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2019—2022年广西鸭圆环病毒分子流行病学研究
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作者 熊陈勇 曾素先 +11 位作者 刘惠心 赵康 施开创 施喻文 谢守玉 韦显凯 龙凤 冯淑萍 屈素洁 王露霞 林昌华 尹彦文 《中国畜牧兽医》 CSCD 北大核心 2024年第1期373-381,共9页
【目的】了解广西鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)的遗传进化特征。【方法】试验于2019—2022年从广西地区采集761份病死鸭临床样本,利用实时荧光定量PCR检测DuCV感染情况。通过PCR扩增DuCV全基因组序列,利用DNAStar分析其与参考毒株... 【目的】了解广西鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)的遗传进化特征。【方法】试验于2019—2022年从广西地区采集761份病死鸭临床样本,利用实时荧光定量PCR检测DuCV感染情况。通过PCR扩增DuCV全基因组序列,利用DNAStar分析其与参考毒株核苷酸和氨基酸序列相似性,使用RDP4和SimPlot 3.5.1软件分析DuCV重组事件,采用Mega 7.0软件构建遗传进化树,应用BioEdit软件分析DuCV Cap蛋白氨基酸变异位点。【结果】DuCV阳性率为22.5%,基因组大小为1988~1996 bp。广西DuCV毒株全基因组、Rep和Cap基因与参考毒株核苷酸序列相似性分别为71.9%~99.6%、83.1%~99.9%和52.8%~99.9%。基因重组分析显示,DuCV-GX13-2019和DuCV-GX14-2020存在重组事件。Cap蛋白共有78个氨基酸位点发生突变,与DuCV-1相比,DuCV-2在第3、12、15、23、31、42、56和64位氨基酸处完全变异。广西毒株为DuCV-1和DuCV-2基因型,DuCV-1为主要优势毒株,且DuCV-1b亚型流行最为广泛。【结论】广西地区DuCV发病较严重,部分毒株存在重组事件,Cap蛋白突变率高,DuCV多种亚型均有流行。研究结果为广西地区DuCV流行病学调查提供基本数据。 展开更多
关键词 鸭圆环病毒(ducv) 遗传进化 相似性 流行病学
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DuCV和GPV与DEV三重PCR检测方法的建立及应用
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作者 田琴 张明华 +3 位作者 周碧君 程振涛 王开功 文明 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期225-230,共6页
根据GenBank中的序列,合成针对鸭圆环病毒(DuCV)REP基因、鹅细小病毒(GPV)NS1基因、鸭肠炎病毒(DEV)UL6基因的3对特异性引物,以病毒的克隆质粒作为模板,进行退火温度、引物终浓度的优化,建立一种能同时鉴别DuCV、GPV、DEV的三重PCR检测... 根据GenBank中的序列,合成针对鸭圆环病毒(DuCV)REP基因、鹅细小病毒(GPV)NS1基因、鸭肠炎病毒(DEV)UL6基因的3对特异性引物,以病毒的克隆质粒作为模板,进行退火温度、引物终浓度的优化,建立一种能同时鉴别DuCV、GPV、DEV的三重PCR检测方法,并检验该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示:试验所建立的三重PCR检测方法的最适退火温度为58.5℃,引物DuCV REP、GPV NS1、DEV UL6的最适终浓度分别为0.9、0.6、0.7μmol/L;该方法能够同时扩增出DuCV、GPV和DEV的特异性片段,而不能扩增出NDV、RA、AIV、DHV和TUMV,表明该方法特异性强;该方法对质粒DuCV、GPV和DEV模板的最低检测量分别为1、100、10 fg,表明该方法敏感性好;运用该方法对DuCV+GPV+DEV、DuCV+GPV、GPV+DEV、DuCV+DEV、DuCV、GPV、DEV进行检测,均能扩增出与预期一致的特异性片段,表明该方法重复性好;运用该方法对42份临床样本进行检测,其检出率分别为26.19%、30.95%和19.05%,与单一PCR的检出结果一致,表明该方法能适用于临床样本的检测。试验建立的方法具有快速、简便、特异性强、敏感性好、重复性好等特点,可用于DuCV、GPV和DEV临床样本混合感染的快速诊断及鉴别诊断。 展开更多
关键词 鸭圆环病毒(ducv) 鹅细小病毒(GPV) 鸭肠炎病毒(DEV) 三重PCR 退火温度 引物终浓度
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广西部分地区鸭圆环病毒感染情况调查 被引量:10
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作者 屈素洁 粟艳琼 +5 位作者 郑敏 覃勇 莫胜兰 陆文俊 梁媛 严斯刚 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第11期156-158,共3页
为了解广西鸭圆环病毒(duck circovirus,DuCV)感染情况,根据已发表的鸭圆环病毒序列合成了1对PCR引物,利用该引物对采集于百色、柳州和桂林3个市的321份鸭组织样品进行了检测。结果表明,58份样品能扩增出228bp的特异条带,总阳性率为18.0... 为了解广西鸭圆环病毒(duck circovirus,DuCV)感染情况,根据已发表的鸭圆环病毒序列合成了1对PCR引物,利用该引物对采集于百色、柳州和桂林3个市的321份鸭组织样品进行了检测。结果表明,58份样品能扩增出228bp的特异条带,总阳性率为18.07%;且3个市均能检出阳性样品,阳性率分别为18%(54/300)、5.6%(1/18)和100%(3/3)。结果证实,广西百色、柳州、桂林地区的鸭群中不同程度地存在鸭圆环病毒感染现象。 展开更多
关键词 鸭圆环病毒 聚合酶链式反应 流行病学调查
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鸭圆环病毒Cap基因在昆虫细胞杆状病毒系统中的表达及鉴定 被引量:4
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作者 张兴晓 邹金峰 +4 位作者 相琪旺 王鑫 陈琳 谢之景 姜世金 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期7-11,共5页
通过PCR方法扩增完整的鸭圆环病毒Cap基因,按正确的阅读框架将其克隆入pFastBacTM HTB杆状病毒载体,将筛选的阳性重组载体pF-CP转化至含有杆状病毒穿梭载体和辅助载体的DH10Bac大肠杆菌感受态细胞,经过蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组表... 通过PCR方法扩增完整的鸭圆环病毒Cap基因,按正确的阅读框架将其克隆入pFastBacTM HTB杆状病毒载体,将筛选的阳性重组载体pF-CP转化至含有杆状病毒穿梭载体和辅助载体的DH10Bac大肠杆菌感受态细胞,经过蓝白斑筛选和PCR鉴定,获得重组表达载体rBacmid-CP。在脂质体的介导下转染Sf9昆虫细胞,72h后获得重组杆状病毒。Western blot和间接免疫荧光(IFA)试验结果表明,表达的蛋白与原核表达Cap蛋白免疫小鼠采集的血清具有良好的反应原性,为进一步研究Cap蛋白的功能奠定基础。 展开更多
关键词 鸭圆环病毒 Cap基因 昆虫细胞-杆状病毒表达系统 IFA
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Epidemiological Investigation and Genome Analysis of Duck Circovirus in Southern China 被引量:11
5
作者 Chun-he Wan Guang-hua Fu Shao-hua Shi Long-fei Cheng Hong-mei Chen Chun-xiang Peng Su Lin Yu Huang 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2011年第5期289-296,共8页
Duck circovirus (DuCV), a potential immunosuppressive virus, was investigated in Southern China from March 2006 to December 2009 by using a polymerase chain reaction (PCR) based method. In this study, a total of 1... Duck circovirus (DuCV), a potential immunosuppressive virus, was investigated in Southern China from March 2006 to December 2009 by using a polymerase chain reaction (PCR) based method. In this study, a total of 138 sick or dead duck samples from 18 different farms were examined with an average DuCV infection rate of-35%. It was found that ducks between the ages of 40~60 days were more susceptible to DuCV. There was no evidence showing that the DuCV virus was capable of vertical transmission. Farms with positive PCR results exhibited no regularly apparent clinical abnormalities such as feathering disorders, growth retardation or lower-than-average weight. The complete genomes of 91 strains from Fujian Province and 1 from Zhejiang Province were sequenced and analyzed. The 10 DuCV genomes, comlbared with others genomes downloaded from GenBank, ranged in size from 1988 to 1996 base pairs, with sequence identities ranging from 83.2% to 99.8%. Phylogenetic analysis based on genome sequences demonstrated that DuCVs can be divided into two distinct genetic genotypes, Group I (the Euro-USA lineage) and Group II(the Taiwan lineage), with approximately 10.0% genetic difference between the two types. Molecular epidemiological data suggest there is no obvious difference among DuCV strains isolated from different geographic locations or different species, including Duck, Muscovy duck, Mule duck, Cheery duck, Mulard duck and Pekin duck. 展开更多
关键词 Duck circovims(ducv) Epidemiological investigation GENOME Phylogenetic analysis
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PCR Detection and Sequence Analysis of Duck Circovirus in Sick Muscovy Ducks 被引量:7
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作者 Shi-jin JIANG Xing-xiao ZHANG +5 位作者 Shao-ning LIU Yu WANG Yi-bo KONG Xiu-li WEI Ya-ni SUN Qin ZHAO 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2008年第4期265-271,共7页
The duck circovirus (DuCV) infection in sick ducks from Fujian Province was investigated. The liver samples of 43 sick Muscovy ducks with infectious serositis were collected from 12 duck farms in Fujian Province Bas... The duck circovirus (DuCV) infection in sick ducks from Fujian Province was investigated. The liver samples of 43 sick Muscovy ducks with infectious serositis were collected from 12 duck farms in Fujian Province Based on the published sequences of DuCV, two primers were designed for the detection of DuCV and four pairs of primers were designed to amplify four overlapping fragments that cover the complete genome of DuCV. The specific PCR products were amplified from positive samples. The fragments were then cloned into pMD18-T vector and sequenced, and the full length genomic sequence of the FJ0601 isolate of DuCV was obtained. PCR analysis showed that the proportion of ducks which were positive for circovirus was 79% and 10 out of the 12 farms were positive. Sequence analysis showed that the complete genome of DuCV-FJ0601 was 1988 bp and possessed features common to the family Circoviridae which included a stem-loop structure and the Rep protein motifs. Homology analysis showed that FJ0601 isolate of DuCV had 97.3%-97.5% nucleotide sequence identity to all the four Taiwan isolates (TC1/2002, TC2/2002, TC3/2002, TC4/2002), 82.9% identity to the America (33753-52) isolate and 82.3% identity to the Germany isolate. Phylogenetic analysis with Clustal W, however, showed that FJ0601 isolate of DuCV was on a common branch with Taiwan isolates, and Germany and America isolates belonged to the other branch. 展开更多
关键词 Duck Circovirus (ducv) PCR Full length genome Sequence analysis
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广西鸭圆环病毒流行毒株遗传变异分析 被引量:9
7
作者 粟艳琼 郑敏 +2 位作者 张步娴 屈素洁 莫胜兰 《动物医学进展》 北大核心 2015年第10期20-25,共6页
为了解广西鸭圆环病毒(DuCV)流行毒株的遗传变异情况,进一步为研制鉴别诊断DuCV方法和制定科学防控措施奠定基础。采用PCR方法对采自广西不同地区的阳性鸭组织样品进行了全基因组扩增和测序,共获得14个完整的DuCV全基因组序列。与GenBan... 为了解广西鸭圆环病毒(DuCV)流行毒株的遗传变异情况,进一步为研制鉴别诊断DuCV方法和制定科学防控措施奠定基础。采用PCR方法对采自广西不同地区的阳性鸭组织样品进行了全基因组扩增和测序,共获得14个完整的DuCV全基因组序列。与GenBank中登录的52个国内外DuCV毒株进行遗传进化分析及同源性比较。结果表明,当前广西同时存在基因1.1亚型、基因1.2亚型和基因2.1亚型3种不同的DuCV毒株在流行,其中基因1.1亚型和1.2亚型为优势流行毒株。 展开更多
关键词 鸭圆环病毒 流行毒株 遗传变异
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鸭圆环病毒Cap蛋白的原核表达 被引量:2
8
作者 粟艳琼 郑敏 +3 位作者 莫胜兰 屈素洁 张步娴 梁媛 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第3期19-23,共5页
为表达鸭圆环病毒(DuCV)Cap蛋白,通过Gene Designer 2.0软件对DuCV Cap基因进行分析和密码子优化,构建DuCV Cap基因重组表达质粒pET-32a-Cap,转化BL21(DH3)株感受态细胞。用终浓度为0.1mmol/L的IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE电泳分析显示... 为表达鸭圆环病毒(DuCV)Cap蛋白,通过Gene Designer 2.0软件对DuCV Cap基因进行分析和密码子优化,构建DuCV Cap基因重组表达质粒pET-32a-Cap,转化BL21(DH3)株感受态细胞。用终浓度为0.1mmol/L的IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE电泳分析显示Cap融合蛋白的分子质量约为48ku,表达的重组蛋白占菌体总蛋白的43.1%。Western blot检测显示该融合蛋白可以被针对His标签蛋白的抗体所识别。利用镍离子亲和纯化株对重组蛋白进行了纯化,纯度为92.3%。为进一步建立DuCV血清学检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭圆环病毒 CAP蛋白 原核表达
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我国自然发病鸭群中鸭圆环病毒的流行病学调查 被引量:18
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作者 刘少宁 张兴晓 +5 位作者 陈智 高继明 魏秀丽 孔义波 朱岩丽 姜世金 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1402-1405,共4页
为了解鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)在我国鸭群中的感染状态,从我国养鸭业比较集中的山东、江苏、四川、福建、广东5个省份36个鸭群采集临床有发病表现的343只病、死鸭的病理组织样品,以提取的组织DNA为模板通过特异性斑点杂交和PC... 为了解鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)在我国鸭群中的感染状态,从我国养鸭业比较集中的山东、江苏、四川、福建、广东5个省份36个鸭群采集临床有发病表现的343只病、死鸭的病理组织样品,以提取的组织DNA为模板通过特异性斑点杂交和PCR方法检测DuCV的感染情况。结果显示上述5个省份的鸭均检出了DuCV,病、死鸭中DuCV的个体阳性率为81.63%(280/343),群体阳性率为94.44%(34/36)。结果表明我国鸭群中已普遍存在DuCV的感染。 展开更多
关键词 鸭圆环病毒 流行病学调查 PCR 核酸探针杂交
原文传递
鸭圆环病毒核酸探针的制备与应用 被引量:10
10
作者 邹金峰 刘少宁 +4 位作者 雷战 孙慧 魏宗 王鑫 姜世金 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1578-1581,共4页
用地高辛标记鸭圆环病毒(DuCV)全基因组克隆制成核酸探针,与鸭病毒性肝炎Ⅰ型病毒(DHV-Ⅰ)的cD-NA、鸭瘟病毒(DPV)的DNA和DuCV的DNA进行斑点杂交以检测核酸探针的特异性,结果该探针只与DuCV的DNA杂交呈阳性。敏感性结果表明,该探针对DuC... 用地高辛标记鸭圆环病毒(DuCV)全基因组克隆制成核酸探针,与鸭病毒性肝炎Ⅰ型病毒(DHV-Ⅰ)的cD-NA、鸭瘟病毒(DPV)的DNA和DuCV的DNA进行斑点杂交以检测核酸探针的特异性,结果该探针只与DuCV的DNA杂交呈阳性。敏感性结果表明,该探针对DuCV的最低检出量约为5pg DuCV的DNA。应用该探针对从山东、江苏、四川等地采集的196只鸭病料,共980份脏器的组织DNA进行检测,结果个体阳性率为33.2%(65/196),在各脏器中法氏囊和肝脏中DuCV检出率较高,检出率分别为52.3%和49.2%。同时对上述样品进行PCR检测,核酸探针检测与PCR检测2种方法的符合率为87.5%。结果表明,制备的DIG标记的核酸探针特异性强、敏感性高,适合对DuCV进行诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 鸭圆环病毒 核酸探针 检测
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检测2种基因型鸭圆环病毒双重PCR方法的建立与应用 被引量:7
11
作者 李志国 王鑫 +5 位作者 张瑞华 陈君豪 夏琳琳 林少莉 谢之景 姜世金 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1060-1063,1068,共5页
为了研究2种基因型鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)在我国鸭群中的混合感染情况,根据鸭圆环Cap蛋白基因序列设计了4条特异性引物,建立了可以同时检测2种基因型DuCV的双重PCR检测方法。结果显示,该方法特异性强,灵敏度高,最低可检测到... 为了研究2种基因型鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)在我国鸭群中的混合感染情况,根据鸭圆环Cap蛋白基因序列设计了4条特异性引物,建立了可以同时检测2种基因型DuCV的双重PCR检测方法。结果显示,该方法特异性强,灵敏度高,最低可检测到1拷贝的DuCV核酸。使用建立的双重PCR方法对收集的山东省6个鸭群150只病死雏鸭的组织DNA进行检测,结果显示有50.0%(3/6)的鸭群检出DuCV-1和DuCV-2的混合感染,33.33%(2/6)的鸭群检出DuCV-2的单独感染。19只雏鸭被检出感染DuCV,其中2.67%(4/150)的雏鸭检出DuCV-1和DuCV-2的混合感染,10.0%(15/150)的雏鸭只感染DuCV-1或DuCV-2。结果表明,山东省鸭群中存在较为严重的DuCV-1和DuCV-2混合感染的现象。 展开更多
关键词 鸭圆环病毒 双重PCR 基因型 检测
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广西鸭圆环病毒全基因组的序列分析 被引量:2
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作者 粟艳琼 郑敏 +8 位作者 莫胜兰 屈素洁 梁媛 陆文俊 胡杰 苏凯 陈玉华 李军 刘棋 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期354-358,共5页
采用PCR方法从广西临床发病番鸭组织中分段扩增获得了鸭圆环病毒(duck circovirus,DuCV)LZ/11/09株的全长基因组,将扩增片段分别克隆,获得重组质粒。测序结果表明,LZ/11/09株基因组全长1 994bp,含有4个开放阅读框(ORF),其中V1和C1是主要... 采用PCR方法从广西临床发病番鸭组织中分段扩增获得了鸭圆环病毒(duck circovirus,DuCV)LZ/11/09株的全长基因组,将扩增片段分别克隆,获得重组质粒。测序结果表明,LZ/11/09株基因组全长1 994bp,含有4个开放阅读框(ORF),其中V1和C1是主要的2个ORF,分别编码Rep蛋白和Cap蛋白;在V1和C1的5′端之间存在与启动滚环复制有关的1个茎环结构和2个正向重复序列。遗传进化分析发现,DuCV可分为2个遗传分支,LZ/11/09株与YS07、FJzq290、MH25、Zhejiang、33753-52和Germany株等同处一个进化分支,而与WF0802和TC1/2002株的关系较远。 展开更多
关键词 鸭圆环病毒 全基因组 序列分析
原文传递
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