基于RBL-2H3细胞脱颗粒抑制作用的体外抗过敏活性益生菌的筛选及鉴定

为探究乳酸菌的抗过敏活性,本研究采用传统分离技术从发酵蔬菜中获得乳酸菌,并进行益生菌体外评价,结合RBL-2H3细胞脱颗粒抑制实验筛选具有抗过敏活性的益生菌。结果表明,从发酵蔬菜中分离的4株菌株表现出良好的益生特性和安全性;所选4株乳酸菌对RBL-2H3细胞脱颗粒释放β-己糖胺酶均具有较高的抑制作用,并对RBL-2H3细胞脱颗粒释放组胺、肿瘤坏死因子-α和白介素-4均有明显的下调作用,具有作为抗过敏活性益生菌的可能性。4株菌株经16S rDNA测序鉴定为植物乳杆菌2株、发酵乳杆菌和副干酪乳杆菌各1株。

RBL联合Seminar教学法在医学学术型硕士培养中的应用

现阶段医学学术型硕士研究生培养的教学模式不能满足当今社会对科研人才的需求,亟需作出改革。以探究为基础的教学法(research based learning,RBL)联合研讨会(Seminar)教学法的教学模式,强调在教师引导下,构建开放式、学生主动参与并开展讨论的学习模式。首先,高校可围绕当前研究热点设置相关课程或者举办专题讲座,开拓学生思维,提高学生科研能力;其次,教师可以引导学生有效利用网络数据库发现问题以及充分探讨和交流实验过程中遇到的诸多问题;再次,针对科研论文写作,需改变传统的大学英语写作教学模式;最后,通过阶段性考核、成果汇报、问卷调查等方式对RBL联合Seminar教学法进行质量评价。通过RBL联合Seminar教学法的教学模式,医学学术型硕士研究生能够积极、主动地发现问题,通过和教师、同学之间讨论交流分析问题,并运用合适的实验方法解决问题,从而培养严谨的科研思维,提高学生的创新能力。

RBL联合虚拟仿真实验教学模式在职业卫生与环境卫生学实验教学中的应用研究

选择右江民族医学院2019级预防医学专业1班和2班共99名学生作为研究对象,分为对照组和观察组。对照组采用传统LBL教学模式,观察组采用RBL联合虚拟仿真实验教学模式。课程结束后,比较两组课程考核成绩、学习效果满意度,并对观察组综合能力进行调查,以分析RBL联合虚拟仿真实验教学模式在职业卫生与环境卫生学实验教学中应用的效果。研究表明,与LBL教学模式相比,采用RBL联合虚拟仿真实验教学模式能提高学生的学习成绩和学习效果满意度,增强学生的综合能力,具有较高的应用价值。

基于RBL教学法的本科生科研创新能力培养的实践与探索

目的探索基于研究的学习(research based learning,RBL)教学法对本科生科研创新能力的影响。方法一共212名本科生纳入研究,其中传统教学组有104名,RBL教学组有108名,之后,教师对2组学生的科研创新能力进行客观评价,并调查了学生对教学效果的满意度。结果RBL教学组本科生的科研创新能力总分高于传统教学组(P<0.001),RBL教学组本科生在实验设计、实验操作、报告撰写、结果汇报、提问问题与回答问题能力,以及对教学效果的满意度均高于传统教学组(P<0.01)。结论RBL教学法可以提高本科生的科研创新能力。

RBL教学法对医学研究生批判性思维的影响

目的评价基于研究的学习(research based learning,RBL)这一新的教学法对医学研究生批判性思维能力的影响,以提高医学专业研究生批判性思维能力。方法330名医学专业研究生参与研究,分为2组。其中实验组(n=165)采用RBL教学方式的《科研基本素质培养》课程学习;对照组(n=165)学生未参与该课程的学习。之后,利用批判性思维能力问卷评价2组学生批判性思维能力的差异。结果实验组批判性思维总分高于对照组(P<0.001),实验组在寻找真相、分析能力、批判性思维的自信心、求知欲、认知成熟度5个维度均高于对照组(P<0.05)。结论RBL教学方式课可提高医学专业研究生批判性思维能力。

防风提取物对IgE致敏肥大细胞的改善作用及机制研究

[目的]探究防风(Saposhnikovia divaricata,SD)提取物对大鼠嗜碱性白血病细胞RBL-2H3脱颗粒的影响及作用机制。[方法]采用噻唑蓝(methylthialazole tetrazolium,MTT)比色法检测,根据5、25、50、100、200、400μg·mL^(-1)SD提取物对RBL-2H3细胞活性的影响,确定后续实验浓度。以免疫球蛋白E(immunoglobulinE,IgE)诱导建立RBL-2H3细胞脱颗粒模型。设立空白对照组、模型组、低剂量SD提取物组(5μg·mL^(-1))、中剂量SD提取物组(25μg·mL^(-1))、高剂量SD提取物组(50μg·mL^(-1))和地塞米松(dexamethasone,DXMS)组(100μg·mL^(-1)),干预30 min。MTT法检测低、中、高剂量SD提取物对RBL-2H3细胞脱颗粒模型活性的影响。甲苯胺蓝染色观察脱颗粒细胞形态,计算细胞脱颗粒率。免疫荧光染色测定细胞F-肌动蛋白(F-actin)表达。酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞β-氨基己糖苷酶、组胺、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)水平。免疫印迹法检测细胞磷脂酰肌醇-3-羟基激酶(phosphoinositide-3 kinase,PI3K)、磷酸化-PI3K(phosphorylation-PI3K,p-PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、磷酸化-AKT(phosphorylation-AKT,p-AKT)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activited protein kinaseelisa,p38MAPK)、磷酸化-p38MAPK(phosphorylation-p38MAPK,p-p38MAPK)、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、磷酸化-NF-κB(phosphorylation-NF-κB,p-NF-κB)、细胞外调节激酶(extracellular regulated kinases,ERK)、磷酸化-ERK(phosphorylation-ERK,p-ERK)蛋白表达。[结果]低、中、高剂量防风提取物(5、25、50μg·mL^(-1))对RBL-2H3细胞活性无显著影响(P>0.05)。与空白对照组比较,模型组甲苯胺蓝染色细胞数量减少、形态变圆,细胞脱颗粒率显著上升,F-actin表达下降,β-氨基己糖苷酶、组胺、IL-4、IL-6、TNF-α水平升高,IFN-γ水平降低,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-p38MAPK/p38MAPK、p-NF-κB/NF-κB、p-ERK/ERK表达升高(P<0.01)。与模型组比较,低、中、高剂量SD提取物组和DXMS组细胞F-actin表达增加,β-氨基己糖苷酶、组胺、IL-4、IL-6、TNF-α释放显著下降(P<0.05,P<0.01),IFN-γ释放显著增加(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-p38MAPK/p38MAPK、p-NF-κB/NF-κB、p-ERK/ERK表达降低(P<0.05,P<0.01);中、高剂量SD提取物组和DXMS组细胞数量增加,形态多呈梭形,细胞脱颗粒率显著下降(P<0.01)。与低剂量SD提取物组比较,高剂量SD提取物组和DXMS组细胞脱颗粒率下降(P<0.01)、F-actin表达增加(P<0.05)、p-p38MAPK/p38MAPK表达降低(P<0.01)。[结论]SD提取物可抑制IgE致敏的RBL-2H3细胞脱颗粒,降低炎性介质水平,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT、p38MAPK/NF-κB、ERK蛋白磷酸化有关。

基于RBL-2H3细胞的复杂基质生化药类过敏反应评估及体内外相关性评价

目的 建立适宜的细胞模型对复杂基质生化药骨肽类注射剂和垂体后叶注射剂类过敏反应风险进行评估,并与类过敏反应体内评价模型实验结果的相关性进行比较。方法 采用RBL-2H3细胞脱颗粒实验,选择β-氨基己糖苷酶作为适宜的评价指标以评估骨肽类注射剂和垂体后叶注射剂对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响;采用实验室已建立的类过敏反应体内评价模型小鼠耳郭蓝染实验,以蓝染率及伊文思蓝升高率为指标评价两种复杂基质生化药注射剂体内类过敏反应风险的相关性。结果 骨肽类注射剂可诱导β-氨基己糖苷酶的释放率增加,与阴性对照组相比差异存在统计学意义(P <0.01),垂体后叶注射剂不可诱导β-氨基己糖苷酶的释放。小鼠耳郭蓝染实验高剂量组中,复方骨肽注射液和骨肽注射液为临床等效剂量的6.67、10倍,类过敏反应阳性率分别为100%、66.7%;随着剂量的降低,复方骨肽注射液和骨肽注射液为临床等效剂量的1.67、2倍时,类过敏反应均判定为阴性,垂体后叶注射剂类过敏反应均为阴性,与体外结果一致。结论通过结合RBL-2H3细胞脱颗粒模型与小鼠耳郭蓝染模型可对药物类过敏反应风险进行评估和筛查,同时也可为复杂基质类生化药类过敏反应物质基础及机制的研究评价提供参考和手段。

几种常见中药注射剂对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响

目的通过研究几种常见中药注射剂(TCMI)对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响,探讨RBL-2H3细胞模型应用于体外评价TCMI引起类过敏反应的可行性。方法体外培养RBL-2H3细胞,血塞通等7种TCMI与其共同培养,通过中性红染色法计数脱颗粒的RBL-2H3细胞,显色法计算β-氨基己糖苷酶释放率,ELISA法检测培养上清中组胺含量,观察TCMI对RBL-2H3细胞脱颗粒的影响。结果正常RBL-2H3细胞出现少量脱颗粒现象,血塞通、清开灵、双黄连、脉络宁、香丹、穿琥宁等能显著引起细胞脱颗粒;血塞通、穿琥宁和柴胡注射液能不同程度促进β-氨基己糖苷酶的释放;血塞通、清开灵注射液可显著引起RBL-2H3细胞组胺释放。结论RBL-2H3细胞脱颗粒的检测方法敏感、重复性好,其结果与临床报道有一定的相关性,提示其有评价TCMI所致的类过敏反应的潜在应用价值。

青藤碱对RBL-2H3肥大细胞增殖凋亡以及活化脱颗粒的影响

目的通过研究青藤碱对肥大细胞增殖凋亡以及活化脱颗粒的影响,深入探讨青藤碱的抗炎作用机理。方法应用细胞培养,流式细胞术等方法,观察青藤碱等药物对体外培养的RBL-2H3肥大细胞增殖凋亡以及活化脱颗粒的影响。结果青藤碱对肥大细胞增殖有明显的抑制作用,其IC50约为1mmol/L,并能促进肥大细胞凋亡,且对RBL-2H3肥大细胞活化脱颗粒有较强的抑制作用。结论青藤碱可能部分通过下调肥大细胞功能发挥抗炎抗风湿作用。

RBL-2H3细胞诊断过敏性休克的可行性初探

目的 :探索诊断过敏性休克的体外检测方法。方法 :建立豚鼠过敏性休克模型 ,培养RBL 2H3细胞株 ,用致敏动物血清在体外诱导该细胞脱颗粒 ,观察其形态改变及测定组胺释放量与细胞表面AnnexinV标记阳性率。结果 :RBL 2H3细胞在致敏血清刺激下活化 ,在抗原再次攻击后可以脱颗粒 ,AnnexinV阳性率与组胺释放量呈正比 ,二者与致敏血清的滴度呈剂量依赖关系。结论 :RBL 2H3可望用于过敏性疾病诊断及变应原筛选 。

人参皂甙Rbl对阿霉素心力衰竭大鼠致心脏纤维化因子表达的影响

目的:探讨人参皂甙Rbl(Ginsenosides-Rbl,Gs-Rb1)是否通过心脏抑制心脏纤维化相关蛋白和mRNA介导其改善慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)大鼠的心肌重构效应。方法:在构建阿霉素CHF大鼠模型成功后,将其随机分为Gs-Rb1组(n=17)给予Gs-Rb1 70 mg/(kg.d)和CHF组(n=15),另外选取同龄健康大鼠作为对照组(n=10)。第4周心脏超声评估全心质量指数(HW/BW)和左室质量指数(LW/BW),应用Western blot和RT-PCR方法检测转化生长因子-β1(transforminggrowth factorβ1,TGF-β1)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、内皮素-1(endothelin 1,ET-1)等蛋白和mRNA的表达。结果:与对照组相比,Gs-Rb1组全心质量指数(HW/BW,P=0.005)及左室质量指数(LW/BW,P=0.000)均显著改善;与CHF组相比,Gs-Rb1组TGF-β1、CTGF和ET-1蛋白的表达均显著下降(P均<0.05),但均显著高于对照组(P均<0.05);Gs-Rb1组TGF-β1、CTGF和ET-1等mRNA的表达均显著低于CHF组(P均<0.05),但均显著高于对照组(P均<0.05)。结论:在Gs-Rbl改善CHF大鼠心肌重构效应中,Gs-Rbl可通过下调TGF-β1、CTGF、ET-1等蛋白和mRNA等介导其保护作用。

金银花对大鼠体内和体外RBL细胞的抗氧化保护作用及其机制

目的:从细胞和分子水平探讨金银花(HS)对机体内外的抗氧化作用及其机制,为金银花的临床应用提供理论依据。方法:体外培养的人肝RBL细胞与0.25g·L-1的金银花共培养前或后加H2O2(氧化剂),应用MTT和TUNEL实验检测细胞生存率和凋亡率,免疫组织化学/免疫印迹检测NF-κB、HSP-70、Bcl-2、Bax及Caspase-3表达水平,检测细胞内抗氧化酶体系的水平。建立金银花大、小剂量灌胃的大鼠动物模型,检测血浆抗氧化酶体系的总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱苷肽(GSH)、丙二醛(MDA)的水平。结果:金银花对RBL细胞的抗氧化和抗凋亡作用中,前保护(先加金银花,后加H2O2)高于后保护(先加H2O2,后加金银花)的效应;下调NF-κB和HSP-70的表达和Bcl-2/Bax比值,且前保护组凋亡率低于后保护组;同时也上调细胞内抗氧化酶体系的水平。金银花灌胃1～2h后,大鼠血浆中T-AOC、GSH-Px、GSH、SOD含量较灌胃前显著增高(P<0.05),而MDA含量明显减低(P<0.05)。结论:金银花可通过上调体内抗氧化酶体系并下调NF-kB信号传导途径呈现抗氧化、抗凋亡的保护作用。

莽草酸抑制大鼠RBL-2H3细胞脱颗粒和组胺释放

目的研究莽草酸对大鼠RBL-2H3细胞增殖和化合物48/80(C48/80)诱导后细胞脱颗粒情况及其机制。方法MTT法检测(3、10、30)μg/m L的莽草酸处理后,RBL-2H3细胞的增殖情况,甲苯胺蓝染色观察C48/80诱导RBL-2H3细胞脱颗粒的情况,底物法检测(0、12.5、25、50、80、100)μg/m L C48/80处理后,RBL-2H3细胞内β-氨基己糖苷酶的释放,ELISA检测各处理组细胞上清液中组胺的含量。结果 (3、10、30)μg/m L莽草酸对RBL-2H3细胞增殖无明显抑制作用,RBL-2H3细胞脱颗粒与C48/80的剂量有一定量效关系;莽草酸能抑制大鼠RBL-2H3细胞脱颗粒;与阳性对照组相比,莽草酸处理C48/80刺激后的RBL-2H3细胞,其β-氨基己糖苷酶释放率和组胺释放量均显著降低。结论莽草酸可抑制大鼠RBL-2H3细胞脱颗粒,减少组胺释放。

基于RBL-2H3细胞模型的Ⅰ型过敏反应和类过敏反应研究

Ⅰ型速发型过敏是常见的药物不良反应,长期受到人们的广泛重视和研究。类过敏反应自20世纪80年代在造影剂和麻醉剂的使用中发现以来,其发生频率不断提高,尤其随着中药注射剂的广泛使用而越来越受到重视。但其确切机理还尚未得到阐明。RBL-2H3细胞是一类表面含有丰富的IgE受体鼠嗜碱性淋巴细胞,在研究过敏反应方面有重要作用。本文就如何以RBL-2H3细胞构建这两类过敏反应的体外细胞模型及如何检测其效应分子进行简单阐述,同时介绍这两类反应机制的研究进展。

人参皂苷Rbl对阿霉素心力衰竭大鼠心肌细胞核因子-κB的影响

目的探讨人参皂苷Rbl(Gs-Rb1)改善阿霉素(Adr)慢性心力衰竭(CHF)效应是否与抑制核因子-κB(NF-κB)有关。方法 Adr诱导CHF大鼠模型被随机分为Adr组(n=15)和Gs-Rbl组(70 mg.kg-1.d-1,n=17),另随机选取同龄健康大鼠作为对照(n=10);同时培养乳鼠心肌细胞并随机分为对照组、Adr组(1μmol.L-1)和Gs-Rbl组(1μmol.L-1Adr+200μmol.L-1 Gs-Rbl)。干预完毕后,检测心脏超声、NF-κB、IκBα、p-IκBα和NF-κB DNA结合活性。结果 (1)Gs-Rb1组LVEF明显改善(P=0.003);(2)在NF-κB p50和NF-κB p65方面,体内或体外的Gs-Rbl组均明显低于Adr组(P<0.001);(3)体内、体外的Gs-Rbl组NF-κBDNA结合活性明显低于Adr组(P<0.01);(4)体内、体外的Adr组IκBα蛋白明显高于对照组,而Gs-Rbl组IκBα最高(P<0.01);Gs-Rbl组p-IκBα和p-IκBα/IκBα比值明显低于Adr组(P<0.01)。结论 Gs-Rb1改善CHF效应与其抑制NF-κB活性有关。

丹皮酚对RBL-2H3肥大细胞活化脱颗粒的影响

目的通过建立体外抑制肥大细胞脱颗粒的药效学模型,探讨丹皮酚抗Ⅰ型变态反应作用机制。方法用MTT比色法检测不同浓度的丹皮酚对RBL-2H3肥大细胞增殖的影响。通过ELISA法,明确体外RBL-2H3细胞活化分泌组胺及TNF-α动力学特征。检测不同浓度药物对RBL-2H3肥大细胞分泌组胺及TNF-α的影响。结果丹皮酚对RBL-2H3细胞增殖有抑制作用,IC50值为0.22 mg/mL。RBL-2H3细胞活化脱颗粒,分泌组胺的释放率在前30 m in上升较快,30 m in后上升进入平台期;TNF-α分泌的量在1h达高峰。丹皮酚抑制RBL-2H3细胞释放组胺和TNF-α作用不弱于色甘酸钠0.1,0.5 mg/mL。丹皮酚浓度的对数与其对RBL-2H3细胞释放组胺和TNF-α的抑制率呈线性相关(P=0.000<0.01)。结论丹皮酚呈剂量依赖性抑制RBL-2H3细胞分泌组胺和TNF-α。

人参皂甙Rbl对血管性痴呆大鼠认知功能及突触素表达的影响

目的：研究人参皂甙Rbl（GSRbl）对血管性痴呆大鼠认知功能与海马突触素表达的影响。方法：将36只大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组。以双侧颈总动脉结扎法制作血管性痴呆大鼠模型。造模后治疗组大鼠腹腔注射GSRbl（30mg·kg^-1·d^-1）。Y型迷宫和免疫组织化学法结合图像分析检测各组大鼠认知功能和海马突触素免疫阳性产物的平均光密度。结果：与对照组大鼠相比，模型组大鼠Y型迷宫中错误次数增加，模型组大鼠学习记忆能力减退，其海马区突触素免疫反应阳性产物平均光密度降低；与模型组相比，治疗组大鼠出错次数减少，而海马区突触素免疫阳性产物平均光密度升高。结论：人参皂甙Rbl可增加血管痴呆性大鼠海马区突触素表达，显著改善其认知功能。

血塞通致RBL-2H3细胞与原代肥大细胞脱颗粒特性的比较

【目的】通过比较血塞通注射液等在类过敏试验中致RBL-2H3细胞与大鼠腹腔原代肥大细胞脱颗粒特性的异同,以评价2种细胞在中药注射液类过敏试验中的意义。【方法】选用已经明确能引起类过敏反应的3种供试品即血塞通注射液、Compound 48/80和吐温80,分别与RBL-2H3细胞和大鼠腹腔肥大细胞共同孵育1 h,通过β-氨基己糖苷酶释放率和组胺释放率、释放量等的检测,分析比较脱颗粒特性的异同,同时观察了不同浓度血塞通注射液对脱颗粒程度的影响。【结果】2种细胞在血塞通注射液、Compound 48/80和吐温80的直接刺激下均出现脱颗粒现象,脱颗粒程度与血塞通注射液呈剂量依赖性;原代肥大细胞β-氨基己糖苷酶释放率、组胺释放量和释放率均显著高于RBL-2H3细胞,2种细胞比较差异有统计学意义(P<0.01)。【结论】在类过敏反应脱颗粒试验中,RBL-2H3细胞和原代大鼠腹腔肥大细胞脱颗粒具有相同趋势,均可用于中药注射液类过敏评价,RBL-2H3细胞应用方便,而肥大细胞更加敏感。

RBL教学模式在医学遗传学实验教学改革中的探讨

实验教学改革作为高等医科院校教学改革的重要组成部分,直接关系到学生动手实践能力和科研创新能力的培养。通过论述探究为基础的学习(RBL)教学模式在医学遗传学实验教学改革中的具体实施过程,探讨RBL教学模式在医学遗传学实验教学改革中的应用。

hFcεRIα/RBL-2H3细胞株的构建与评价

目的构建稳定表达人FcεRIα(h FcεRIα)亚基的RBL-2H3细胞株。方法利用RT-PCR技术克隆h FcεRIα基因,构建真核表达载体p CI-neo-h FcεRIα。脂质体介导法转染RBL-2H3细胞,G418筛选获得稳定转染细胞株。利用RT-PCR、Western blot及免疫荧光法鉴定转染结果。结果通过对脂质体介导转染体系进行优化,转染效率可高达75.38%。经Western blot、免疫荧光及RT-PCR鉴定,h FcεRIα基因在RBL-2H3细胞内成功表达。结论成功构建h FcεRIα/RBL-2H3细胞模型,为深入研究Ig E与FcεRI作用机制及相关药物开发提供了实验基础。