HPLC-UV法检测EV71-CA16二价手足口病灭活疫苗原液相关抗原纯度的方法建立与评价

为建立一种准确可靠的高效液相色谱-紫外(HPLC-UV)方法,检测EV71-CA16二价手足口病(HFMD)灭活疫苗原液中的相关抗原,肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CA16)的纯度。本文采用Waters体积排阻色谱柱(SEC,UltrahydrogelTM 2507.8×300 mm,6μm),流动相为0.01 mol/L的PBS中再加入0.1 mol/L氯化钠溶液,等度洗脱,流速0.3 mL/min,检测波长280 nm,进样量50μL,柱温21℃,进行EV71与CA16病毒原液的纯度检测,并对该方法的检测限、拖尾因子、专属性、重复性及检测范围进行验证。结果显示,2种抗原的灵敏度溶液的信噪比(S/N)分别为37.053和47.710,均远大于3,各试样的拖尾因子均小于3;CA16原液和EV71原液经HPLC分离纯化后的目标抗原峰馏分经SDS-PAGE和Western-Blot特异性鉴定,结果显示,色谱峰样品组成分别为CA16和EV71的2种病毒衣壳的结构蛋白,表明本检测方法专属性高。不同浓度的EV71与CA16病毒抗原经多次检测后,各浓度条件下的峰面积百分比与保留时间的RSD均小于1%,重复性良好。不同抗原浓度批样品检测结果显示,CA16原液抗原浓度在89 U/mL~26398 U/mL之间,EV71原液抗原浓度在170 U/mL~9074 U/mL之间时,2种抗原溶液经多次检测统计显示峰面积百分比与保留时间的RSD均小于1%,本方法在该抗原浓度范围内准确可靠,适用于EV71-CA16二价手足口病灭活疫苗原液中病毒抗原纯度的检测。

直肠滴入中药对CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病的疗效

目的观察直肠滴入中药对CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病的疗效。方法选取2019年8月—2022年8月贵州水矿控股集团有限公司总医院CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病患儿85例,按照随机数表法分为观察组(42例)和对照组(43例),其中对照组患儿给予利巴韦林治疗,观察组患儿给予直肠滴入中药治疗。对比两组患儿治疗前后口腔疱疹、发热、皮疹等症状的评分,治疗前后患儿炎症因子、免疫指标水平及两组患儿治疗后不良反应发生率。结果治疗前,两组患儿的口腔疱疹、发热、皮疹评分差异无统计学意义(P>0.05),治疗后,两组患儿的口腔疱疹、发热、皮疹评分均降低,并且治疗后观察组患儿的以上症状评分低于对照组(P<0.05);治疗后,两组患儿白细胞介素(IL)-6、IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)-α均降低,并且治疗后观察组患儿的以上降低幅度大于对照组(P<0.05);治疗后,两组患儿CD4^(+)、CD3^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平均升高,CD8^(+)水平降低,并且治疗后观察组患儿的变化幅度大于对照组(P<0.05);观察组患儿不良反应发生率为4.76%,对照组患儿不良反应发生率为18.60%,观察组不良反应发生率低于对照组(P<0.05)。结论给予CoxA16、EV71肠道病毒感染手足口病患儿直肠滴入中药治疗,能减轻患儿临床症状及炎性反应,改善免疫功能,且不良反应少,值得借鉴。

EV71阳性手足口病患儿131例临床特征及其EV71疫苗接种的预防效果

目的分析EV71阳性手足口病患儿临床特征及其EV71疫苗接种情况,探索重症发生和接种EV71疫苗的预防效果的关系。方法回顾性分析昆明市儿童医院2020年1月1日至2022年12月31日确诊的131例EV71阳性手足口病患儿临床资料,选取临床确诊手足口病患者的粪便做肠道病毒核酸检测,对结果为肠道病毒通用型阳性并且EV71阳性手足口病患儿的临床病例资料及其EV71疫苗接种情况进行分析。结果检出的131例阳性病例中包括116例轻症和15例重症,其中80例接受电话咨询其EV71疫苗接种情况的患儿中,17例接种疫苗,63例未接种疫苗,接种疫苗的患儿皆为轻症患者,未接种疫苗的患儿中有6例为重症患者。2020至2022年,每年4~9月为EV71阳性手足口病检出率高峰期(χ^(2)=125.705,P=0.000),小于1岁及大于5岁患儿阳性检出率高于1~5岁年龄段患儿(χ^(2)=8.765,P=0.033),男女阳性检出率无明显差异(χ^(2)=1.221,P=0.269)。结论接种EV71疫苗对减少重症病例出现具有重要意义。结合目前云南昆明地区该疫苗接种率仍然偏低的情况,提示相关机构仍需继续加大EV71疫苗接种的宣传力度。

小儿豉翘清热颗粒联合重组人干扰素喷雾剂治疗EV71感染手足口病患儿的疗效及对核因子-κB、炎症因子的影响

目的:研究小儿豉翘清热颗粒联合重组人干扰素(rhIFN)-α2b喷雾剂治疗EV71病毒感染手足口病(HFMD)患儿疗效及对核因子-κB(NF-κB)、炎症因子的影响。方法:回顾性分析我院收治的130例被EV71病毒感染的轻症HFMD患儿的临床资料及随访资料,根据治疗方法不同将患儿分为对照组和观察组各65例,对照组采用rhIFN-α2b治疗,观察组在对照组治疗基础上加用小儿豉翘清热颗粒治疗,比较两组患儿临床疗效,症状消退时间,治疗前后NF-κB、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-10水平变化,肝肾功指标及药物不良反应。结果:与对照组比较,观察组临床疗效更高(P<0.05);观察组症状消退时间均短于对照组(P<0.05);与治疗前比较,两组患儿治疗后血清NF-κB、TNF-α、IL-6、IL-10水平均有所降低,且观察组低于对照组(P<0.05);两组患儿治疗前后丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酐(Cr)及尿素氮(BUN)水平均为正常范围,但观察组治疗前后肝肾功能指标差值低于对照组(P<0.05);两组患儿均未发现明显药物不良反应。结论:小儿豉翘清热颗粒联合rhIFN-α2b喷雾剂治疗EV71病毒致儿童HFMD,能够有效提高治疗疗效,降低NF-κB、炎症因子,且对肝肾功能指标影响小,安全性高,值得临床推广应用。

2013-2019年柳州市手足口病病原学监测结果及肠道病毒71型VP1基因特征分析

目的 分析2013-2019年柳州市手足口病病原学监测结果,掌握该地区手足口病的病原组成以及肠道病毒71型(EV71)的分子流行病学特征,为当地手足口病的防控提供科学依据。方法 采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RTPCR)对收集的手足口病病例标本进行病原学检测。对重症或死亡病例的病原进行分型检测,选取2017年的5例EV71阳性手足口病重症或死亡病例标本进行VP1基因序列测定和特征分析。结果 2013-2019年柳州市共检测6 038例手足口病病例标本,肠道病毒通用型阳性标本4 210例(69.73%),其中EV71阳性659例(15.65%)、柯萨奇病毒A16型(Cox A16)阳性1 159例(27.53%)、其他肠道病毒阳性2 392例(56.82%)。2013年、2015年、2017年、2019年以其他肠道病毒为主(阳性率均>50.00%),2014年以EV71和其他肠道病毒为主,2016年、2018年以Cox A16和其他肠道病毒为主。2014-2019年重症或死亡病例的病原学分型显示,重症或死亡病例的主要病原是EV71、Cox A16、柯萨奇病毒A6型(Cox A6)、柯萨奇病毒A2型(Cox A2)。2017年该市手足口病重症或死亡病例中分离到的5株EV71毒株的病原基因亚型均为C4a亚型,毒株序列之间的核苷酸同源性为95.20%~100.00%,氨基酸同源性为97.50%~100.00%。结论 2013-2019年柳州市手足口病的优势病原发生了变化,主要病原由EV71逐渐转变为Cox A16和其他肠道病毒。引发重症或死亡病例的病原主要有EV71、Cox A16、Cox A6、Cox A2,EV71的优势基因型为C4a亚型。今后应进一步加强病原监测和相关分子流行病学研究,为落实手足口病综合性防控措施提供依据。

外泌体包裹的miR-19b抑制EV71复制的影响

[目的]探讨外泌体包裹的miR-19b对EV71病毒复制的影响,为EV71病毒的miRNA防治药物的开发提供参考.[方法]将游离的miR-19b-cy3.5分子和转染miR-19b-cy3.5的HT29细胞分泌的外泌体分别处理T98G细胞,观察进入细胞的效率;分别提取未处理的、转染mimic-n.c.和转染miR-19b的HT29细胞分泌的外泌体,并给予T98G细胞孵育后,检测细胞内miR-19b的表达;分别以60 mg/L转染mimic-n.c.的HT29细胞分泌的外泌体、60 mg/L和40 mg/L转染miR-19b的HT29细胞分泌的外泌体孵育T98G细胞并感染EV71病毒,检测病毒RNA载量;将携带包裹的miR-19b-cy3.5的HT29细胞来源的外泌体,通过尾静脉注射小鼠检测miR-19b在小鼠各个器官中的表达.[结果]miR-19b-cy3.5能够通过外泌体的形式进入T98G细胞中,而游离的miR-19b-cy3.5无法进入细胞;转染miR-19b的HT29细胞分泌的外泌体在处理T98G细胞后,胞内miR-19b高表达,同时,外泌体处理后的T98G细胞中EV71病毒RNA复制量显著降低;动物实验中,外泌体包裹的miR-19b能够在小鼠的脑、肝及肺有效表达.[结论]外泌体包裹的miR-19b能够有效进入靶细胞中,并且可以抑制靶细胞中EV71病毒的复制;同时,外泌体包裹的miR-19b能够有效进入小鼠脑、肝以及肺等组织中并表达.

影响家长对学龄前儿童接种EV71疫苗意愿的因素

目的 分析家长对学龄前儿童接种肠道病毒71型(EV71)疫苗意愿的影响因素。方法 前瞻性选取郑州市第七人民医院2022年1—5月就诊的136例学龄前儿童家长作为研究对象,通过调查问卷方式,统计家长的接种疫苗意愿情况,并分析影响因素。结果 136例家长中同意小儿接种者81例(59.56%);不同受教育程度、家庭年收入、获得育儿信息途径、手足口病为严重传染性疾病认知状况、知道EV71疫苗能预防EV71引发首手足口病状况、知道EV71疫苗状况、孩子患手足口病状况、孩子过敏体质状况、疫苗安全担忧状况、疫苗自费状况、疫苗不良反应状况、疫苗预防疾病认可状况的学龄前儿童家长EV71疫苗接种意愿不同(P<0.05);经logistic回归模型分析结果显示,家长高中及以下受教育程度、家庭年收入<5万、孩子过敏体质、有疫苗安全担忧、疫苗自费、疫苗有不良反应、不认可疫苗预防疾病为学龄前儿童家长EV71疫苗接种意愿的独立危险因素,而家长从手机APP获得育儿信息、知道手足口病为严重传染疾病、知道EV71疫苗能预防EV71引发手足口病、知道EV71疫苗、孩子有患手足口病史为学龄前儿童家长EV71疫苗接种意愿的保护因素(P<0.05)。结论 学龄前儿童家长EV71疫苗接种意愿有待提高,且受家长受教育程度、家庭年收入、家长获得育儿信息途径、手足口病为严重传染性疾病认知状况、知道EV71疫苗能预防EV71引发手足口病状况、知道EV71疫苗状况、孩子过敏体质、有疫苗安全担忧、疫苗自费、疫苗有不良反应、不认可疫苗预防疾病、孩子有手足口病史等因素影响。

2010—2020年马尾区手足口病流行病学特征及EV71疫苗接种效果分析

目的通过探讨福州市马尾区手足口病流行特征与肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)疫苗接种的效果,为寻找更有效的防控策略提供科学依据。方法收集2010年1月1日—2020年12月31日马尾区手足口病疫情监测数据和2017—2020年EV71疫苗接种资料,采用描述性流行病学方法进行流行特征和疫苗接种效果分析。结果2010—2020年马尾区报告手足口病总共5482例,重症54例,死亡1例,年均发病率为206.82/10万。除2020年外,其余年份发病高峰为每年4—7月和9—10月;男性发病率高于女性,发病年龄主要聚集在3岁以下(占68.88%),发病人群以散居儿童和幼托儿童为主;感染的病毒类型主要为其他肠道病毒,不同年份病原构成比差异有统计学意义(χ^(2)=165.06,P<0.001)。2017—2020年马尾区接种EV71疫苗共11231剂次,平均估算接种率为10.63%,总体接种率偏低。结论福州市马尾区手足口病疫情防控形势仍旧严峻,相关部门需在发病高峰、重点场所对低龄儿童有针对性开展健康宣教工作;疫苗接种能有效降低发病率和重症发生率,建议通过多渠道提高疫苗接种率。

OSA1基因多态性与EV71所致中枢神经系统感染的关系

目的分析EV71引起的中枢神经系统感染过程中,其感染机制是否与OSA1基因多态性存在关系,为临床预防感染制定相关措施提供参考。方法收集2018年3月至2021年10月在本院就诊的EV71感染者,以及体检健康儿资料,使用SNP scan分析OAS1 rs2660和rs1131454 SNP分型。结果本次研究共收集86名EV71感染患儿纳入至观察组,另外收集60名健康体检患儿纳入至对照组。rs2660、rs1131454的基因型和等位基因分布之间比较,P>0.05。在OAS1 rs2660基因SNP方面,与轻度组进行比较,受累组与之比较存在显著差异(P<0.05),其中受累组AG基因型频率明显更高,OR为2.27,95%CI分布范围为1.07~4.85,受累组GG基因型频率明显更低,OR为0.27,95%CI分布范围为0.08~0.97。而受累组OAS1基因SNP与对照组进行对比无显著差异(P>0.05)。结论OAS1基因rs2660 SNP与CNS参与EV71感染的易感性。携带OAS1的儿童rs2660 AG基因型在EV71感染后存在CNS受累风险性更高。

2010—2019年肇庆市手足口病流行特征及EV71疫苗接种效果分析

目的:分析肇庆市2010—2019年手足口病流行特征及肠道病毒71(EV71)型疫苗接种效果,为完善手足口病防控策略提供科学依据。方法:收集手足口病病例资料和EV71型疫苗接种情况,采用描述性流行病学方法分析三间分布、病原构成和疫苗接种情况,保护效果采用疫苗保护效力评价。结果:肇庆市2010—2019年手足口病年均报告发病率为314.77/10万,发病以≤5岁儿童为主。肇庆市2016—2019年EV71疫苗估算接种率为6.80%,疫苗推广后报告发病率、重症比例较低,接种EV71疫苗是EV71所致手足口病的保护因素,总保护效果为92.70%。结论:EV71疫苗上市后肇庆市手足口病发病率有所下降,但仍处于较高水平,目标儿童疫苗估算接种率较低,应推广及时全程接种EV71疫苗,并加强重点人群手足口病知识健康宣教和病原学监测。

上海市长宁区儿童家长肠道病毒71型灭活疫苗接种意愿及影响因素分析

目的 了解上海市长宁区托幼机构儿童家长为孩子接种肠道病毒71型灭活疫苗(EV71疫苗)的意愿并分析影响因素,为推广EV71疫苗接种提出建议。方法 采用随机抽样的方式抽取长宁区托幼机构就读的儿童,向儿童家长发放问卷进行调查。结果 有75.40%的家长愿意为孩子接种EV71疫苗。Logistic回归分析,不认为EV71会产生强烈副作用、疫苗犹豫量表得分越高、主动获取知识得分越低的家长更愿意为孩子接种EV71疫苗。结论 家长为儿童接种EV71疫苗的意愿受到对EV71疫苗副作用的认知、疫苗犹豫和主动获取知识情况的影响,应对家长开展相关健康教育,以提升接种率。

外周血中抗EV71 VP1特异性抗体分泌细胞检测方法的建立

目的应用酶联免疫斑点(ELISPOT)技术,建立一种检测外周血中抗EV71VP1特异性抗体分泌细胞的方法,并评价该方法在检测EV71感染诊断中的应用价值。方法无菌分离外周血中单个核细胞,建立一系列特异性ELISPOT检测外周血VP1抗原特异性抗体分泌细胞的参数:包括抗原最佳包被浓度、反应体系中细胞浓度以及HRP标记抗体工作浓度的确定,与ELISA比较,检测方法的敏感性和特异性。结果当抗原包被浓度为20μg/mL时,不同细胞浓度反应曲线最稳定;细胞浓度为5×10^(6)/mL时,不同包被浓度形成的斑点数适量,易于计数;HRP标记抗体释稀度为1:10000时,背景最浅容易识别。ELISPOT敏感性为90.0%,特异性96.7%。与ELISA检测抗EV71抗体方法比较,ELISPOT优于ELISA。结论该方法有较高的特异性和灵敏度,有望成为诊断EV71感染的一种理想方法。

以EV71抗原检测方法验证浅析生物制品生物效价检测方法学验证

目的:本文以对生物制品生物效价检测进行规范的《中国药典》2020年版新增9401指导原则为标准进行EV71抗原检测方法的验证,进一步浅析生物制品生物活性/效价检测的方法学验证。方法:依据《中国药典》2020年版9401指导原则,结合EV71抗原检测方法特点及验证目的对其进行专属性、相对准确度、精密度、线性和范围5个方面进行方法学验证。结果:EV71抗原检测方法专属性强,6个效价水平几何变异系数为4.7%~13.0%,均小于15%,相对偏倚为-6.05%~9.03%,均在±15%范围内,定量范围为225%~31%,线性回归相关系数为0.999 5,5方面验证均符合要求,且适用于该检测方法的使用。结论:本原则可具体指导生物学检测方法验证,在对不同检测方法进行验证时,根据检测目的、方法的原理、方法的技术特点、被检物的成分等设计具体方案。

EV71可感染幼龄中缅树鼩

树鼩是灵长类动物的近亲,且具有体型小、繁殖周期短、饲养管理成本低等优点,长期以来被认为有望替代灵长类动物用于人类疾病的动物模型研究。该文研究了肠道病毒EV71对幼年中缅树鼩的感染特点,探索建立EV71感染树鼩动物模型及替代灵长类动物的可行性。实验分别采用灌胃、滴鼻和尾静脉注射3种方式,感染3月龄树鼩,定期观察动物临床症状和血常规变化和定期采集血液和粪便样品,并使用中和抗体试验、reverse transcription-PCR(RT-PCR)和Real-TimePCR等技术,检测相关样品中和抗体效价、病毒核酸及载量变化。结合组织病理学检查,分析感染病变特点。研究结果发现,实验组树鼩体温在第4天前后开始升高,白细胞、淋巴细胞也有类似趋势;3种攻毒方式均可检测到病毒载量,峰值出现在第10天前后,灌胃途径尤为明显,血清的最大中和抗体效价为1:16。感染EV71病毒的树鼩2周左右出现急性松弛性瘫痪,大体解剖发现伴有尿潴留症状,组织病理学检查发现在脑、肺、肠、脾脏、肾脏等部位发生病变。结果表明,EV71病毒通过灌胃、滴鼻和静脉注射3种方式均可以感染中缅树鼩,并使之出现神经系统及相关病变,该实验为将来研究EV71感染树鼩致病机理、建立手足口病树鼩动物模型奠定了理论基础。

EV71型手足口病乳鼠动物模型的建立及免疫、内分泌及病理特征研究

目的建立EV71型手足口病乳鼠动物模型并进行免疫、致病特性研究。方法将临床分离的EV71病毒株经蚀斑纯化,3T3细胞适应,乳鼠驯化,最终获得1株能致死7日龄乳鼠的EV71毒株,命名为BJ09/07(GenBank Accession NO.JQ319054,EV71-BJ)。EV71-BJ感染7日龄ICR乳鼠后,观测临床疾病得分、体质量变化、死亡率并测定病毒载量、免疫分子、内分泌水平、组织病理损伤等病毒、免疫、内分泌、病理指标。结果 EV71-BJ毒株感染7日龄ICR乳鼠,其病毒毒力为150 LD50/ml,感染后不同时期肌肉病毒载量均高于脑中,至第4天达到高峰,后不断下降。至感染后第6天发病达高峰时做病理检测,相对于脑组织,肌肉中有更严重的淋巴细胞浸润,引起更严重的炎性分子升高。肌肉研磨液和血清中MCP-1、IFN-γ、IL-6和TNF-α显著升高,而肾上腺素和皮质醇未见明显变化。结论初步建立了EV71型手足口病乳鼠动物模型,为药物筛选、疫苗研发及免疫机理研究奠定了基础。

NSE、MBP和S-100β蛋白在重症EV71脑炎中的临床应用价值

目的:测定重症EV71脑炎患儿脑脊液和血清中神经元特异性烯醇化酶(NSE)、髓鞘碱性蛋白(MBP)和S-100β蛋白的含量,探讨其在EV71脑损伤中的评估价值。方法:采用ELISA法测定25例EV71脑炎患儿(脑炎组,重症16例,危重症9例)急性期脑脊液和血清中NSE、MBP、S-100β蛋白含量,并与10例健康儿童(对照组)进行比较。结果:(1)血清与脑脊液的NSE、MBP、S-100β含量经直线相关分析,r值分别为0.806,0.671,0.802(均P<0.01);(2)脑炎组血清NSE(7.46±2.74)ng/mL、S-100β(529.85±192.90)pg/mL,显著高于对照组血清NSE(4.13±0.68)ng/mL、S-100β(325.61±63.14)pg/mL(均P<0.01),脑炎组血清MBP(1.45±0.79)ng/mL与对照组血清MBP(1.22±0.56)ng/mL的含量差异无显著性(P=0.409);(3)与对照组相比,危重症组血清NSE、MBP和S-100β含量显著增高,NSE(10.34±1.50)ng/mL(P<0.01),MBP(1.95±0.48)ng/mL(P<0.05),S-100β(744.31±101.57)pg/mL(P<0.01),重症组血清NSE、S-100β含量增高,NSE(5.80±1.70)ng/mL(P<0.05)、S-100β(409.22±104.50)pg/mL(P<0.05)。(4)与重症患儿相比,危重症患儿血清NSE、MBP、S-100β含量明显增高(均P<0.01)。结论:NSE、MBP、S-100β水平与病情严重程度有关,检测其血清含量有助于EV71感染后脑损伤的病情评估。

肠道病毒71型(EV71)感染性克隆的构建

目的构建肠道病毒71(enterovrius 71,EV71)的感染性克隆,为研究EV71毒力基因及新型疫苗设计等建立一个技术平台。方法用RT-PCR方法扩增出EV71FJ08149株全基因组,通过TA克隆组装进TOPO-XL-PCR载体中,获得全长cDNA克隆pFJ08149T5和pFJ08149T25。应用T7聚合酶系统在体外将线性化后全长cDNA克隆转录出RNA并转染RD细胞。通过间接免疫荧光试验、RT-PCR、序列测定及免疫电镜等对拯救病毒进行鉴定。结果 RNA转染后72h观察到典型的肠道病毒致细胞病变,拯救病毒经RT-PCR、间接免疫荧光和免疫电镜检测鉴定为EV71型,表明已成功构建了EV71感染性克隆。结论本研究成功构建出具有感染性的EV71全长cDNA克隆,为深入研究EV71的致病机制等提供了有利的工具。

EV71小鼠适应株制备及体内外感染特点

目的用1日龄ICR小鼠传代制备EV71小鼠适应株,研究EV71亲代株与小鼠适应株的体内外感染特点,建立EV71感染ICR小鼠动物模型,为病毒疫苗和抗病毒药物的研究提供实用的动物评价工具。方法用1日龄ICR小鼠进行EV71病毒(Fuyang-0805)的传代,得到小鼠传代株。以一定浓度亲代株和传代株病毒分别接种RD、Vero、SY5Y、Caco-2四种细胞,定量方法检测各时间点不同毒株在四种细胞上的复制数量,CCK8方法测定各时间点细胞的存活率;同时,两毒株分别腹腔注射感染1日龄小鼠,定期安乐死动物,采集肺、小肠、骨骼肌、大脑四种器官组织,进行动物体内病毒半定量和定量分析,同时进行各器官组织病理学观察、免疫组织化学鉴定。结果与亲代毒株相比较,小鼠传代株(EV71-MMP4)表现出更强的肌肉来源细胞嗜性与毒性;同时,两毒株腹腔注射感染1日龄小鼠后,EV71-MMP4感染的小鼠体重增长较正常小鼠体重增长缓慢;半定量和定量RT-PCR显示,在小鼠肌肉中的病毒载量于感染后1d和5d达到高峰。EV71-MMP4感染组感染率较高、病毒组织分布较广、感染持续性较好、病毒载量较高,高剂量病毒感染后小鼠小肠、心肌和骨骼肌可观察到细胞空泡变性、淋巴细胞浸润等病理变化。免疫组织化学显示感染后小鼠骨骼肌有EV71病毒特异分布。结论阜阳EV71小鼠适应株表现出较亲代毒株更好的小鼠易感性、细胞毒性,所建立的动物模型可用于EV71病毒致病机制、感染特点的研究和病毒疫苗及药物的评价。

北京市房山区某幼儿园一起EV71引起的手足口病暴发疫情调查

目的调查一起发生在某幼儿园由肠道病毒71型（EV71）引起的手足13病暴发疫情，分析其暴发原因，探讨有效的预防控制措施。方法使用卫生部的《手足13病个案调查表》对所有发病病例进行现场流行病学调查，对数据进行描述性分析。结果该起疫情的发病儿童中以小龄童（2～3岁）为主，占87．50％（14／16）；发病高峰在2008年5月13日和5月14日；其中6例病例病毒分离结果为EV71阳性。结论手足13病易在幼儿园小龄组儿童中发生暴发流行；采取及时有效的防控措施可控制EV71引起的手足13病暴发疫情。

EV71手足口病患儿CD8^+T、NK细胞穿孔素和颗粒酶B的变化

目的探讨肠道病毒7l型(EV71)手足口病患儿CD8^+T、NK细胞穿孔素(PRF)和颗粒酶B(Grz B)的变化。方法选取某儿童医院2017年5—7月普通型、重型手足口病患儿(普通型组、重型组),健康儿童志愿者(正常对照组)各30例,采用流式细胞术测定外周血CD8^+T、NK细胞PRF和Grz B的表达水平,比较各组差异。结果与正常对照组相比,普通型组和重型组EV71手足口病患儿急性期两种细胞中PRF和Grz B的表达水平均升高,差异有统计学意义(均P <0. 05)。普通型组和重型组EV71手足口病恢复期患儿CD8^+T细胞PRF、Grz B的表达水平较急性期明显下降,但仍高于正常对照组(均P <0. 05)。NK细胞PRF、Grz B的表达水平:普通型组和重型组急性期比较,差异均无统计学意义(均P> 0. 05);普通型组EV71手足口病恢复期患儿较急性期虽稍升高,但差异仍无统计学意义(均P> 0. 05);重型组EV71手足口病恢复期患儿较急性期明显升高(均P <0. 05)。结论 CD8^+T、NK细胞PRF和Crz B在EV71手足口病发病中起着一定作用。