DNMT1在口腔鳞状细胞癌中的表达及作用机制研究

目的:探讨DNMT1在口腔鳞癌中的表达情况及其对口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法:通过GEPIA2数据库分析泛癌中DNMT1表达情况;采用RT-qPCR、Western blot检测人口腔上皮角化细胞HOK及口腔鳞状细胞癌细胞系HSC3、SAS中DNMT1的表达水平;采用shRNA慢病毒敲低HSC3、SAS细胞中DNMT1并用RT-qPCR、Western blot检测sh DNMT1转染效率;采用CCK-8、平板克隆实验检测敲低DNMT1对HSC3、SAS细胞增殖的影响;采用细胞划痕、Transwell实验检测敲低DNMT1对HSC3、SAS细胞迁移、侵袭的影响。结果:与HOK相比,HSC3、SAS细胞中DNMT1的mRNA及蛋白表达量均较高(P<0.05);敲低DNMT1后,HSC3、SAS细胞的增殖、迁移及侵袭能力均降低(P<0.05)。结论:DNMT1在口腔鳞状细胞癌细胞中高表达,且可促进口腔鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

血清DNMT1和lncRNA MEG3表达水平与帕金森病的关联性研究

目的探讨血清DNA甲基转移酶1(DNMT1)、长链非编码RNA人类母系表达基因3(lncRNA MEG3)表达水平与帕金森病(PD)的关联性。方法招募2020年3月至2023年1月青海红十字医院神经内科收治的PD患者106例作为PD组,另选择同期健康体检者103名作为对照组。比较两组的临床资料,分析PD患者血清DNMT1、lncRNA MEG3表达水平与临床指标的相关性。采用多因素logistic回归分析影响PD发生的因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清DNMT1、lncRNA MEG3水平对PD的诊断价值。结果PD组血清DNMT1水平高于对照组,总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及lncRNA MEG3水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,PD患者血清DNMT1水平与TC、TG、LDL-C水平呈负相关(P<0.05),与统一帕金森病评定量表(UPDRS)Ⅰ评分、UPDRSⅡ评分、UPDRSⅢ评分、Hoehn-Yahr(H-Y)分期呈正相关(P<0.05)。lncRNA MEG3水平与TC、TG、LDL-C水平呈正相关(P<0.05),与UPDRSⅠ评分、UPDRSⅡ评分、UPDRSⅢ评分、H-Y分期呈负相关(P<0.05)。多因素logistic回归分析结果显示,较高的血清DNMT1水平是促进PD发生的独立危险因素(P<0.05),较高的lncRNA MEG3水平是抑制PD发生的独立保护因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清DNMT1、lncRNA MEG3水平具有诊断PD的应用价值(P<0.05),且联合两指标可进一步提高诊断效能[AUC(95%CI)=0.906(0.865~0.947)],灵敏度和特异度分别为80.21%和89.34%。结论PD患者血清DNMT1呈高表达,lncRNA MEG3呈低表达,二者联合检测有助于临床诊断PD。

胃癌组织中Dnmt1的表达及其临床病理意义

目的:探讨胃癌组织中Dnm t1蛋白的表达及其临床病理意义。方法:应用免疫组化SP法检测了20例正常胃黏膜、40例不典型增生胃黏膜及70例胃癌组织中Dnm t1蛋白的表达状况。结果:Dnm t1蛋白阳性表达率在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌各组间呈递增趋势,差异有统计学意义(χ2=34.710,P<0.01);低分化腺癌较高分化腺癌组织阳性表达信号明显增强,但在不同分化程度各组间Dnm t1蛋白阳性表达率无显著性差异(P>0.05);胃癌组织中Dnm t1蛋白阳性表达与性别、年龄、溃疡的大小、有无淋巴结转移和浸润深度等临床病理特征无关(P>0.05),而与有无脉管侵犯有关(P<0.05)。结论:Dnm t1蛋白表达显著升高可能是胃癌发生、发展的重要原因,Dnm t1蛋白可成为早期诊断胃癌的有效指标。

三阴性乳腺癌中DNMT1表达与ERα基因启动子甲基化的关系

目的:探讨三阴性乳腺癌中DNMT1表达与ERα基因启动子甲基化的关系,以及二者在三阴性乳腺癌中的临床意义。方法:采用免疫组化法检测了126例三阴性乳腺癌组织中DNMT1蛋白的表达情况,同时采用甲基化特异性PCR法检测了ERα基因启动子区甲基化水平。结果:126例三阴性乳腺癌中,DNMT1阳性表达率为38.1%,ERα基因启动子区甲基化率为54.8%,DNMT1表达水平与ERα基因甲基化呈显著正相关(r=0.220,P=0.013)。与TNMⅠ-Ⅱ期组织相比,在TNMⅢ-Ⅳ期组织中ERα基因甲基化显著增加(P=0.040);与无淋巴结转移的组织相比,发生淋巴结转移的组织中DNMT1表达水平显著增加(P=0.043)。ERα基因启动子区甲基化与三阴性乳腺癌患者OS及DFS缩短显著相关(P=0.020,P=0.036);DNMT1阳性表达可显著缩短患者OS(P=0.034),同时可使患者DFS出现缩短趋势(P=0.054)。结论:三阴性乳腺癌中DNMT1蛋白参与了ERα基因甲基化,且该事件与三阴性乳腺癌的侵袭转移、病程进展及不良预后相关。

沉默dnmt1基因对胃癌细胞株AGS细胞周期、增殖及凋亡的影响

背景与目的:DNA甲基转移酶1(DNAmethyltransferase1,dnmt1)基因在多种肿瘤细胞中表达量相当高,而在正常成人细胞中则低表达,因此dnmt1基因的高表达与肿瘤的发生有密切的关系。本研究观察以dnmt1基因为靶基因的重组质粒对胃癌细胞株AGS细胞周期、增殖及凋亡的影响。方法:设计短发夹状RNA(shorthairpinRNA,shRNA)的寡核苷酸片段,再克隆至载体pTZU6+1中构建重组体pshRNA-dnmt1,转染胃癌细胞株AGS。实验分为空白对照组(仅予脂质体)、pTZU6+1组(予空质粒pTZU6+1)和pshRNA-dnmt1组(予以重组质粒pshRNA-dnmt1)3组。Westernblot检测dnmt1蛋白水平变化;RT-PCR法评估mRNA水平;流式细胞技术分析细胞周期的变化;MTT法检测细胞生长情况;吖啶橙/溴乙锭双染色(AO/EB)法、电镜和TUNEL观察细胞凋亡情况。结果:成功构建重组质粒pshRNA-dnmt1,并经序列分析得到确认。pshRNA-dnmt1转染AGS细胞后24h出现dnmt1蛋白表达量减少,24、48、72h抑制率分别为28.24%、68.54%、81.47%。转染pshRNA-dnmt1后24、48、72h对AGS细胞中dnmt1mRNA的抑制率分别为21.63%、52.97%、72.06%。转染后72hS期细胞由空白对照组的(36.58±1.76)%降至pshRNA-dnmt1组的(18.54±6.59)%;G2/M期细胞由空白对照组的(6.18±0.32)%升至pshRNA-dnmt1组的(18.53±1.42)%,均有显著性差异(P<0.05)。转染后24、48、72h细胞存活率分别为79.49%、51.63%和39.16%。AO/EB法、电镜和TUNEL均可见大量典型的凋亡和坏死细胞。结论:重组质粒pshRNA-dnmt1能特异有效地抑制AGS细胞内dnmt1的表达、抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,为肿瘤的基因治疗提供依据。

子宫颈鳞状细胞癌组织中DNMT1 mRNA表达和E-cad甲基化检测

目的:探讨宫颈鳞状细胞癌组织中DNA甲基化转移酶(DNMT1)mRNA的表达和上皮钙粘附素(E-cadherin)的甲基化状况,分析其与宫颈鳞状细胞癌发生发展的关系。方法:应用原位杂交技术检测20例正常宫颈、60例CIN(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ各20例)和40例宫颈鳞状细胞癌组织中DNMT1 mRNA的表达情况;利用甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)方法检测E-cad基因启动子区甲基化状况,分析宫颈鳞状细胞癌中DNMT1 mRNA的表达与E-cad启动子区甲基化状况及2者之间的相关性。结果:DNMT1 mRNA在正常宫颈、CIN和宫颈鳞状细胞癌组织中表达逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05);DNMT1 mRNA在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ组织中表达的差异有统计学意义(P<0.05)。E-cad启动子甲基化率在正常宫颈、CIN、宫颈鳞状细胞癌组织中依次升高,差异有统计学意义(P<0.05)。E-cad启动子甲基化与DNMT1 mRNA的表达呈正相关(r=0.401,P<0.05)。结论:DNMT1 mRNA过表达和E-cad启动子异常甲基化与子宫颈鳞状细胞癌的发生发展关系密切;E-cad启动子甲基化过程可能是在DNMT1的催化作用下完成的。

沉默DNMT1减弱WIF-1基因启动子甲基化对慢性髓系白血病K562细胞生物学行为的影响

目的:探讨沉默DNA甲基转移酶(DNMT1)对人慢性髓系白血病细胞内抑癌基因wnt抑制因子-1(WIF-1)基因启动子甲基化的影响。方法:构建DNMT1 siRNAi质粒,将DNMT1 siRNAi转染至慢性髓系白血病K562细胞中,采用RT-PCR和Western blot法检测DNMT1基因和相关蛋白的表达,并利用甲基化PCR检测WIF-1基因启动子甲基化水平,台盼蓝拒染法和MTT法检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡率,集落形成实验检测细胞的集落形成能力,Western blot法检测沉默DNMT1基因后Wnt/β-catenin及其下游信号通路蛋白的表达情况。结果:实验组DNMT1 mRNA和相关蛋白表达水平显著低于对照组和阴性对照组(P<0.05);成功转染72 h后,对照组和阴性对照组WIF-1基因处于完全甲基化状态,而实验组WIF-1基因启动子区域甲基化水平显著降低。MSP检测结果显示,实验组未甲基化的WIF-1引物扩增出的PCR产物含量显著增加,而甲基化的WIF-1引物扩增出的PCR产物含量显著降低。转染成功48 h后,实验组的OD值、活细胞数及集落形成数均显著低于阴性对照组和对照组(P<0.05)。实验组的细胞凋亡率显著高于阴性对照组和对照组(P<0.05)。实验组K562细胞中β-actin、myc、cyclin D1和TCF-1蛋白表达水平均显著低于阴性对照组和对照组(P<0.05)。结论:沉默DNMT1基因能够抑制K562细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能与逆转WIF-1基因启动子高甲基化水平,从而抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性有关。

DNMT1、β-catenin和P-GSK-3β在结肠癌组织中的表达

目的探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)、β-连环素(β-catenin)和磷酸化糖原合成酶激酶(P-GSK-3β)在结肠癌中的表达及其与肿瘤分化程度和淋巴结转移等的关系。方法采用荧光定量PCR检测62例原发性结肠癌患者癌组织及21例正常大肠黏膜组织中DNMT1、β-catenin和GSK的表达,采用Westernblot方法验证蛋白的表达情况。结果结肠癌组织中DNMT1、β-catenin和P-GSK-3β表达程度显著高于正常组织。DNMT1在低分化程度的癌组织间相对含量高,β-catenin在肿瘤的不同分化程度及有无淋巴结转移的癌组织间相对含量的差异有统计学意义,而P-GSK-3β的组间比较无显著性差异。结论DNMT1、β-catenin和P-GSK-3β的活性改变与结肠癌有一定的相关性。

DNMT1靶向RNA干扰重组体的构建及序列分析

目的 :本研究利用RNA干扰 (RNAinterfering ,RNAi)技术 ,以DNMT1(DNAmethyltransferase 1)为靶基因 ,设计构建重组体 ,并进行序列分析 ,为下一步探索肿瘤基因治疗的新途径打好基础。方法 :设计有小发夹结构的两条DNA序列 ,经退火成互补双链 ,再克隆至载体pTZU6 +1中构建重组体 ,转化JM10 9菌株 ,提取质粒行酶切鉴定后 ,进行测序分析。结果 :将合成的DNA序列退火后克隆到载体上 ,经测序鉴定确实为所需序列。结论 :DNMT1靶向RNA干扰重组体的成功构建和序列分析 ,可进一步利用克隆所得的小RNA序列干扰DNMT1的mRNA转录 。

胃癌组织中Dnmt1与caveolin-1表达的关系

目的探讨正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌组织中Dnmt1及caveolin-1的表达以及二者间的关系。方法应用免疫组化SP法检测20例正常胃黏膜、40例不典型增生胃黏膜及70例胃癌组织中Dnmt1、caveolin-1的表达状况。结果在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌组织中Dnmt1蛋白阳性表达率呈递增趋势,组间差异极显著（χ^2=34.710,P〈0.01）;而caveolin-1蛋白呈递减趋势,组间差异亦极显著（χ^2=41.806,P〈0.01）。Dnmt1蛋白阳性表达率在性别、年龄、溃疡的大小、有无脉管转移和浸润深度各组间差异不显著（P〉0.05）,而在有无淋巴结侵犯组间差异显著（P〈0.05）;caveolin-1蛋白阳性表达率在性别、年龄各组间阳性表达率差异不显著,而在有无淋巴结转移、浸润深度、有无脉管转移组间阳性表达率差异显著（P〈0.05）。Dnmt1与caveolin-1蛋白表达呈负相关（rs=-0.929,P〈0.05）。结论caveolin-1基因在胃癌组织中的沉默可能由Dnmt1高表达引起的该基因高甲基化而产生,在胃癌发生、发展中可能具有重要作用。

三氧化二砷对MRL/lpr自发性狼疮小鼠脾脏单个核细胞DNMT1及CD_(11a)表达的影响

目的探讨三氧化二砷(ATO)对MRL/lpr自发性狼疮小鼠脾脏单个核细胞(SMC)中DNA甲基转移酶1(DNMT1)和黏附分子淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)的亚基CD11a表达的影响及其可能作用机制。方法分离小鼠SMC,采用20g/ml植物血凝素和1000IU/ml白介素-2体外诱导培养SMC 48h后,随机分为空白组、ATO组和5-氮胞苷(5-Az)组,继续培养24h,采用RT-PCR法检测两组小鼠SMC中DNMT1及CD11a基因转录水平的表达情况。结果MRL/lpr小鼠ATO组中DNMT1-mRNA的灰度比值较5-Az组增高(P<0.05),MRL/lpr小鼠ATO组中CD11a-mRNA的灰度比值较5-Az组降低(P<0.05)。结论ATO治疗系统性红斑狼疮的作用机制可能与其能逆转低甲基化状态有关。

DNMT1和DNMT3B基因多态性与食管癌发病风险的关联分析

目的探讨DNMTl基因多态性位点（rsl6999593，rs2228611）和DNMT3B基因多态性位点（rs2424908）的基因型与食管癌及其病理参数的关联。方法采用病例对照研究，使用MassARRAY检测技术对258例食管癌患者和260例健康对照的3个多态性位点基因型分布进行分析。采用Logistic回归模型分析各基因型与食管癌发生的关系并比较不同基因型与食管癌病理参数的关系。结果DNMT1基因rs16999593位点TC基因型（OR=0．69，95％CI：0．47—1．00）和rs2228611位点GA基因型（OR=0．67，95％CI：0．46—0．98）与食管癌的低风险相关，rs16999593TC、CC基因型与食管癌分化程度相关（中分化：TCvs.TT：OR=0．53，95％CI：0．33—0．86；低分化：CCVS．1Tr：OR=2．79，95％CI：1．12—6．91），rs2228611GA基因型与高分化食管癌（GAVS．GG：OR=0．47，95％CI：0．25～0．88）和无周围淋巴结转移（GAVS．GG：OR=0．62，95％CI：0．39—0．98）有关，DNMT3B基因rs2424908CC基因型与肿瘤Ⅲ-Ⅳ分期（CCVS．Tr：OR=0．38，95％CI：0．15～0．92）及远端淋巴结转移（CCvs．TT：OR=0．18，95％CI：0．40—0．80）相关。结论本研究发现rs16999593和rs2228611位点与食管癌的发生及分化程度相关，rs2228611和rs2424908位点和淋巴结转移相关，rs2424908位点和肿瘤分期有相关性。

DNA甲基转移酶DNMT1与EZH2在急性髓系白血病中的表达及相关性研究

目的 探讨DNA甲基转移酶DNMT1与EZH2在急性髓系白血病（AML）中的表达及其相关性。方法 采用荧光定量PCR技术检测50例AML患者骨髓细胞中DNMT1与EZH2 mRNA的表达水平,分析DNMT1表达水平与临床特征和预后的关系以及与EZH2的相关性。结果 50例AML患者骨髓细胞中DNMT1 mRNA的表达显著高于30例正常供者的（2.72±0.73 vs 0.89±0.27,P〈0.01）;EZH2的表达水平也显著高于正常供者的（4.39±1.06,1.87±0.33,P〈0.01）;EZH2与DNMT1的表达水平呈显著正相关（r=0.51,P=0.002）; DNMT1表达水平与外周血幼稚细胞比例 ≥ 60%（P〈0.05）、WBC ≥ 50×10^9/L（P〈0.05）显著相关; DNMT1高表达组患者中位生存时间15个月（95% CI：9-19个月）,显著低于DNMT1低表达组患者的32个月（95% CI：27-40个月）（P=0.006）。结论 DNMT1和EZH2在AML患者中均高表达,两者表达水平呈正相关,DNMT1与AML患者预后不良相关。

5-Aza-CdR通过DNMT1调控卵巢癌细胞ERCC1基因甲基化及其表达

目的:研究5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)在卵巢癌细胞系SKOV3中对核苷酸切除交叉修复互补基因1(excision repair cross complementation group 1,ERCC1)表达的影响及可能的机制。方法:设计特异性针对DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)基因的shRNA转染入人卵巢癌细胞系SKOV3细胞中,Western blotting检测SKOV3细胞DNMT1以及ERCC1的表达变化;利用不同浓度5-Aza-CdR于不同时间点处理卵巢癌SKOV3细胞,Western blotting检测DNMT1和ERCC1蛋白在处理前后的变化,利用亚硫酸氢钠法检测ERCC1基因启动子区域甲基化水平。结果:0.5、1.0、2.0、4.0μmol/L的5-Aza-CdR作用于SKOV3细胞后,DNMT1表达水平呈浓度依赖性降低,而ERCC1表达水平呈浓度依赖性升高;使用终浓度为1.0μmol/L的5-Aza-CdR处理SKOV3细胞12、24、36 h后,DNMT1表达水平呈时间依赖性降低,而ERCC1表达水平呈时间依赖性升高,亚硫酸氢钠法检测示药物处理前ERCC1启动子区域处于高甲基化水平,在用1.0μmol/L的5-Aza-CdR处理后,其启动子发生了去甲基化。结论:5-Aza-CdR通过DNMT1调控卵巢癌SKOV3细胞中ERCC1基因的甲基化及其表达水平。

利用dCas9-FokⅠ编辑大鼠Dnmt1基因

CRISPR/Cas9的发现为多种生物的基因编辑提供了强有力的工具。然而,该系统在提供靶向性基因修饰的同时,会产生一些不需要的突变,即脱靶现象。为提高CRISPR/Cas9的特异性,我们将野生型Fok I核酸内切酶的功能结构域与催化功能区失活的Cas9蛋白(dCas9)进行融合,形成融合蛋白用于降低脱靶效应。FokⅠ是一种依赖于二聚化才能行使内切酶活性的核酸酶,在本研究中,通过将FokⅠ功能结构融合到dCas9的N端,构建表达质粒p ST1374-dCas9-FokⅠ。我们前期研究中,发现一个sgRNA在介导Cas9编辑Dnmt1基因建立条件敲除大鼠时,存在显著的脱靶现象。以此为基础,我们利用dCas9-FokⅠ/sgRNA系统编辑大鼠Dnmt1基因,研究该系统是否能够进行基因编辑以及是否能够提高基因编辑特异性。将转录好的dCas9-FokⅠmRNA和sgRNA显微注射到SD大鼠的受精卵中,用于产生基因编辑大鼠。通过显微注射以及胚胎移植,最终获得43只F0代大鼠,其中两只在靶点位置包含突变,突变效率达4.5%。对脱靶情况进行分析,结果显示,无脱靶现象存在。综上,表明dCas9-FokⅠ/sgRNA可以应用于编辑大鼠基因,并能显著提高特异性。尽管dCas9-FokⅠ/sgRNA系统相比于Cas9/sgRNA系统,基因编辑效率有所下降,但是该技术的发展为基因治疗提供了可供选择的潜在工具。

DAPK和DNMT1在宫颈癌中的相关性研究

目的探讨宫颈癌中DAPK(Death-associated protein kinase)启动子甲基化与DNMT1 mRNA的表达及两者之间的关系。方法应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)技术检测52例宫颈癌、60例CIN(cervical intraepithelial neoplasia)和20例正常宫颈组织中DAPK启动子甲基化状况;应用原位杂交方法检测DNMT1 mRNA的表达。结果正常宫颈鳞状上皮不存在DAPK基因启动子CpG岛甲基化,而在CIN和宫颈癌中的甲基化率分别为18.3%(11/60)、65.4%(34/52),差异有统计学意义(χ2=39.639,P<0.001)。正常宫颈鳞状上皮、CIN和宫颈癌DNMT1 mRNA阳性率分别为10%、63.3%和78.8%,差异有统计学意义(χ2=29.057,P<0.001)。DAPK异常甲基化和DNMT1 mRNA表达成正相关,r=0.308,P<0.001。结论DAPK异常甲基化和DNMT1 mRNA过表达参与了宫颈癌的发生;DAPK基因启动子的甲基化过程可能是在DNMT1的催化作用下完成的。

杆状病毒介导的DNMT1 siRNA对人胰腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:观察介导DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)基因RNA干扰(RNAi)的杆状病毒载体(Bac-si-DNMT1-D)对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长的影响及毒性反应。方法:建立人胰腺癌SW1990细胞裸鼠移植瘤模型,随机分为4组:空载体组、生理盐水组、低浓度病毒组及高浓度病毒组进行实验。TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡;实时荧光定量PCR检测DNMT1 mRNA表达;蛋白质印迹法检测DNMT1、Bax和Bcl-2蛋白的表达;病理学及血清学检测裸鼠心、肝、肾功能变化。结果:病毒组肿瘤生长较对照组明显被抑制(P<0.05),凋亡指数显著高于两对照组(P<0.01)。病毒组的DNMT1 mRNA表达量显著低于两对照组(P<0.05)。病毒组DNMT1及Bcl-2蛋白表达低于两对照组,但Bax蛋白表达高于两对照组(P<0.01)。各组间裸鼠心、肝及肾未见异常。结论:杆状病毒介导的DNMT1 siRNA载体可以有效降低人胰腺癌裸鼠移植瘤内DNMT1基因表达,抑制肿瘤生长,诱导肿瘤细胞凋亡,且对裸鼠无明显毒性作用。

沉默DNMT1基因对Molt-4细胞增殖、凋亡及组蛋白调控的影响

目的探讨siRNA沉默DNMT1基因对人急性T淋巴细胞性白血病Molt-4细胞增殖、凋亡及组蛋白调控的影响。方法将DNMT1特异性siRNA经LipofectamineTM2000转染Molt-4细胞后,应用RT-PCR检测Molt-4细胞DNMT1 mRNA表达,MTT法绘制细胞生长曲线;流式细胞术分析细胞凋亡。Western blot检测Bcl-2、procaspase-3、P15蛋白表达以及组蛋白甲基化、乙酰化状态的改变。结果 DNMT1 siRNA可沉默DNMT1基因的表达,并呈现浓度依赖性;抑制Molt-4细胞增殖,诱导细胞凋亡。经0、30、60、120 nmol·L-1DNMT1 siRNA作用24h后,细胞凋亡率分别为(4.27±1.42)%,(15.25±1.54)%,(35.63±2.54)%,(66.27±3.02)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。DNMT1 siRNA可上调P15的表达;下调Bcl-2、procaspase-3的表达,下调组蛋白H3K9甲基化水平,上调组蛋白H3K4的甲基化水平,而组蛋白H3乙酰化水平无明显变化。结论 DNMT1 siRNA可以有效地抑制Molt-4细胞中DNMT1的表达,下调组蛋白H3K9甲基化水平,上调组蛋白H3K4的甲基化水平,从而抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡。

DNMT1基因与胃癌RASSF1A基因失活的关系

目的研究胃癌组织及癌旁组织中R ASSF1A表达情况,检测沉默DNMT1基因后胃癌SGC-7901细胞系R ASSF1A基因启动子区甲基化状况及R ASSF1A基因表达。方法逆转录-聚合酶链式反应(reversetranscription polymerase chain reaction,R T-PCR)、免疫组织化学方法检测40例胃癌组织和癌旁组织R ASSF1A基因表达情况;R T-PCR、甲基化特异性聚合酶链反应(methylation specific PCR,MSP)检测5-Aza-CdR、RNA干扰技术沉默DNA甲基转移酶1后SGC-7901细胞后R ASSF1A基因表达及DNA甲基化状态改变。结果胃癌组织RASSF1A基因mRNA及蛋白表达率显著低于癌旁组织,(60%vs100%,P<0.05);不同分化程度、临床分期及有无淋巴结转移的胃癌组织中表达差异有统计学意义(P<0.05);SGC-7901细胞RASSF1A基因表达随5-Aza-CdR浓度和作用时间的增加而增强(P<0.05),沉默DNMT1后R ASSF1A基因重新表达,DNA甲基化状态被逆转。结论 R ASSF1A基因在胃癌组织中存在较高的表达缺失,且与胃癌的临床分期、病理分级及淋巴结转移有关,RASSF1A基因可能在DNMT1基因的调控下发生甲基化,丧失其活性。

DNMT1和p27蛋白在原发性与继发性胶质母细胞瘤中的表达及相关性

目的探讨原发性胶质母细胞瘤和继发性胶质母细胞瘤中DNA甲基转移酶1(DNMT1)蛋白及p27蛋白的表达及相关性。方法收集2000年1月1日至2012年12月31日经手术切除胶质母细胞瘤患者组织蜡块标本64例(原发胶质母细胞瘤32例,继发性胶质母细胞瘤32例)作为研究对象。检测64例胶质母细胞瘤标本和13例正常脑组织中DNMT1蛋白及p27蛋白的表达情况。结果在正常脑组织中,DNMT1蛋白不表达,而在原发性和继发性胶质母细胞瘤中的阳性表达率分别为59.4%和81.3%。在正常脑组织中,p27蛋白的阳性表达率为100.0%,高于其在原发性和继发性胶质母细胞瘤中的50.0%和25.0%(P<0.05)。DNMT1蛋白及p27蛋白在原发性和继发性胶质母细胞瘤中的表达差异存在统计学意义(P<0.05),但两者表达无相关性(r=0.41,P>0.05)。结论 DNMT1蛋白及p27蛋白在原发性和继发性胶质母细胞瘤中的表达存在差异,联合检测肿瘤标本中两者的表达情况有助于判断不同类型胶质母细胞瘤。