益肝胶囊对药物性肝损伤大鼠HMGB1、RAGE和NF⁃κB蛋白表达的影响

目的:研究益肝胶囊对抗结核药物性肝损伤(ATB‐DILI)中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、核因子‐κB(NF‐κB)和晚期糖基化终末产物受体(RAGE)蛋白表达的影响,探讨其对ATB‐DILI的保护作用和机制,为益肝胶囊的临床应用提供实验依据。方法:将24只大鼠分为两组,除空白组(n=6)灌胃0.9%氯化钠溶液外,其余18只给予异烟肼(INH)+利福平(RFP)(各50 mg⋅kg^(‐1)⋅d^(‐1))连续灌胃4周。然后将18只按每组6只随机分为3组(模型组、益肝胶囊低剂量组、益肝胶囊高剂量组),空白组与模型组继续灌胃0.9%氯化钠溶液,益肝胶囊低剂量组0.468 g/kg,益肝胶囊高剂量组1.872 g/kg[1]进行灌胃给药。4周后,HE染色观察肝的病理变化;检测ALT、AST、ALP、γ‐GT、TBIL的含量;IHC检测HMGB1、NF‐κBp65、RAGE蛋白的表达;WB检测HMGB1、NF‐κBp65、RAGE、TNF‐α和IL‐1β的表达水平。结果:HE染色显示,模型组肝的结构排列较紊乱、肝细胞出现肿胀融合、炎性细胞数量增多并伴有点状坏死,而益肝胶囊各治疗组的上述病理变化有明显的改善;模型组ALT、AST、ALP、γ‐GT、TBIL含量较空白组上升(P<0.05);益肝胶囊各治疗组ALT、AST、ALP、γ‐GT、TBIL含量较模型组显著降低(P<0.05);与空白组比较模型组TNF‐α和IL‐1β的表达水平升高(P<0.05),HMGB1、NF‐κBp65、RAGE的表达增加(P<0.05);与模型组比较益肝胶囊各治疗组TNF‐α和IL‐1β的表达水平降低(P<0.05),HMGB1、NF‐κBp65、RAGE的表达下降(P<0.05)。结论:益肝胶囊可能通过HMGB1/RAGE/NF‐κBp65信号通路,抑制炎性因子的分泌,从而对ATB‐DILI起到保护作用。

槲皮素通过HMGB1/RAGE/NF-κB通路减轻癫痫大鼠神经炎症的实验研究

目的:探讨槲皮素是否通过调控高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、糖基化终末产物受体(RAGE)、核转录因子κB(NF-κB)参与减轻癫痫大鼠神经炎症,探究HMGB1/RAGE/NF-κB通路作为槲皮素作用新靶点的可能性。方法:将60只SD大鼠随机选取12只作为健康组,剩余大鼠构建癫痫大鼠实验模型,将造模成功的大鼠分为模型组、槲皮素高剂量组、槲皮素低剂量组、槲皮素+通路激活剂组,每组12只。观察大鼠海马组织病理变化;评估大鼠的神经行为学功能;检测大鼠海马组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、IL-1β水平及HMGB1、RAGE、NF-κB mRNA及蛋白表达。结果:健康组大鼠海马组织结构完整;与健康组相比,模型组大鼠海马组织结构分散,存活神经元数显著降低,凋亡指数显著上升,Racine等级显著升高,海马组织TNF-α、IL-1β、IL-6含量及HMGB1、RAGE、NF-κB mRNA和蛋白表达量显著升高;与模型组相比,槲皮素低、高剂量组大鼠海马组织结构较为完整,存活神经元数显著上升,凋亡指数显著降低,Racine等级显著降低,TNF-α、IL-1β、IL-6含量及HMGB1、RAGE、NF-κB mRNA和蛋白表达量显著降低,且槲皮素高剂量组的改善效果更佳;与槲皮素高剂量组相比,槲皮素+通路激活剂组存活神经元数显著降低,凋亡指数显著上升,Racine等级显著升高,海马组织TNF-α、IL-1β、IL-6含量及HMGB1、RAGE、NF-κB mRNA和蛋白表达量显著升高。结论:槲皮素可通过抑制HMGB1/RAGE/NF-κB通路,降低相关基因mRNA和蛋白表达,从而有效减轻癫痫大鼠的神经炎症。

六味地黄丸介导RAGE抑制MMP-2/MMP-9对Aβ_(1-40)损伤bEnd.3细胞紧密连接蛋白的影响

目的探讨六味地黄丸对β淀粉样蛋白1-40(Aβ_(1-40))损伤的小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)的保护作用及其机制。方法采用CCK8法检测Aβ_(1-40)和六味地黄丸含药血清(MSLDP)对细胞活性的影响,筛选合适的作用浓度。将bEnd.3细胞分为对照组、Aβ_(1-40)组、MSLDP+Aβ_(1-40)组和MSLDP组,采用Western blot检测低密度脂蛋白相关蛋白1(LRP1)、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达,免疫荧光检测LRP1、RAGE、ZO-1表达;再将bEnd.3细胞分为对照组、Aβ_(1-40)组、FPS-ZM1(RAGE抑制剂)+Aβ_(1-40)组和FPS-ZM1+Aβ_(1-40)+MSLDP组,Western blot检测RAGE、MMP-9、MMP-2、ZO-1蛋白表达。结果Aβ_(1-40)呈剂量依赖性降低bEnd.3细胞活性(P<0.01),MSLDP对Aβ_(1-40)损伤的细胞活性具有保护作用(P<0.05,P<0.01),因此选择10μmol/L Aβ_(1-40)和10%MSLDP进行后续实验。与对照组比较,Aβ_(1-40)组RAGE、MMP-2、MMP-9蛋白表达升高(P<0.01),LRP1、ZO-1、BDNF蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),并且LRP1、ZO-1荧光强度降低(P<0.01),RAGE荧光增强(P<0.01);与Aβ_(1-40)组比较,MSLDP组RAGE、MMP-2、MMP-9蛋白表达和RAGE荧光强度降低(P<0.05,P<0.01),而LRP1、ZO-1、BDNF蛋白表达和LRP1、ZO-1荧光强度升高(P<0.05,P<0.01)。与Aβ_(1-40)组比较,Aβ_(1-40)+FPS-ZM1组MMP-2、MMP9、RAGE蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),ZO-1蛋白表达升高(P<0.05);Aβ_(1-40)+FPS-ZM1+MSLDP组MMP-2、MMP9、RAGE蛋白表达降低(P<0.01),ZO-1蛋白表达升高(P<0.01),FPS-ZM1和MSLDP联合使用的效果更佳。结论六味地黄丸能够保护Aβ_(1-40)损伤的脑微血管内皮的细胞紧密连接,减轻血脑屏障障碍,保护神经血管单元防治阿尔茨海默病,可能通过调节RAGE途径抑制MMP-2/MMP-9途径实现。

胡黄连苷Ⅱ调节HMGB1/RAGE信号通路对冠心病大鼠内皮细胞损伤的影响

目的:初步探讨胡黄连苷Ⅱ(P-Ⅱ)调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/晚期糖基化终末产物受体(RAGE)信号通路对冠心病(CHD)大鼠内皮细胞损伤的影响。方法:SPF级SD大鼠随机分为control组、CHD组、P-Ⅱ低、中、高剂量组、P-Ⅱ高剂量+DEX组(P-Ⅱ高剂量+HMGB1/RAGE信号通路激活剂DEX),除control组外,采用高脂饮食联合腹腔注射垂体后叶素法建立CHD大鼠模型,灌胃或腹腔注射相应药物,1次/d,连续4周。生化分析仪分析大鼠血脂水平;ELISA检测血清血管内皮损伤标志物一氧化氮(NO)、内皮素(ET)-1、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及血清和冠状动脉组织TNF-α、IL-1β、IL-6炎症因子水平;试剂盒检测大鼠冠状动脉组织活性氧(ROS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;HE染色观察大鼠冠状动脉组织病理损伤;TUNEL染色观察血管内皮细胞凋亡;Western blot检测冠状动脉组织中血管内皮生长因子(VEGF)、HMGB1、RAGE蛋白表达。结果:相较于control组,CHD组大鼠TC、TG、LDL-C、ET-1、AngⅡ、TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS、内皮细胞凋亡率及HMGB1、RAGE表达显著升高,HDL-C、NO、GSH-Px及VEGF表达显著降低(P<0.05);相较于CHD组,P-Ⅱ低、中、高剂量组TC、TG、LDL-C、ET-1、AngⅡ、TNF-α、IL-1β、IL-6、ROS、内皮细胞凋亡率及HMGB1、RAGE表达显著降低,HDL-C、NO、GSH-Px及VEGF表达显著升高(P<0.05);HMGB1/RAGE信号通路激活剂DEX可减弱P-Ⅱ对CHD大鼠内皮细胞损伤的保护作用。结论:P-Ⅱ能有效减轻CHD大鼠内皮细胞损伤,其作用机制可能与抑制HMGB1/RAGE通路激活有关。

基于RAGE、VCAM-1表达变化的抗静脉血栓方抗大鼠深静脉血栓研究

为探究基于晚期糖基化终末产物受体(RAGE)和血管细胞粘附分子1(VCAM-1)表达变化的抗静脉血栓方对深静脉血栓(DVT)大鼠抗血栓的影响,将30只SD大鼠随机分为空白组、模型组、假手术组、阳性药组和中药组,采用下腔静脉狭窄法建立大鼠DVT模型。中药组给予抗静脉血栓方汤剂4.48 g/100 g;阳性药组给予复方丹参片0.023 g/100 g;其余组灌胃等体积生理盐水,1次/d。灌胃7 d后,取腹主动脉血1~2 mL,取下腔静脉标本。ELISA检测大鼠血清中RAGE和VCAM-1的表达水平,HE染色观察血管形态改变,免疫组化、WB和PCR检测各组大鼠RAGE和VCAM-1的表达变化。结果显示:模型组大鼠内膜损伤严重,有血栓形成,血管壁有炎性细胞浸润;模型组大鼠血清RAGE和VCAM-1的含量均显著高于中药组和阳性药组,而中药组和阳性药组大鼠血管组织中RAGE和VCAM-1的表达均降低;与假手术组相比,模型组大鼠中的RAGE、VCAM-1的蛋白和mRNA表达均显著增加,药物治疗后,中药组与阳性药组RAGE\,VCAM-1的蛋白和mRNA表达均显著降低。研究表明排除手术创伤影响,抗静脉血栓方可能是通过减少RAGE、VCAM-1的表达从而减少DVT模型大鼠静脉血栓的形成。

黄芪多糖调节HMGB1-RAGE信号通路对自身免疫性心肌炎大鼠心肌损伤的影响

目的:探讨黄芪多糖(AP)调节高迁移率族蛋白Box-1-晚期糖基化终产物受体(HMGB1-RAGE)信号通路对自身免疫性心肌炎(EAM)大鼠心肌损伤的影响。方法:取50只SPF级SD大鼠,适应性喂养1周,随机分为对照组、EAM组、AP组(30 g/kg)、rHMGB1组(8μg/kgr)、AP+rHMGB1组[Ap(30 g/kg)+rHMGB1(8μg/kg)],除对照组(弗氏完全佐剂)外,其余各组通过左、右后足垫皮下注射抗原佐剂乳化液方法建立EAM大鼠模型并按照上述剂量进行干预;3周后,超声仪检测心率(HR)、左心室射血分数(LVEF)和舒张末期内径(LVEDs);酶联免疫吸附(ELISA)检测各组大鼠血清中炎症因子水平;马松(Masson′s)及苏木精-伊红(HE)染色检测心肌组织纤维化及病理学变化;免疫印迹(Western blotting)及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测HMGB1、RAGE蛋白及mRNA表达。结果:与对照组比较,EAM组心肌结构紊乱及纤维化严重,病理评分、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、白细胞介素-6(IL-6)水平、HR、LVEDs、HMGB1、RAGE蛋白及mRNA表达显著增加,LVEF显著下降(P<0.05);与EAM组比较,AP组病理损伤及纤维化得到改善,病理评分、TNF-α水平、IL-6水平、HR、LVEDs、HMGB1、RAGE蛋白及mRNA表达显著降低,LVEF显著增加(P<0.05),但rHMGB1组病理损伤及纤维化进一步加重,病理评分、TNF-α水平、IL-6水平、HR、LVEDs、HMGB1、RAGE蛋白及mRNA表达显著增加,LVEF显著下降(P<0.05);与AP组比较,AP+rHMGB1组病理损伤及纤维化稍加重,病理评分、TNF-α水平、IL-6水平、HR、LVEDs、HMGB1、RAGE蛋白及mRNA表达显著增加,LVEF显著下降(P<0.05);与rHMGB1组比较,AP+rHMGB1组病理损伤及纤维化得到改善,病理评分、TNF-α、IL-6水平、HR、LVEDs、HMGB1、RAGE蛋白及mRNA表达显著降低,LVEF显著增加(P<0.05)。结论:AP可能通过抑制HMGB1-RAGE信号通路改善EAM大鼠心肌损伤。

益母草碱通过调节HMGB1/RAGE信号通路对重症急性胰腺炎大鼠的改善作用

目的 研究益母草碱对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺损伤的影响,并基于高迁移率族蛋白1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)信号通路探讨其作用机制。方法 采用胰胆管注射5%牛磺胆酸钠构建SAP大鼠模型,造模成功的大鼠随机分为模型组、低剂量益母草碱组(8 mg/kg)、高剂量益母草碱组(16 mg/kg)、HMGB1过表达组(8μg/kg)、高剂量益母草碱+HMGB1过表达组(16 mg/kg益母草碱+8μg/kg HMGB1),每组14只;另取14只大鼠作为假手术组。各组大鼠腹腔或尾静脉注射相应药物或生理盐水,每日1次,连续5 d。末次给药后,检测大鼠血清中淀粉酶(AMS)、脂肪酶(LPS)水平;观察其胰腺组织病理损伤;检测其胰腺组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平以及HMGB1、RAGE mRNA和蛋白表达水平。结果 与模型组比较,低、高剂量益母草碱组大鼠胰腺组织结构逐渐恢复、炎症细胞浸润逐渐减少,病理损伤评分和AMS、LPS、TNF-α、IL-6、MDA水平以及HMGB1、RAGE mRNA和蛋白表达水平均显著降低,SOD水平均显著升高(P<0.05),且高剂量益母草碱组改善效果更明显(P<0.05);HMGB1过表达组大鼠胰腺组织病理损伤加重,除SOD水平显著降低外,其余各指标均显著升高(P<0.05)。HMGB1过表达可减弱高剂量益母草碱对SAP大鼠上述指标的改善效果(P<0.05)。结论 益母草碱可能通过抑制HMGB1/RAGE信号通路激活来减轻SAP大鼠的胰腺损伤和胰腺组织的炎症反应、氧化应激。

槲皮素通过抑制HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路减轻糖尿病引起的大鼠肾脏损伤

目的探究槲皮素对链脲佐菌素(STZ)致糖尿病大鼠的肾脏炎症反应和细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法采取腹腔一次性注射STZ建立糖尿病SD大鼠模型,并设置正常对照组(NC组,n=6)、高糖高脂组(HC组,n=6)、糖尿病模型组(DM组,n=6)、槲皮素组(DMQ组,n=6),DMQ组每日给予100 mg/kg的槲皮素灌胃处理。通过HE染色观察肾组织的病理学形态变化;ELISA检测血清炎症反应;免疫组化观察NF-κB的表达情况;血糖分析仪检测FBG;磷酸甘油氧化酶法、脲酶法、肌氨酸酶氧化酶法、双缩脲法等方法测定各组大鼠血清TG、BUN、Scr含量以及24 h尿蛋白含量;Western blotting检测各组大鼠肾脏组织HMGB1、RAGE、NF-κB、Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达情况。结果与正常对照组相比,糖尿病组大鼠FBG、TG、BUN、Scr、肾脏肥大指数和24 h尿蛋白均显著升高(P<0.01);血清炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α水平显著升高(P<0.01);肾脏结构产生典型的病理性变化;肾脏组织HMGB1、RAGE、NF-κB、Bax、Caspase-3的表达量明显升高(P<0.01),Bcl-2的表达量明显降低(P<0.01)。与糖尿病组相比,经过槲皮素干预后上述情况得到相反的结果。结论槲皮素能够改善糖尿病引起的肾脏损伤,其保护作用可能与抑制HMGB1/RAGE/NF-κB炎症信号通路,进而减轻肾脏的炎症反应、细胞凋亡等。

连翘苷抑制HMGB1/RAGE信号通路减轻大鼠糖尿病周围神经病变坐骨神经损伤

目的 基于高迁移率族蛋白Box-1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)信号通路探讨连翘苷(PHI)对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠坐骨神经损伤的影响。方法 利用高脂高糖饮食并注射链脲佐菌素(STZ)建立DPN大鼠模型,随机分为模型组、连翘苷低剂量(PHI-L)(50 mg/kg)组、连翘苷中剂量(PHI-M)(100 mg/kg)组、连翘苷高剂量(PHI-H)(200 mg/kg)组、阳性药物(甲钴胺,250μg/kg)组;另取正常饲料喂养大鼠为对照组。每组10只。采用BL-420S生物机能实验系统测定坐骨神经传导速度;血糖仪检测空腹血糖(FBG)水平;ELISA试剂盒检测血清HbAlc、IL-6、TNF-α水平;电镜观察坐骨神经超微结构形态;试剂盒检测坐骨神经中ROS、SOD、MDA、MBP水平;RT-qPCR、Western blot法检测坐骨神经中HMGB1、RAGE mRNA和蛋白水平。结果 与模型组比较,PHI-M组、PHI-H组、阳性药物组大鼠病理损伤明显减轻,坐骨神经传导速度、MBP、SOD水平显著恢复,FBG、HbAlc、IL-6、TNF-α、ROS、MDA、HMGB1、RAGE的mRNA及蛋白水平显著下降(P均<0.05)。结论 PHI可降低炎症反应,减轻大鼠DPN,发挥治疗作用,其机制可能与抑制HMGB1/RAGE信号通路有关。

松萝提取物通过调节HMGB1-RAGE炎症通路治疗类风湿关节炎的机制研究

目的 探讨松萝提取物通过调节(high mobility group protein, HMGB1-RAGE)信号通路治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)的机制。方法 54只CIA大鼠随机平均分为空白组,模型组,羟氯喹组,松萝提取物高、中、低剂量组,除空白组外,其余各组CIA大鼠均采用免疫诱导法建立RA模型,从造模第14 d后进行灌胃干预,连续用药14天后取血清及滑膜组织。ELISA检测(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、(interleukin-1,IL-1β)、(interleukin-6,IL-6)、(interleukin-17,IL-17)、、(interleukin-23,IL-23)浓度水平,Rt-PCR检测HMGB1、RAGE mRNA的表达,Western blot法检测HMGB1、RAGE的蛋白活性。结果 模型组检测指标明显高于空白组。经过14天的干预治疗后,羟氯喹组、松萝提取物高、中、低剂量检测指标均有不同程度降低,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),与羟氯喹组比较,松萝提取物高剂量组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 松萝提取物可抑制HMGB1、RAGE、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17、IL-23在CIA大鼠中的表达。提示松萝提取物可能有望通过调节HMGB1-RAGE信号通路治疗类风湿关节炎。

绞股蓝皂苷调节HMGB1-RAGE信号通路对骨肉瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨绞股蓝皂苷(Gyp)调节高迁移率族蛋白B1-晚期糖基化终产物受体(HMGB1-RAGE)信号通路对骨肉瘤细胞恶性生物学行为的影响及其机制。方法使用不同浓度(0~400μmol/L)绞股蓝皂苷处理MG63细胞,CCK-8检测细胞活力。将MG63细胞分为对照组(Control组)、绞股蓝皂苷低、中、高浓度组(Gyp-L组、Gyp-M组、Gyp-H组,50、100、200μmol/L Gyp)、绞股蓝皂苷高浓度+过表达HMGB1阴性对照组(Gyp-H+pcDNA-NC组,200μmol/L Gyp+转染pcDNA-NC质粒)和绞股蓝皂苷高浓度+过表达HMGB1组(Gyp-H+pcDNA-HMGB1组,200μmol/L Gyp+转染pcDNA-HMGB1质粒)。Edu检测细胞增殖水平;Transwell小室和划痕愈合实验检测细胞侵袭和迁移能力;ELISA检测转化生长因子-β(TGF-β)、基质金属蛋白酶(MMP-9)和白介素-6(IL-6)水平;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测通路、凋亡及EMT相关蛋白。随后建立骨肉瘤移植小鼠模型,在体检验绞股蓝皂苷对骨肉瘤移植瘤生长的影响。结果25~400μmol/L的绞股蓝皂苷能降低MG63细胞活力。与Control组相比,Gyp-L组、Gyp-M组和Gyp-H组细胞Edu阳性率、细胞侵袭数、划痕愈合率、TGF-β、MMP-9和IL-6水平及Bcl-2、HMGB1、RAGE、N-cadherin和VEGF蛋白表达显著降低(P<0.05);细胞凋亡率及Bax和E-cadherin蛋白表达显著增加(P<0.05),且呈浓度依赖性。过表达HMGB1可部分逆转绞股蓝皂苷对骨肉瘤细胞恶性生物学行为的抑制作用(P<0.05)。小鼠移植瘤实验结果表明,绞股蓝皂苷可显著抑制小鼠骨肉瘤移植瘤的生长(P<0.05)。结论绞股蓝皂苷对骨肉瘤细胞恶性生物学行为的抑制作用可能与抑制HMGB1-RAGE信号通路有关。

桂枝附子汤调控AGEs/RAGE/NF-κB信号通路对类风湿关节炎大鼠的影响

目的研究桂枝附子汤对类风湿关节炎(RA)大鼠的干预作用及对晚期糖基化终末产物(AGEs)/晚期糖基化终末产物受体(RAGE)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法将50只大鼠随机分为空白组、模型组、桂枝附子汤组(6.1 g/kg)、RAGE抑制剂组(0.5 mg/kg)、桂枝附子汤+RAGE抑制剂组(6.1 g/kg+0.5 mg/kg),每组10只。用牛Ⅱ型胶原与不完全弗氏佐剂(IFA)混合乳化诱导建立RA大鼠模型,造模后连续灌胃给药30 d。给药结束后,测定大鼠关节炎指数和关节肿胀度,HE染色观察大鼠踝关节软骨及滑膜组织病理变化,ELISA法检测大鼠血清白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,Western blot法检测大鼠踝关节软骨组织RAGE、p-NF-κB p65蛋白表达,免疫组化(IHC)法观察大鼠踝关节软骨组织AGE和软骨及滑膜组织TNF-α、白细胞介素-1β(IL-1β)阳性细胞表达。结果与模型组比较,桂枝附子汤组、抑制剂组和桂枝附子汤+抑制剂组均能有效降低RA大鼠关节炎指数、关节肿胀度、血清炎性因子IL-6、TNF-α水平、软骨组织AGE、RAGE、p-NF-κB p65蛋白表达和软骨及滑膜组织TNF-α、IL-1β蛋白表达(P<0.01),并能减轻软骨破坏,改善滑膜的炎性细胞浸润。结论桂枝附子汤对RA大鼠软骨和滑膜具有保护作用,该作用与抑制AGEs/RAGE/NF-κB信号通路活化,进而下调下游炎性因子表达有关。

吴茱萸碱调节HMGB1-RAGE信号通路对脓毒症大鼠急性肺损伤的影响

目的 探讨吴茱萸碱(EVO)调节高迁移率族蛋白1/晚期糖基化终末产物受体(HMGB1/RAGE)信号通路对脓毒症大鼠急性肺损伤(ALI)的影响。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、EVO组(40 mg/kg EVO)、EVO+HMGB1组(40 mg/kg EVO+500μg HMGB1重组蛋白),每组均12只。除对照组外,其余组采用盲肠结扎穿刺(CLP)法建立脓毒性ALI模型;ELISA法检测血清中炎性因子;苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理形态;TUNEL染色观察肺组织细胞凋亡情况;肺通透性指数(LPI)评估大鼠肺毛细血管渗漏;Western blot检测肺组织Occludin、ZO-1以及HMGB1-RAGE通路相关蛋白表达。结果 对照组肺组织结构正常;与对照组相比,模型组肺组织炎性细胞浸润严重,肺泡壁增厚,弥漫性水肿明显,肺泡间隙变窄,间质充血增强,病理损伤严重,Smith评分(3.10±0.38)、TNF-α、IL-1β、MCP-1含量、细胞凋亡率、LPI水平(2.98±0.12)、HMGB1、RAGE蛋白水平显著升高(P<0.05),Occludin、ZO-1蛋白水平显著下调(P<0.05);与模型组相比,EVO组肺肿胀、充血、炎性细胞浸润现象改善,Smith评分(0.42±0.04)、TNF-α、IL-1β、MCP-1含量、细胞凋亡率、LPI水平(0.97±1.05)、HMGB1、RAGE蛋白水平显著降低(P<0.05),Occludin、ZO-1蛋白水平显著升高(P<0.05);HMGB1过表达消除了EVO对脓毒症大鼠ALI的有利影响。结论 EVO可能通过下调HMGB1-RAGE信号通路对脓毒症大鼠ALI起到改善效果。

HMGB1/RAGE轴在肿瘤炎症中的作用及其治疗药物罂粟碱的研究进展

高迁移率族蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1)在肿瘤中的作用复杂多样,它结合不同的受体发挥不同生物学功能。其中晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycationend products,RAGE)定位于细胞膜,与释放至胞外的HMGB1相结合。已知HMGB1/RAGE轴在肿瘤的发展中起到重要作用,而肿瘤的发展及其耐药强弱与炎症密切相关。本文主要综述了HMGB1/RAGE轴在胰腺癌、结直肠癌和肝癌炎症中起到促炎促瘤作用的分子机制,总结了针对肿瘤炎症中HMGB1/RAGE轴的治疗药物罂粟碱及其衍生物的研究进展,旨在为探究肿瘤炎症中分子作用机制提供新思路,为针对HMGB1/RAGE轴治疗药物的研究提供新的理论依据。

RAGE受体阻断剂对癫痫幼鼠脑电图、神经元损伤及S100B蛋白表达的影响

目的探究晚期糖基化终末产物(Receptor for Advanced Glycation End Products,RAGE)受体阻断剂对癫痫幼鼠脑电图、神经元损伤及S100B蛋白表达的影响。方法选取40只无特定病原体级SD雄性幼鼠,随机分为正常组(N组)、模型组(M组)、苯妥英钠组(P组)、RAGE受体阻断剂组(R组),每组10只。M组、P组、R组腹腔注射戊四氮建立癫痫模型,N组不建立该模型,建模成功后,对P组腹腔注射20 mg/kg苯妥英钠,对R组腹腔注射1 mg/kg RAGE受体阻断剂FPS-ZM,N组、M组同期腹腔注射同体积0.9%氯化钠溶液。观察各组幼鼠模型行为学,记录脑电图,采用FJB染色和尼氏染色检测神经元损伤情况,免疫酶标法检测S100B蛋白表达。结果与N组比较,M组、P组、R组幼鼠Racine评分、发作持续时间、发作次数明显升高(P<0.05);与M组比较,P组、R组幼鼠Racine评分、发作持续时间、发作次数明显降低(P<0.05);且与P组相比,R组上述指标显著降低(P<0.05)。与N组比较,M组、P组、R组幼鼠波幅明显升高(P<0.05);频率明显降低(P<0.05);与M组比较,P组、R组幼鼠波幅明显降低(P<0.05),频率明显升高(P<0.05);且与P组相比,R组上述指标变化显著(P<0.05)。与M组相比,P组、R组神经元损伤明显减轻,神经元数量有所增加,神经元形态有所改善,神经元细胞及尼氏小体数目明显增加。与N组比较,M组、P组、R组海马、中脑、额叶皮层S100B蛋白表达显著升高(P<0.05);与M组比较,P组、R组海马、中脑、额叶皮层S100B蛋白表达显著降低(P<0.05);且与P组相比,R组上述指标显著降低(P<0.05)。结论RAGE受体阻断剂可显著改善癫痫幼鼠脑电图和神经元损伤,并抑制S100B蛋白表达。

健脾补肾法对人结直肠癌移植瘤组织TLR4、RAGE、NF-κB及CD34、D2-40的影响

目的探讨健脾补肾法对人结直肠癌移植瘤组织TLR4、RAGE、NF-κB及CD34、D2-40的影响。方法于裸鼠右腿内侧接种人结肠癌细胞,建立人结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型,15d后脱颈处死剥离瘤体。对照组用生理盐水灌胃,实验组用健脾补肾中药灌胃,免疫组化法检测2组移植瘤组织中TLR4、RAGE、NF-κB及CD34、D2-40的表达。结果免疫组化显示,与对照组相比,实验组的移植瘤组织中TLR4、RAGE、NF-κB的表达均明显下调(P<0.05),微血管CD34及淋巴管D2-40也明显下调(P<0.005)。结论健脾补肾法能明显下调人结直肠癌移植瘤组织炎症受体TLR4及RAGE、核转录因子NF-κB、肿瘤新生血管标记物CD34及肿瘤新生淋巴管标记物D2-40的表达。

颅脑损伤后HMGB1-RAGE介导血管周细胞脱离血管和血脑屏障损伤的机制研究

目的观察颅脑损伤后皮层血管周细胞的反应性变化并探讨其机制。方法使用可控性皮层撞击动物模型模拟颅脑损伤,通过蛋白免疫印迹检测外伤后不同时间点皮层周细胞标记物表达情况,并通过透射电镜确定颅脑损伤后血管周细胞的生物学行为。通过Western blotting检测外伤后高迁移率族蛋白1(highmobilitygroupbox 1,HMGB1)、晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end product,RAGE)、核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)表达水平,并将实验动物分为FPS-ZM1(一种特异性RAGE受体阻滞剂)注射组和野生型组,利用干湿脑重和透射电镜的方法检测外伤后HMGB1-RAGE对周细胞的影响。培养原代小鼠脑微血管周细胞,添加HMGB1重组蛋白并以同时添加FPS-ZM1的培养周细胞作为对照,离体水平探索HMGB1-RAGE通路对血管周细胞的影响。结果外伤后早期皮层周细胞标记物血小板源性生长因子受体B(platelet-derived growth factor receptor beta,PDGFR-β)、NG2蛋白聚糖(NG2 proteoglycan,NG2)表达水平降低(PDGFR-β,Control vs.CCI 3D P<0.05;NG2,Control vs.CCI 6H P<0.05,Control vs.CCI 1D P<0.05),并发现周细胞脱离血管,同时伴有局部血脑屏障开放。外伤后早期皮层HMGB1-RAGE-NF-κB信号通路表达升高(HMGB1,Control vs.CCI 6H P<0.05,Control vs.CCI 1D P<0.05;RAGE,Control vs.CCI 6H P<0.05,Control vs.CCI 1D P<0.05,Control vs.CCI 3D P<0.05,Control vs.CCI 5D P<0.05,Control vs.CCI 7D P<0.05;NF-κB,Control vs.CCI 6H P<0.05,Control vs.CCI 1D P<0.05),阻断RAGE与配体结合后皮层水肿减轻(CCI 6H、CCI 1D均P<0.05)、神经血管单元损伤降低。HMGB1重组蛋白可增加培养周细胞的迁移能力(Control vs.HMGB1 P<0.05,Control vs.HMGB1+FPS-ZM1 P<0.05),且能被FPS-ZM1逆转(HMGB1 vs.HMGB1+FPS-ZM1 P<0.05)。结论颅脑损伤后高水平的HMGB1通过周细胞上RAGE受体介导周细胞脱离血管,并导致局部脑水肿的发生。

基于AGEs/RAGE/NF-κB通路探讨补肝散改善D-半乳糖致衰大鼠学习记忆障碍机制研究

目的探讨复方补肝散(BGSD)干预D-半乳糖致衰大鼠学习记忆能力的潜在作用机制。方法40只大鼠被随机分为对照组、模型组、BGSD[14.06 g/(kg·d)]组和吡拉西坦[0.4 g/(kg·d)]组,每组10只。腹腔注射D-半乳糖[400 mg/(kg·d)]建立衰老大鼠模型。每周记录大鼠体质量、摄水量、摄食量和抓力;八臂迷宫和跳台实验评估大鼠学习记忆能力;称取肝脏、胸腺、脾脏和脑组织重量以计算相应脏器指数;检测血清丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;苏木精-伊红(HE)染色观察海马病理学改变;酶联免疫吸附法(ELISA)检测海马肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6及IL-1β水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测海马晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、核因子-κB(NF-κB)、TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA表达;蛋白免疫印迹法(WB)检测海马晚期糖基化终末产物(AGEs)、RAGE和NF-κB蛋白表达。结果补肝散可显著增加D-半乳糖致衰大鼠的摄食量、摄水量、体质量、抓力及脏器指数(P<0.05),减少八臂迷宫中工作记忆错误(WME)、参考记忆错误(RME)以及总记忆错误次数(TE)(P<0.05),降低跳台实验中错误次数并延长跳台潜伏期(P<0.05)。此外,补肝散可减少海马神经元损伤,提高血清SOD活性,降低MDA含量及下调促炎因子TNF-α、IL-6和IL-1β水平(P<0.05)。进一步研究结果显示,补肝散可显著降低海马AGEs、RAGE和NF-κB表达(P<0.05)。结论补肝散可通过抑制AGEs/RAGE/NF-κB信号通路调节D-半乳糖致衰大鼠神经炎症损伤从而改善学习记忆能力。

天马颗粒对裸鼠结肠癌移植瘤组织中RAGE、CD34、D2-40表达影响的研究

目的:研究天马颗粒对裸鼠结肠癌移植瘤组织中RAGE、CD34、D2-40表达的影响探讨天马颗粒抑癌机制。方法:以SPF级雌雄各半裸鼠为研究对象,通过皮下种植HCT116细胞株构建裸鼠移植瘤模型,随机将其分为三组:空白对照组,天马颗粒低浓度组(5.39g/kg)、天马颗正常浓度组(10.79g/kg),种植瘤形成后施行药物干预,然后摘取结肠癌组织,进行免疫组化染色检测,观察RAGE、CD34、D2-40蛋白表达量。结果:同空白对照组相比,天马颗粒低浓度组、天马颗粒正常浓度组大肠癌组织中RAGE蛋白具有明显差异(P<0.05),CD34天马颗粒组较空白对照组有明显差异(P<0.05),D2-40天马颗粒组较空白对照组有明显差异(P<0.05)。结论:天马颗粒可以抑制RAGE蛋白、CD34、D2-40蛋白表达,改善肿瘤炎症微环境,抑制肿瘤血管、淋巴管生成。

松萝提取物对胶原诱导性关节炎大鼠HMGB1-RAGE自噬通路及关节炎性损伤的影响

目的:探讨松萝提取物对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB1)-晚期糖基化终产物受体(RAGE)自噬通路及关节炎性损伤的影响。方法:将54只大鼠随机分为空白对照组,模型对照组,松萝提取物低、中、高剂量组和羟氯喹组,每组9只。除空白对照组外,其余组采用Ⅱ型胶原乳剂建立CIA模型。松萝提取物低、中、高剂量组分别给予2mg·kg^(-1)·d^(-1)、6mg·kg^(-1)·d^(-1)、54 mg·kg^(-1)·d^(-1)松萝提取物灌胃,羟氯喹组给予36 mg·kg^(-1)·d^(-1)羟氯喹灌胃,空白对照组及模型对照组则予以等量的生理盐水灌胃。观察各组大鼠关节炎评分、肿胀程度和滑膜病理的变化,采用ELISA检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶(MMPs)、血管内皮生长因子(VEGF)、HMGB1的含量,PCR、WB检测蛋白HMGB1、RAGE、Beclin1、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、哺乳动物雷帕霉素靶点(mTOR)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)的蛋白浓度及表达情况。结果:模型大鼠出现关节肿胀、变形,活动量减少,关节炎评分提示造模成功。经松萝提取物治疗后,大鼠的关节肿胀减轻,活动量增加,炎症反应减轻。与空白对照组比较,模型对照组血清TNF-α、MMPs、VEGF、HMGB1含量均增高,且HMGB1、RAGE、Bcl-2、mTOR、p38 MAPK蛋白表达量均上升,Beclin1蛋白表达量下降(P<0.05)。与模型对照组比较,松萝提取物中、高剂量组及羟氯喹组HMGB1、RAGE、Bcl-2、mTOR、p38 MAPK、TNF-α、MMPs、VEGF含量均降低,Beclin1蛋白表达量上升(P<0.05);与羟氯喹组比较,松萝提取物中、高剂量组抑制HMGB1、RAGE、Bcl-2、mTOR、p38 MAPK表达,激活Beclin1的效果相当,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:松萝提取物能减轻CIA大鼠关节肿胀程度,降低血清TNF-α、MMPs、VEGF、HMGB1含量,抑制HMGB1、RAGE、Bcl-2、mTOR、p38 MAPK蛋白的表达,提升Beclin1表达,增强细胞自噬,减少滑膜炎症反应。