利用CRISPR/Cas9编辑系统构建ACTA1基因敲除的PEFs细胞系

【目的】利用CRISPR/Cas9技术获得α-肌动蛋白1(actin alpha 1,ACTA1)基因敲除的猪胎儿成纤维细胞(porcine embryo fibroblasts, PEFs),为后续在细胞水平上探究猪ACTA1基因功能及发掘友好基因座位奠定基础。【方法】通过实时荧光定量PCR检测ACTA1基因在巴马小型猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背部皮下脂肪和背最长肌7种组织中的表达情况;利用CRISPOR在线网站在猪ACTA1基因第7外显子区域设计3条向导RNA(single guide RNA,sgRNA),并将其连接至pX330载体;通过T7E1酶切检测不同sgRNA活性,选择效率较高且符合目标的载体质粒共转染至PEFs中;利用有限稀释法筛选单克隆细胞,并对获得的单克隆细胞进行基因型鉴定和脱靶分析。【结果】实时荧光定量PCR结果表明,ACTA1基因在背最长肌中的表达量极显著高于其他组织(P<0.01)。设计的3条sgRNA的基因编辑效率分别为24.87%(sgRNA1)、39.59%(sgRNA2)、36.93%(sgRNA3),综合切割位置和基因编辑效率,选用sgRNA1和sgRNA2共转染细胞。基因型鉴定结果表明,获得的69株单克隆细胞中有20株单克隆细胞发生了编辑,其中单等位基因片段敲除细胞3株,双等位基因片段敲除细胞1株,片段敲除效率为5.8%(4/69)。脱靶分析结果显示,在预测的脱靶位点未检测到脱靶效应。【结论】本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑系统成功构建了ACTA1基因纯合敲除的PEFs,研究结果为进一步探究ACTA1基因对猪骨骼肌发育调控提供了技术支撑和理论基础,同时为挖掘猪组织特异性表达的友好位点提供新思路。

生物基PEF和石油基PET微塑料对微藻生物效应

微塑料(MPs)对水生生态系统主要生产者微藻的生物效应及其相互作用,目前还没有得到足够的关注.为此以蛋白核小球藻为受试生物,考察聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET,石油基塑料)及其替代物聚2,5-呋喃二甲酸乙二醇酯(PEF,生物基塑料)两种MPs对微藻产生的生物效应,并进行比较.结果表明,PEF和PET MPs能够抑制微藻细胞生长及其体内叶绿素的积累,扰乱微藻的抗氧化平衡体系,对活性氧(ROS)的积累及抗氧化酶的活性具有诱导和促进作用.研究还发现,PEF和PET MPs会促进微藻胞外聚合物(EPS)的分泌,降低胞内大分子物质的含量;通过扫描电子显微镜发现许多微藻细胞黏附在粗糙的MPs表面形成异质聚集体.PEF和PET MPs对微藻的生物效应具有一定的差异性,尤其是EPS的分泌方面,PEF MPs对EPS分泌的促进作用大于PET MPs的;从侧面来看,生物基PEF MPs可能具备更好的生物降解性能.研究结果为不同来源(生物基或石油基)MPs的生物效应研究提供了基础数据,为生物基MPs环境风险评估提供了研究基础.

PEF中脉冲上升沿对金黄色葡萄球菌杀菌的影响

方波脉冲因能量集中、能量利用率高、杀菌效果好而被认为是PEF技术的最优选择。但关于其上升时间对杀菌效果影响的研究和报道都比较少。为此,研究了在脉冲电场(PEF)技术中,高压方波脉冲的上升前沿对金黄色葡萄球菌杀菌效果的影响。通过实验分别比较了在上升时间为2μs和200ns的高压方波脉冲作用下,3种不同电导率(1.5、2.0、2.5mS/cm)的苹果汁在有效处理时间75μs、电场强度分别为25、30、35kV/cm下对金葡菌的杀灭效果。实验结果表明:在处理时间和脉冲电场强度等其它因素都相同的条件下,陡前沿的方波脉冲电场比上升时间长的方波脉冲电场对金葡菌的杀灭效果更好,平均能提高0.5个对数;处理后的温升也要低1～6°C。

哮喘症状评分及PEF评价普鲁司特治疗支气管哮喘的临床疗效

目的:用哮喘症状评分及峰速仪测量PEF评价国产普鲁司特胶囊治疗支气管哮喘的临床疗效。方法:双盲、随机、平行、对照方法观察225例支气管哮喘患者用药前、后哮喘自觉症状、肺功能指标、实验室指标及不良反应。结果:两组患者治疗后第1、2、3、4周的平均晨间、夜间PEF值较治疗前均有显著改变(P<0.001)。治疗4周后,两组患者的平均日间、夜间哮喘症状评分均明显减少,日间、夜间无症状天数的百分数明显增加。两组患者的全天无症状天数的百分数增加,日间、夜间两组患者用喘乐宁气雾剂喷数减少;两组患者治疗期间全天未用喘乐宁气雾剂天数的百分数增加,两组组间均无显著差异(P>0.05)。结论:哮喘症状评分及PEF能很好地评价国产普鲁司特胶囊的临床疗效,该药能改善支气管哮喘患者的PEF值、减轻哮喘症状,不良反应轻微,有良好的临床疗效及安全性。

三种转染试剂对PEF细胞与BHK细胞转染效率的比较

【目的】比较三种转染试剂对原代细胞和传代细胞的转染效率,选择合适的转染试剂。【方法】以EGFP为报告基因,分别用脂质体、磷酸钙、罗氏试剂转染PEF细胞和BHK细胞。通过改变转染试剂和质粒DNA的剂量,利用流式细胞仪分析转染效率,从而确定最佳的转染试剂。【结果】对于PEF细胞,脂质体和磷酸钙转染效果不理想,细胞死亡率高,绿色荧光表达量少。罗氏转染试剂相对较好,细胞死亡率低,并且保持原有细胞形态。对于传代细胞BHK细胞而言,各转染试剂均可达到理想转染效果。【结论】不同的细胞对转染试剂的选择也不同,传代细胞BHK用脂质体即可达到理想的效果。利用罗氏试剂可以提高转染效率,但不明显。而对于原代细胞PEF,脂质体与磷酸钙试剂的转染效率很低。相比较而言,罗氏转染试剂效果更好些,细胞毒性小,转染率在10%～12%。

高压脉冲电场(PEF)对蛋清蛋白功能特性的影响

蛋清蛋白不仅具有重要的营养价值,而且还具有重要的功能特性如乳化性、起泡性等,作为一种重要的蛋白原料,本实验研究了高压脉冲电场对蛋清蛋白功能性质的影响。结果表明:蛋清蛋白的溶解度在脉冲电场强度大于35kV/cm时下降;蛋清蛋白的乳化性、起泡能力、泡沫稳定性及疏水性先随脉冲电场强度增加而增大,但当脉冲电场强度大于30kV/cm后,蛋清蛋白的乳化性、起泡能力、泡沫稳定性及疏水性下降;随着脉冲电场数的增加,蛋清蛋白的溶解度、乳化性、起泡能力、泡沫稳定性及疏水性变化不显著。

基于改进同步解调方式的三级式同步电机无位置传感器起动控制

针对航空三级式同步电机起动控制中存在的转子位置信息获取困难问题,在励磁电压高频谐波自注入方法分析的基础上,该文基于同步解调的基本思路,提出了一种无需极性判断和励磁电流采样环节的同步解耦信号生成方式,并根据主发电机中响应电压谐波的频谱特性设计了位置误差信息提取的精准谐波消除滤波器,可以降低转子位置估计闭环系统的阶次,增强系统的稳定性以适应更宽的转速范围。最后通过仿真和实验证明了所述改进同步解调方法能够实现高精度和宽转速范围的三级式同步电机无位置传感器起动控制。

高压脉冲电场(PEF)非热处理的加工原理与安全控制

高压脉冲电场非热处理技术因处理时间短,温升小,能耗低和杀菌效果明显等成为目前杀菌工艺中研究最为活跃的技术之一,而且在功能物质提取与保持物质活性等方面也展现了较好的应用前景。本文着重对该技术在食品加工中的作用原理、工艺过程和加工中的安全质量控制等方面进行阐述。

高压脉冲电场(PEF)对溶菌酶抑菌活性的影响

研究了不同脉场强度和脉冲数对溶菌酶抑菌能力的影响。结果表明,随着脉冲强度的增加,溶菌酶抑菌能力呈波浪式变化,在25 kV/cm时,抑菌能力达到最大值,比对照组提高了10.6%。PEF处理后溶菌酶液放置于4℃下贮藏1 h和10 h后,溶菌酶抑菌能力都有增加,变化规律和PEF处理后直接测得的结果相似,而随着贮藏时间的延长溶菌酶的抑菌能力又有下降趋势。在设定的脉冲数内,脉冲数的变化对溶菌酶抑菌能力的影响不显著。荧光分析表明,25 kV/cm下相对荧光强度最大,比对照组提高了15.42%;但贮藏一段时间后相对荧光强度有下降的趋势。在设定的脉冲数内,脉冲数的变化对溶菌酶的相对荧光强度影响不显著。

综合外治疗法治疗咳嗽变异性哮喘的临床观察及对PEF变异率的影响

目的观察综合外治疗法治疗咳嗽变异性哮喘的临床疗效及对最大呼气流量昼夜波动率(PEF)变异率的影响。方法将咳嗽变异性哮喘患者60例随机分为2组。治疗组30例采用综合外治疗法,包括拔火罐、穴位注射卡介菌多糖核酸和穴位贴敷,隔日1次,30次为1个疗程。对照组30例予茶碱缓释胶囊0.1g,每日2次口服,2个月为1个疗程。2组均治疗1个疗程后评定疗效,比较PEF变异率。结果2组治疗后总有效率比较差异有统计学意义(P<0.05),治疗组临床疗效优于对照组。治疗组治疗后PEF变异率与本组治疗前比较差异有统计学意义(P<0.01);2组治疗后PEF变异率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论综合外治疗法治疗咳嗽变异性哮喘疗效确切,优于对照组,并能减少PEF变异率。

以PD_(20)-PEF和PD_(20)-FEV1作为气道反应性判定指标的比较分析

为探讨以 PD2 0 - PEF替代 PD2 0 - FEV1作为气道反应性判定指标的可行性 ,对 6 4例有呼吸系统症状者和 6 2例无症状者进行乙酰甲胆碱支气管激发试验 ,同步记录 PEF和 FEV1,计算 PD2 0 - PEF和 PD2 0 - FEV1。虽然 PD2 0 - PEF和 PD2 0 - FEV1之间有较强的直线相关关系 (P<0 .0 0 1) ,但两者之间有显著差异 (P<0 .0 0 5 ) ;若以 PD2 0 - FEV1作为金标准 ,在有症状组中以 PD2 0 - PEF作为气道反应性判定指标的敏感性 (72 .7% )、特异性 (73.8% )、阳性符合率(5 9.3% )、阴性符合率 (83.8% )均不甚高 ;在无症状组中敏感性 (6 6 .7% )和阳性符合率 (40 .0 % )仍低 ,而特异性(89.2 % )和阳性符合率 (96 .2 % )较高。认为 PD2 0 - PEF作为无症状群体的流行病学筛选指标以除外气道反应性正常者可能具有一定价值 ,但替代 PD2 0 -

利用PEF从牛脾脏中快速提取食用DNA

应用PEF方法从牛脾脏中成功提取可用于食品中的DNA,并与常规方法的提取率进行了比较。实验证明,将物料悬浮在pH5.5的缓冲液中,在65℃,脉冲电场强度为30kV/cm,脉冲宽度为2!s,脉冲数为8和流速为2mL/min,4倍质量缓冲液的条件下,DNA有最大提取率,且提取率是常规方法的1.87倍。所得DNA经吸光度检测OD260/280﹥1.80。PEF法提取时间短,工艺流程简单,成本低。因此,PEF提取是一种很有希望的DNA食品提取方法。

脉冲电场回收农产品加工废料中生物活性物质的研究进展

脉冲电场(Pulsed electric fields,PEF)是一种新型物理场加工技术,具有处理时间短、能耗低以及绿色环保等优点,近年来在回收农产品加工废弃物中活性物质的应用上展现出一定的潜力。本文对脉冲电场强化活性物质提取的作用机理以及优点进行了综述。此外,本文也针对脉冲电场技术在回收不同类型加工废弃物中活性物质的应用进展进行了分类和详细概述,以期为农产品加工过程中副产物的高值化利用提供参考和指导。

PEF处理对冷冻浓缩西瓜汁品质影响的研究

本文探讨温度对果汁电导率影响以及不同处理西瓜汁贮藏期间品质变化情况,采用模糊数学方法对不同处理的西瓜汁进行感官评价。结果表明,可通过控制温度来控制浓缩果汁电导率的大小,以达到PEF杀菌条件。将PEF应用于冷冻浓缩西瓜汁杀菌处理,其微生物指标达到国家标准。贮藏期间各理化指标的比较发现,pH值,固形物含量变化不大,而VC含量都有降低。对不同处理方法得到的果汁进行感官评定,结果显示冷冻浓缩+PEF处理的果汁更接近于原汁。

舒适护理对支气管哮喘患者症状改善和FEV 1%、PEF数值的影响

目的观察舒适护理联合中医固本活血法对支气管哮喘患者治疗前后的症状改善和FEV1%、PEF数值的影响。方法 64例反复间断发作病程在4年以内的支气管哮喘患者,随机分为观察组(n=33)和对照组(n=31)两组,对照组一般护理联合西医解痉、平喘、激素、抗菌素、中医固本活血疗法(固本平喘汤加减)治疗。观察组在对照组治疗的同时再加用舒适护理,两组均治疗2周。结果治疗2周后观察组FEV1%、PEF改善程度高于对照组(P<0.05);观察组总有效率高于对照组(P<0.05)。结论在西医解痉、平喘、激素、抗菌素疗法及一般护理的同时再实施舒适护理联合固本活血疗法治疗比单纯西医解痉、平喘、激素、抗菌素疗法及一般护理能更有效改善FEV1%、PEF,提高治疗有效率。

妥洛特罗对咳嗽变异性哮喘患儿EOS和PEF的影响研究

目的 对妥洛特罗用于咳嗽变异性哮喘患儿中的EOS与PEF值变化情况进行研究。方法 选择2014年1月~2016年1月我院儿科慢性咳嗽门诊诊治的89例咳嗽变异性哮喘患儿,根据治疗方法不同分为观察组和对照组,观察组43例,对照组46例,对照组予抗组胺药物联合选择性白三烯受体阻滞剂治疗。观察组加用妥洛特罗贴剂于每晚1贴,贴于前胸、后背及上臂部均可,24h更换,连用14d。比较两组治疗后的疗效及两组治疗前后PEF、PEFR的变化。结果 观察组的总有效率达95%,对照组的总有效率为72%,观察组的临床疗效显著优于对照组,两组疗效组间比较差异具有显著性（P〈0.05）。治疗后,两组EOS、PEFR明显降低,PEF明显升高,且观察组EOS、PEF、PEFR较对照组变化更显著（P〈0.05）。结论妥洛特罗用于咳嗽变异性哮喘可以提高临床疗效,改善肺功能,通过降低EOS而发挥抗炎作用。

院前急救对急性肺炎患者肺功能指标Pe_(max)、Pi_(max)、PEF和MMF及预后影响分析

目的分析院前急救对急性肺炎患者肺功能指标最大呼气压(Pe_(max))、最大吸气压(Pi_(max))、峰流量(PEF)及最大呼气中段流量(MMF)预后影响。方法随机选择2015年12月—2017年12月汉中市中心医院收治的100例急性肺炎患者,按随机数字表法分为对照组和观察组,各50例。2组患者使用常规的抗生素、抗病毒药物、化痰药物进行静脉滴注对症治疗,但观察组患者接受院前急救。治疗后,统计患者的治疗效果,检测患者的肺功能指标(Pe_(max)、Pi_(max)、PEF、MMF),并检测患者血清炎症因子超敏C反应蛋白(hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)及降钙素原(procalcitonin,PCT)水平。结果观察组的总有效率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前2组患者的的肺功能指标Pe_(max)、Pi_(max)、PEF和MMF差异无统计学意义(P>0.05);治疗后2组患者的指标均升高,但观察组肺功能指标Pe_(max)、Pi_(max)、PEF和MMF明显高于对照组Pe_(max)、Pi_(max)、PEF和MMF,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,2组患者血清炎症因子差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,2组患者的血清炎症因子水平均降低,但观察组hs-CRP、TNF-α及PCT明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论急性肺炎患者采取院前急救,能有效改善患者的肺功能指标,调节患者血清炎症因子分泌,提高临床治疗的有效率,值得临床借鉴。

辅舒酮吸入治疗前后哮喘儿童PEF的变化

目的 探讨辅舒酮吸入治疗前后儿童哮喘最大呼气峰流速(PEF)值的改变。方法 将52例应用皮质激素辅舒酮(FP)吸入治疗的哮喘儿童,年龄4～14岁,按病情分轻、中、重度三级,分别在用药前、用药后1个月、3个月、6个月及12个月测定PEF值,并观察用药过程中肺功能改善情况及出现的不良反应。结果 三级患儿用药后肺功能均较用药前明显改善,P<0.01,其中用药后3个月肺功能基本达预计值的80％以上,用药中不良反应少,主要表现为声嘶、鼻塞共3例(5.8％),加强漱口后症状消失,无1例发生口腔霉菌感染及全身不适。结论 辅舒酮吸入治疗儿童哮喘,在常规剂量下疗效好、安全,使用方便,无明显不良反应。

内蒙古地区(蒙、汉族杂居)正常人群呼气峰流速(PEF)预计值检测的研究

目的确立内蒙古地区正常人群呼气峰流速(PEF)预计值。从而正确判定内蒙古地区正常人群及患者的肺功能。方法我们于2009年3月至2012年8月对内蒙古地区蒙古族聚集居住地的蒙古族和汉族人群,采用美国明尼苏达iml呼吸检测产品制造商生产的IMI呼气峰值记录仪,按要求进行呼气峰流速测定,共收集资料1 527例,其中蒙古族758例,汉族769例;其中男737例,女783例。采取SPSS17.0统计软件进行统计学分析。结果多重逐步回归分析结果:PEF与性别、年龄呈负相关,与体重、身高呈正相关(P<0.05),四因素中性别对其水平影响最大,PEF水平女性低于男性,随年龄的增长而降低,但随体重和身高增加而增加。在男性人群中年龄、身高、体重三项指标蒙汉之间存在统计学意义(P<0.05),而呼气峰流速(PEF)蒙汉之间无统计学意义(P>0.05)(t'=0.458,P=0.647)。女性人群中,蒙汉之间在年龄、体重之间存在统计学意义(P<0.05),身高无差别,PEF值存在统计学意义(P<0.05)t’=2.81,P=0.005。结论建立内蒙古地区成人呼气峰流速预计值PEF(L/min)回归方程Y=455.503-87.726×X性别-3.196×X年龄+2.417×X体重+0.605×X身高;性别:男=1,女=2;年龄(岁)、体重(公斤)、身高(厘米)。

阿奇霉素治疗哮喘的疗效及对PEF、ACT的影响

目的:探究阿奇霉素治疗哮喘的疗效及对最大呼气峰流速(PEF)、哮喘控制测试(ACT)的影响。方法 :选取我院2014年12月-2016年6月收治的符合纳入标准的哮喘患儿100例,根据治疗方法的不同,分为试验组与对照组,各50例。试验组予以孟鲁司特钠咀嚼片(4 mg,qd)+阿奇霉素(10 mg/kg,qd,po)治疗7 d,对照组予以孟鲁司特钠咀嚼片(同试验组)治疗7 d。观察并比较两组CD4+CD25+、白细胞介素(IL)-4、γ-干扰素、PEF及ACT情况。结果 :治疗后,两组CD4+CD25+、IL-4、γ-干扰素指标均有不同程度改善(P<0.01),且试验组上述指标改善优于对照组(P<0.01);与对照组比较,试验组的气促消失时间、咳嗽消失时间及哮鸣音消失时间均缩短,差异具有统计学意义(P<0.01);两组治疗前PEF与ACT无统计学差异(P>0.05);治疗后,试验组与对照组PEF、ACT均明显改善(P<0.01),且试验组的PEF、ACT改善优于对照组(P<0.01)。结论 :阿奇霉素能更好地改善哮喘患儿的PEF、ACT水平,提高临床疗效,值得临床推广。