路用性能(高温性能、低温性能、水稳定性)进行测试;最后铺筑了ARP沥青混合料试验路段,总结了其施工工艺。结果表明,ARP掺量为沥青混合料质量的0.45%;ARP沥青混合料的高温性能和水稳定性均优于改性沥青混合料Sup25,但前者的低温性能略低;ARP沥青混合料施工方便,各项施工指标均满足设计要求,且经过半年跟踪检测,实际路用性能较好;ARP沥青混合料Sup25的价格相较于SBS改性沥青混合料,每吨可节约400元,具有明显的经济性。研究成果可为ARP外掺剂的推广应用提供依据和基础。

局域网中ARP攻击防范研究

作为交换式局域网重要协议之一,地址解析协议(AddressResolutionProtocol,ARP)对局域网的正常运行具有十分重要的作用。ARP诞生之初,局域网并未得到广泛应用,ARP设置的运行机制在现有的局域网环境下存在安全隐患。基于ARP的原理,对ARP存在的典型安全漏洞进行了分析,并对局域网环境中通过利用ARP存在的漏洞进行局域网攻击的一般流程进行了介绍,提出了主机主动防御和网络安全设备防御两种典型防范方法。

GLS1通过激活Nrf2/HO-1轴抑制过氧化氢诱导的ARPE-19细胞氧化应激、自噬与凋亡

目的探究GLS1对过氧化氢诱导的ARPE-19细胞氧化应激、自噬与凋亡的影响及机制。方法ARPE-19细胞分为对照组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+Vector组、H_(2)O_(2)+GLS1组,对照组细胞不做任何处理,H_(2)O_(2)组细胞用200μmol/L H_(2)O_(2)诱导48h,H_(2)O_(2)+Vector组和H_(2)O_(2)+GLS1组细胞转染Vector和GLS1质粒后用200μmol/L H_(2)O_(2)诱导48 h,比色法测定各组细胞SOD、GSH和MDA浓度,透射电镜观察各组细胞自噬小体,流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,Western blot检测各组细胞Nrf2、HO-1、LC3-Ⅱ、p62的表达。结果与对照组比较,H_(2)O_(2)组ARPE-19细胞SOD、GSH表达显著下降,MDA显著增加,自噬小体数目显著增加,细胞凋亡显著增加,LC3-Ⅱ表达显著上调,P62、抗核因子红系2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、血红素氧合酶1(heme Oxygenase-1,HO-1)表达显著下调。与H_(2)O_(2)+Vector组比较,H_(2)O_(2)+GLS1组细胞SOD、GSH表达显著增加,MDA显著降低,自噬小体数目显著减少,细胞凋亡显著减少,LC3-Ⅱ表达显著下调,P62、Nrf2、HO-1表达显著上调。结论GLS1可抑制H_(2)O_(2)诱导的ARPE-19细胞氧化应激、自噬与凋亡,其机制为激活Nrf2/HO-1信号通路。

ARP协议分析及攻防技术研究

随着计算机网络技术的广泛应用,有很多在当时看来没有问题的协议随着科技信息的进步逐渐开始暴露出问题,其中最具代表性的就是ARP协议。ARP协议在设计之初,一方面为了通信的效率考量,另一方面也受限于当时硬件设备的算力,协议本身并没有考虑到安全因素。文章详细地对ARP协议的报文格式、工作原理及相关缺陷进行论述,模拟攻击者对ARP协议常见的攻击手段逐一进行测试,以网络攻击者的视角对ARP协议给出相应的防护意见,便于应对接下来网络安全将面临的挑战。

448 nm蓝光照射致ARPE-19细胞坏死性凋亡研究

长期超风险限值蓝光照射可能导致视网膜变性疾病,而视网膜色素上皮损伤是视网膜光损伤的关键来源。本研究探讨了448 nm蓝光对人视网膜色素上皮细胞的损伤作用及凋亡方式。25 mW/cm2蓝光照射ARPE-19细胞3、6、9、12 h,照后即刻采用钙黄绿素乙酰甲酯染色检测细胞活性,并在照后24 h采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测坏死性凋亡相关基因表达,同时采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测坏死性凋亡和DNA损伤标志蛋白表达。9 h和12 h照射组细胞形态发生显著变化,表现为细胞肿胀、间隙增大、漂浮细胞增多、细胞碎片增加;蓝光照射3~9 h后RIPK1、RIPK3 mRNA表达量较正常组出现明显升高,且在照射9 h时达到最大值;蓝光照射6~12 h后RIPK1、RIPK3、P-MLKL坏死性凋亡蛋白标志物的表达量随蓝光照射时间增加而明显升高,并在照射12 h时达到最高值;蓝光照射3~12 h后DNA损伤标志物γ-H2AX蛋白表达量明显升高,并在照射12 h时达到最高值。蓝光照射9 h坏死性凋亡相关基因表达量达到最大,照射12 h基因表达明显下降但坏死性凋亡相关蛋白表达量累积到最大,这提示25 mW/cm2蓝光照射9~12 h可诱导ARPE-19细胞发生坏死性凋亡,并表明DNA损伤程度与细胞坏死性凋亡发生可能存在关联。

α-硫辛酸对蓝光诱导损伤的ARPE-19细胞的保护作用

目的 研究α-硫辛酸(ALA)对蓝光诱导损伤的ARPE-19细胞的保护作用。方法 体外培养ARPE-19细胞,随机分为正常组(N组)、药物组(D组)、光照组(L组)、药物+光照组(D+L组)。倒置显微镜下观察ARPE-19细胞形态结构。CCK-8法检测各组ARPE-19细胞活性;流式细胞仪(Annexin V/PI双染色法)检测ARPE-19细胞凋亡率;倒置荧光显微镜检测ARPE-19细胞ROS水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测ARPE-19细胞核因子E2相关因子2(Nrf2)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)、NAD(P)H醌氧化还原酶1(NQO1)、血红素氧合酶-1(HO-1) mRNA表达水平;Western blot检测ARPE-19细胞天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Nrf2、NQO1蛋白表达水平。结果 N组及D组细胞均呈贴壁生长,分布均匀,形态清晰,细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05)。与N组相比,L组细胞皱缩、变小、变圆,失去正常形态,部分细胞不能贴壁生长,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,ROS水平升高(均为P<0.05);与L组相比,D+L组细胞形态改善,大部分细胞呈梭形贴壁生长,细胞轮廓较清晰,小部分细胞失去正常形态结构,细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,ROS水平降低(均为P<0.05)。RT-qPCR检测结果显示:与N组相比,L组细胞NQO-1、HO-1的mRNA相对表达量均升高(均为P<0.05),Nrf2、GST的mRNA相对表达量均升高,但差异均无统计学意义(均为P>0.05);与L组相比,D+L组细胞Nrf2、GST、NQO-1、HO-1的mRNA相对表达量均升高(均为P<0.05)。Western blot检测结果显示:与N组相比,L组细胞的Caspase-3、Nrf2蛋白相对表达量均升高(均为P<0.05);与L组相比,D+L组细胞的Caspase-3蛋白相对表达量降低(P<0.05),Nrf2、NQO-1蛋白相对表达量均升高(均为P<0.05)。结论 蓝光会导致ARPEA-19细胞产生氧化应激损伤并最终导致细胞凋亡,而ALA能够增强ARPE-19细胞对蓝光损伤的抗氧化保护作用。

基于Wireshark的数据包解析及ARP欺骗解决方案

随着计算机网络的飞速发展,网络安全问题日益突出。文章以Wireshark为平台,对客户端和服务器在进行网络通信过程中产生的数据包进行抓取,结合传输所使用的协议进行分析,了解各类数据包的结构组成、特点,针对数据包传输过程中存在的安全协议漏洞用两台测试机和一台攻击机模拟网络攻击过程,并对如何有效避免被窃取关键信息提出解决方案。

ARP欺骗的监测与防范技术综述

目前已经提出许多针对ARP欺骗的安全技术,根据所起作用的不同,将其分为ARP欺骗监测、ARP欺骗防御和改进ARP协议的ARP欺骗避免技术。主要对这些技术进行分析和总结,比较其优缺点,并提出研究改进ARP协议需要综合考虑的因素。

针对ARP攻击的网络防御模式设计与实现

利用数据链路层地址解析协议(ARP)可以进行IP冲突、ARP欺骗、ARP溢出等方式的网络攻击。因为ARP具有实现IP地址到网络接口硬件地址(MAC)的映射功能,所以利用此特性在数据链路层发动的攻击具有很强的隐蔽性。针对ARP攻击的网络防御模式通过跟踪网络主机ARP缓存的变化、统计ARP数据包、主动验证ARP数据包3种方法,可以有效地侦测ARP攻击,并提供了网络防御的方法。

基于ARP和SNMP的网络拓扑自动发现算法

详细探讨了网络可视化管理的核心技术———拓扑图自动发现方法 分析了ARP(地址解析协议 )和SNMP(简单网络管理协议 )以及SMI(管理信息结构 ) ,并详细介绍了MIBII库 ,ARP表和路由表的描述 在此基础上 ,重新设计了数据结构 ,设计并实现了拓扑自动发现算法 ,并给出了详细的算法描述 ,实验结果表明 ,该算法简单、快速、易于实现 。

一种主动检测和防范ARP攻击的算法研究

为了能有效对抗ARP攻击,提出一种采用主动检测技术的算法。在算法中,对主机发送和接收的ARP报文头信息进行一致性检测,丢弃ARP头信息不一致的ARP报文;根据接收的ARP报文信息构造特定数据包,采用主动检测方法对发送方实施身份认证,拒绝未通过认证的报文;依照先发送请求后接收应答规则验证ARP应答,拒绝无请求型应答。与其它ARP攻击解决方法相比较,该算法除了能更快速和准确检测出其它机器对本机的ARP攻击,还能阻止本机对其它机器进行ARP攻击,能更有效地防止ARP攻击。

ARP协议欺骗原理分析与抵御方法

ARP协议欺骗是网络欺骗行为之一，它使得攻击者可以重定向一个以太网段上的IP数据报以取得目标主机的信任。该文主要从以下4个部分：背景知识、欺骗原理、攻击方式、抵御方法对ARP协议欺骗技术进行了全面的、深入浅出的分析。

ARP协议在局域网类型探测中的应用

局域网类型探测对于网络拓扑发现和网络管理都是非常重要的。该文在分析共 享网络和交换网络各自特点的基础上，利用ARP协议的弱点，使用ARP欺骗实现了局域网络类 型的识别，同时给出了具体的实现代码和详细的注释。

基于ETHERNET的网络监听以及ARP欺骗

网络监听就像网络中的一把双刃剑,一方面它在监测网络性能、排除网络故障方面起着不可替代的作用;另一方面,由于其本身具有非常强的隐蔽性,一旦其被黑客用来进行网络嗅探,则会给以太网的安全带来极大的隐患。本文主要分析了网络监听的基本原理,对基于ARP协议的欺骗模式进行了研究,最后根据对实验的分析总结提出了对应的安全建议。

应用ARPS-CMAQ模拟研究石景山污染对北京的影响

建立了中尺度气象模型ARPS与区域多尺度空气质量模型CMAQ的耦合模型系统,应用该模型系统模拟研究了2002年1月份和8月份石景山区污染物排放对北京市空气质量的影响.模拟结果显示,1、8两个月份石景山区污染对北京市PM10的月均贡献浓度分别为29.68μg.m-3和32.09μg.m-3,其中污染较重日的日均贡献浓度在50μg.m-3左右,说明石景山污染对北京市空气质量影响较大.同时,进一步对两月典型污染过程进行深入分析,研究发现,在所选两个污染过程中,石景山对北京PM10的贡献浓度与监测浓度同步升高或降低.首先,在污染过程的前期,石景山贡献浓度较低且变化不大,之后贡献浓度与监测浓度同步快速上升,该阶段贡献浓度增量对监测浓度增量的贡献较大,分别占到了同期各自监测浓度增量的52.89%和44.78%,最后,贡献浓度与监测浓度同步降低,说明,在所选污染过程中贡献浓度短时间内的迅速增加是导致北京市监测浓度骤然升高的一个重要原因.