基于Hsp70基因的绵羊肺炎支原体TaqMan检测方法的建立及其遗传演化分析

热休克蛋白70 (heat shock protein 70,Hsp70)是绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae, Movi)的重要膜蛋白,是机体内高度保守的生物分子,但在种间差异大,可作为分子生物学检测的候选靶区。为建立基于Hsp70基因的Movi通用型TaqMan实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法,并进一步了解其遗传变异情况,本研究基于GenBank中Movi的Hsp70基因特征,设计特异性的引物及探针,建立了基于Hsp70基因的绵羊肺炎支原体qPCR检测方法。应用建立的检测方法对88份山羊鼻拭子样品及43份疑似羊支原体性肺炎(Mycoplasmal pneumonia of sheep and goats, MPSG)病料进行检测。将检测结果为Movi阳性的肺组织样品进行分离鉴定,并对分离株Hsp70基因进行序列分析。结果显示,建立的qPCR检测方法其相关系数为1.00,扩增效率为96.0%,斜率为-3.411,Y轴截距为37.29。特异性强,与丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri, Mmc)、山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae, Mccp)、莱氏无胆甾原体(Acholeplasmalaidlawii, AL)、无乳支原体(Mycoplasma agalactiae, Maga)、伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis, CP)、羊口疮病毒(orf virus, ORFV)、牛支原体(Mycoplasma bovis, Mb)等牛羊常见病原均无交叉反应;敏感性高,最低检测限为5.72 copies·μL^(-1);重复性优,组内变异系数和组间变异系数均小于1.00%。6株Movi分离株Hsp70基因全长均为1 818 bp,与其它Movi参考株核苷酸和氨基酸同源性分别为96.0%~99.4%和98.0%~100.0%;进一步分析发现,山羊源Movi均比绵羊源多1个N-糖基化位点。遗传演化分析表明,其均处于ClusterⅠA亚分支(均为山羊源)。综上,本研究建立了特异性强、敏感性高、重复性优的基于Hsp70基因的Movi的qPCR检测方法。序列分析发现,不同来源Movi的Hsp70基因核苷酸同源性高;遗传演化分析证实,Movi福建株与山羊源分离株遗传关系较近。本研究不仅为Movi临床诊断提供了技术支持,更为进一步了解Movi遗传演化规律提供参考。

HSP超前探测技术在煤矿TBM掘进巷道中的应用研究

随着全断面掘进机TBM(Tunnel Boring Machine)逐渐应用于煤矿岩巷掘进,对不良地质构造进行超前准确快速预测的需求日益迫切。通过对主动源地震波超前探测方法的特点和TBM破岩震源超前探测技术的适用性进行分析,结合煤矿巷道地质和生产条件,提出了适用于煤矿巷道TBM掘进的HSP超前探测方法。以河南平顶山首山一矿TBM掘进底板瓦斯治理巷道为工程背景,选用防爆硬件一体化设计的探测仪器在煤矿巷道中进行应用。构建了空间型观测方式对煤矿巷道近水平煤线进行探测,优化了双护盾TBM掘进巷道狭小空间检波器阵列式布置参数;基于时频分析、互相关干涉处理、反射与散射联合反演等方法处理原始信号并进行探测结果成像。研究表明:采用空间型观测方式可实现与巷道小角度斜交煤线的识别,设计震源与首检波器间距离为15 m时最优。通过时频分析提取有效信号,利用互相关干涉法获取虚拟震源道和反射特征曲线,并结合反射与散射联合反演成像得到探测区域地层反射能量分布图,能够较准确地推测得到围岩存在的不良地质构造。通过比较现场开挖揭露情况与探测结果发现两者吻合度较高,表明HSP超前探测方法可实现掘进工作面前方100 m范围内超前无损地质预测,有助于提高煤矿岩巷TBM掘进速度。

128例病毒感染患者血清HSP 70水平变化及HSP 70-1基因多态性分析

目的 分析贵州省某院128例新型冠状病毒感染患者血清HSP 70表达水平及HSP 70-1基因多态性变化,并探讨其临床价值。方法 选取2020年1月至2020年2月贵州省某医院收治的128例新型冠状病毒感染患者(病例组),同期128名健康体检者(对照组)。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)比较两组血清中HSP 70水平变化;采用单核苷酸多态性(SNP)基因分型方法检测HSP 70-1(+190位点)基因序列,分析基因多态性。结果 病例组患者血清中HSP 70蛋白高于对照组,差异有统计学意义(Z=6.924,P<0.05),并且随着病例组患者病程的加重,血清HSP 70水平也逐渐升高,各临床分型的HSP70水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);HSP 70-1(+190位点)的基因型GG、GC、CC在患者病例组均存在,与对照组比较,差异有统计学意义(χ^(2)=6.975,P<0.05),此外,轻型患者HSP 70-1 GC基因型的分布频率(59.26%)及普通型患者HSP 70-1 GC基因型的分布频率(52.69%)均高于对照组(39.84%)(P<0.05),而轻型患者HSP 70-1 GG基因型的分布频率(33.33%)及普通型患者HSP 70-1 GG基因型的分布频率(38.71%)均低于对照组(53.90%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HSP 70表达水平及HSP 70-1基因分型与新型冠状病毒感染的发生、发展相关,可辅助新型冠状病毒感染患者临床分型的判断。

丁香酚慢性麻醉对红鲫血液生理及肝脏hsp70和hsp90mRNA表达量的影响

为研究丁香酚慢性麻醉对红鲫(Carassius auratus)血液生理及肝脏中应激基因hsp70和hsp90mRNA相对表达量的影响,试验设置丁香酚处理组和对照组,用15 mg/L丁香酚处理平均体质量(61.9±3.66)g红鲫12 h。试验结果表明,经12 h麻醉后,试验组红鲫除游动变缓外,其它行为表现正常,未出现死亡现象;麻醉组红鲫血液中皮质醇含量、乳酸脱氢酶活力显著下降,而血糖和K^(+)、Na^(+)浓度却显著上升。基因定量结果显示,麻醉组红鲫肝脏中hsp70和hsp90mRNA相对表达量显著高于对照组。综上所述,15 mg/L丁香酚处理12 h内对红鲫未造成明显损伤,可用于其保活运输。

参附汤提取物经miRNA-1调控HSP70表达对心力衰竭模型大鼠线粒体功能的影响

目的探讨参附汤提取物去甲乌药碱(HG)、人参皂苷Rg1经微小RNA-1(miRNA-1)调控热休克蛋白70(HSP70)对心力衰竭大鼠线粒体功能的作用机制。方法选取100只SD大鼠,其中20只常规饲养,其余80只建立阿霉素诱导的心力衰竭模型大鼠,建模成功后分为四组,即模型组、5 mg/kg HG干预的HG组、5 mg/kg人参皂苷Rg1干预的Rg1组以及HG联合人参皂苷Rg1干预的HG/Rg1组,每组20只。4周后观察各组大鼠心功能[左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左室射血分数(EF)、左心室短轴缩短率(FS)]、B型钠尿肽(BNP)、心肌组织中HSP70、线粒体功能指标三磷酸腺苷(ATP)、活性氧(ROS)、线粒体膜电位(MMP)、线粒体超微结构及心肌组织miRNA-1表达量。结果与正常组比较,模型组LVESD[(9.08±1.12)mm比(3.14±0.68)mm,P<0.05]、LVEDD[(15.63±2.41)mm比(6.13±1.14)mm,P<0.05]、BNP[(77.89±4.52)ng/mL比(33.12±3.21)ng/mL,P<0.05]、ROS[(70.98±8.94)U/L比(42.34±4.51)U/L,P<0.05]水平、miRNA-1[3.54±0.23比0.78±0.09]表达量升高,EF[(50.98±5.62)%比(87.96±9.08)%,P<0.05]、FS[(23.54±3.41)%比(51.43±3.42)%,P<0.05]、ATP[(309.90±32.41)μg/L比(745.17±38.89)μg/L,P<0.05]、MMP[(0.60±0.12)ng/mL比(2.65±0.21)ng/mL,P<0.05]、HSP70[0.53±0.05比3.38±0.21,P<0.05]水平降低。与模型组相比,HG组、Rg1组、HG/Rg1组LVESD[(7.11±0.24)mm、(7.18±0.31)mm、(4.78±0.69)mm、比(9.08±1.12)mm,P<0.05]、LVEDD[(13.02±2.31)mm、(13.10±2.18)mm、(8.85±2.12)mm比(15.63±2.41)mm,P<0.05]、BNP[(70.42±4.52)ng/mL、(70.83±6.12)ng/mL、(43.32±4.86)ng/mL比(77.89±4.52)ng/mL,P<0.05]、ROS[(53.62±4.51)U/L、(54.24±6.13)U/L、(65.64±6.71)U/L比(70.98±8.94)U/L,P<0.05]水平、miRNA-1(2.24±0.35、2.20±0.28、1.32±0.11比3.54±0.23,P<0.05)表达量降低,EF[(61.67±4.53)%、(62.43±4.76)%、(76.89±7.96)%比(50.98±5.62)%,P<0.05]、FS[(32.98±3.42)%、(32.65±3.65)%、(45.75±3.42)%比(23.54±3.41)%,P<0.05]、ATP[(563.73±45.32)μg/L、(560.98±46.22)μg/L、(649.07±71.32)μg/L比(309.90±32.41)μg/L,P<0.05]、MMP[(1.56±0.19)ng/mL、(1.60±0.21)ng/mL、(2.13±0.23)ng/mL比(0.60±0.12)ng/mL,P<0.05]、HSP70(1.12±0.10、1.15±0.12、2.34±0.17比0.53±0.05,P<0.05)水平升高。与HG组、Rg1组相比,HG/Rg1组上述指标改善更明显(P<0.05)。HG组、Rg1组各指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论参附汤提取物HG联合人参皂苷Rg1可能通过抑制miRNA-1上调HSP70表达,维护心力衰竭大鼠线粒体结构和功能,从而保护心肌细胞。

苹果蠹蛾热激蛋白Hsp90基因的克隆及热胁迫下的表达分析

世界检疫性害虫苹果蠹蛾Cydia pomonella是一种温度耐受可塑性很高的物种。本研究针对温度波动可能导致其耐热性增强的科学问题,采用生测法鉴定了苹果蠹蛾实验种群的高温耐受阈值,采用同源克隆、RACE和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)等方法研究了苹果蠹蛾热激蛋白Hsp90基因的应激表达对耐热性的重要作用。高温耐受阈值研究结果表明,苹果蠹蛾实验种群的死亡率随温度的升高和时间的延长显著性升高,1-5龄幼虫分别经50℃和52℃高温处理2,5和10min后,3龄幼虫耐热性最差,5龄幼虫最强。50℃和52℃分别处理10min和5min均可导致1-4龄幼虫全部死亡,而5龄幼虫在这两种处理下仍有25.0%和11.1%的存活率。以35℃处理的5龄雌幼虫为材料克隆苹果蠹蛾Hsp90基因全长cDNA,结果显示该基因全长为2470bp,完整开放阅读框为2148bp,共编码716个氨基酸,预测分子量为82.07kDa,命名为Cphsp90(GenBank登录号JN624775)。该基因编码的氨基酸序列与亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis和甘蓝夜蛾Mamestra brassicae等昆虫的Hsp90的氨基酸序列一致性高达96%,表明了Hsp90家族的保守特性。Cphsp90mRNA的相对表达量在32～44℃高温胁迫下随温度的升高而显著增高,证实Cphsp90是诱导型热激基因,且mRNA相对表达量与胁迫程度正相关。Cphsp90基因的表达还具有组织特异性,35℃处理幼虫的表皮中Cphsp90相对表达量显著高于血淋巴、脂肪体和中肠,应激响应最为活跃。与未经温热预处理的昆虫相比,35℃温热预处理3h后的5龄幼虫在40,45和50℃更高的温度胁迫下,Cphsp90mRNA达到最高表达量所需要的胁迫温度有所提升,由未经预热处理的40℃处理10min提高到45℃处理10min,这与温热预处理会增强5龄幼虫耐热性的现象相符,表明Cphsp90基因的响应表达在苹果蠹蛾耐热性及其可塑性过程中发挥重要的作用。

肉鸡组织脏器的急性热应激损伤及HSP_(90)的表达

将 30日龄AA肉鸡在 ( 4 0± 1)℃高温中分别持续 2、 3、 5和 10h ,定期剖杀 ,进行临床血液病理学、组织病理学和免疫组织化学检测。结果表明 :在热应激 2～ 5h内 ,受试鸡外周血液中肌酸激酶活性持续升高 (P <0 0 1) ;当热应激持续到 10h时其活性出现降低 ,但仍明显高于对照组 (P <0 0 1)。受试鸡的组织脏器在应激前期损伤较严重 ,热应激 2～ 5h内 ,各主要脏器组织如心肌纤维、肝细胞、肾小管上皮细胞出现颗粒变性和脂肪变性 ,甚至坏死 ;而后期组织细胞的损伤则无明显坏死。提示在热应激持续一定时间后 ,机体可通过自身调节逐渐获得对高热的耐受能力。免疫组化结果显示 ,HSP90 广泛分布在热应激受试鸡脏器组织细胞的胞浆和胞核中 ,尤其在组织的小动脉、毛细血管内皮细胞内呈现强表达。提示血管壁中HSP90 可能通过血管的舒缩而影响组织器官的血液供应。

榄香烯或热休克对人肝癌细胞HepG_2 HSP70膜表达及多种HSP基因表达的影响

目的 :研究榄香烯或热休克对人肝癌细胞HepG2 HSP70膜表达及多种HSP基因表达的影响。方法 :免疫荧光和FCM观察榄香烯 (5 0 μg ml,1h)或热休克 (42℃ ,1h)处理后肿瘤细胞HSP70的膜表达 ,放线菌素D阻断基因转录。应用人类基因表达谱芯片分析经榄香烯或热休克处理的人肝癌细胞HepG2 多种热休克蛋白基因及与热休克蛋白调控相关基因表达谱的改变。结果 :榄香烯或热休克处理 1h后 ,肿瘤细胞膜表面HSP70的表达均有增高 ,而以榄香烯处理为明显 ,放线菌素D的加入在两种处理中均增高了HSP70膜表达的阳性率。两种处理均使细胞的HSP70HP(EnhancerProtein)基因表达增高 ,而以热休克处理为更明显 ,HSPA2的表达均有所下降 ,也以热休克处理更明显 ,HSF1基因在热休克处理为上调 ,而在榄香烯处理则为下调 ,与肿瘤免疫密切相关的HSP70、HSP72、HSP75及HSP90、gp96基因的表达则没有变化。结论 :榄香烯较热休克处理早期能更多地促进HepG2 细胞HSP70的膜表达 ,其机制可能是与其改变胞内已存在的HSP70的分布 ,和 或促进HSP70mRNA的翻译有关。两种处理均能改变与HSPs调控相关基因的表达 ,并可引起HSPA2基因表达下调。

井穴刺络放血法对MCAO模型大鼠大脑皮层HSP70蛋白表达的影响

[目的]从脑内应激热休克蛋白70(HSP70)蛋白表达的角度观察井穴放血法对急性缺血性脑损伤的脑保护作用。[方法]以凝结法阻断大鼠一侧大脑中动脉造成急性局灶性缺血性脑损伤模型,用免疫组织化学法观察缺血区皮层脑组织HSP70蛋白的表达变化及施加井穴放血法后对其的干预作用。[结果]急性缺血性脑损伤可快速诱导HSP70蛋白在皮层缺血区脑组织的表达增加,其表达有随缺血时间延长逐渐增多的趋势,提示脑的缺血性损伤可应激性地增强神经细胞对缺血、缺氧的耐受和适应能力,而应用井穴放血的干预治疗可明显上调缺血区皮层脑组织HSP70的表达水平,进一步增强脑组织对抗缺血性损伤的应激能力,抵抗缺血性脑损害的进一步发展,增强脑修复能力。[结论]表明井穴放血法在中风早期可提高缺血区脑组织的抗应激能力,发挥出有效的脑保护作用。

Hsp菌剂在牛粪堆肥中的试验应用

报道了Ｈｓｐ菌剂对牛粪堆肥发酵影响的初步试验效果。结果表明，Ｈｓｐ菌剂能迅速提高发酵温度，加快熟化进程，有效杀灭粪中所含的杂草种子和虫卵病菌，具有快速堆肥熟化和无害化的功效。

热应激和吡虫啉对大豆蚜hsp70和hsc70基因mRNA表达的影响

【目的】昆虫在高温或农药的胁迫下,通过高效表达热休克蛋白(HSP)等建立应激自我保护机制。本研究为从转录组水平上认识大豆蚜Aphis glycines在热应激和吡虫啉胁迫下hsp70和hsc70 mRNA表达分子机制,进而寻找自我保护应激反应中的薄弱环节,为大豆蚜的生物防治提供理论基础。【方法】采用同源克隆、RACE技术和实时荧光定量PCR等方法研究不同热激时间和热激后不同恢复时间及不同吡虫啉浓度对大豆蚜4龄若虫hsp70和hsc70的表达影响。【结果】37℃热激后,大豆蚜4龄若虫中hsp70表达量先上调,1 h时升至对照组的10.36倍(P<0.05),然后逐渐下降。同样热激后恢复时间的长短对大豆蚜若蚜中hsp70的表达具有显著影响。热激处理后,大豆蚜若蚜中hsp70立即大量表达,表达量为对照组的8.78倍(P<0.05),随后表达量下降至对照组水平,而hsc70的表达量并没有显著变化(P>0.05)。大豆蚜若蚜受吡虫啉的胁迫时,其hsp70和hsc70的表达量受吡虫啉的浓度及胁迫的时间的影响,呈现先升高后下降的趋势,具有明显的短期效应。【结论】吡虫啉诱导大豆蚜hsp70和hsc70表达量的上调;而热胁迫对hsp70和hsc70 mRNA具有不同的表达模式,高温可以诱导hsp70的表达,但对hsc70没有明显的诱导作用。

针刺对急性高血压脑出血大鼠HSP_(70)mRNA表达的调整作用

目的 :探索针刺对急性高血压脑出血治疗作用的分子机制。方法 :采用分子生物学手段 ,动态观察针刺对急性高血压脑出血大鼠脑组织HSP70 mRNA表达的影响。结果 :针刺能促进HSP70 mRNA在高血压脑出血大鼠脑组织中表达。结论 :针刺促进高血压脑出血大鼠脑组织HSP70 mRNA表达是针刺治疗急性高血压脑出血的重要机制。

松材线虫Hsp70基因的克隆与原核表达

热激蛋白70（Hsp70）是已知热休克蛋白家族中最重要的一种,它在细胞内的大量表达可以明显改善细胞的生存能力,提高对环境胁迫或伤害的耐受性。采用RACE-PCR技术,从松材线虫（Bursaphelenchus xylophilus）中克隆了Hsp70基因的全长cDNA序列（共2 061 bp）（GenBank登录号为：DQ785812）。其编码一个分子量为70 kD的642个氨基酸的蛋白序列,含有3段Hsp70家族的签名序列。同源性分析表明,氨基酸序列与其它真核生物的Hsp70序列具有很高的相似性,并与秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）热激蛋白70家族中的hsp-1基因编码的氨基酸序列更为相似。因此,将克隆的松材线虫Hsp70基因命名为Bx-hsp-1。构建了一个原核表达载体Bx70pEASY-E1,当IPTG终浓度为0.4-0.8 mmol/L时,能诱导表达融合蛋白。Bx-hsp-1基因的克隆和表达,将为松材线虫的生态适应性机理研究奠定基础。

水稻HSPs诱导合成的研究

水稻HSPs在37—40℃开始启动合成,在43℃合成量最大。43℃处理0—9.5小时,可诱导合成两组共18种HSPs。第一组8种HSPs在热激后立即启动合成,其分子量大于50kd;第二组10种HSPs在热激处理3.5小时才启动合成,所有低分子量HSPs都集中在这一组。我们认为,HSPs合成的多级调控主要受处理时间制约,而与高于热激诱导临界温度之上的温度变化无关或关系不大。mRNA体外翻译的结果表明水稻热激mRNA是在热激后新合成的。

HSP法在引汉济渭TBM隧道地质预报中的应用

为了解决超前地质预报与TBM快速施工之间的干扰,结合TBM的施工特点,分析地质预报的难点,介绍适用于TBM施工的HSP声波反射法原理和探测方案。该方法创造性地利用刀盘剪切岩石产生的振动信号为震源信号,采取阵列式布极,获取前方地层特征参数,来预报TBM施工前方的地质条件,来达到TBM快速施工的目标。通过HSP在陕西省引汉济渭工程TBM施工段应用案例的解析和实际情况的对比分析,表明HSP声波反射法对不良地质结构面的存在具有较好的正相关响应,是适用于TBM施工时地质预报的高效方法之一。

氟对暴露工人外周血淋巴细胞HSP70含量的影响

本文用斑点杂交方法检测了氟暴露工人外周血淋巴细胞７０ＫＤ热休克蛋白（ＨＳＰ７０）含量。结果显示：氟暴露工人外周血淋巴细胞ＨＳＰ７０含量显著增加。提示氟对暴露工人外周血淋巴细胞合成ＨＳＰ７０具有一定的诱导作用。

艾灸对急性胃黏膜损伤大鼠HSP60、HSP70表达的影响

目的观察艾灸中脘、足三里穴对急性胃黏膜损伤模型大鼠胃黏膜上皮HSP60、HSP70表达的影响。方法 32只SD大鼠完全随机分为空白组、模型组、艾灸穴位组和艾灸非穴位组。艾灸预处理大鼠8 d无水乙醇灌胃,造急性胃黏膜损伤模型。采用免疫组织化学法检测HSP60、HSP70的表达。结果与空白组比较,模型组中胃黏膜损伤指数、HSP60表达明显升高(P<0.01)。与模型组和艾灸非穴位组相比,艾灸穴位组胃黏膜损伤指数明显降低(P<0.01),HSP60、HSP70过度高表达(P<0.01)。结论艾灸中脘、足三里穴预处理能够降低无水乙醇对胃黏膜的损伤指数,诱导HSP60、HSP70的过度表达,减少伤害性刺激,从而起到保护胃黏膜的作用。艾灸穴位要比非穴位的作用更加明显,说明艾灸对胃黏膜保护作用具有一定的穴位特异性。

Hsp65与HBV多表位融合基因的表达及其免疫应答研究

目的用基因工程的方法构建并表达一种由Hsp65、通用辅助T细胞表位(PADRE)和HBV表面抗原与核心抗原的多个表位组成的乙型肝炎治疗性疫苗(简称为Hsp65-HBV)。方法采用PCR方法人工合成由PADRE和HBV的多个表位组成的基因片段,将此片段克隆入原核表达质粒pET28a/Hsp65后,利用大肠杆菌进行融合蛋白的表达。用纯化后的蛋白免疫Balb/c小鼠。将小鼠脾细胞用HBsAg装载的P815细胞在体外刺激5d后,用流式细胞仪检测IFN-γ+细胞的频率。用ELISA方法检测小鼠血清中的特异性抗体(IgG1和IgG2a)的产生。结果由Hsp65、通用辅助T细胞表位(PADRE)和HBV的多个表位组成的融合蛋白能在大肠杆菌中进行高水平的表达,能诱导小鼠产生IgG2a亚型的特异性抗体,并能诱导HBV特异性的IFN-γ+的淋巴细胞的产生。结论获得了大肠杆菌表达的由Hsp65、通用辅助T细胞表位(PADRE)和HBV的多个表位组成的融合蛋白,并能被机体以MHC-Ⅰ途径递呈,为检测本融合蛋白是否能激发出HBV特异性CTL反应奠定了基础。

艾灸预刺激对阿尔茨海默病大鼠Hsp70、Hsp90的影响

目的:通过观察艾灸预刺激对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠热休克蛋白Hsp70、Hsp90的影响,探讨艾灸防治AD的作用机理。方法:将SD大鼠随机分为4组,即正常组、假手术组、模型组、预艾灸组,每组各10只,以双侧海马注入Aβ1-42制作AD大鼠造模,造模前预艾灸组采用艾条温和灸"百会""肾俞"穴,采用免疫组化法测定大鼠海马CA1区Hsp70、Hsp90的平均光密度表达。结果:通过4周的预艾灸治疗,预艾灸组大鼠海马CA1区Hsp70、Hsp90的平均光密度表达均较模型组有显著提高(P<0.01)。结论:艾灸预刺激方法可能通过诱导脑内Hsp70、Hsp90的表达来抑制Aβ毒性级联反应,从而起到保护神经元的作用。

拟松材线虫两个HSP基因的克隆与分析

采用RACE(快速扩增cDNA末端)技术从拟松材线虫中克隆了HSP70蛋白编码基因mc2和HSP90蛋白编码基因mc19,两个基因的全长cDNA分别为2 067和1 222 bp。生物信息学分析结果表明:mc2基因的ORF为1 926 bp,推测的编码蛋白包含642个氨基酸,分子质量为170.85 ku,等电点为4.69。mc19基因的ORF为1 083 bp,推测的编码蛋白包含361个氨基酸,分子质量为97.70 ku,等电点为4.83。多序列比对和系统进化树结果分析都表明,拟松材线虫的mc2、mc19基因的编码蛋白与植物寄生线虫HSP70和HSP90蛋白具有较高的同源性,拟松材线虫和松材线虫之间的亲缘关系尤其密切。