6-姜酚基于PKB/KIF14信号通路对大鼠口腔黏膜愈合的作用

目的探讨生姜提取物6-姜酚对实验性口腔溃疡大鼠黏膜愈合的促进作用,及其对蛋白激酶B(PKB)/驱动蛋白家族成员14(KIF14)信号通路的调节作用。方法将50只大鼠随机分为正常组、模型组、6-姜酚组、信号通路抑制剂(LY294002)组和LY294002联合6-姜酚组,每组10只,除正常组外,其余组大鼠用冰醋酸烧灼法建立口腔溃疡模型,6-姜酚组大鼠尾静脉注射6-姜酚6 mg·kg^(−1),LY294002组大鼠尾静脉注射LY2940020.3 mg·kg^(−1),LY294002联合6-姜酚组大鼠尾静脉注射LY2940020.3 mg·kg^(−1),30 min后,尾静脉注射6-姜酚6 mg·kg^(−1);每日1次,连续7 d。计算溃疡面积,HE染色观察病理学变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)水平,实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)水平,蛋白印迹法(Western blotting)检测磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)、PKB和KIF14蛋白的相对表达量。结果模型组大量炎性细胞浸润,黏膜上皮细胞坏死脱落,无新生成纤维细胞;6-姜酚组黏膜上皮覆盖,溃疡趋于愈合;LY294002组大量炎性细胞浸润,上皮结构被破坏,黏膜上皮细胞脱落坏死;LY294002联合6-姜酚组炎性细胞浸润减少,病变较6-姜酚组减轻。与模型组比较,6-姜酚组大鼠溃疡面积减小,IL-6、TNF-α、IL-1β水平及MMP-2、MMP-9 mRNA的相对表达量降低,p-PI3K、p-PKB以及KIF14的相对表达量升高;LY294002组溃疡面积增加,IL-6、TNF-α、IL-1β水平以及MMP-2、MMP-9 mRNA的相对表达量升高,p-PI3K、p-PKB及KIF14的相对表达量降低(P<0.05);与LY294002联合6-姜酚组比较,6-姜酚组大鼠溃疡面积减小,IL-6、TNF-α、IL-1β水平及MMP-2、MMP-9 mRNA的相对表达量降低,p-PI3K、p-PKB及KIF14的相对表达量升高;LY294002组溃疡面积增加,IL-6、TNF-α、IL-1β水平及MMP-2、MMP-9 mRNA相对表达量升高,p-PI3K、p-PKB及KIF14的相对表达量降低(P<0.05)。结论生姜提取物6-姜酚可促进口腔溃疡大鼠创面愈合,其可能是通过激活蛋白激酶B/驱动蛋白家族成员14信号通路发挥作用的。

沉默信息调节因子2同源蛋白1通过Akt/PKB通路抑制人退变椎间盘髓核细胞凋亡

沉默信息调节因子2同源蛋白1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1/sirtuin 1)是组蛋白去乙酰化酶,参与表观遗传修饰调节,促进多种细胞的生存,但目前对椎间盘髓核细胞的作用未见研究.为了阐明临床不同来源的椎间盘髓核手术标本SIRT1的表达变化,用免疫组化、定量RT-PCR、Western blot方法对中老年腰椎间盘突出症病人及青壮年腰椎骨折病人术中髓核标本进行研究,表明老年人髓核SIRT1的mRNA及蛋白质水平均显著低于青壮年的髓核.同时,用resveratrol(SIRT1激动剂)、烟碱(SIRT1抑制剂)、SIRT1-siRNA对培养的退变髓核细胞进行处理或转染后,用流式细胞仪检测凋亡率变化,结果表明resveratrol能显著促进退变髓核细胞生存,相反,当烟碱或SIRT1-siRNA转染后则显著促进髓核细胞凋亡.为了进一步分析SIRT1抑制退变髓核细胞凋亡的分子机制,应用Western blot及抑制剂方法研究表明,当SIRT1-siRNA转染髓核细胞后能降低磷酸化Akt蛋白的表达,而白藜芦醇处理则促进磷酸化Akt蛋白的表达,当用LY294002(PI3K抑制剂)或Akt-siRNA转染后显著抑制髓核细胞的生存率.研究结果表明,SIRT1通过Akt通路能显著抑制髓核细胞凋亡,为深入揭示退变性椎间盘疾病的病理生理及生物治疗提供新的思路和靶点.

罗格列酮上调高脂饮食老年大鼠骨骼肌GLUT4和PKB的表达

目的观察高脂饮食对老年大鼠骨骼肌葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)和蛋白激酶B(PKB)的表达变化及罗格列酮的干预效果。方法老年大鼠随机分为对照组、高脂组(HF)、高脂+罗格列酮干预组(RSG),每组20只。应用清醒状态下正常葡萄糖高胰岛素钳夹技术的葡萄糖输注率评价胰岛素抵抗,用荧光定量PCR法和Western印迹技术检测骨骼肌GLUT4和PKB的表达。结果高脂组骨骼肌长链脂酰辅酶A(LCACoA)升高而葡萄糖输注率明显下降(P<0.01),骨骼肌GLUT4和PKB的表达明显降低(P<0.05,P<0.01),罗格列酮干预组显著缓解高脂组上述变化(P<0.05,P<0.01)。结论罗格列酮上调高脂饮食老年大鼠骨骼肌GLUT4和PKB的表达,是改善老年胰岛素抵抗的机制之一。

NGF对哮喘小鼠气道阻力和肺组织Akt/PKB表达的影响

目的探讨NGF介导的Akt/PKB信号转导通路在哮喘小鼠发病中的作用。方法BALB/c小鼠30只,按随机数字表法随机分为正常对照组、哮喘组、NGF阻断组。利用An iRes2005肺功能仪测小鼠气道阻力,运用免疫组织化学方法测定Akt/PKB的组织表达,M etamoph图像分析系统对结果进行分析。结果哮喘小鼠吸气阻力和呼气阻力明显高于正常组小鼠(P<0.01),NGF阻断组小鼠吸气阻力和呼气阻力明显低于哮喘组。免疫组织化学染色结果显示哮喘组Akt/PKB在肺组织炎性细胞的表达及AK t/PKB阳性炎症细胞数明显多于正常对照组(P<0.05),而NGF阻断组则明显低于哮喘组(P<0.05)。结论NGF介导哮喘气道高反应和炎症反应,Akt/PKB参与了哮喘发病中NGF介导的信号传导。

抑制PI3K/PKB通路逆转胃癌耐药的作用及其机制

目的观察抑制PI3K/PKB信号通路对胃癌耐药性的逆转作用,并探讨其可能机制。方法通过体内外实验方法检测长春新碱(vincristine,VCR)及联合LY294002(PI3K/PKB通路抑制剂)对SGC7901/VCR细胞的生长抑制作用;采用Western blot及RT-PCR分别检测细胞中PKB、磷酸化PKB的蛋白表达水平及MDR1、Bax、Bcl-2基因表达水平;流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果LY294002能明显增加SGC7901/VCR细胞对VCR的敏感性,促进VCR诱导细胞凋亡,使其耐药指数从40.45降至8.50;LY294002可明显降低耐药细胞中磷酸化PKB的蛋白表达和MDR1、Bcl-2的基因表达水平(P<0.01),促进Bax的基因表达(P<0.01);体内实验显示联合用药组的裸鼠移植瘤大小明显小于VCR组(P<0.01)。结论抑制PI3K/PKB通路可逆转胃癌耐药,其机制可能与降低耐药基因MDR1的表达以及调控相关凋亡基因Bax和Bcl-2的表达有关。

Akt/PKB对哮喘小鼠Fas表达的调节作用

目的探讨在哮喘发病中,Akt/PKB(protein kinase B)对哮喘小鼠C7-T5节段脊神经及相应节段脊髓后角内Fas表达的调节作用。方法BALB/c小鼠30只,按随机数字表法均分为正常对照组、哮喘组、Akt/PKB阻断组,利用肺功能仪测小鼠气道阻力、免疫荧光方法检测各组小鼠C7-T5节段脊神经及相应节段脊髓后角内Fas的表达、Western blot检测各组小鼠C7-T5节段脊神经内Fas的表达。结果哮喘组小鼠吸气阻力和呼气阻力明显高于正常组(P<0.01);免疫荧光结果显示哮喘组C7-T5节段脊神经及相应节段脊髓后角内Fas阳性产物的平均光密度值(mean optical density,MOD)高于正常对照组(P<0.01);而Akt/PKB阻断组与哮喘组相比,上述部位Fas阳性反应产物的MOD值明显升高(P<0.01)。Western blot结果显示:与正常对照组比较,哮喘组小鼠C7-T5节段脊神经内Fas的相对灰度值(integrated density value,IDV)与内参照IDV的比值明显降低(P<0.05),而Akt/PKB阻断组Fas目标带的IDV与内参照IDV的比值则明显高于哮喘组(P<0.05)。结论在NGF介导的哮喘发病机制中,Akt/PKB能下调哮喘小鼠C7-T5节段脊神经及相应节段脊髓后角内Fas的表达。

过度训练和补糖对大鼠骨骼GLUT4和PKb活性的影响

通过过度训练和补糖观察在过量运动后的不同血糖和肌糖原条件下大鼠骨骼肌的糖转运和PKb活性的变化,旨在从分子水平探寻过度训练的发生机制,为研发预防过度训练的手段和方法提供理论依据。

PKB/Akt:一个具有多种功能的蛋白激酶

蛋白激酶B(protein kinase B, PKB)是细胞信号传导过程中的一个重要的中间体。在过去10多年的研究中,发现它不仅参与调节细胞糖代谢、细胞增殖、细胞凋亡,而且与糖尿病和癌症的发生也有关。目前PKB的相关调控机制还未得到完全阐明。在此,作者谨就PKB的一些研究进展作一介绍。

PI3K/PKB信号通路在TGF-β_1诱导人肝星状细胞表达骨桥蛋白中的作用

目的:研究磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)信号通路在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肝星状细胞表达骨桥蛋白(OPN)的调控作用。方法:体外培养LX-2人肝星状细胞株,予TGF-β1(终浓度2.5、5、10、20μg/L)刺激24 h或予TGF-β1(终浓度10μg/L)刺激12 h、24 h、48 h;先经PI3K/PKB信号通路特异性抑制剂wortmannin(0.1μmol/L)预处理1 h,再予10μg/L TGF-β1刺激24 h,收集细胞,采用real-time PCR及Western blotting法检测OPN表达情况。结果:TGF-β1能够促进LX-2细胞表达OPN,在一定浓度和时间范围内,其表达量随着TGF-β1浓度和时间的增加而增加,呈剂量和时间依赖性关系;经wortmannin预处理再予TGF-β1刺激的LX-2细胞,与对照组相比,OPN表达受到明显抑制(P<0.01)。结论:TGF-β1对LX-2人肝星状细胞OPN表达具有诱导作用,此作用可能受PI3K/PKB信号通路的调控。

ibrolipim对糖尿病小型猪肝脏PKBβ/Akt2表达的影响

目的采用高脂高糖高胆固醇饮食喂养的方法建立广西巴马小型猪糖尿病动物模型。研究合成化合物ibrolipi(NO-1886)对肝脏PKBβ/Akt2表达变化的影响,探讨ibrolipim改善胰岛素抵抗、治疗糖尿病的可能机制。方法15头雄性广西巴马小型猪按体重随机分为3组:正常对照组(n=5)饲以正常饲料;高脂高糖高胆固醇组(n=5)饲以高脂高糖高胆固醇饲料;加药组(n=5),HFSCD饲料中加入1.0%NO-1886。每月末测定血糖、甘油三酯、胰岛素和口服葡萄糖耐量实验。第5个月末取部分肝脏组织用western blotting和免疫组织化学方法检测Akt2蛋白的表达。结果CD组血糖、甘油三酯、胰岛素水平正常,葡萄糖耐量实验(OGTT)血糖清除和胰岛素分泌有效、及时;与CD组相比较,HFSCD组血糖和甘油三酯胰岛素水平明显升高,糖耐量减低;HFSCD+NO-1886组与HFSCD组相比,血糖、甘油三酯和胰岛素水平明显降低,OGTT葡萄糖清除和胰岛素分泌近似CD组。CD组肝脏Akt2蛋白表达量较高;HFSCD组Akt2表达量减少(P<0.05);HFSCD+1%NO-1886组Akt2蛋白表达较HFSCD明显增高(P<0.05)但低于CD组。结论饮食诱导的糖尿病小型猪肝脏组织Akt2表达降低;NO-1886能够上调肝脏Akt2蛋白的表达,改善胰岛素抵抗。

神经酰胺阻断剂对高糖培养的人脐静脉血管内皮细胞PKB/eNOS信号通路的影响

目的观察神经酰胺阻断剂对高浓度葡萄糖培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)胰岛素信号通路PKB/eNOS mRNA表达的影响。方法高浓度葡萄糖培养HUVECs的基础上加用神经酰胺合成阻断剂Myriocin、DES或神经酰胺降解阻断剂NOE或PDMP干预,RT-PCR分析血管内皮细胞中IRS-1/PI3K/PKB/eNOS mRNA表达的变化。结果高浓度葡萄糖培养血管内皮细胞,对IRS-1、PI3K mRNA表达无明显影响,但能抑制PKB、eNOS mRNA表达(P<0.05);神经酰胺合成阻断剂Myriocin或DES均能改善高糖对内皮细胞PKB、eNOS mRNA表达的影响(P<0.05);神经酰胺降解阻断剂NOE或PDMP均加强高糖对PKB、eNOS mRNA表达的抑制(P<0.05)。结论神经酰胺与高糖引起的胰岛素信号通路下调有关,机体内神经酰胺水平的改变直接影响内皮细胞胰岛素信号转导通路PKB/eNOS mRNA的表达。

PKC、PKB通过p21^(CIP1/WAF1)蛋白对小鼠受精卵G2期向M期转换的影响

目的:探讨在小鼠受精卵中,PKC及PKB是如何通过p21CIP1/WAF1蛋白影响小鼠受精卵G2/M的转换。方法:以小鼠受精卵为材料,通过Westernblot及免疫荧光的方法,检测经PKC及PKB抑制剂处理后的p21蛋白表达及定位。结果:经PKC抑制剂(PMA)处理后的小鼠G2期受精卵中p21蛋白表达增加,而经PKB抑制剂(LY294002)处理后的p21蛋白表达没有变化,但是其在亚细胞的定位发生了改变。结论:PKC通过改变p21蛋白表达,影响小鼠受精卵G2/M转换。而PKB通过改变p21蛋白在小鼠受精卵中的亚细胞定位,影响受精卵G2/M转换。

银屑病皮损中PKB、NF-κBp65、Bcl-xL的表达及相关性研究

目的探讨PKB、NF-κBp65、Bcl-xL与寻常型银屑病发病的相关性。方法采用S-P免疫组织化学法检测30例寻常性银屑病患者皮损及10例正常人皮肤石蜡包埋组织标本中PKB、NF-κBp65、Bcl-xL的表达与定位。结果与正常对照组相比,银屑病皮损角质形成细胞中PKB、NF-κBp65、Bcl-xL的表达均明显上调,其差异有统计学意义(P<0.05)。在银屑病皮损组织角质形成细胞中,随着PASI评分的增加,PKB、NF-κBp65、Bcl-xL的表达逐渐增强,其表达水平与患者PASI评分之间均存在正相关,有统计学意义(P<0.01)。PKB与NF-κBp65、PKB与Bcl-xL、NF-κBp65与Bcl-xL之间的表达水平均存在正相关,有统计学意义(P<0.01)。结论 PKB、NF-κBp65、Bcl-xL可能与银屑病发病及银屑病疾病严重程度有关。

瘦素、胰岛素及IGF-2影响滋养层细胞中PKB和P70S6K蛋白表达的机制

目的:探讨瘦素、胰岛素及IGF-2对滋养层细胞中PKB和P70S6K蛋白表达的影响是否与PI3K/PKB/mTOR信号途径存在联系。方法:应用Western blot检测瘦素、胰岛素及IGF-2作用后滋养层细胞中PKB和P70S6K蛋白的表达,以及分别加入PI3K的特异性抑制剂LY294002和mTOR的特异性抑制剂雷帕霉素后对PKB和P70S6K蛋白表达的影响。结果:瘦素、胰岛素及IGF-2刺激组滋养层细胞中PKB和P70S6K蛋白表达与对照组相比明显增加(P<0.05)。瘦素、胰岛素及IGF-2刺激组分别加入LY294002和雷帕霉素,PKB和P70S6K蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论:瘦素、胰岛素及IGF-2可能通过PI3K/PKB/mTOR信号通路促进滋养层细胞中PKB和P70S6K蛋白表达。

高住低练对大鼠骨骼肌PI3K/PKB/mTOR信号通路基因表达的影响

目的:探讨高住低练对大鼠骨骼肌PI3K/PKB/mTOR信号通路基因表达的影响。方法:40只8周龄SD大鼠适应训练后,随机分为低住安静组(LC)、低住低练组(LoLo)、高住安静组(HC)和高住低练组(HiLo)。高住组每天低氧暴露12 h(氧浓度13.6%,相当于海拔3500 m),低练组进行35 m/min、1 h/d、5 d/周、共4周的跑台训练。采用实时荧光定量PCR检测大鼠腓肠肌PI3K、PKB、mTOR mRNA表达,以双因素方差分析进行统计。结果:低氧和运动均显著提高大鼠骨骼肌PI3K和PKB mRNA表达(P<0.01),但低氧和运动无显著交互作用(P>0.05);运动显著提高大鼠骨骼肌mTOR mRNA表达(P<0.01),低氧却显著降低mTOR mRNA表达(P<0.01),且低氧和运动有交互作用,显著降低mTOR mRNA表达(P<0.01)。结论:低氧和运动促进PI3K和PKB基因表达,低氧抑制而运动促进mTOR基因表达;HiLo训练促进PI3K和PKB基因表达,却抑制mTOR基因表达。不同条件下PI3K/PKB/mTOR信号通路基因表达水平不一致。

PKB/Akt和GSK-3β在抗体介导的慢性排斥反应患者移植肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的:观察磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、糖元合成激酶(GSK-3β)在抗体介导的慢性排斥反应(chronic active antibody-mediated reiection,ABMR)患者移植肾肾小管上皮细胞中的表达,探讨二者在移植肾小管上皮细胞转分化(EMT)中的作用。方法:38例移植肾穿刺标本经病理明确诊断为ABMR,按Banff 2009标准将其按间质纤维化/小管萎缩(IF/TA)程度Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级分为C1(n=12)、C2(n=14)、C3(n=12)组,用免疫组织化学技术和计算机真彩色图像分析系统半定量检测移植肾组织中p-Akt、GSK-3β、转化生长因子TGF-β_1、整合素连接激酶ILK、上皮细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在各组中的表达面积,线性相关分别分析p-Akt、GSK-3β与转化生长因子TGF-β_1、整合素连接激酶ILK、E-cadherin和α-SMA表达的相关性及其与IF/TA病理分级之间的关系。9例正常肾组织作为对照组。结果:ABMR患者移植肾组织中p-AKt、GSK-3β、TGF-β_1、ILK和α-SMA的表达比正常肾组织明显增加(P <0. 001),并随(IF/TA)病理分级呈逐渐递增的趋势。E-钙黏蛋白在ABMR肾小管上皮细胞中的表达比正常肾组织明显减少(P <0. 001),组间呈递减趋势,移植肾组织中P-akt的表达与TGF-β_1、ILK和α-SMA呈正相关(r分别为0. 912、0. 871和0. 878,P <0. 001),而与E-cadherin的表达量呈负相关(r=-0. 849,P <0. 001);GSK-3β的表达与TGF-β_1、ILK、p-Akt和α-SMA呈正相关(r分别为0. 874、0. 793、0. 828、0. 781,P <0. 001),与E-cadherin的表达量呈负相关(r=-0. 781,P <0. 001)。p-Akt、GSK-3β、ILK、TGF-β_1和α-SMA的表达均与移植IF/TA程度呈正相关(r分别为0. 943、0. 863、0. 907、0. 964和0. 926,P <0. 001);而E-cadherin的表达与移植肾IF/TA程度成负相关(r=-0. 859,P <0. 001)。结论:P-Akt、GSK-3β作为TGF-β_1及ILK的重要下游细胞因子可能介导了ABMR所致的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化的发生、发展,p-Akt和GSK-3β在ABMR所致移植肾间质纤维化进程中可能发挥重要作用。

PTEN-PKB途径在子宫内膜癌中的作用

目的探讨PTEN、PKB在子宫内膜癌发病过程中的作用。方法应用逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR)技术检测55例子宫内膜癌组织,13例子宫内膜非典型增生,11例增殖期内膜中PTEN及PKB mRNA的表达。结果 PTEN mRNA在正常内膜、非典型增生内膜及子宫内膜癌组织间表达阳性率分别为 81．8％、38．5％及36．4％,三者比较有显著性差异(P<0．05),而PKB mRNA在正常内膜、非典型增生及子宫内膜癌中表达阳性率为27．3％、46．2％及61．8％,但无统计学差异(P>0．05);在子宫内膜癌不同临床分期、病理分级之间,PTEN mRNA和PKB mRNA表达量均没有显著差异(P>0．05)。结论 PTEN可能通过PI3K- PKB途径导致子宫内膜癌的发生。

石斛合剂基于PKB/FoxO1通路抑制糖尿病大鼠肝糖异生的机制研究

目的观察复方石斛合剂对糖尿病大鼠肝PKB/FoxO1信号通路分子蛋白表达的影响,探讨其抑制肝糖异生的分子机制。方法随机选取11只雌性Wistar大鼠为正常组,其余36只大鼠高脂高糖饲料喂养,6周后腹腔注射STZ 2次。按糖尿病诊断标准,筛选出糖尿病成模大鼠33只,再随机分为模型组、二甲双胍组、石斛合剂组,每组11只。给药12周后,检测空腹血糖(FBG)、血清空腹胰岛素(FINS)、游离脂肪酸(FFA);免疫组化检测各组的肝脏的胰岛素受体(InsR)、叉头框蛋白O1(FoxO1)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)表达情况。Western blot检测各组大鼠肝组织PKB、p-PKB、FoxO1、p-FoxO1的蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组FBG、FINS、FFA明显升高(P<0.01);与模型组比较,石斛合剂组FBG、INS、FFA显著下降(P<0.05或P<0.01);石斛合剂组与二甲双胍组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化结果显示石斛合剂能促进InsR表达,抑制PEPCK和FoxO1的表达(P<0.05)。Western blot结果显示石斛合剂组p-PKB/PKB、p-FoxO1蛋白表达增加(P<0.05或P<0.01);FoxO1表达减少(P<0.01)。结论石斛合剂能抑制肝糖异生,调节糖脂代谢,增强胰岛素敏感性,可能与其调节PKB/FoxO1通路相关蛋白的表达有关。

PKB/Akt调节结构域的克隆,表达及初步纯化

目的 :克隆akt1的调节结构域 (regulationdomainRD)的编码基因 ,表达并纯化AktRD蛋白 ,为研究RD的功能奠定基础 .方法 :用RT PCR方法从胚胎肝细胞中获得Akt1调节结构域RD的编码基因 ,克隆至pMD18 T载体并测序 ,结果正确后亚克隆到含有 6个His的融合表达载体pRSET A中 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3 ) ,经IPTG诱导表达RD/6×His融合蛋白 ,超声裂菌 ,将上清通过金属螯合层析进行纯化 .结果 :从人胚胎肝细胞中扩增出编码RD的cDNA ,序列测定证实与文献报道的序列一致 ;成功构建了 6×His融合的表达载体pRSET A RD ;表达了RD/6×His融合蛋白 ,并纯化得到了RD/6×His蛋白 .结论 :成功克隆了人akt1的调节结构域RD基因 ,构建了6×His融合的表达载体 。

神经生长因子对大鼠脑缺血再灌注后Fas-L蛋白和p-PKB表达的影响

[目的]探讨神经生长因子(NGF)对大鼠脑缺血再灌注后Fas-L和p-PKB表达的影响,为临床应用NGF治疗缺血性脑血管病提供依据。[方法]健康成年SD大鼠55只,随机分为假手术组(n=5);对照组(n=30),按缺血2 h再灌注2 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h再分为6组,每组5只;NGF组(第8f和8p组,分别为缺血2 h再灌注6h和再灌注72 h注射NGF,每组5只)和生理盐水组(第9f和9p组,分别为缺血2 h再灌注6 h和再灌注72 h注射生理盐水,每组5只)。制备MCAO模型。观察各组动物神经功能缺损评分和脑内Fas-L和p-PKB表达。[结果]NGF组与生理盐水组比较,神经功能缺损程度(1.400±0.6253,2.300±0.3650),(2.200±0.6903,3.100±0.0038)均明显减轻,差异有显著性意义(P<0.01)。与缺血再灌注组相比,NGF干预组Fas-L蛋白表达(18.6600±12.2584)减少,p-PKB表达(66.6600±12.3353)增多,差异有显著性意义(P<0.01)。[结论]肌注NGF对脑缺血再灌注有明显的保护作用。