血清卵泡抑素（FS）水平检测对子宫内膜异位症（EMT）的临床诊断价值

目的研究血清FS水平检测对EMT的临床诊断价值。方法选取2014年5月～2016年5月舟山市妇幼保健院收治的EMT患者40例，在疾病类型方面，24例患者在卵巢型，16例患者在卵巢外。将这些患者作为EMT组，另选取本院同期收治的40例卵巢良性肿瘤患者作为良性组，选取同期本院进行体检的40例健康人员作为对照组，运用ELISA法及对其血清FS水平进行检测，运用ECISA对其血清CA125水平进行检测，然后对3组人员的血清FS、CA125水平、EMT组中卵巢型、卵巢外患者经血清FS、CA125诊断的准确度进行统计分析。结果EMT组中卵巢型患者的血清FS水平显著高于卵巢外（P＜0.05）；EMT组中卵巢型、卵巢外患者的血清FS、CA125水平均显著高于良性组、对照组（P＜0.05），而良性组患者的血清FS、CA125水平又均显著高于对照组（P＜0.05）。EMT组中卵巢型、卵巢外患者经血清FS诊断的敏感度、特异度均显著高于血清CA125（P＜0.05）。结论血清FS水平检测对EMT较CA125具有较高的临床诊断价值。

基于NFAT5介导的EMT研究益糖康改善高血糖对肾脏早期损伤的作用机制

目的探讨活化T细胞核因子5(nuclear factor of activated T cells 5,NFAT5)对高糖诱导人肾小管上皮HK-2细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响以及益糖康改善高血糖对肾脏早期损伤的作用机制。方法SD雄性大鼠20只,随机分成生理盐水组和益糖康组,每组10只。生理盐水组给予1 mL/100 g生理盐水灌胃,益糖康组给予2.10 g/100 g益糖康煎剂灌胃,连续5 d,腹主动脉取血,离心分离上清。通过高糖诱导HK-2细胞构建早期糖尿病肾病体外模型,并加入相应的药物进行干预。分别采用qRT-PCR和Western blot实验检测转染NC-siRNA(NC-siRNA组)/NFAT5-siRNA(NFAT5-siRNA组)或生理盐水含药血清处理(NS组)/益糖康含药血清处理(YTK组)以及益糖康含药血清处理同时转染GV492-Empty(YTK+GV492-Empty组)/GV492-NFAT5(YTK+GV492-NFAT5组)细胞中NFAT5、E-cadherin以及Vimentin mRNA和蛋白表达水平的改变。再分别采用划痕和Transwell实验检测各组细胞迁移力和侵袭力的改变。结果转染NFAT5-siRNA能够明显抑制NFAT5 mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.05)的表达;与NC-siRNA组相比较,NFAT5-siRNA组细胞中E-cadherin mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.01)的表达水平显著升高,Vimentin mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.01)的表达水平显著降低,细胞的迁移力(P<0.05)和侵袭力(P<0.01)均明显减弱。与NS组相比较,YTK组细胞中NFAT5 mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.05)的表达水平明显降低。转染GV492-NFAT5能够明显促进NFAT5 mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.01)的表达;与YTK+GV492-Empty组相比较,YTK+GV492-NFAT5组细胞中E-cadherin mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.01)的表达水平显著降低,Vimentin mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.01)的表达水平显著升高,细胞的迁移力(P<0.05)和侵袭力(P<0.05)均明显增强。结论在高糖环境下,NFAT5会促进人肾小管上皮细胞发生EMT;益糖康能够通过下调NFAT5表达抑制肾小管上皮细胞发生EMT从而改善高血糖对肾脏的早期损伤。

miR-544靶向TGF-β抑制神经胶质母细胞瘤细胞迁移、侵袭及EMT

目的探究miR-544在神经胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程中的作用及机制。方法采用RT-qPCR检测miR-544及TGF-β在GBM组织和癌旁组织、GBM转移与非转移的病人血清中的表达。在GBM细胞系U251中转染MiR-544 mimics。采用Transwell、Western boltting检测细胞迁移及侵袭,EMT相关蛋白(E-cadherin和N-cadherin)的变化。荧光素酶报告基因验证miR-544与TGF-β基因3’UTR区结合。结果miR-544在GBM组织及转移组中表达显著降低;TGF-β显著升高(P<0.05)。荧光素酶报告证实miR-544靶向调节TGF-β3’-UTR区域。miR-544 mimics组及si-TGF-β组与NC组相比,细胞迁移与侵袭数目减少(P<0.05);E-cadherin蛋白表达增加,N-cadherin蛋白表达减少(P<0.05)。miR-544mimics+pcDNA-TGF-β组部分逆转了miR-544 mimics对细胞迁移与侵袭和EMT相关蛋白的表达的作用(P<0.05)。结论miR-544靶向调控TGF-β是其参与EMT过程的作用机制之一。

解毒消癥饮抑制大肠癌细胞EMT及PD-L1表达相关研究

目的:从上皮间质转化(EMT)及免疫检查点配体-1 (PD-L1)角度探讨解毒消癥饮治疗大肠癌的生物学机制。方法:从TCGA数据库收集267例大肠癌患者相关数据,采用生物信息学分析大肠癌患者肿瘤特异性生存期与EMT和PD-L1的相关性;采用热图分析EMT相关转录因子与PD-L1之间的相关性,划痕实验检测解毒消癥饮对大肠癌细胞HCT-15和HCT-116愈合能力的影响,Western blot实验检测解毒消癥饮对大肠癌细胞HCT-15和HCT-116 EMT相关因子ZEB1、Snail、PD-L1、ZO-1和E-cadherin等蛋白表达的影响。结果:高表达EMT和高表达PD-L1显著降低了CRC患者生存期(P<0.01,P<0.05);PD-L1基因的表达与EMT相关因子基因(TWIST1、TWIST2、ZEB1、ZEB2、Snail1、Snail2、Vimentin等)表达呈正相关;解毒消癥饮干预后的大肠癌细胞愈合能力显著降低(P<0.05);同时,解毒消癥饮抑制肠癌细胞中EMT因子蛋白ZEB1、Snail、PD-L1的表达,上调ZO-1和E-cadherin蛋白的表达。结论:解毒消癥饮抑制肠癌EMT和免疫检查点配体PD-L1表达,对肠癌的抑制作用与抗肿瘤转移和调节免疫微环境相关。

EMT在肝细胞肝癌耐药中的分子机制研究进展

肝细胞肝癌肿瘤组织的高度异质性使得肝细胞肝癌患者经常对化疗药物及靶向药物产生耐药。研究表明,上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程中调控EMT的转录因子、细胞因子及相关的信号通路和一些非编码RNA介导了肝细胞肝癌的耐药。此外,发生EMT的肝细胞显示出类似癌症干细胞的特征—对药物原发耐药。EMT在肝癌耐药的发展中起着不可忽视的作用,为此我们就EMT在肝细胞肝癌耐药机制中的作用及靶向EMT治疗肝细胞肝癌的可行性进行综述。

POSTN对人下咽癌细胞增殖、凋亡和EMT的影响

目的研究骨膜蛋白(Periostin,POSTN)对人下咽癌细胞增殖、凋亡和上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响和机制。方法通过TIMER2数据库分析POSTN基因在头颈部肿瘤中的表达情况。培养人下咽癌FaDu细胞,构建转染si-POSTN的实验组(si-POSTN1组、si-POSTN2组、si-POSTN3组)和转染阴性对照序列si-NC的对照组(NC组),然后通过PCR实验筛选出POSTN基因敲低效率较高的两组,用于后续的实验。CCK-8和细胞集落形成实验检测增殖情况;划痕和Transwell实验检测迁移和侵袭能力;Western blot实验检测凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)和EMT相关蛋白(N-cadherin、E-cadherin、Vimentin、Snail)的表达情况;PCR实验检测TGF-β/Smad通路相关基因(TGF-β1、SMAD2、SMAD3)mRNA的表达情况。结果PCR实验发现si-POSTN1组和si-POSTN2组POSTN mRNA表达量比si-POSTN3组低(P<0.05),故选择si-POSTN1和si-POSTN2序列进行后续实验。与NC组相比,si-POSTN1组和si-POSTN2组POSTN的蛋白表达量下降(P<0.001)。与NC组相比,si-POSTN1组和si-POSTN2组细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显降低(P<0.05)。与NC组相比,si-POSTN1组和si-POSTN2组凋亡相关蛋白Bax的表达量上升而Bcl-2的表达量减少(P<0.01),EMT相关蛋白E-cadherin的表达量增加而N-cadherin、Vimentin和Snail的表达量均减少(P<0.05)。与NC组相比,si-POSTN1组和si-POSTN2组TGF-β1、SMAD2、SMAD3的mRNA表达量均降低(P<0.01)。结论POSTN会增强下咽癌细胞迁移、侵袭、增殖的能力,促进EMT的进程,抑制细胞凋亡,其机制可能是通过TGF-β/Smad通路来调控。

大蒜素通过GSK-3β/β-catenin信号通路抑制舌鳞状细胞癌EMT的研究

本研究旨在探讨大蒜素(Allicin)对舌鳞状细胞癌上皮向间充质转化(EMT)的影响,并探究其作用机制。本实验采用CCK-8法检测不同剂量大蒜素对HSC-3和HSC-4细胞的生存作用并计算半数抑制作用(IC_(50));划痕和Transwell小室实验测定大蒜素对细胞的迁移能力和侵袭影响;Western Blot检测蛋白表达。结果显示,大蒜素对HSC-3和HSC-4细胞活性有抑制作用且具有时间和剂量依赖性;不同浓度(20、40、60μmol/L)的大蒜素能够抑制HSC-3和HSC-4细胞迁移和侵袭;Western Blot结果显示大蒜素能够升高EMT标志物E-cadherin表达,降低N-cadherin和Vimentin表达,同时对GSK-3β/β-catenin信号通路中P-GSK-3β和β-catenin蛋白起到抑制作用。结果表明,大蒜素能够抑制舌鳞状细胞癌HSC-3和HSC-4细胞侵袭和迁移,其机制可能是通过抑制GSK-3β/β-catenin信号通路逆转EMT发生实现的。

Trim37过表达通过激活Wnt/β-catenin通路促进乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及EMT

目的:探讨Trim37通过Wnt/β-catenin通路对乳腺癌发展的影响及其作用机制。方法:实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)和Western blot检测Trim37在乳腺癌组织、癌旁正常组织、人乳腺癌细胞(MCF-7细胞)和人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A细胞)中的表达。pcDNA-Trim37或Trim37 siRNA转染MCF-7细胞后,CCK-8法检测过表达及下调Trim37对细胞增殖的影响,Transwell实验检测过表达及下调Trim37对细胞侵袭的影响,细胞划痕愈合实验检测过表达及下调Trim37对细胞迁移的影响,Western blot检测过表达及下调Trim37对细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Snail)及β-catenin、CyclinD1、p-ERK、p-AKT和p-FAK蛋白表达的影响。Wnt/β-catenin通路抑制剂(XAV939)作用MCF-7细胞后,检测MCF-7细胞增殖、侵袭、迁移和EMT能力。结果:与癌旁正常组织相比,乳腺癌组织中Trim37 mRNA和蛋白表达量明显升高(P<0.01);与MCF-10A细胞相比,MCF-7细胞中Trim37 mRNA和蛋白表达量明显升高(P<0.01)。过表达Trim37促进了MCF-7细胞增殖、侵袭、迁移与EMT,β-catenin和CyclinD1蛋白表达量明显上升;下调Trim37抑制了MCF-7细胞增殖、侵袭、迁移与EMT,β-catenin和CyclinD1蛋白表达量明显降低,过表达及下调Trim37对ERK、AKT和FAK蛋白的磷酸化水平没有影响。XAV939作用MCF-7细胞后抑制了过表达Trim37对MCF-7细胞增殖、侵袭、迁移和EMT的促进作用。结论:过表达Trim37通过激活Wnt/β-catenin通路诱导EMT来促进乳腺癌的发展。

鞣花酸调控Nrf2和NLRP3通路影响TGF-β所致AML-12细胞EMT的作用

研究了鞣花酸(EA)对TGF-β所致小鼠AML-12正常肝细胞上皮-间质转化(EMT)的影响及其可能机制.通过细胞活力评价、细胞形态观察和细胞内ROS水平检测,评价了EA对TGF-β所致AML-12细胞EMT的作用.通过免疫荧光和免疫印迹检测了细胞内EMT标志蛋白钙黏蛋白E(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达;免疫印迹检测了细胞内Nrf2和NLRP3通路相关因子的表达水平.结果显示:EA显著抑制了TGF-β所致AML-12细胞EMT.进一步研究表明,EA可以诱导Nrf2入核并上调其下游抗氧化基因的表达.EA还可以下调NLRP3炎症通路相关蛋白的表达.综上所述,EA对TGF-β诱导的AML-12小鼠肝细胞EMT具有抑制作用,其机制可能与调控Nrf2抗氧化通路与NLRP3炎症通路有关.

miR-100-5p调控甲状腺乳头状癌细胞的增殖、迁移、侵袭及EMT进程

目的:探讨miR-100-5p对甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化(EMT)进程的影响。方法:通过GEO数据库下的miRNA微阵列数据集(GSE104006、GSE73182、GSE151180),选取变化倍数[|log2Fold Change(FC)|>1]和adj.P.Val<0.05的miRNA进行交集。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-100-5p在PTC细胞系(TPC-1和B-CPAP)和人正常甲状腺细胞系(Nthy-ori 3-1)中的表达趋势。合成miR-100-5p相关的模拟物(mimics-100-5p)、抑制剂(inhibitor-100-5p)以及对应的对照组(mimics-NC和inhibitor-NC)。分别转染PTC细胞系,通过Edu实验、平板克隆实验、划痕愈合实验、Transwell实验深入研究miR-100-5p对PTC细胞的影响。通过蛋白印迹实验检测转染mimics-100-5p、inhibitor-100-5p及对应NC组MMP-9和EMT相关标志蛋白的表达趋势。结果:三个miRNA微阵列数据库共同交集于miR-100-5p。与人正常甲状腺细胞系Nthy-ori 3-1相比,miR-100-5p在PTC细胞系中低表达。qRT-PCR验证转染成功。Edu实验、平板克隆实验显示过表达miR-100-5p细胞的增殖速率明显降低,而敲低miR-100-5p后结果与之相反。划痕愈合实验和Transwell实验显示过表达miR-100-5p的TPC-1细胞的迁移和侵袭能力受限,而敲低miR-100-5p的结果与之相反。蛋白印记实验显示过表达miR-100-5p后MMP-9、VIM蛋白表达趋势明显降低,而E-cad蛋白表达上升,敲低miR-100-5p可以逆转过表达miR-100-5p的结果。结论:miR-100-5p负调控PTC细胞的增殖、迁移和侵袭。此外,miR-100-5p还参与介导PTC的上皮间质转化进程。

HER-2通过影响EMT增强胃癌细胞的侵袭、迁移及黏附能力

目的:研究HER-2表达对胃癌细胞侵袭、迁移及黏附的影响,并探讨HER-2表达与EMT相关蛋白的关系。方法:利用小干扰RNA技术,在MKN-45胃癌细胞中沉默HER-2表达;采用实时荧光定量PCR法及Western blot法验证HER-2沉默效果,并将实验分为空白对照组、阴性对照组和HER-2沉默组;采用实时荧光定量PCR法及Western blot法检测各组细胞EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、Snail的mRNA和蛋白表达情况。采用Transwell小室技术检测细胞侵袭及迁移能力;MTT实验检测细胞黏附能力。结果:沉默MKN-45胃癌细胞株中HER-2表达后,HER-2沉默组Vimentin、Snail表达水平以及侵袭、迁移及黏附能力明显低于空白对照组和阴性对照组;HER-2沉默组E-cadherin表达水平明显高于空白对照组和阴性对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:在胃癌细胞中,HER-2可能通过影响EMT相关蛋白表达从而增强胃癌细胞的侵袭、迁移及黏附能力。

桃红四物汤通过JAK2/STAT3信号通路对肺纤维化模型大鼠凋亡及EMT的影响

目的探索桃红四物汤通过酪氨酸激酶2/信号传导与转录激活子3(Janus kinase 2/signal transducing activator of transcription,JAK2/STAT3)信号通路对肺纤维化模型大鼠凋亡及EMT的影响。方法将40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、甲泼尼龙组、桃红四物汤低浓度组、桃红四物汤高浓度组,每组8只,气管内滴入博来霉素(bleomycin,BLM)建立IPF模型。HE及Masson染色观察肺组织形态学改变;ELISA检测大鼠血清MMP-7、TGFβ-1、TNF-α的含量;免疫组化和Western blot测定肺组织JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、E-cadherin、α-SMA蛋白的表达;RT-PCR检测肺组织JAK2、STAT3、Bcl-2、Bax基因表达。结果与正常组相比,模型组大鼠肺泡炎症和纤维化程度,血清中TNF-α、MMP-7、TGFβ-1的含量,肺组织JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、α-SMA蛋白表达,JAK2、STAT3、Bax基因表达水平均升高,Bcl-2基因及E-cadherin蛋白表达水平均降低。与模型组相比,桃红四物汤高浓度组大鼠肺组织肺泡炎症和纤维化程度,血清中TNF-α、MMP-7、TGFβ-1的含量,肺组织JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、α-SMA蛋白表达,JAK2、STAT3、Bax基因表达水平均降低,Bcl-2基因及E-cadherin蛋白表达升高。结论桃红四物汤可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路,下调Bax、α-SMA和上调Bcl-2、E-cadherin的表达诱导肺纤维化模型大鼠凋亡及EMT,从而发挥抗肺纤维化作用。

CD24在三阴性乳腺癌中的表达及与EMT的关系

目的:探讨三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)中CD24表达与临床病理特征的关系,分析其表达对上皮间质转化(EMT)的影响。方法:通过基因表达谱动态分析数据库(Gene expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)分析CD24在不同乳腺癌亚型中的表达情况;Kaplan-Meier Plotter在线数据库分析CD24的表达与乳腺癌患者相关预后因素的关系;收集73例三阴性乳腺癌患者癌组织病理切片,免疫组化法检测分析CD24的表达与三阴性乳腺癌临床病理特征的关系;流式细胞术分选CD24^(high/low)细胞亚群,Transwell小室检测CD24^(high/low)细胞不同的迁移能力,Western blot检测CD24^(high/low)与上皮间质转化相关蛋白的变化关系。结果:与正常乳腺组织相比,CD24在癌组织中明显高表达,其在TNBC组织中的表达量最高(P<0.05)。与CD24^(low)组比较,CD24^(high)组患者的预后更差(P<0.05)。免疫组化提示,CD24在TNBC中高表达,阳性率达82.19%,CD24的表达与患者的年龄、肿瘤大小、组织学分级、TNM分期均无关(P>0.05),仅与淋巴结有无转移相关(P<0.05)。Transwell小室结果表明,CD24^(low)细胞群的迁移能力明显弱于CD24^(high)细胞群(t=22.814,P<0.05)。Western blot结果显示,CD24^(low)组的E-cadherin和β-catennin蛋白水平明显低于CD24^(high)组,而N-cadherin和Vimentin蛋白水平明显高于CD24^(high)组,以上指标差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论:CD24在三阴性乳腺癌中高表达,其表达与EMT相关蛋白相关,可能参与肿瘤的远处转移,可作为评估患者预后的潜在指标。

肺岩宁下调转录因子Snail表达抑制人肺腺癌A549细胞EMT发生及侵袭转移

目的研究肺岩宁抑制人肺腺癌A549细胞侵袭转移的分子机制。方法体外培养A549细胞,细胞计数试剂盒(Cell counting kit 8,CCK-8)检测不同浓度的肺岩宁对A549细胞生长增殖的影响;细胞形态学观察和免疫印迹实验(Western blot)检测转化生长因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)对A549细胞上皮间质转化(Epithelial mesenchymal transformation,EMT)发生的影响;Western blot、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)实验检测TGF-β1诱导前后,肺岩宁对A549细胞EMT标志蛋白及mRNA表达变化;划痕实验、Transwell实验检测TGF-β1诱导前后,肺岩宁对A549细胞侵袭和迁移能力的影响变化;构建稳定过表达Snail的A549细胞株,Western blot、RT-qPCR实验检测稳定过表达锌指转录因子(Snail)后,肺岩宁对A549细胞EMT标志蛋白及mRNA表达变化;划痕实验、Transwell实验检测稳定过表达Snail后,肺岩宁对A549细胞侵袭和迁移能力的影响变化。结果不同浓度的肺岩宁处理后,A549细胞的生长受到不同程度的抑制(P<0.01);10 ng·mL^(-1)的TGF-β1可以诱导A549细胞EMT发生;与对照组比较,TGF-β1诱导后,A549细胞侵袭迁移能力增加(P<0.01),而与TGF-β1组比较,肺岩宁能够抑制A549细胞的侵袭迁移能力(P<0.01)、上调A549细胞中E钙黏蛋白(E-cadherin)及Ecadherin mRNA的表达(P<0.01),下调N钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和Snail及其mRNA的表达(P<0.05),抑制A549细胞EMT发生;与TGF-β1诱导组比较,稳定过表达Snail能够减弱肺岩宁对A549细胞的侵袭转移能力的抑制作用(P<0.01)、减弱肺岩宁对A549细胞中E-cadherin及其mRNA表达的上调作用(P<0.01)、N-cadherin、Snail(P<0.01)Vimentin(P>0.05)和及其mRNA表达的下调作用。结论肺岩宁方可能通过下调转录因子Snail的表达抑制A549细胞EMT发生及其侵袭转移。

NEK2与EMT相关分子在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨NEK2与EMT相关分子在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达及意义。方法:采用免疫组织化学方法检测60例原发性OSCC组织及正常口腔黏膜组织中NEK2和EMT相关分子(E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin)的表达水平,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测25例OSCC组织和10例正常口腔黏膜中NEK2 mRNA的表达水平。采用SPSS 26.0软件包对数据进行统计学分析。结果:OSCC组织中NEK2、NCadherin、Vimentin表达显著升高,E-Cadherin表达显著下降(P<0.05);分化越差,NEK2表达越高,E-Cadherin表达越低(P<0.05)。结论:NEK2可作为初步判断OSCC预后的标志物。NEK2的表达上调,EMT相关分子表达水平的变化导致细胞间黏附力下降,侵袭性增强,促进肿瘤的发生、发展。

达格列净通过Rffl抑制STAT1/TGF-β1信号通路改善糖尿病肾病肾小管上皮细胞EMT和纤维化

目的:探讨达格列净对糖尿病肾病肾小管上皮细胞的上皮细胞-间充质转化和纤维化的影响及分子机制。方法:体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,分为对照组、高糖组、低剂量达格列净+高糖组和高剂量达格列净+高糖组。用Western blot与RT-PCR分别检测E3泛素连接酶Rffl的表达水平。Western blot检测各组上皮细胞钙黏蛋白(epithelial cadherin,E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤连蛋白(Fibronectin)、转化生长因子-β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)、信号转导与转录激活因子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)的表达水平。在HK-2细胞中过表达Rffl后,Western blot检测E-cadherin、α-SMA、Fibronectin、TGF-β1、STAT1的表达水平。结果:高糖组中Rffl的表达水平显著低于对照组,加入达格列净后Rffl表达升高;与对照组相比,高糖组细胞中E-cadherin表达水平降低,Fibronectin、α-SMA表达水平升高,过表达Rffl后E-cadherin表达水平升高,Fibronectin、α-SMA表达水平降低;与高糖组相比,低剂量达格列净+高糖组和高剂量达格列净+高糖组中E-cadherin表达水平均升高,Fibronectin、α-SMA表达水平均降低,且呈一定的剂量依赖性;与对照组相比,高糖组细胞中STAT1、TGF-β1的表达水平升高,而在过表达Rffl或达格列净作用后则明显降低。结论:达格列净通过上调Rffl的表达抑制STAT1/TGF-β1信号通路,改善糖尿病肾病肾小管上皮细胞的上皮细胞-间充质转化和纤维化。

lncRNA MEG3经miR-421调节E-cadherin抑制乳腺癌细胞EMT

目的 探讨lncRNA母系表达基因3(MEG3)经miR-421调节E-上皮钙黏附素(E-cadherin)抑制乳腺癌细胞上皮间充质转化(EMT)的机制。方法 qRT-PCR法检测45例乳腺癌及癌旁组织lncRNA MEG3 mRNA表达。通过生物信息学网站筛选靶向lncRNA MEG3的miRNA。乳腺癌MCF-7细胞分别转染miR-NC、lncRNA MEG3 RNAi和pCDNA3.0-HA-lncRNA MEG3质粒,qRT-PCR检测各组细胞lncRNA MEG3、miR-421和E-cadherin mRNA表达水平;MTT法、Transwell法检测细胞增殖和迁移情况。结果 乳腺癌组织lncRNA MEG3表达低于癌旁组织(P<0.05)。lncRNA MEG3与miR-421存在靶向调节作用。与阴性对照组比较,细胞lncRNA MEG3和E-cadherin mRNA表达在MEG3 RNAi组降低,MEG3质粒组增加;miR-421表达、细胞增殖率和迁移数在MEG3 RNAi组增加,MEG3质粒组降低(P<0.05)。结论 lncRNA MEG3通过miR-421靶向调控E-cadherin,抑制乳腺癌细胞EMT。

肉桂醛对PC-3细胞增殖、EMT及干细胞特性的影响

目的 探索肉桂醛(cinnamaldehyde,CA)对PC-3细胞增殖、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及干细胞特性的作用及机制,为CA作为潜在抗前列腺癌骨转移药物提供前期实验参考。方法 通过CCK-8法、Transwell实验、基质黏附实验及成球实验检测CA对PC-3细胞增殖、迁移、侵袭、黏附及成球的影响,qRT-PCR分析CA处理PC-3细胞后miR-143及AGO2 mRNA表达情况,Transwell实验和基质黏附实验检测单独加入CA、转染miR-143mimic、AGO2-siRNA同时处理CA及AGO2、同时转染miR-143mimic及AGO2后PC-3细胞的侵袭、迁移及黏附情况。Western blot实验检测CA或转染miR-143mimic后PC-3细胞AGO2、EMT及干细胞特性相关蛋白的表达情况。结果 CA呈浓度依赖性抑制PC-3细胞的增殖、迁移、侵袭、黏附及成球能力,与对照组相比差异均有统计学意义(P <0.01);qRT-PCR分析发现CA可上调PC-3细胞中miR-143表达、抑制AGO2 mRNA表达;过表达miR-143及沉默AGO2均能抑制PC-3细胞的迁移、侵袭及黏附,而同时上调AGO2及CA、同时上调miR-143及AGO2后PC-3细胞迁移、侵袭及黏附的抑制作用并不明显。此外,过表达miR-143及CA均能抑制PC-3细胞中AGO2、ZEB1、Vimentin、N-cadherin、fibronectin及CD44、Oct-4、c-Myc蛋白的表达。结论 CA可在体外抑制PC-3细胞的增殖、迁移、侵袭及黏附能力,此外,CA可抑制PC-3细胞的EMT及干细胞特性,其机制可能与其能上调miR-143/AGO2轴有关。

六味地黄汤对UUO大鼠肾组织β-catenin及EMT的影响

目的探讨六味地黄汤(Liuwei Dihuang decoction,LWDHD)对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteric obstrutction,UUO)大鼠肾组织中上皮钙黏蛋白E(E-cadherin)、β-连环蛋白(β-catenin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达、肾脏组织病理变化及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)的影响。方法SPF级SD大鼠48只随机分成假手术组(Sham)、模型组(UUO)、LWDHD低、中、高组(LWDHD 3.375、6.75、13.5 g·kg^(-1))、依那普利组(Enalapril)10 mg·kg^(-1),每组8只。采用HE、Masson染色法观察6组大鼠患侧肾组织的病理变化和胶原纤维沉积情况;免疫组化及Western blot检测各组大鼠肾组织中上E-cadherin、β-catenin、α-SMA蛋白的表达情况。结果与Sham组比较,UUO组大鼠患侧肾组织中肾小球硬化,肾小管扩张,间质纤维化明显。β-catenin、α-SMA蛋白表达增加,E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05);与UUO组相比,LWDHD组和Enalapril组中大鼠肾组织病理改变和胶原沉积明显改善,β-catenin、α-SMA蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达增加(P<0.05)。结论LWDHD可能通过下调β-catenin的表达,进而抑制EMT,发挥缓解肾纤维化的作用。

FOXP3基因下调EMT抑制肝细胞癌细胞迁移

目的 探讨FOXP3基因对肝细胞癌细胞迁移能力的影响及机制研究。方法 利用慢病毒感染的方式构建FOXP3稳定敲低的细胞模型。采用qRT-PCR和Western blot实验验证病毒感染效率。利用划痕实验检测肝癌细胞的迁移能力,并采用Western blot的方法检测下调FOXP3基因后上皮细胞-间充质转化(EMT)通路相关蛋白E-cadherin、N-cadherin及Slug的表达变化。结果 感染FOXP3-shRNA后,肝癌细胞HepG2和MHCC97H中FOXP3的表达水平显著降低。体外试验证明敲低FOXP3可显著抑制肝癌细胞的迁移能力。Western blot实验表明下调FOXP3可抑制EMT通路,上调E-cadherin的表达,下调N-cadherin及Slug的表达。结论 下调FOXP3通过介导EMT抑制肝癌细胞的迁移能力;FOXP3可能作为肝癌复发转移的潜在治疗靶点。