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利用DD-PCR技术研究扬稻6号基因的差异表达 被引量:5
1
作者 张洪熙 戴正元 +4 位作者 陈建民 肖宁 李爱宏 刘广青 潘存红 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2008年第6期745-750,共6页
利用DD-PCR技术对扬稻6号参与的强优势组合(扬两优6号和两优培九)、明恢63参与的弱优势组合、R13参与的中强优势组合以及亲本的基因表达进行了分析。根据基因在杂交组合和双亲中的表达情况分为8种类型,统计30个引物组合在11个参试材料... 利用DD-PCR技术对扬稻6号参与的强优势组合(扬两优6号和两优培九)、明恢63参与的弱优势组合、R13参与的中强优势组合以及亲本的基因表达进行了分析。根据基因在杂交组合和双亲中的表达情况分为8种类型,统计30个引物组合在11个参试材料中的表现,获得314组差异条带,大小在250 bp至1 000 bp之间,其中强优势组合的差异表达带型UNP1、UNF1和ABF1明显低于弱优势组合,而DMP2和MONO则明显高于弱优势组合。用8种类型所占的比例对各参试材料进行聚类分析,结果显示,扬稻6号参与的强优势组合和明恢63参与的弱势组合明显被分为两类,两者在基因表达模型上存在一定差异。此外,在基因表达水平上探讨了扬稻6号杂种优势的特殊分子基础。 展开更多
关键词 差异显示PCR 基因差异表达 杂种优势 扬稻6号
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DD-PCR技术在植物抗土壤逆境遗传研究中的应用 被引量:3
2
作者 吴平 张立平 祝金明 《植物营养与肥料学报》 CAS CSCD 1999年第2期172-177,共6页
差示PCR(DD-PCR)技术是分离特异表达目的基因的重要手段,在环境逆境诱导表达基因的分离、克隆研究中已有报道。随着DD-PCR技术的不断改进,它将在植物抗土壤逆境胁迫诱导表达基因的背景研究中显示出广泛的应用前景。... 差示PCR(DD-PCR)技术是分离特异表达目的基因的重要手段,在环境逆境诱导表达基因的分离、克隆研究中已有报道。随着DD-PCR技术的不断改进,它将在植物抗土壤逆境胁迫诱导表达基因的背景研究中显示出广泛的应用前景。文章介绍了差示PCR的方法原理与技术改进及其在分离土壤—植物营养胁迫诱导表达基因方面的初步应用。 展开更多
关键词 dd-pcr 植物 抗逆性 土壤逆境 植物营养
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萝卜胞质雄性不育正常花蕾与败育花蕾DD-PCR及EST序列分析 被引量:4
3
作者 贾晋 张鲁刚 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期426-431,共6页
提取了萝卜雄性不育系BT-18败育花蕾和正常花蕾的DNA,并且采用DD-PCR技术研究了败育花蕾与正常花蕾的mRNA差异表达。败育花蕾DNA表现有规则的Ladder,而正常花蕾只有单一DNA条带,该结果为萝卜败蕾发生了细胞程序化死亡提供了生化证据;DD-... 提取了萝卜雄性不育系BT-18败育花蕾和正常花蕾的DNA,并且采用DD-PCR技术研究了败育花蕾与正常花蕾的mRNA差异表达。败育花蕾DNA表现有规则的Ladder,而正常花蕾只有单一DNA条带,该结果为萝卜败蕾发生了细胞程序化死亡提供了生化证据;DD-PCR得到107个差异表达片段,其中败育花蕾差异表达片段94个,正常花蕾差异表达片段13个。BLAST结果显示,与功能蛋白同源的差异序列50%以上来源于叶绿体,推测萝卜败蕾与叶绿体有很大关系;叶绿体Mat K在不同的引物组合扩增中出现3次,序列分析后发现长度为282bp和283bp的为同一片段,长度为396bp的片段与长度为282bp和283bp的片段无同源性,可能为编码Mat K的不同亚基。Mat K参与叶绿体中RNA转录本Ⅱ型内含子剪切,通过对内含子剪接的影响来调节基因的表达,推测Mat K等叶绿体基因上调表达使其蛋白质的合成发生变化,导致萝卜叶绿体代谢紊乱,最终导致败蕾;而甲基转移酶可能通过DNA甲基化调控萝卜发育,使其发育异常表现花蕾败育。对BLASTx比对分值小于80及无同源性的片段进行BLASTn分析,根据比对结果推测:细胞程序化死亡可能是萝卜败蕾、植物衰老和植物受逆境胁迫时普遍发生的一种生理生化现象。 展开更多
关键词 萝卜败蕾 dd-pcr EST序列分析 MATK DNA甲基转移酶 细胞程序化死亡
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dd-PCR法研究中草药促神经生长过程中的基因差异表达 被引量:6
4
作者 刘梅 顾晓松 +3 位作者 刘炎 崔学芝 邱一华 张沛云 《南通医学院学报》 1999年第4期363-365,共3页
目的 :为探讨中药促神经生长的分子机理提供实验依据。方法 :采用 dd-PCR方法 ,从体外培养大鼠背根神经节细胞加中药组和不加中药组中获得两者的差异表达片段 ,并克隆测序分析。结果 :获得 7个差异条带 ,其中 2个条带的 c DNA序列分别... 目的 :为探讨中药促神经生长的分子机理提供实验依据。方法 :采用 dd-PCR方法 ,从体外培养大鼠背根神经节细胞加中药组和不加中药组中获得两者的差异表达片段 ,并克隆测序分析。结果 :获得 7个差异条带 ,其中 2个条带的 c DNA序列分别与酪氨酸磷酸酶受体 ( PTPR) m RNA、促生长素抑制素受体 ( SSTR) m RNA的序列部分同源。结论 :在中药促神经生长过程中 。 展开更多
关键词 中药 神经生长 dd-pcr 基因表达
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mRNADD-PCR技术及其在植物抗病基因研究中的应用
5
作者 闫红飞 杨文香 +1 位作者 董立 刘大群 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第z1期169-172,共4页
mRNA差异显示技术自 1992年建立以来 ,成为分子生物学领域的一个研究热点 ,并在许多领域得到了较为广泛的应用。阐述了mRNA差异显示技术的基本原理 ,综述了其现存的问题及近几年该技术的改进、完善与发展。如引物设计、PCR参数优化、假... mRNA差异显示技术自 1992年建立以来 ,成为分子生物学领域的一个研究热点 ,并在许多领域得到了较为广泛的应用。阐述了mRNA差异显示技术的基本原理 ,综述了其现存的问题及近几年该技术的改进、完善与发展。如引物设计、PCR参数优化、假阳性克服、cDNA片段克隆测序及完整基因的筛选。此外 。 展开更多
关键词 MRNA 差异显示 抗病基因 dd-pcr
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DD-PCR及其在作物环境胁迫研究中的进展
6
作者 刘厚淳 段发平 《广西农业生物科学》 CSCD 2000年第4期285-288,共4页
本文介绍了 DD-PCR的基本原理和基本步骤 ,总结了该技术在作物环境胁迫应用中的进展 。
关键词 dd-pcr 环境胁迫 作物抗逆性研究 应用
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基因差异表达研究方法的探讨──从DD-PCR到cDNA RDA 被引量:1
7
作者 邹胜伟 陈清轩 《生命科学》 CSCD 2000年第2期80-81,88,共3页
DD-PCR和 cDNA RDA都是近年发展起来的新技术,它们被应用于生物及医学领域,在基因差异表达和筛选差异基因的研究中有着广泛的前景。本文论述了 DD—PCR及 CDNA RDA的基本技术策略;并对两者进行了比较分析。
关键词 基因 差异表达 dd-pcr CDNA RDA
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中药“神经再生素”促神经生长过程中基因差异性表达的初步研究 被引量:24
8
作者 刘梅 顾晓松 +3 位作者 刘炎 崔学芝 彭聿平 张沛云 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期101-106,共6页
为了探索中药“神经再生素”促神经生长过程中基因水平的变化。本实验采用 dd-PCR方法 ,从体外培养背根神经节细胞加药组和不加药组中获得两者的差异表达片段 ,并经反杂交筛选、克隆测序、DNA序列检索分析、Northern验证。结果表明 ,差... 为了探索中药“神经再生素”促神经生长过程中基因水平的变化。本实验采用 dd-PCR方法 ,从体外培养背根神经节细胞加药组和不加药组中获得两者的差异表达片段 ,并经反杂交筛选、克隆测序、DNA序列检索分析、Northern验证。结果表明 ,差异显示共获得 8个差异条带 ,一个为下调基因 ,其余为上调基因 ,其中 2个 c DNA序列与 RRAJ5 16 1基因 (增殖相关基因 )、AF196 3 15基因 (锌指样蛋白 DDP2 ) 10 0 %同源 ,2个 c DNA序列与 AK0 0 175 7基因、STA5 SRR基因 (t RNA合成酶 )部分同源。结论是中药“神经再生素”在促神经生长过程中 ,对神经元基因的选择性表达起着重要的调控作用。 展开更多
关键词 神经再生素 神经生长 dd-pcr 基因表达 大鼠 中药药理
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银染mRNA差异显示法的建立及其应用 被引量:4
9
作者 陈瑞川 蔡克瑕 +3 位作者 马胜平 陈福 付永贵 曾寰 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期1138-1144,共7页
以银染 m RNA差异显示方法对原发及转移灶胃癌标本总 RNA为研究对象进行银染差示分析和回收差异条带 ,从中获得系列差异表达片段 .随机选取 5个从原发性胃癌样品回收的表达条带 ,以取自体外培养胃癌细胞株的 RNA进行点杂交验证 ,均被证... 以银染 m RNA差异显示方法对原发及转移灶胃癌标本总 RNA为研究对象进行银染差示分析和回收差异条带 ,从中获得系列差异表达片段 .随机选取 5个从原发性胃癌样品回收的表达条带 ,以取自体外培养胃癌细胞株的 RNA进行点杂交验证 ,均被证实为真实带 .对 2个差异表达片段进行分析、测序和 Gen Bank同源比较结果表明 :MGD1片段与肿瘤转移相关基因 MTA1完全同源 ,属胃癌转移相关基因 ;PGD2与胃癌转移抑制相关 ,并与细胞周期抑制蛋白 p2 7/ Kip1具 99%的同源性 .结果表明 ,银染差异显示法具有快速、直观、假阳性率低等优点 。 展开更多
关键词 银染差示PCR 胃癌 转移相关基因 银染mRNA差异显示法 肿瘤转移 差异表达片段
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低剂量的甲醛诱导MRC5损伤耐受差异表达基因的研究 被引量:5
10
作者 卫秦芝 庄志雄 +4 位作者 袁建辉 李习艺 杨晓华 黄海燕 庾蕾 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期265-268,共4页
目的 用荧光差异显示PCR(fluoroDD PCR)方法寻找低剂量的甲醛(FA)诱导人胚肺成纤维细胞(MRC 5 )损伤耐受差异表达的基因。方法 用MTT方法得到FA对MRC 5毒性的剂量-反应关系。根据剂量-反应关系选择对MRC 5几乎没有损伤或有增殖的剂量... 目的 用荧光差异显示PCR(fluoroDD PCR)方法寻找低剂量的甲醛(FA)诱导人胚肺成纤维细胞(MRC 5 )损伤耐受差异表达的基因。方法 用MTT方法得到FA对MRC 5毒性的剂量-反应关系。根据剂量-反应关系选择对MRC 5几乎没有损伤或有增殖的剂量作为低剂量,对细胞有明显损伤的剂量为高剂量,然后用低剂量、高剂量、损伤耐受模式(低剂量预刺激后继而用高剂量刺激)三种方式处理细胞,通过荧光差异显示PCR技术寻找不同处理组与对照组比较差异表达的基因。对其中的11个差异条带进行二次PCR、克隆、测序,在GeneBank上通过Blast鉴定基因。结果 根据FA对MRC 5毒性的剂量-反应关系,选择10 0 μmol L为低剂量、10mmol L为高剂量。然后按方法中所述的方式处理细胞后,用荧光差异显示PCR的方法发现有6 1个差异表达的基因。对其中的11个差异条带进行鉴定,发现有2个已知基因,分别与nuclearfactorofactivatedT cells 5 (NFAT5 )和tetratricopeptiderepeatdomain 3(TPRD 3)高度同源,其余9个为新基因。结论 FA在低剂量可以促进MRC 5的增殖,通过荧光差异显示PCR获得6 1个FA诱导MRC 5损伤耐受差异表达的基因,通过对其中11个差异条带的鉴定,为进一步研究FA诱导MRC 5损伤耐受的机制提供线索。 展开更多
关键词 甲醛 损伤耐受 荧光差异显示PCR
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早期小鼠胚胎发育的基因表达 被引量:6
11
作者 朱新产 张涌 王宝维 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第2期272-276,共5页
A modification of the mRNA differential display method was used to an alyze differential gene expression during early embryonic development in the mou se. This method detects appropriate changes in the temporal patter... A modification of the mRNA differential display method was used to an alyze differential gene expression during early embryonic development in the mou se. This method detects appropriate changes in the temporal pattern of expressio n of amplicons and proteins by DD PCR and SDS PAGE analysis. In addition, it i ndicates that the activity of genes during early embryonic development was tempo ral; different degrees of activation→expression→translation occurring with cha nging spatio temporal and environmental conditions. The selectivity of gene exp r ession and levels of transcription and translation are a key controlled regulat ed position during early embryonic development in the mouse . 展开更多
关键词 胚胎发育 早期发育 基因表达 瞬时-空间变化模式 哺乳动物 分子调控机制
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低剂量三氯乙烯诱导人正常肝细胞损伤耐受差异表达基因的研究 被引量:3
12
作者 卫秦芝 庄志雄 +4 位作者 袁建辉 黄海燕 李习艺 杨晓华 庾蕾 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期403-406,共4页
目的寻找低剂量三氯乙烯(TCE)诱导人正常肝细胞(L02)损伤耐受差异表达的基因。方法参照本实验室用MTT法所得的TCE对L02毒性剂量-效应关系,选择5μmolL的三氯乙烯为低剂量,40μmolL为高剂量,按以下方式对细胞进行染毒:空白对照、低剂量... 目的寻找低剂量三氯乙烯(TCE)诱导人正常肝细胞(L02)损伤耐受差异表达的基因。方法参照本实验室用MTT法所得的TCE对L02毒性剂量-效应关系,选择5μmolL的三氯乙烯为低剂量,40μmolL为高剂量,按以下方式对细胞进行染毒:空白对照、低剂量、高剂量、损伤耐受组(先用低剂量刺激24小时,再用高剂量刺激6小时),然后用荧光差异显示PCR(FluoroDDPCR)寻找不同方式刺激差异表达的基因,并对差异表达基因进行克隆、鉴定。结果按方法所示的方式处理细胞,处理完毕后提取各组细胞总RNA,进行荧光差异显示PCR,找到51个差异条带。对其中的11个差异条带进行克隆鉴定同源性比较,发现其中9个已知基因,2个新基因。结论用荧光差异显示PCR方法寻找TCE诱导L02损伤耐受过程差异表达的基因,通过鉴定基因,为进一步研究TCE诱导L02的损伤耐受的机理提供科学依据。 展开更多
关键词 三氯乙烯 损伤耐受 荧光差异显示PCR
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用mRNA差异显示方法寻找小鼠胸腺基质细胞差异表达基因 被引量:2
13
作者 贾熙华 应翔宇 +2 位作者 程度胜 黄培堂 陈慰峰 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期301-304,共4页
目的寻找并初步分析小鼠胸腺基质细胞差异表达基因。方法来源于小鼠胸腺基质细胞系的两株亚克隆细胞 4 ( 5 )和 4 ( 12 ) ,前者可诱导前体 T细胞的进一步成熟 ,分别提取该两株细胞的总 RNA,利用 m RNA差异显示方法( DD- PCR)筛选 4 ( 5 ... 目的寻找并初步分析小鼠胸腺基质细胞差异表达基因。方法来源于小鼠胸腺基质细胞系的两株亚克隆细胞 4 ( 5 )和 4 ( 12 ) ,前者可诱导前体 T细胞的进一步成熟 ,分别提取该两株细胞的总 RNA,利用 m RNA差异显示方法( DD- PCR)筛选 4 ( 5 )细胞特异表达的基因片段。结果得到了 17个 4 ( 5 )细胞特异表达的基因片段 ( expressed sequences tag,EST) ,其中 14个代表了尚未登录的小鼠新基因 ,另外 3个则分别与小鼠的 cytochrome C oxidase,Hsp65 ,Eps8基因高度同源。结论 DD- PCR方法是一种优良的寻找新基因的方法 ,小鼠胸腺基质细胞可能分泌或表达更多的新因子或分子。 展开更多
关键词 dd-pcr 表达序列标签 EST 胸腺基质细胞 mRNA 小鼠
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采用改进的差示PCR技术分离胃癌差异表达基因及其临床意义(英文) 被引量:13
14
作者 崔大祥 阎小君 苏成芝 《第四军医大学学报》 1998年第6期601-605,共5页
目的:建立优化的差示PCR条件;运用建立的条件分离胃癌GC7901与胃粘膜GES-1细胞株之间的差异表达基因;根据获取的序列,设计引物并运用于检测胃癌组织、血、活检胃粘膜标本,拟筛选出检出率与符合率高的数对引物,建立胃癌基因诊断... 目的:建立优化的差示PCR条件;运用建立的条件分离胃癌GC7901与胃粘膜GES-1细胞株之间的差异表达基因;根据获取的序列,设计引物并运用于检测胃癌组织、血、活检胃粘膜标本,拟筛选出检出率与符合率高的数对引物,建立胃癌基因诊断方法.方法:LJGC7901与GES-1细胞株为研究对象,探索mRNA差示PCR的最佳反应条件,运用优化的条件分离细胞株之间的差异表达基因;以回收的片段作探针,打点杂交证实为真正的差异片段后,对产物进行直接测序及同源性检索;设计引物,采用RT-PCR方法检测胃癌组织、血、活检胃粘膜标本.结果:优化的差示PCR条件为:前5轮PCR循环采用94℃35s,40℃2min,72℃30s,后35轮PCR循环采用94℃45s,55℃2min,72℃1min,最后在72℃延伸7min;分离回收差异条带154条,从中选出17个片段作探针,打点杂交证实在两细胞株之间呈差异表达;对17个片段进行了测序,其中17个新序列被GenBank接受,接受号为AF054162至AF054172,AF071052至AF071058;其中5个序列引物在26例胃癌标本中检出覆盖率为100%,在9例病理确诊的胃癌患者活检胃粘膜中检出率100%,在17例病理确诊为胃癌患者血标本中检出率为53%.结论:优化了mRNA差示PCR技术条件;分离出154个差异表达的基因片段;筛选出17个新序? 展开更多
关键词 胃肿瘤 差异表达基因 差示PCR 聚合酶链反应
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小鼠2-细胞胚胎ATP合成酶6基因特异表达分析及鉴定 被引量:6
15
作者 杨立新 郁卫东 陈清轩 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期201-204,共4页
合子基因组活化是小鼠胚胎早期发育由细胞质调控向核调控转变的关键 .小鼠合子基因组活化发生在 2 细胞胚胎阶段 ,通过对 2 细胞胚胎阶段特异性表达基因的分析 ,可以从分子水平上揭示早期小鼠胚胎的发育机理 .用DD RTPCR技术 ,从单个... 合子基因组活化是小鼠胚胎早期发育由细胞质调控向核调控转变的关键 .小鼠合子基因组活化发生在 2 细胞胚胎阶段 ,通过对 2 细胞胚胎阶段特异性表达基因的分析 ,可以从分子水平上揭示早期小鼠胚胎的发育机理 .用DD RTPCR技术 ,从单个小鼠 2 细胞胚胎与成熟卵母细胞 (MII细胞 )中分离了 2个差异片段 ,片段 2同小鼠睾丸中表达的一个未知片段具有高度同源性 .经过cDNA文库构建、筛选 ,分离到其全长cDNA .序列分析结果表明 ,该基因为小鼠ATP合成酶亚单位 6基因 .ATP合成酶亚单位 6基因由线粒体DNA编码 ,与细胞内ATP的合成相关 .小鼠 2 细胞胚胎特异表达的ATP合成酶亚单位 展开更多
关键词 小鼠 胚胎发育 早期发育 ATP合成酶亚单位6基因 DD-RTPCR技术 合子基因组活化 2-细胞胚胎 特异表达 鉴定
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低剂量过氧化氢诱导机体适应性反应差异表达基因的研究 被引量:2
16
作者 卫秦芝 庄志雄 +4 位作者 袁建辉 李习艺 杨晓华 黄海燕 庾蕾 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2005年第4期2-6,共5页
目的寻找低剂量过氧化氢(H2O2)诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5)适应性反应差异表达的基因。方法用溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率得到H2O2对MRC-5毒性的剂量反应关系,分别用低剂量、高剂量和低剂量预刺激后用高剂量攻击细胞,观察细胞... 目的寻找低剂量过氧化氢(H2O2)诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5)适应性反应差异表达的基因。方法用溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率得到H2O2对MRC-5毒性的剂量反应关系,分别用低剂量、高剂量和低剂量预刺激后用高剂量攻击细胞,观察细胞生长的变化,得到低剂量H2O2诱导MRC-5的适应性反应模型。然后用荧光差异显示聚合酶链反应(FluoroDD-PCR)寻找不同方式刺激的差异表达基因。结果根据H2O2诱导MRC-5毒性的剂量反应关系,选择0.088、0.88、8.8、88μmol/L为低剂量,1100μmol/L为高剂量,用低剂量处理细胞24h,然后用高剂量刺激1h,可以观察到在0.88μmol/L预刺激细胞24h后,对继而1100μmol/L的刺激有明显的抵抗效应。对不同方式处理的细胞RNA进行FluoroDD-PCR,找到60个差异条带。对其中的15个差异条带进行克隆鉴定同源性比较,发现其中7个已知基因,8个新基因。结论H2O2可以诱导MRC-5的适应性反应过程,用FluoroDD-PCR方法找到差异表达的基因。 展开更多
关键词 过氧化氢 适应性反应 荧光差异显示PCR
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mRNA差异显示法筛选黄花石蒜中加兰他敏合成相关基因 被引量:3
17
作者 唐金凤 鲁耀邦 桂柳姿 《湖南中医药大学学报》 CAS 2012年第7期34-36,49,共4页
目的筛选和克隆黄花石蒜加兰他敏相关基因。方法采用mRNA差异显示法(mRNA differential displayPCR,DD-PCR),对7月份黄花石蒜产加兰他敏含量最高的部位花蕊和含量最低的部位花葶进行基因表达差异的研究,筛选其差异片段,再对差异片段进... 目的筛选和克隆黄花石蒜加兰他敏相关基因。方法采用mRNA差异显示法(mRNA differential displayPCR,DD-PCR),对7月份黄花石蒜产加兰他敏含量最高的部位花蕊和含量最低的部位花葶进行基因表达差异的研究,筛选其差异片段,再对差异片段进行回收、克隆、测序及序列分析和同源性比较。结果黄花石蒜花蕊和花葶中存在明显的基因表达差异,发现差异条带44条,经序列分析和同源性比较,确认其中2个条带与黄花石蒜加兰他敏合成相关,另一条可能与加兰他敏运输代谢调控有关。结论通过DD-PCR得到的3个同源序列为研究黄花石蒜中加兰他敏的合成途径提供了有力依据。 展开更多
关键词 黄花石蒜 加兰他敏 MRNA差异显示技术 生物信息学
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用mRNA差异显示方法筛选HIV/HCV合并感染者差异表达基因 被引量:3
18
作者 赵锦 赵广录 +6 位作者 周克恒 李江鹏 甘永霞 张燕 陈琳 王晓辉 冯铁建 《中国艾滋病性病》 CAS 2008年第5期442-445,共4页
目的建立信使RNA(messenger RNA,mRNA)差异显示技术平台,寻找艾滋病病毒/丙型肝炎病毒(HIV/HCV)合并感染者差异表达基因。方法分离正常人、HIV感染者、HCV感染者及HIV/HCV合并感染者的外周血单核细胞,提取RNA,定量后利用锚定引物进行逆... 目的建立信使RNA(messenger RNA,mRNA)差异显示技术平台,寻找艾滋病病毒/丙型肝炎病毒(HIV/HCV)合并感染者差异表达基因。方法分离正常人、HIV感染者、HCV感染者及HIV/HCV合并感染者的外周血单核细胞,提取RNA,定量后利用锚定引物进行逆转录合成cDNA,然后利用10对随机引物及锚定引物进行PCR扩增。行6%变性PAGE凝胶电脉,银染后分析结果,回收差异条带测序。通过SYBRgreen实时荧光定量PCR以β-actin为内参,进行大量人群样本的定量分析鉴定。结果共筛选出107条差异表达条带,其中大部分是感染者与正常人之间的差异显示条带。已鉴定6个序列,其中2个序列是未知功能基因,3个序列为锌指蛋白141 (RNF141),1个序列为环磷酸腺苷磷酸化蛋白(ARPP-19)基因。经过对超过10份病人血样RNF141荧光定量PCR初步鉴定,在HIV/HCV合并感染者、HCV感染者中,RNF141的表达水平高于正常人。结论RNF141与HIV/HCV合并感染及HCV感染可能存在一定相关性。同时证明,利用mRNA差异显示方法可以筛选出与HIV/ HCV合并感染或单独感染相关的差异表达基因。 展开更多
关键词 艾滋病病毒/丙型肝炎病毒合并感染 MRNA差异显示 实时荧光定量PCR
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太空诱变玉米细胞核雄性可育和不育材料的遗传多态性分析 被引量:1
19
作者 刘福霞 曹墨菊 +2 位作者 荣廷昭 潘光堂 刘乃森 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2010年第5期5-7,共3页
利用mRNA差异显示技术,对太空诱变玉米细胞核雄性不育和可育材料的mRNA进行了初步分析,用24对锚定引物和5对随机引物的不同组合对不育和可育RNA池进行DD-PCR扩增,1对引物组合BO308(锚定引物)/BO312(随机引物)扩增出了8条差异片段,其中50... 利用mRNA差异显示技术,对太空诱变玉米细胞核雄性不育和可育材料的mRNA进行了初步分析,用24对锚定引物和5对随机引物的不同组合对不育和可育RNA池进行DD-PCR扩增,1对引物组合BO308(锚定引物)/BO312(随机引物)扩增出了8条差异片段,其中500 bp和600 bp条带清晰,信号较强,而其他片段信号较弱。推断8条差异片段可能与细胞核雄性不育基因有关。 展开更多
关键词 太空诱变 玉米 核不育 mRNA差异显示 集团分离分析
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用mRNA差异显示法寻找人绒毛膜上皮癌与孕早期绒毛组织间的差异基因 被引量:1
20
作者 史桂芝 高英茂 +2 位作者 顾晓松 刘梅 王宝恒 《解剖学报》 CSCD 北大核心 2000年第4期364-367,I016,共4页
目的 寻找人绒毛膜上皮癌 (JAR)与孕早期绒毛组织间的差异基因。 方法 采用 m RNA差异显示法 (m RNA differential display PCR,DD- PCR) ,即分别提取正常孕早期绒毛及绒毛膜上皮癌的总 RNA ,在oligod T1 5 作用下分别合成相应的 c D... 目的 寻找人绒毛膜上皮癌 (JAR)与孕早期绒毛组织间的差异基因。 方法 采用 m RNA差异显示法 (m RNA differential display PCR,DD- PCR) ,即分别提取正常孕早期绒毛及绒毛膜上皮癌的总 RNA ,在oligod T1 5 作用下分别合成相应的 c DNA ,并以其为模板利用试剂盒中的 2 0对引物组合和α- 32 Pd ATP,Taq酶等进行PCR,将两者的 PCR产物在 6 %变性聚丙烯酰胺凝胶 (PAG)上电泳 ,放射自显影后寻找两者间的差异片段 ,回收差异片段进行二次 PCR,对二次 PCR产物先采用反杂交法初步筛选后再用 Northern Blot鉴定。 结果 从 PAG上切下 32条差异条带 ,经反杂交初步筛选出 11个阳性片段 ,对 11个阳性片段分别做 Northern Blot鉴定 ,其中 1个片段(T2 6 )的基因长度约 1.2 kb,其在绒毛膜上皮癌中的表达远高于正常绒毛组织。 结论  T2 展开更多
关键词 MRNA差异显示法 绒毛膜上皮癌 绒毛
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