工况排放测试用ndv值的计算方法

摩托车排气污染物测试中,工况排放的测试是非常重要的,影响因素也是最多的。在进行工况排放测试时,不仅要保证测试环境条件、油品的一致性,更要保证底盘测功机和工况排放分析仪计量有效性,同时还需要根据车辆的性能参数设置对应的换挡信息,保证所有被测车辆在同一条件下运转,保证测试的一致性。

鸡胚免疫新城疫疫苗后宿主法氏囊转录组学分析

【目的】通过转录组学分析鸡胚免疫新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)TS09-C株后宿主法氏囊内免疫关键基因及信号通路分子转录差异,探究免疫后宿主法氏囊内免疫相关分子的调控反应。【方法】将60只18胚龄SPF鸡胚随机分为免疫组和对照组,30枚/组,免疫组将NDV TS09-C株通过羊膜腔接种鸡胚,剂量为103.0 EID 50/枚,注射体积为0.1 mL,对照组以同样的方法接种等体积PBS。检测免疫后不同时间点肺脏、胸腺、脾脏和法氏囊组织的病毒载量。选取病毒载量最高的法氏囊组织进行转录组学测序后,筛选免疫相关差异表达基因并分析其参与的主要功能及通路。【结果】免疫后1 d法氏囊组织中即可监测到病毒,免疫后3 d病毒载量达到最高。将免疫后3 d的法氏囊进行转录组学分析,与对照组相比,免疫组有453个基因上调、98个基因下调,其中免疫相关基因有36个上调、10个下调。免疫相关差异表达基因主要富集于自噬和细胞因子-细胞因子受体相互作用的免疫相关通路。差异表达基因蛋白互作分析显示,自噬通路中富集的BCL2与其他免疫相关基因有较多互作关系,且在B细胞活化、分化、免疫系统发育等功能注释中均有参与。【结论】本研究结果揭示了鸡胚免疫NDV TS09-C株后法氏囊内调控B细胞活化、分化的潜在靶向基因及通路,为进一步研究该毒株鸡胚免疫后B淋巴细胞调控的分子机制提供新的信息。

检测NDV特异性IgG、IgM、IgA的间接ELISA方法的建立

本试验以新城疫病毒 (NDV)感染的鸡胚尿囊液经差速离心 ,庶糖密度梯度离心提纯的NDV为包被抗原 ,以纯化的鸡IgG、IgM及IgA免疫兔 ,制备辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡IgG、IgM及IgA ,分别建立了检测NDV特异性IgG、IgM、IgA的间接ELISA方法 ,抗原最适包被量为 1.34μg/孔。酶标兔抗鸡IgG、IgM、IgA的最佳稀释度分别为 1∶40 0 ,1∶40 0 ,1∶10 0 ;血清样品检测IgG时 ,最适工作浓度为 1∶40 0 ,检测IgM时为 1∶5 0。该方法具有特异性强、灵敏度度、快速简便等优点 ,适合于对各类新城疫特异性抗体的动态监测和大批检测 。

NDV La Sota、V4疫苗免疫鸡及免疫攻毒鸡的主要特异性血清抗体动态变化规律比较

本研究应用间接ELISA方法对新城疫LaSota和V4疫苗免疫SPF鸡及免疫后攻毒SPF鸡的血清中新城疫病毒(NDV)特异性HI抗体、IgM和IgG抗体水平的动态变化进行了检测。结果表明 ,V4较LaSota疫苗免疫鸡HI抗体提前 3天左右出现 ,但除高峰期 (1周左右 )外 ,其HI抗体水平均低于LaSota免疫鸡。LaSota疫苗免疫鸡血清中NDV特异性IgM和IgG抗体水平高于V4免疫鸡 ,IgG抗体高峰较V4免疫鸡提前约 2周出现 ,攻毒后 ,LaSota免疫鸡血清中特异性IgG和IgG回忆应答显著 ,而V4免疫鸡IgM和IgG回忆应答不明显。

金银花、山银花绿原酸类提取物体外抗NDV作用研究

为研究比较价格差异较大的金银花和山银花的体外抗病毒作用,分别提取金银花和山银花绿原酸类活性成分,利用Vero细胞体外培养系统,通过观察细胞病变效应(CPE),并用MTT法检测细胞活性来评价和比较金银花和山银花绿原酸类提取物体外抑制新城疫病毒(NDV)对细胞的感染作用。结果表明:在安全浓度范围内,金银花和山银花绿原酸类提取物均具有显著的抗病毒作用,体外对NDV分别具有明显的阻断作用、抑制作用和中和作用,且两者之间的抗病毒效果差异不显著。本试验为价格相对便宜的山银花在一定领域部分代替金银花提供了实验依据。

新城疫病毒(NDV)HN基因真核表达重组质粒的构建

应用一对自行设计的引物 ,通过反转录 -聚合酶链反应 (RT-PCR)获得新城疫病毒 (NDV) Lasota株的血凝素神经氨酸酶 (HN)基因片段 ,其长度约为 1 .7kb,与已报道的 NDV-HN基因片段大小一致。再将该 HN基因片段定向插入真核表达质粒 pc DNA3中 ,经酶切和测序鉴定 ,表明构建的重组质粒含有 NDV-HN基因片段。

重组酵母鸡α干扰素的诱导表达及其抗MDV、NDV能力

【目的】获得鸡α干扰素重组酵母菌诱导表达的最佳诱导时间和甲醇的体积分数,并测定诱导表达产物对鸡马立克氏病毒(MDV)和鸡新城疫病毒(NDV)的抑制能力。【方法】挑取2个鸡α干扰素重组酵母菌单菌落至BMGY培养基中培养,待菌液OD600为4左右时,分别转接至BMMY培养液诱导,1瓶每隔12 h补加1次体积分数0.5%甲醇,另1瓶每隔12 h补加1次体积分数1%甲醇,于24,48,72 h收集样品,备SDS-PAGE检测用。根据不同时间(24,48,72,96 h)诱导上清液表达量的差异,留用表达量最高时段的上清液,经初步纯化后,利用鸡胚成纤维细胞(CEF),分别测定重组酵母鸡α干扰素抑制MDV及NDV的能力。【结果】鸡α干扰素重组酵母菌在每隔12 h补加1次体积分数1%甲醇诱导48 h时,或每隔12 h补加1次体积分数0.5%甲醇诱导72 h时,重组酵母鸡α干扰素表达量均达到最高;且诱导上清液具有较好地抑制MDV、NDV的能力。【结论】获得了鸡α干扰素重组酵母菌小量发酵的最佳条件;获得的重组酵母鸡α干扰素对MDV和NDV有明显的抑制作用。

NDV小片段多肽F_(14a)的融合表达和应用的研究

将对应NDV强毒株F基因裂解位点附近编码 14个多肽的双链寡核苷酸片段克隆至融合表达载体 pGEMEX 1,构建重组质粒GEMF14a并转化大肠杆菌DE3。将GEMF14a/DE3的融合表达产物免疫兔 ,制备抗多肽抗体。该抗体与NDV强毒株F4 8E9呈ELISA强阳性反应 ,P/N >3 5～ 7 0 ,而与弱毒NDV的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ系呈阴性反应 ,P/N <2 0 ,证明制备的F14a抗多肽抗体是特异的 ,可用于NDV强弱毒株的毒力快速鉴别。

NDV长春株和四平株HN/F核酸疫苗的构建及表达

将新城疫病毒 (NDV)长春株和四平株 HN插入 p IRES1多克隆位点 (Eco R )中 ,构建成核酸表达疫苗 p IRc HN和 p IRs HN,然后切除 p IRc HN和 p IRs HN的新霉素基因 ,将长春株和四平株 F基因分别插入其中 ,构建成 p IRc HNF和 p IRs HNF,而后分别转染 Hela细胞。经血凝效价测定、Western blot分析 ,弱毒株构建的核酸疫苗的血凝活性比强毒株高 1个数量级 ,Hela细胞表达的 HN蛋白量以 p IRc HN最高 ,p IRs HN次之 ,p IRc HNF和 p IRs HNF较低。将重组疫苗转染 Hela细胞 ,用兔抗鸡 Ig Y进行间接免疫荧光试验 ,结果 ,在细胞膜和细胞浆中观察到了特异性的黄绿色荧光 ,证明表达产物具有特异性。

NDV7793体外激活的小鼠单核巨噬细胞(MΦ)对小鼠肝癌细胞的杀伤作用及其机制

目的初步研究NDV7793激活的小鼠单核巨噬细胞(MΦ)对小鼠肝癌Novikoff细胞的杀伤作用,并探讨其杀伤机制与TNF-α和TRAIL的关系。方法从腹腔分离6周龄BALB/C小鼠MΦ,用NDV7793于体外刺激小鼠MΦ,以ELISA分别测定NDV7793刺激小鼠MΦ后产生的TNF-α及TRAIL水平;NDV7793体外刺激MΦ后,与小鼠肝癌Novikoff细胞混合培养,以LDH微量释放法测定小鼠MΦ对小鼠肝癌Novikoff细胞的杀伤效应。同时设立3组实验对照组:IFN-β阳性对照组、紫外线灭活NDV(UV-NDV)对照组以及空白对照组。结果与3个对照组相比,NDV7793在体外能提高MΦ分泌TNF-α、TRAIL的水平;NDV体外刺激后的小鼠MΦ能杀伤小鼠肝癌Novikoff细胞。结论NDV7793在体外能激活小鼠MΦ,小鼠MΦ被NDV7793刺激后,对小鼠肝癌Novikoff细胞的杀伤作用增强,NDV激活后的小鼠MΦ对小鼠肝癌Novikoff细胞的杀伤机制可能与TNF-α和TRAIL有关。

转化型桔梗皂甙抗IBDV、AIV和NDV的研究

为探索中药桔梗的主要活性成分桔梗总皂甙及其转化型桔梗皂甙的生物学活性和抗IBDV、A IV(H9)、NDV的作用,采用M TT法和间接免疫荧光检测试验,分别研究桔梗总皂甙与转化型桔梗皂甙的细胞毒性、对CEF生长和活性的影响以及抗病毒活性。结果表明:桔梗总皂甙和转化型桔梗皂甙对细胞毒性作用的IC50分别为128.74和53.48μg.mL-1,对CEF细胞生长和活性具有最大促进作用的浓度分别为80和25μg.mL-1。桔梗总皂甙阻断IBDV、A IV(H9)、NDV感染CEF细胞的作用分别为66.3%、55.4%和36.9%,抑制三者增殖的作用分别为69.4%、60.8%和26.2%;转化型桔梗皂甙阻断三者感染CEF细胞的作用分别为84.7%、63.5%和45.5%,抑制三者增殖的作用分别为77.8%、63.5%和41.9%,表明桔梗总皂甙经化学处理转变成转化型桔梗皂甙,可明显提高其生物学活性和抗病毒用。

鹅源新城疫病毒单克隆抗体的研制及其与不同NDV毒株的反应性

以鹅源新城疫病毒(NDV)作为免疫原免疫BALB/c小鼠,获得了5 株具有HI特性的单克隆抗体,分别命名为2G5、3A4、3B5、6B1 和8C5,其腹水HI 效价分别为214、212、29、215 和28。竞争ELISA结果表明,2G5、3A4、3B5和6B1在HN蛋白上所针对的表位属于同一抗原区,而8C5针对的表位为另一抗原区。将上述5株单抗与不同来源的NDV进行了HI排谱试验。结果显示,同一抗原区4株单抗的反应谱比较一致,而与另一抗原区单抗8C5 的反应谱明显不同。5 株单抗与鹅源NDV毒株的反应性较强,而与鸽源NDV毒株的反应性较弱。这5 株单抗用HRP标记后再与不同单抗进行交叉夹心ELISA,得到了一个新的系统(2G5 8C5)。用该系统对NDV分离株做排谱试验。结果显示,该系统与鹅源NDV分离株的反应性较好,表明所建立的新系统可用于鹅源NDV的检测。

15株NDV地方株的分离鉴定与生物学特性

从1998～2002年河南省洛阳地区代表性新城疫发病禽群中分离鉴定了15株新城疫病毒(NDV),并对其生物学特性进行了研究.结果表明,15株NDV均呈现良好的血凝活性和特异的血凝抑制特性;对鸡胚的致病作用可被新城疫阳性血清所抑制;对鸡胚最小致死量的平均死亡时间(MDT),1日龄雏鸡脑内接种的致病指数(ICPI)和6周龄鸡静脉内接种的致病指数(IVPI)的测定证实,LD-6-01和LR-2-00株是弱毒株,其余均为强毒株;弱毒株的血凝素热稳定性较好,属慢速血凝解脱型;强毒株的血凝素热稳定性差,属快速或中速血凝解脱型;所有毒株均可较好地凝集鸡和人(O型血)的红细胞,但对其他动物的红细胞凝集性差异较大.对HI抗体为6log2的12日龄雏鸡攻毒试验结果表明,15个分离株中2个弱毒株可得到100%保护;13个强毒株中,LG-1-99,LR-1-98,LD-4-01和LD-3-00得到了70%～90%的保护,而其他9个分离株(LD-1-98,LD-2-99,LD-5-01,LD-7-02,LR-3-02,LW-1-02,LG-2-00,LA-1-99和LE-1-01)基本上得不到保护(0～20%),但所有得不到保护的试验组鸡的发病死亡时间均明显向后推迟.

重组NDV HN基因乳酸菌穿梭表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达

为构建新城疫病毒乳酸菌穿梭表达载体,采用RT-PCR方法从新城疫病毒中扩增了HN基因,将其克隆到pMD18-T Simple Vector中。经测序鉴定正确后,定向克隆至乳酸菌表达载体pW425et中,并转化入表达宿主菌BL21(DE3),利用IPTG诱导表达。采用SDS-PAGE和Western blotting检测重组菌在大肠杆菌中的表达情况。结果表明:NDVHN基因与表达载体pW425et正确重组,且该重组菌传50代次以上,重组质粒依然稳定。SDS-PAGE显示表达出约63 kD的条带,与已知表达的HN蛋白大小相符。Western blotting进一步证实该蛋白能被NDV阳性抗体所识别,具有反应原性。表明构建了重组NDVHN基因乳酸菌穿梭表达载体。

新城疫病毒(NDV)F基因的克隆及其真核表达重组质粒的构建

应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和一对自行设计的引物,从新城疫病毒(NDV)F48E9株扩增出长度为1664bp的DNA片段。与已报道的NDV-融合蛋白(F)基因比较,两者大小一致。经限制性内切酶反应,获得两个预期大小的片段。将克隆的F基因定向插入真核表达质粒pcDNA3中,经酶切和测序鉴定,证明构建的重组质粒含有NDV-F基因。

基于NDVI的云南省植被覆被变化趋势分析

选取云南省为研究区域,利用2001-2015年MODIS中国植被指数合成产品Tiff遥感图像,通过Arcgis软件对遥感图像进行分区统计,得到研究区域各年每月的植被归一化指数(NDVI)。在此基础上进行统计分析,结合当地的生长季与种植制度,分析研究区域植被指数的年际、季节及月变化的特点。结果表明,在2001-2015年,云南省植被指数有增加的趋势,表明在2001-2015年云南省植被覆盖度基本保持稳定或略有增加的趋势;2001-2015年云南省春季和冬季的NDVI整体呈增加趋势,冬季的增速大于春季,夏季NDVI整体呈减少趋势,而秋季处于平稳状态,说明云南省2001-2015年春、冬两季植被覆盖度不断增加;云南省NDVI月变化差异较为明显,与当地生长季和种植制度密切相关,说明植被指数的月变化特征主要受种植作物的影响。

多重PCR同时检测鸡AIV、NDV、IBV、ILTV和MG方法的建立和临床应用

通过建立针对鸡AIV、NDV、IBV、ILTV和MG的多重PCR鉴别诊断技术,并进行了特异性、敏感性试验和临床应用。结果表明:设计的5对引物对同一样品中的RNA(AIV、NDV、IBV)和DNA(ILTV、MG)进行多重PCR扩增,均同时得到5条片段大小与设计相符的特异性片段,即268bp(AIV)、321bp(NDV)、457bp(IBV)、662bp(ILTV)和732bp(MG)。说明该多重PCR技术具有较强特异性和较高敏感性,能检测出1pg AIV、1pg NDV、10pg IBV的RNA和1pg ILTV、10pgMG的DNA。对自然感染鸡临床样品检测的结果则证明,该技术在临床诊断方面具有广阔的应用前景。

新鱼腥草素钠增强NDV LaSota疫苗免疫作用研究

用新城疫病毒(NDV)LaSota株弱毒活疫苗接种1日龄非免疫健康肉雏鸡的同时,以新鱼腥草素钠为免疫佐剂按不同剂量颈部皮下注射,以生理盐水为对照;二次免疫后第7、14、21、28天分别测定各组动物的抗NDV血凝抑制抗体和外周血CD4+/CD8+淋巴细胞比值。结果表明:新鱼腥草素钠对提高鸡体抗NDV血凝抑制抗体效价和外周血CD4+/CD8+淋巴细胞比值都有一定作用,与对照组差异显著(P<0.05),且这种作用与给药剂量有关。另外,新鱼腥草素钠对细胞免疫的影响早于对体液免疫。

NDV La Sota株与H_9N_2亚型AIV血凝谱的比较研究

为进一步研究NDV与AIV的生物学特性,为二者的鉴别诊断提供科学的依据,应用微量血凝(HA)试验比较观察NDV(La Sota)与AIV(H9N2)对鸡等17种动物红细胞的血凝谱。结果显示:NDV(La Sota)与AIV(H9N2)均可凝集鸡、鸭、鸽、鹌鹑、麻雀、喜鹊、赤颈鸫、三趾鹬、鹰鸮、长耳鸮、羊、小白鼠和人(O型)的红细胞,均不凝集兔的红细胞,但对牛、犬、猪红细胞的血凝特性有明显的差异。NDV(La Sota)可凝集这3种动物的红细胞且凝集效价均较高,而AIV(H9N2)对其则不具有凝集作用。表明NDV(La Sota)与AIV(H9N2)对不同动物红细胞血凝谱具有一定的差异性,特别是对不同哺乳动物红细胞的血凝性差异明显。