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鸭圆环病毒ORF-C1基因的扩增及遗传进化分析 被引量:1
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作者 吕振环 赵莎 +10 位作者 卢凤英 杨婧 韩凯凯 黄欣梅 赵冬敏 章丽娇 吴凤瑶 刘宇卓 李银 刘青涛 张小飞 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第5期63-69,共7页
鸭圆环病毒(DuCV)感染能够引起鸭的免疫抑制,引起多种病原的继发性感染,在我国鸭群中广泛流行。为了解DuCV的遗传变异情况,对采自山东、江苏和贵州3个省份的19个鸭场的样品进行了PCR测定,并对DuCV的ORF-C1基因进行测序和遗传进化分析。... 鸭圆环病毒(DuCV)感染能够引起鸭的免疫抑制,引起多种病原的继发性感染,在我国鸭群中广泛流行。为了解DuCV的遗传变异情况,对采自山东、江苏和贵州3个省份的19个鸭场的样品进行了PCR测定,并对DuCV的ORF-C1基因进行测序和遗传进化分析。PCR测定结果显示,19个鸭场中有9个鸭场的样品为DuCV阳性,总体阳性率为47.4%;ORF-C1基因序列测定结果显示,9株DuCV之间的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为93.4%~100%和82.2%~100%,与NCBI中已公布的DuCV毒株的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为77.8%~99.5%和71.5%~-99.6%;遗传进化分析显示,9株DuCV全部属于DuCV-1b亚型,其中有7株在同一分支上,与D11-JW-001等韩国毒株遗传距离较近,另外2株则与山东、广西的毒株遗传距离较近;此外,与已公布的毒株相比,9株DuCV都在158位发生了氨基酸突变,由E/D变为L/P。上述结果表明,DuCV-1仍然为我国鸭群中的优势流行基因型,但病毒的基因也在不断地发生变异,应该对其进行持续监测。 展开更多
关键词 鸭圆环病毒 orf-C1基因 遗传进化分析
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猪细小病毒6型ORF 2基因的截短表达及多克隆抗体制备 被引量:1
2
作者 欧云文 潘琴 +4 位作者 汪洋 代军飞 任绍科 张洋 张杰 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期2487-2495,共9页
【目的】原核截短表达猪细小病毒6型(Porcine parvovirus type 6,PPV6)ORF 2基因,并制备PPV6 VP1(348 aa-675 aa)蛋白多克隆抗体,为后续研究该蛋白的生物学功能提供材料。【方法】以PPV6分离毒株基因组为模板,PCR扩增获得ORF 2截短基因... 【目的】原核截短表达猪细小病毒6型(Porcine parvovirus type 6,PPV6)ORF 2基因,并制备PPV6 VP1(348 aa-675 aa)蛋白多克隆抗体,为后续研究该蛋白的生物学功能提供材料。【方法】以PPV6分离毒株基因组为模板,PCR扩增获得ORF 2截短基因片段,将其克隆至原核表达载体pET30a(+)中构建重组质粒pET30a-PPV6-ORF2。经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,Ni-NTA树脂亲和层析纯化,通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定纯化后重组蛋白。将纯化后的重组蛋白与弗氏佐剂混匀乳化,免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体,采用Western blotting、间接免疫荧光试验(IFA)和间接ELISA鉴定免疫兔血清特异性。【结果】成功构建了pET30a-PPV6-ORF2重组表达载体,原核截短表达了PPV6 VP1(348 aa-675 aa)蛋白;SDS-PAGE结果显示,重组PPV6 VP1(348 aa-675 aa)蛋白大小约为40 ku,主要以包涵体形式存在;Western blotting结果显示,该蛋白可与PPV6阳性猪血清发生特异性结合,具有良好的反应原性;Western blotting间接与ELISA结果显示,纯化后免疫兔血清与PPV6全病毒蛋白发生特异性反应,抗体效价为1∶25600;IFA鉴定结果表明,PPV6 VP1(348 aa-675 aa)蛋白兔源多克隆抗体具有良好的特异性。【结论】本研究成功原核截短表达了PPV6 ORF 2基因并制备了兔抗PPV6 VP1(348 aa-675 aa)蛋白多克隆抗体,为PPV6血清学检测方法的建立和PPV6 VP1蛋白的进一步研究提供了参考。 展开更多
关键词 猪细小病毒6型(PPV6) orf 2基因 截短表达 多克隆抗体
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135位点表达ORFVF1L基因的重组山羊痘病毒的构建
3
作者 余远迪 牟豪 +3 位作者 张阳 郑华 李幸 付利芝 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第8期1808-1813,共6页
【目的】采用Cre/Loxp基因编辑系统,在羊痘病毒135基因位点插入ORFV外源基因F1L,同时引入标记基因,从而构建重组山羊痘病毒,为临床上预防羊口疮疫苗的设计、研制提供参考。【方法】以pDonor载体为基础,135基因编码区两侧500 bp左右的片... 【目的】采用Cre/Loxp基因编辑系统,在羊痘病毒135基因位点插入ORFV外源基因F1L,同时引入标记基因,从而构建重组山羊痘病毒,为临床上预防羊口疮疫苗的设计、研制提供参考。【方法】以pDonor载体为基础,135基因编码区两侧500 bp左右的片段作为上下重组同源臂,中间插入羊口疮病毒F1L基因编码区及标记基因gpt、EGFP、痘病毒早晚期启动子p7.5、p11,并且含有loxp位点,构建同源重组供体质粒命名为pGTPV(135)-ORFV-F1L;并对阳性克隆菌液进行PCR鉴定并测序,经测序正确的菌液接种氨苄LB液体培养基培养过夜,提取去内毒素的质粒并进行双酶切鉴定。山羊痘病毒弱毒株感染永生化山羊睾丸细胞2 h后,重组质粒经脂质体法转染永生化山羊睾丸细胞,观察细胞病变及EGFP标记基因的表达情况;48 h后收获病毒液,反复冻融后离心,盲传3代,通过PCR鉴定目标基因的整合情况,以羊口疮病毒阳性血清为一抗,驴抗山羊IgG为二抗,通过蛋白免疫印迹分析目标基因的表达情况来对获得的重组病毒进行鉴定。【结果】经PCR筛选,成功获得表达羊口疮病毒F1L基因的同源重组供体质粒。经过测序并与目标序列进行比对,结果正确,表明重组质粒成功构建。重组质粒经去内毒素提取后测定浓度并进行双酶切鉴定,结果与预期相符,经鉴定的重组质粒转染山羊睾丸细胞,在48 h后观察到细胞病变及绿色荧光,PCR鉴定结果表明F1L基因整合到重组病毒上。蛋白免疫印迹分析显示,检测到目标蛋白条带,说明重组山羊痘病毒插入的外源基因F1L基因成功表达。【结论】本研究成功构建了一种在135基因位点表达羊口疮病毒F1L基因的重组山羊痘病毒,并在永生化山羊睾丸细胞中,该重组病毒展现出目的基因的稳定表达。以羊痘病毒弱毒株135基因位点插入羊口疮病毒F1L外源基因,该重组病毒在永生化山羊睾丸细胞中获得,目的基因能稳定表达,成功构建135基因位点插入羊口疮病毒F1L基因的重组山羊痘病毒方法。 展开更多
关键词 羊痘病毒 羊口疮病毒 F1L基因 重组病毒
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叶用芥菜细胞质雄性不育相关基因orf220的分子特性 被引量:19
4
作者 杨景华 张明方 +2 位作者 喻景权 王涛 陈竹君 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第6期594-599,共6页
采用榨菜细胞质雄性系为不育源,通过变种间杂交和回交的方法,转育叶用芥菜细胞质雄性不育种质。根据Brassicanap型细胞质雄性不育相关基因orf222设计兼并引物,利用特异引物PCR方法,分别在不育源、F1、BC2以及BC3世代中扩增出一条600~70... 采用榨菜细胞质雄性系为不育源,通过变种间杂交和回交的方法,转育叶用芥菜细胞质雄性不育种质。根据Brassicanap型细胞质雄性不育相关基因orf222设计兼并引物,利用特异引物PCR方法,分别在不育源、F1、BC2以及BC3世代中扩增出一条600~700bp大小的特异条带,而在叶用芥菜保持系中无此条带,具细胞质基因遗传特性。进一步序列分析表明,此特异条带大小为663bp,具有起始密码子和终止密码子,编码220个氨基酸,定名为orf220。同时,orf220推导的氨基酸序列存在两个跨膜区,氨基端与Oenotheraberteriana中的COXⅢ(线粒体细胞色素氧化酶复合体亚基)、萝卜中的ATP8(线粒体ATP酶复合体亚基)以及向日葵中的ORFB(ATP酶复合体α亚基相关)蛋白氨基端高度同源。RT PCR方法分析表明,orf220基因的表达为组成性表达,无器官特异性。 展开更多
关键词 叶用芥菜 细胞质雄性不育 orf220
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细胞质雄性不育相关基因orf224的克隆及其植物表达载体的构建 被引量:16
5
作者 王永飞 马三梅 +2 位作者 张鲁刚 王鸣 郑学勤 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2002年第4期9-12,共4页
利用 PCR技术从油菜 Polim a不育系中扩增出细胞质雄性不育相关基因 orf 2 2 4 ,并将其克隆到p GEM- T Easy载体上得到重组质粒 p GEMORF。在此基础上 ,用限制性内切酶将 orf 2 2 4基因从质粒 p GEMORF上切下 ,连接在 p BI12 1质粒的 Ca... 利用 PCR技术从油菜 Polim a不育系中扩增出细胞质雄性不育相关基因 orf 2 2 4 ,并将其克隆到p GEM- T Easy载体上得到重组质粒 p GEMORF。在此基础上 ,用限制性内切酶将 orf 2 2 4基因从质粒 p GEMORF上切下 ,连接在 p BI12 1质粒的 Ca MV 35 S启动子和 NOS终止子之间。经 PCR和酶切鉴定 ,得到了 orf 2 2 4基因的植物表达载体 p 展开更多
关键词 细胞质 雄性不育 相关基因 orf224 克隆 植物 表达载体
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羊痘一例 被引量:1
6
作者 熊飞 曹经江 《中国麻风皮肤病杂志》 2024年第3期214-215,共2页
本文报道一例羊痘患者,给予口服伐昔洛韦、外用夫西地酸乳膏及红光照射治疗2周后皮损完全消退。
关键词 羊痘
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猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒河南分离株ORF3-7基因克隆与序列分析 被引量:11
7
作者 尹彦涛 夏平安 +5 位作者 崔保安 王建举 党占国 柴春霞 陈红英 李新生 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期496-500,共5页
参照GenBank中公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株ATCC VR2332的ORF3~7基因序列,利用Pri mer软件分别设计合成了针对PRRSV ORF3、ORF4、ORF5、ORF6和ORF7基因的特异性引物,利用RT-PCR从河南分离株Hn-1/06株分别扩增得到了大... 参照GenBank中公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株ATCC VR2332的ORF3~7基因序列,利用Pri mer软件分别设计合成了针对PRRSV ORF3、ORF4、ORF5、ORF6和ORF7基因的特异性引物,利用RT-PCR从河南分离株Hn-1/06株分别扩增得到了大小约964、675、718、566和501 bp的片段,并将扩增的片段插入PGEM-T-easy载体进行测序。利用DNAStar软件进行序列分析表明,河南分离株Hn-1/06株属于美洲型,同时将Hn-1/06株ORF3~7基因的核苷酸序列和推导氨基酸序列与ATCC VR2332、LV、Resp、CH-1a、BJ-4、S1、CC-1、HB-1、JX0612、HUB1等分离株进行了同源性分析。 展开更多
关键词 PRRSV 河南分离株Hn-1/06株 orf3-7基因 克隆与序列分析
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猪生殖-呼吸道综合征病毒CH-1a株ORF2~7序列测定 被引量:10
8
作者 仇华吉 童光志 +5 位作者 周彦君 郭宝清 张绍杰 王柳 蔡雪晖 刘宝全 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第2期156-158,共3页
新近发现的猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)是单股RNA病毒,属于不久前成立的动脉炎病毒科。为了比较从国内分离的PRRSV与欧美PRRSV毒株的分子遗传学关系,本文扩增并克隆了PRRSVCH-1a株ORF2~7,... 新近发现的猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)是单股RNA病毒,属于不久前成立的动脉炎病毒科。为了比较从国内分离的PRRSV与欧美PRRSV毒株的分子遗传学关系,本文扩增并克隆了PRRSVCH-1a株ORF2~7,测定了其核苷酸序列。用序列分析软件进行核苷酸和氨基酸序列比较分析,结果表明CH-1a株与欧洲型代表株LV的遗传关系较远,与北美洲型代表株VR-2332遗传距离最近,可能来自同一祖先。 展开更多
关键词 orf2~7 序列测定 PRRSV
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猪圆环病毒Ⅱ型ORF2截短基因的克隆及原核表达 被引量:8
9
作者 林彦星 孙彦伟 +2 位作者 刘镇明 戚一达 耿忠海 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期464-468,共5页
参照GenBank中猪圆环病毒Ⅱ型(Porcinecircovirus type 2,PCV2)的ORF2基因序列,设计合成1对引物,对PCV-2ZS株ORF2基因上含主要抗原位点的片段(ORF2-ME)进行PCR扩增,并克隆到pMD18-T Simple Vector中,进行序列测定。将重组质粒... 参照GenBank中猪圆环病毒Ⅱ型(Porcinecircovirus type 2,PCV2)的ORF2基因序列,设计合成1对引物,对PCV-2ZS株ORF2基因上含主要抗原位点的片段(ORF2-ME)进行PCR扩增,并克隆到pMD18-T Simple Vector中,进行序列测定。将重组质粒pMD—ORF2-ME的EcoR Ⅴ和Xhol Ⅰ双酶切产物插入原核表达载体pET-32a(+),构建原核表达载体pET—ORF—ME。测序分析表明,克隆的ORF2-ME与GenBank上公布的PCV2毒株核苷酸序列同源性为99%~100%,推导的氨基酸序列同源性介于91%~100%之间。原核表达载体导入BL21(DE3)后用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS—PAGE和Western Blotting分析,结果表明ORF2-ME在BL21(DE3)中成功表达,所表达融合蛋白的相对分子质量约为40000,并能被PCV2阳性血清所识别,这就为PCV2感染诊断和抗体检测提供了依据。 展开更多
关键词 PCV2 orf2截短基因 克隆 表达
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羊口疮病毒ORF129基因重组质粒的构建及其在BHK-21细胞中的表达 被引量:10
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作者 白刚 贾怀杰 +4 位作者 何小兵 王盈盈 何妍萍 吴润 景志忠 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期8-13,共6页
为研究羊口疮病毒(ORFV)ORF129基因编码的锚蛋白调节宿主天然免疫应答的作用机制,利用PCR技术对ORFV/QH01/2010分离株ORF129基因进行扩增,并连接到pGEM-T easy载体,构建pGEM-ORF129重组质粒,双酶切后与pEGFP-N1真核表达载体连接,构建pEG... 为研究羊口疮病毒(ORFV)ORF129基因编码的锚蛋白调节宿主天然免疫应答的作用机制,利用PCR技术对ORFV/QH01/2010分离株ORF129基因进行扩增,并连接到pGEM-T easy载体,构建pGEM-ORF129重组质粒,双酶切后与pEGFP-N1真核表达载体连接,构建pEGFP-ORFV-ORF129真核表达质粒,经酶切、PCR鉴定及测序正确后转染BHK-21细胞,观察其在细胞中的表达情况.结果表明:ORFV ORF129基因在BHK-21细胞中获得稳定表达,并为进一步研究其编码蛋白在ORFV感染过程中的分子机制奠定了基础. 展开更多
关键词 羊口疮病毒 orf129基因 BHK-21细胞 融合表达
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鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF4基因的克隆、表达与免疫学检测方法 被引量:11
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作者 周勇 范玉顶 +4 位作者 徐进 马杰 江南 刘文枝 曾令兵 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2017年第1期61-65,共5页
根据鲤疱疹病毒II型(Cyprinid herpesvirus Ⅱ,Cy HV-2)ORF 4基因序列(Gen Bank:JQ815364.1)设计特异性引物,PCR扩增得到ORF 4基因编码框全长序列1 041 bp,将其克隆至原核表达载体p ET-32a(+)中,构建了重组原核表达载体p ET-32a-ORF 4。... 根据鲤疱疹病毒II型(Cyprinid herpesvirus Ⅱ,Cy HV-2)ORF 4基因序列(Gen Bank:JQ815364.1)设计特异性引物,PCR扩增得到ORF 4基因编码框全长序列1 041 bp,将其克隆至原核表达载体p ET-32a(+)中,构建了重组原核表达载体p ET-32a-ORF 4。将p ET-32a-ORF 4重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导得到融合表达的重组蛋白,融合表达的重组蛋白主要以包涵体的形式存在,其分子质量约为57 ku,与预期大小一致。将纯化的重组蛋白免疫日本大耳兔,制备了多克隆抗体,ELISA检测抗体效价大于1∶50 000,Western blot检测显示该抗体可以特异性识别重组蛋白。间接免疫荧光检测结果表明:该多克隆抗体可与由Cy HV-2感染引起细胞病变的异育银鲫脑组织细胞(GICB)发生特异性的结合。 展开更多
关键词 鲤疱疹病毒Ⅱ型 orf4 原核表达 多克隆抗体 免疫荧光检测
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羊口疮病毒基因组结构及重要基因功能研究进展
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作者 张江绒 田谦 +3 位作者 王艳华 周洛译 孙跃峰 王光祥 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第9期142-151,共10页
羊口疮是由羊口疮病毒(orf virus, ORFV)引起的一种人畜共患疾病,具有接触性、嗜上皮性和自限性的特征,该疾病在全球范围内广泛流行,严重影响公共卫生,对养羊业也造成不可忽视的经济损失。本文主要综述了国内外在羊口疮病原学、基因组... 羊口疮是由羊口疮病毒(orf virus, ORFV)引起的一种人畜共患疾病,具有接触性、嗜上皮性和自限性的特征,该疾病在全球范围内广泛流行,严重影响公共卫生,对养羊业也造成不可忽视的经济损失。本文主要综述了国内外在羊口疮病原学、基因组结构以及功能基因等方面的研究进展,旨在为相关学者提供研究参考。通过对病毒基因组及其功能基因的深入解析,不仅有助于深入理解病毒的致病机理和宿主的互作机制,同时也为疫苗的研发提供理论依据。 展开更多
关键词 羊口疮 羊口疮病毒 功能基因
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猪生殖和呼吸综合征病毒B_(13)株ORF7基因的克隆及在杆状病毒系统中的表达 被引量:21
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作者 赵耘 罗长宝 +4 位作者 陈茹 林志雄 李树根 陈博文 刘尚高 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期75-80,共6页
利用单管RT PCR方法扩增猪生殖和呼吸综合征病毒 (PRRSV)分离株B13 株包括ORF7基因的片段 ,并对其序列进行了测定 ,结果PRRSV分离株B13 ORF7基因长度为 384bp ,编码 12 8个氨基酸组成的 15kD蛋白。与已发表的PRRSVLV株、VR 2 332株进行... 利用单管RT PCR方法扩增猪生殖和呼吸综合征病毒 (PRRSV)分离株B13 株包括ORF7基因的片段 ,并对其序列进行了测定 ,结果PRRSV分离株B13 ORF7基因长度为 384bp ,编码 12 8个氨基酸组成的 15kD蛋白。与已发表的PRRSVLV株、VR 2 332株进行同源性比较 ,发现核苷酸同源性分别为 99 2 %、5 9 4% ;氨基酸同源性分别为98 4%、5 4 7%。表明PRRSV分离株B13 在基因结构上可能与LV株同属于欧洲亚群。同时构建了重组转移载体质粒 pAcGHLT B ORF7,用该重组转移载体质粒与线性化苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒 (AcMNPV SVI-G)基因组DNA(baculogoldlinearizedbaculovirusDNA)共转染草地夜蛾 (Spodoptcrafrugiperda ,Sf9)细胞 ,得到重组病毒AcMNPV OCC- GST 6xHis ORF7。在感染了重组病毒的Sf9细胞中检测到分子量为 46kD的ORF7基因的GST融合蛋白表达产物 ,能被猪抗PRRSVB13 株多克隆血清所特异识别。 展开更多
关键词 猪生殖和呼吸综合征病毒 PRRSV orf7基因 测序 杆状病毒表达载体 表达
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羊口疮病毒蛋白ORFV035的表达、纯化和多克隆抗体的制备 被引量:5
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作者 陈慧芹 王小平 +3 位作者 罗树红 王丽洁 陈倩倩 郝文波 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期150-154,共5页
克隆表达羊口疮病毒蛋白ORFV035,并制备其多克隆抗体,为后续对病毒复制、装配、形态发生和成熟过程的研究奠定基础。PCR扩增羊口疮病毒ORFV035基因,将其与质粒pET-30a(+)经Bam HⅠ和HindⅢ双酶切后连接,构建重组质粒pET30a-035。重组质... 克隆表达羊口疮病毒蛋白ORFV035,并制备其多克隆抗体,为后续对病毒复制、装配、形态发生和成熟过程的研究奠定基础。PCR扩增羊口疮病毒ORFV035基因,将其与质粒pET-30a(+)经Bam HⅠ和HindⅢ双酶切后连接,构建重组质粒pET30a-035。重组质粒经双酶切和测序鉴定,转化感受态大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定蛋白表达情况。表达产物进行超声破碎和Ni柱纯化,纯化后目的蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体并对其进行鉴定。成功构建了重组质粒pET30a-035,在大肠杆菌BL21中以包涵体形式高效表达。包涵体洗涤、溶解后进行Ni柱纯化,得到纯度较高的ORFV035-his融合蛋白。以纯化蛋白免疫小鼠获得多克隆抗体。Western blot检测显示该多抗可以识别天然ORFV035蛋白。成功诱导表达、纯化ORFV035蛋白并制备ORFV035多克隆抗体。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 orfV035 纯化 多克隆抗体
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我国两个不同地区猪繁殖和呼吸综合征病毒分离株ORF5基因序列比例 被引量:9
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作者 姜平 陈溥言 +3 位作者 姜志华 蔡家利 董永毅 蔡宝祥 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期70-72,共3页
To elucidate the characteristics of molecular epidemiology of PRRSV in China, the nucleotide sequence of open reading frame 5 (ORF5) coding regions from two wild PRRSV strains, J1 and S1, isolated in northern and mid-... To elucidate the characteristics of molecular epidemiology of PRRSV in China, the nucleotide sequence of open reading frame 5 (ORF5) coding regions from two wild PRRSV strains, J1 and S1, isolated in northern and mid-eastern regions of China was determined by RT-PCR. Comparison showed that only 4 different bases between J1 and S1 strains resulted in 3 amino acid (aa. )changes in their deduced proteins. There were 3 and 2 different aa. between the deduced aa. sequences of J1, S1 strains and the American prototype ATCC virus VR2332 respectively, while there existed 16 and 15 aa. changes between the 2 isolates and the modified live vaccine strains derived from VR2332. The putative protein molecular weight, isoelectric point, signal region, glycosylation site and possible transmembrane helices of ORF5 of each strains were similar to that of VR2332 strain. These results showed that the two isolates belong to the same genotype and they may come from USA. 展开更多
关键词 猪繁殖 呼吸综合征病毒 orf5基因 基因序列
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基于ORF Finder方法的植物ITS片段结构特点分析 被引量:8
16
作者 司源 郭亦琦 孔航辉 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2005年第5期54-56,共3页
非编码区ITS(The Internal Transcribed Spacer)片段是目前分子系统学研究中应用最广的分子标记之一。运用生物信息学ORF finder技术,以单子叶网状叶脉植物的ITS片断为例进行分析,探讨了ITS内编码区5.8S和非编码区ITS1和ITS2的基本位置... 非编码区ITS(The Internal Transcribed Spacer)片段是目前分子系统学研究中应用最广的分子标记之一。运用生物信息学ORF finder技术,以单子叶网状叶脉植物的ITS片断为例进行分析,探讨了ITS内编码区5.8S和非编码区ITS1和ITS2的基本位置。并通过分析单子叶网状叶脉植物和菝葜科部分种类的ITS序列特点,研究了该片段在科、属、种间存在的关系和变异特点。 展开更多
关键词 ITS序列 orf FINDER 单子叶网状叶脉植物 菝葜科
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2014年中国不同地区对虾白斑综合征病毒ORF14/15和ORF23/24缺失区序列比较 被引量:4
17
作者 孙新颖 刘庆慧 +1 位作者 万晓媛 黄倢 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2016年第4期140-146,共7页
对虾养殖面临诸多病害威胁,对虾白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)是养殖对虾主要病原之一,WSSV不同地理株的变异可能导致WSSV毒力的变化。为了解2014年中国大部分地区WSSV ORF14/15和ORF23/24的变异情况,本研究选择2014... 对虾养殖面临诸多病害威胁,对虾白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)是养殖对虾主要病原之一,WSSV不同地理株的变异可能导致WSSV毒力的变化。为了解2014年中国大部分地区WSSV ORF14/15和ORF23/24的变异情况,本研究选择2014年1月–8月期间采集的48份WSSV阳性样本,用特异引物扩增ORF14/15和ORF23/24片段,连接于T载体,转化至Top10中,筛选阳性克隆,测序分析不同样本之间的缺失差异。结果显示,能够扩增ORF14/15和ORF23/24样品的比例分别为43.75%和33.33%。在ORF14/15扩增中,分别扩增出1260 bp、1270 bp、1892 bp和2662 bp片段,与TH-96-Ⅱ比对共有4种缺失情况,即缺失6540 bp、6530 bp、5908 bp和5138 bp。而在ORF23/24扩增中,分别扩增出1140 bp和1146 bp片段,与中国台湾株(TW)比对有两种缺失情况,即缺失12070 bp和12064 bp。研究结果表明,WSSV在中国大部分地区存在一定程度的变异,而不同毒株之间在ORF14/15可变区差异比较明显,在ORF23/24可变区差异不大,但均具有大片段缺失。 展开更多
关键词 WSSV orf14/15 orf23/24 序列分析
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LINE-1 ORF-1p对肝脏肿瘤细胞系和肝源永生化细胞系增殖的调控作用 被引量:3
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作者 冯帆 高旭东 +6 位作者 陆荫英 张帆 王博 常秀娟 曲建慧 王春平 杨永平 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期213-216,共4页
目的研究反转座子LINE-1编码蛋白LINE-1 ORF-1p对肝脏肿瘤细胞系以及肝源永生化细胞系增殖能力的影响。方法构建针对LINE-1 ORF-1编码序列的siRNA表达载体(LINE-1 ORF-1p psilence2.1-U6-siRNA),转染肝脏肿瘤细胞系Bel-7402、SMMC-7721... 目的研究反转座子LINE-1编码蛋白LINE-1 ORF-1p对肝脏肿瘤细胞系以及肝源永生化细胞系增殖能力的影响。方法构建针对LINE-1 ORF-1编码序列的siRNA表达载体(LINE-1 ORF-1p psilence2.1-U6-siRNA),转染肝脏肿瘤细胞系Bel-7402、SMMC-7721、HepG2和肝源永生化细胞系LO2。采用Western blotting检测LINE-1 ORF-1p siRNA表达载体对LINE-1 ORF-1编码蛋白LINE-1 ORF-1p表达的影响,采用MTT法检测LINE-1 ORF-1p表达受抑对细胞增殖的影响。结果在肝脏肿瘤细胞HepG2、Bel-7402、SMMC-7721和肝源永生化细胞LO2中,转染LINE-1 ORF-1p siRNA表达载体均能降低LINE-1 ORF-1p的表达水平,并从第3天起显著抑制前述细胞的增殖(P<0.05),其抑制率分别为63%、51%、40%、43%。结论抑制LINE-1 ORF-1p蛋白表达后可使肝脏肿瘤细胞系和永生化细胞系的增殖受抑。 展开更多
关键词 肝肿瘤 RNA 小分子干扰 LINE-1 orf-1p 细胞增殖
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E.coli表达HEV ORF2编码蛋白第112~607氨基酸片段的免疫原性及其诱生抗体的病毒中和活性 被引量:2
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作者 李洪钊 冮宏映 +5 位作者 刘晓 张光明 孙强明 李燕 马雁冰 孙茂盛 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2003年第5期264-266,共3页
目的 探讨E.coli表达的戊型肝炎病毒(HEV)ORF2编码蛋白第112~607氨基酸片段(pORF2-56K)的免疫原性及其诱生抗体的病毒中和活性。方法 pORF2-56K免疫小鼠和豚鼠,用ELISA检测血清抗体效价。将HEV毒种与高效价豚鼠灭活血清在体外孵育后,... 目的 探讨E.coli表达的戊型肝炎病毒(HEV)ORF2编码蛋白第112~607氨基酸片段(pORF2-56K)的免疫原性及其诱生抗体的病毒中和活性。方法 pORF2-56K免疫小鼠和豚鼠,用ELISA检测血清抗体效价。将HEV毒种与高效价豚鼠灭活血清在体外孵育后,接种于2BS细胞,用RT-PCR检测病毒RNA的复制情况。结果E.coli表达的pORF2-56K可诱导机体产生高水平的HEV特异性抗体和强烈的免疫记忆。该抗体可在体外有效中和HEV,使之失去在2BS细胞中有效复制的能力。结论 E-coli表达的pORF2-56K具有良好的免疫原性,且其诱生抗体具有中和HEV的能力,可作为HEV重组疫苗的候选抗原。 展开更多
关键词 表达 HEVorf2编码蛋白 氨基酸片段 免疫原性 诱生抗体 中和活性 戊型肝炎病毒
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抗羊口疮病毒蛋白ORFV086多克隆抗体的制备及其应用 被引量:4
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作者 王小平 郝文波 +1 位作者 罗树红 宁章勇 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第11期7-13,共7页
本试验旨在克隆表达羊口疮病毒(ORFV)蛋白ORFV086,制备兔抗ORFV086蛋白多克隆抗体并检测ORFV086蛋白的表达。以ORFV基因组DNA为模板,利用PCR方法扩增ORFV086的基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-33b(+)。将构建的pET33b-086重组表达... 本试验旨在克隆表达羊口疮病毒(ORFV)蛋白ORFV086,制备兔抗ORFV086蛋白多克隆抗体并检测ORFV086蛋白的表达。以ORFV基因组DNA为模板,利用PCR方法扩增ORFV086的基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-33b(+)。将构建的pET33b-086重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)pLys感受态细胞,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达,以纯化蛋白作为免疫原,免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体。应用ELISA和Western blotting方法对所得抗体进行检测。结果显示,重组蛋白pET33b-086主要以包涵体形式存在,分子质量约为100ku;目的蛋白经切胶纯化回收后作为免疫原制备的多克隆抗体效价达1∶128000;纯化的多克隆抗体可用于检测重组及天然ORFV086蛋白,特异性好。本试验制备了ORFV086多克隆抗体,为深入研究ORFV086蛋白在羊口疮病毒感染过程中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 orfV086蛋白 原核表达 包涵体 多克隆抗体
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