基于云理论及GG聚类的滚动轴承故障辨识方法

为了探讨不同特征对区分滚动轴承故障状态贡献的大小,在特征层面上使轴承的定性概念与定量数据建立关联,以达到敏感特征提取的目的,将云理论引入到滚动轴承的特征筛选中,并将所提方法结合GG(Gath-Geva,简称GG)聚类应用于滚动轴承的故障辨识。首先,对滤波消噪后的振动信号提取高维原始特征集,建立滚动轴承在不同运行状态下的云分布模型;然后,利用正向云发生器分别求出不同样本下各特征对轴承状态的确定度,设定阈值筛选原始特征集中对轴承运行状态贡献度大的特征,计算其出现的概率并作为权值,提出一种基于云理论加权特征选择方法,筛选出敏感特征集;最后,利用主成分分析(principal component analysis,简称PCA)对敏感特征集降维并输入至GG聚类中,完成故障辨识。实验结果表明,相较于传统的特征选择方法,所提算法在聚类评价指标及故障辨识率上具有明显的优势。

大豆分离蛋白和大豆肽对鼠李糖乳杆菌GG生长代谢的影响

为探究氮源类营养物质对鼠李糖乳杆菌GG(Lactobacillus rhamnosus GG,LGG)生长和代谢的影响,本研究以模拟胃肠道消化后的大豆分离蛋白和大豆肽为原料,通过单培养的方式分别测定鼠李糖乳杆菌GG的活菌数和乳酸及乙酸产量,并将鼠李糖乳杆菌GG与单增李斯特菌共培养测定其在致病菌存在下利用大豆蛋白和大豆肽的情况。结果表明,在单培养的条件下消化后大豆分离蛋白和大豆肽都能显著提高鼠李糖乳杆菌的活菌数(P<0.05),而消化后大豆肽的作用比消化后大豆蛋白的作用提前4 h,且二者都能显著提高乳酸和乙酸的生成(P<0.05)。在共培养体系中,消化后大豆蛋白显著削弱了单增李斯特菌的竞争能力,提高了鼠李糖乳杆菌的竞争能力,且培养4 h和8 h后,鼠李糖乳杆菌的活细胞数显著高于单培养(P<0.05)。本研究结果将氮源作为具有潜在益生功能的营养物质,为消化后大豆蛋白和大豆肽功能性食品的开发提供理论依据。

LGG@LPM微球的制备及其对溃疡性结肠炎小鼠的防治作用

目的:研究柠檬果胶包埋鼠李糖乳杆菌微球对DSS诱导的溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠的防治作用。方法:首先将柠檬果胶与鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus GG,LGG)制成微球(LGG@LPM),并对其进行表征。对小鼠灌胃LGG@LPM并对其进行生理生化等检测。结果:LGG@LPM微球具有良好的稳定性,给药可以显著缓解DSS诱导小鼠结肠炎的病理进程,恢复其体质量、结肠长度,降低组织学活动指数评分和疾病活动指数评分。同时,LGG@LPM给药改善了DSS导致的小鼠结肠促炎因子水平升高和抗氧化酶活性降低、血清LPS水平升高以及短链脂肪酸水平的变化。16S RNA测序表明,LGG@LPM恢复了UC小鼠的肠道菌群,提高Lactobacillus、Mucispirillum等相对丰度,并且菌群的改变与相关环境因子有显著的相关性。结论:LGG@LPM可以通过改善肠道菌群从而延缓UC的病理进程,并且这种防治作用比单用柠檬果胶或LGG的效果好。

猪伪狂犬病病毒gG、gE和TK基因多重PCR检测方法的建立及应用

建立准确鉴别猪群伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)野毒株和基因缺失疫苗株高效多重PCR方法,对PRV gG、gE和TK基因保守区域设计合成特异性引物,优化反应体系和条件,建立多重PCR鉴别检测方法,对临床样品进行检测应用。结果成功建立了鉴别PRV gG、gE和TK基因缺失疫苗株和野毒株感染的多重PCR检测方法,该方法对PRV gG、gE和TK基因可进行特异性扩增,对猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒和猪副猪嗜血杆菌等相关病原均无扩增,对携带gG、gE和TK混合阳性质粒的最低检测限为2.5×10^(-5) ng/μL,具有良好的重复性。用该方法检测53份猪组织样品,检出PRV野毒感染的样品7份,与国标方法和单一PCR法检测结果符合率为100%。建立的猪伪狂犬病病毒野毒株和基因缺失疫苗株多重PCR鉴别检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性,在生产中可快速、高效鉴别猪群PRV野毒感染和基因缺失疫苗免疫,可为PRV的快速鉴别检测、流行病学调查和防控提供技术支持。

ESMD-SRCC与GG聚类在轴承故障诊断的应用

轴承是旋转机械的关键设备,一旦发生故障会造成严重的经济损失及人员伤亡。对轴承进行状态监测及故障诊断,是机械安全运行的重要保证。为提高轴承故障诊断的准确性,以轴承外圈、内圈、滚动体故障为例,通过ESMD分解有效解决传统EMD模态混叠问题;同时计算SRCC,提取关联性大的IMF分量作为轴承故障的特征向量;再将特征向量输出到GG聚类中进行模式识别。通过仿真验证,ESMD-SRCC与GG聚类的方法实现了轴承故障的准确识别。

鸡传染性喉气管炎病毒gG蛋白间接竞争ELISA方法的建立及初步应用

鸡传染性喉气管炎是由鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)引起鸡的一种急性、高度接触性呼吸道传染病。为建立检测该病毒g G蛋白的间接竞争ELISA方法,本研究以原核系统表达ILTV g G蛋白,并采用切胶纯化该重组g G蛋白(rg G)后经western blot检测纯化的rg G (P-rg G)与本研究室制备的g G蛋白单克隆抗体(MAb) 3C8的反应原性。将MAb 3C8采用Protein G亲和层析柱纯化后与HRP偶联(HRP-3C8),利用间接ELISA法测定纯化HRP-3C8的效价。结果显示,P-rg G与MAb 3C8发生了特异性反应,在30 ku处出现特异性条带。纯化的HRP-3C8效价达1∶51 200。以P-rg G作为包被抗原,以纯化的HRP-3C8作为检测抗体,通过对各反应条件优化后初步建立了ILTV g G蛋白间接竞争ELISA (ic-ELISA)检测方法。条件优化结果显示,P-rg G包被量为12.5 ng/孔,HRP-3C8抗体稀释度为1∶10 000,将待检样品与HRP-3C8抗体在37℃孵育40 min后加入ELISA板再反应20 min,TMB底物反应10 min。将待检样品的抑制率(PI)≥31.08%判为阳性;采用该方法分别检测ILTV、新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡痘病毒(FPV),通过计算PI,评估该方法的特异性;按照Reed-Muench法测定ILTV K317株的鸡胚半数感染量(EID_(50)),再将该病毒2倍倍比稀释(1∶10~1∶2 560)后,以该ic-ELISA方法检测,评估该方法的敏感性;利用同批次和不同批次P-rg G分别包被ELISA板,采用该ic-ELISA方法检测ILTV阳性及阴性样品,评估该方法的重复性。结果显示,该方法除了能检测ILTV外,其余相关病毒均为阴性结果;将ILTV稀释至1∶320时检测结果仍为阳性,相当于75 EID_(50)/0.1 m L;批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%。利用该方法及荧光定量PCR (q PCR)分别检测50份临床ILTV、IBV和FPV感染鸡的口咽拭子和喉头组织、10份ILTV活疫苗,该方法检测结果显示,阳性检测率为73.3%(44/60),阴性率为26.7%(16/60)。q PCR的检测结果显示,阳性检测率为81.7%(49/60),阴性率为18.3%(11/60),二者的阴、阳性符合率分别为90.9%和87.8%,总符合率为88.3%。本研究建立的ILTV g G蛋白ic-ELISA方法特异性强、敏感性高、重复性好,可以用于检测实验室和临床ILTV感染的不同样品,为ILTV及其疫苗的检测提供了新的技术手段。

鼠李糖乳杆菌对老年小鼠术后海马区小胶质细胞激活及Tau蛋白磷酸化的影响

【目的】探讨术前益生菌鼠李糖乳杆菌(LGG)灌胃对麻醉手术老年小鼠海马区小胶质细胞及Tau磷酸化的影响。【方法】18月龄C57BL/6J小鼠30只随机分为3组,10只/组:对照组,麻醉手术组,麻醉手术+鼠李糖乳杆菌组。生理盐水/LGG 109CFU 150μL灌胃,每日1次,连续20 d后接受异氟醚麻醉+剖腹探查手术,术后12 h免疫荧光染色检测海马区小胶质细胞激活状态,ELISA检测IL-6的浓度变化,Western blot检测Tau蛋白磷酸化位点Tau-pS202/pT205和total Tau蛋白表达变化。【结果】对照组海马区小胶质细胞呈静息状态,炎症因子IL-6浓度为(82.08±12.07)pg/mL。与对照组相比,麻醉手术组海马区小胶质细胞活化增生,胞体变大,突起缩短变粗,炎症因子IL-6上升至(123.7±5.72)pg/mL(P=0.000),磷酸化Tau-pS202/pT205蛋白表达量也明显增加(P=0.002)。而与麻醉手术组相比,麻醉手术+LGG组海马区小胶质细胞增生肥大不明显,炎症因子IL-6分泌减少至(96.68±9.59)pg/mL(P=0.008),磷酸化Tau-pS202/pT205蛋白表达量明显下降(P=0.002)。而3组total Tau蛋白表达水平差异无统计学意义。【结论】术前服用益生菌鼠李糖乳杆菌减轻麻醉手术导致的老年小鼠海马区小胶质细胞活化、炎症因子分泌增加、以及Tau蛋白磷酸化水平增加。

伪狂犬病毒gG基因的表达及gG-LAT诊断方法的建立

依据伪狂犬病病毒(PseudorabiesVirusPRV)Rice株序列合成针对gG基因的特异性引物,从PRV鄂A株中扩增出gG基因,并将其克隆到pBluescriptⅡSK+质粒中并测序,用SacⅠ和HindⅢ酶切,将gG基因融合到pET 28a质粒中T7启动子下游,构建成原核表达质粒pET 28a gG1,结果并未获得表达。再用NotⅠ切除gG基因后小半部分片段,构建成原核表达质粒pET 28a gG2,使其在E.coliBL21(DE3)中以IPTG诱导表达,经SDS PAGE分析,表达特异带为47KDa,斑点杂交证实表达产物具有抗原性。表达产物主要以可溶性蛋白的形式存在于细菌裂解液的上清之中,上清经饱和硫酸铵溶液沉淀,透析,PEG20000浓缩,ELISA分析表明,经初步纯化的表达产物可与抗PRV猪血清发生特异性免疫反应。用该产物致敏空白乳胶建立gG 乳胶凝集试验(gG LAT),检测340份血清,结果表明gG LAT能区分gG基因缺失疫苗活苗免疫猪与自然感染野毒的血清学阳性猪,且特异性强、敏感性高。

伪狂犬病病毒gG基因缺失通用转移载体的构建

对克隆有伪狂犬病病毒Ea株基因组DNASphI 15kb片段的质粒pBSA用SphI和KpnI消化 ,将含gG全基因及其上游PK基因、下游gD基因部分编码区约 2 .6kb的片段亚克隆到消除了EcoRI位点的载体pUC19中 ,获得重组质粒pUSK(E)。以pEGFP N1为模板 ,通过PCR扩增约 0 .3kb的SV40Poly(A)片段 ,并将其克隆到杆状病毒转座载体pFastBac1的NotI和PstI位点 ,利用pFastBac1的BamHI和PstI将含有 9个酶切位点以及SV40Poly(A)的片段亚克隆到pUSK(E)的相应位点 ,在插入的同时导致gG基因 5’端编码区约 40 0bp的缺失 ,构建了由gG启动子驱动gG部分编码区缺失的通用转移载体pgG Uni。序列分析进一步证实 :有 7个单一酶切位点可供外源基因直接插入。

伪狂犬病gG-ELISA鉴别诊断方法的建立及其应用

利用gG基因表达产物建立了gG-酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴别诊断方法,以该方法检测100份猪血清,结果表明该方法可显著区分gG基因缺失疫苗免疫猪和野毒感染猪,且特异性强、敏感性高。临床应用表明,该方法结果与其它临床诊断结果符合率高。以该方法在部分使用gG基因缺失疫苗的猪场做流行病学调查,共检测842份血清,检出242份阳性,阳性率为28.74%。

伪狂犬病病毒鄂A株TK^-/gG^-/LacZ^+突变株的构建

为了以国内地方分离株鄂A株为亲本构建伪狂犬病病毒双基因缺失株 ,采用外切酶Ⅲ和绿豆核酸酶酶切 ,构建了缺失主要毒力基因TK基因部分编码区的重组质粒 pSTK1-4 ,进一步改造成为转移质粒 pUCPB4。用HindⅢ将质粒pUCPB4线性化 ,然后与用EcoRI消化的伪狂犬病病毒鄂A株TK-/LacZ+ 突变株基因组DNA共转染PK- 15细胞 ,待完全病变后 ,收毒作空斑试验 ,PCR筛选TK缺失的重组病毒。重组病毒空斑纯化 3次 ,随机挑取空斑进行PCR扩增 ,证实所获得的病毒为均一的无TK-/LacZ+ 突变株污染的TK缺失的重组病毒。分别以TK缺失株病毒与鄂A野毒株为模板对TK基因进行PCR扩增 ,扩增产物经酶切分析和测序后发现 :TK缺失重组病毒的TK基因缺失了 2 0 5个碱基 ,XhoI和SalI位点消失 ,SmaI酶切片段发生变化。两种病毒在PK - 15细胞上形成空斑的大小和增殖的滴度无明显的差别。进一步提取TK缺失突变株基因组DNA ,与含gG -LacZ的转移质粒pUSKZ通过磷酸钙法共转染PK - 15细胞 ,待完全病变后 ,在X - gal存在下筛选蓝斑 ,将挑取的蓝斑纯化 3次后 ,对纯化的重组病毒进行TK、LacZ扩增 ,结果既能扩增出较以鄂A野毒株为模板扩增的要小的TK基因片段 ,同时又能扩增出LacZ基因 ,证实所得到的重组病毒为TK-/ gG-/LacZ+ 突变株。此双缺失突变株的构?

基于RQA与GG聚类的滚动轴承故障识别

提出递归定量分析与GG聚类相结合的滚动轴承故障识别方法。利用能够表征信号发散程度的RQA参数——确定率和分层率组成轴承故障识别的特征向量,结合GG模糊聚类实现滚动轴承故障模式识别。对实际故障数据进行分析,结果表明,该方法不仅能够识别滚动轴承的不同程度损伤,而且能够实现不同部位的轴承故障诊断。研究结果为滚动轴承故障识别提供了一种高效、直观的新方法。

表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5的重组伪狂犬病毒TK^-/gG^-/GP5^+的构建及其生物学特性初步探讨

以伪狂犬病毒基因缺失标志疫苗株TK-/gG-/LacZ+为亲本株,通过同源重组,构建了表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)主要免疫原性蛋白GP5的重组伪狂犬病毒TK-/gG-/GP5+。经PCR、Southern杂交、Westernblot证实构建正确,并能表达GP5。同时,对重组病毒在PK-15细胞中的增殖特性进行了检测,结果与亲本株相比,增殖滴度无显著性差异。将重组病毒免疫BALB/c小鼠,2次免疫后4周,50%(3/6)小鼠产生了低水平的GP5特异性ELISA抗体,但中和抗体均小于1:4。

牛传染性鼻气管炎病毒gG蛋白的表达及gG-ELISA的建立

以牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）基因组DNA为模板,PCR扩增gG基因,克隆到T载体pMD18-T,经限制性酶切分析及序列测定鉴定正确后,进一步亚克隆至原核表达载体pGEX-KG。SDS-PAGE和Western blot分析表明,该基因在大肠杆菌BL21（DE3）中呈可溶性及包涵体两种形式表达,重组蛋白质具有免疫学活性。包涵体蛋白经提纯、变性、复性后,作为包被抗原建立了gG-ELISA诊断方法。应用该方法与进口试剂盒（IDEXX）平行检测380份血清样品,两种方法的符合率为92%（351/380）。对6份病毒分离阳性血清的检测均为阳性,对非相关病原的阳性血清及中监所的阴性血清检测均为阴性,表明所建立的IBRVgG抗体的ELISA检测具有良好的灵敏度与特异性。对1248份奶牛血清样本进行了检测,进口牛群的IBRV抗体阳性率平均为21.7%,湖北本地中国黑白花奶牛的抗体阳性率在不同牧场之间变化很大,范围为0.0%-41.5%。

伪狂犬病病毒鄂A株gG^-/LacZ^+突变株的构建

以从湖北某猪场分离鉴定的鄂A株为亲本 ,提取其基因组DNA ,克隆含 gG基因的SphⅠ /KpnⅠ片段 ,然后将LacZ基因融合到 gG启动子下游 ,得到重组质粒 pUSKZ ,将重组质粒与鄂A株基因组共转染PK 15细胞 ,待细胞完全病变后 ,在X gal存在下 ,作蓝斑筛选纯化。经斑点杂交和PCR扩增证实得到的是基因型为 gG- /LacZ+ 的重组伪狂犬病病毒。

伪狂犬病毒上海株糖蛋白G (gG)基因的克隆及序列分析

应用PCR方法从PRVSH (上海株 )病毒培养物扩增了gG基因 ,克隆入 pcDNA3质粒 ,并进行了序列测定。结果表明 ,扩增的 gG基因片段长 1719bp ,包含一个 14 91bp的开放阅读框 (ORF) ,在起始密码子上游有TATAAAA盒 ,在终止密码子下游有AATAAA的 poly (A)尾 ,编码由 4 96个氨基酸组成的蛋白质。与Rice株相应的gG片段相比 ,核苷酸序列同源性达 97 1%。但推导的氨基酸序列同源性仅有 87 6 % ,主要是在编码区内插入和缺失核苷酸 ,出现了突变和移码 ,导致氨基酸序列同源性降低。gG具有膜蛋白的结构特点。

基于CEEMD和GG聚类的电能质量扰动识别

提出一种基于完备总体经验模态分解(complete ensemble empirical mode decomposition,CEEMD)和GG(gath-geva)聚类的电能质量扰动识别方法。CEEMD是一种对EEMD(ensemble empirical mode decomposition)的改进算法,其特点是向原始信号中以正负成对的形式加入白噪声,有利于减少重构信号中残余的辅助噪声;且在分解的每一个阶段都加入特殊噪声,计算一个唯一残差以得到每个IMF,因此分解的结果是完整的,优于EEMD。CEEMD不仅有效解决了EEMD的模态混叠的问题,同时也保留了EEMD处理非平稳信号的优势,再将CEEMD分解的IMF分量的互近似熵值作为特征向量输入到GG模糊分类器中进行电能扰动的分类识别。为了验证该方法的有效性,进行了仿真和实测实验,结果表明,该方法有较好的频谱分离效果,且仅需要较少的迭代次数,减轻了计算成本。

茜素黄GG稀土配合物的合成及其抗菌活性的研究

合成了稀土茜素黄ＧＧ固体二元配合物，其通式为ＮａＲＥＬ２２Ｈ２Ｏ（ＲＥ＝Ｌａ，Ｃｅ，Ｎｄ，Ｓｍ，Ｅｕ，Ｇｄ，Ｔｂ，Ｄｙ，Ｈｏ，Ｙ；Ｌ＝Ｃ１３Ｈ７Ｎ３Ｏ５）．通过元素分析、红外光谱、紫外光谱、核磁共振氢谱、热分析等测试手段对其性质进行了研究，从而确定了这类配合物的化学组成和结构，并对其抗菌活性做了研究．

低速离心法测定荧光红GG脂质体包封率

用薄膜分散法制取荧光红GG脂质体,紫外分光光度计520 nm处测其吸光度,计算总浓度.取荧光红GG脂质体,3000 r/min,离心10 min,分离含药脂质体和游离的药物,稀释后测定其上清和沉淀吸光度,计算其浓度.由包封率=(总浓度-沉淀浓度)/总浓度×100%计算包封率.结果发现溶液的稳定性和精密度都良好,测得脂质体中药物的包封率分别为11.89%,11.46%,12.89%,结果较为接近,说明低速离心法是一种有效的水不溶性药物脂质体包封率的测定方法.

奶牛传染性鼻气管炎病毒gG基因PCR检测方法的建立

本试验旨在建立一种PCR技术,既能快速检测牛传染性鼻气管炎病毒,又能区分同属病毒牛疱疹病毒5型和伪狂犬病病毒。根据基因库中牛传染性鼻气管炎病毒gG基因的特异性引物,建立PCR方法,对牛传染性鼻气管炎病毒参考毒株和阳性样本进行扩增,结果均能扩增出一条463bp的特异性条带;对同属的牛疱疹病毒5型进行扩增,获得651bp和431bp两条带;对同属伪狂犬病病毒进行扩增,获得493bp的条带;而非相关病毒(如猪呼吸与繁殖综合征病毒等),不能扩增出条带。对牛传染性鼻气管炎病毒的检测灵敏度为2×10-3 PFU/mL。鉴于该方法具有良好的灵敏度和特异性,将在牛疱疹病毒感染诊断和标记疫苗免疫后的鉴别诊断方面具有良好的应用前景。