食管胃交界腺癌和远端胃腺癌中HER2、RKIP及ERK表达的对比研究

目的:比较HER2、RKIP和ERK在食管胃交界腺癌(adenocarcinoma of esophagogastric junction,AEG)及远端胃腺癌(distal gastric adenocarcinoma,DGA)中的表达情况,并探讨AEG与DGA发病机制的差异。方法:通过免疫组化法检测AEG、DGA及正常胃黏膜组织中HER2、RKIP及ERK的表达情况,分析HER2、RKIP及ERK与临床病理学特征的关系及三者相关性。结果:AEG中HER2阳性表达率高于DGA,差异有统计学意义(P<0.05)。AEG及DGA中RKIP阳性表达率均低于正常胃黏膜组织,ERK阳性表达率均高于正常胃黏膜组织(P<0.05)。AEG中,RKIP在高/中分化、淋巴结转移组中阳性表达率较低,ERK在低分化、浸润浆膜层、淋巴结转移组中阳性表达率较高(P<0.05);HER2与ERK表达正相关(r=0.352,P=0.007),RKIP与ERK表达负相关(r=-0.521,P=0.000)。DGA中,RKIP在低分化、淋巴结转移组中阳性表达率较低,ERK在淋巴结转移组中阳性表达率较高(P<0.05);RKIP与ERK表达负相关(r=-0.287,P=0.021)。结论:AEG中HER2阳性表达率高于DGA,ERK高表达与AEG患者临床病理特征的关系更为密切,RKIP表达与AEG和DGA的分化程度和淋巴结转移情况密切相关。HER2、RKIP、ERK在AEG与DGA中的表达不同,提示不同部位胃腺癌的MAPK信号通路调节机制并不完全一致。

RKIP低表达与鼻咽癌侵袭转移和NF-κB信号通路活化相关

为筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)发病相关的蛋白质,采用双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)和质谱(mass spectrometry,MS)技术比较NPC组织与癌旁正常鼻咽上皮组织(adjacent normal nasopharyngeal epithelialtissue,ANNET)蛋白质表达的差异,鉴定了21个差异蛋白,其中Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein,RKIP)等9个蛋白质在NPC组织中的表达水平低于ANNET.为探讨RKIP在NPC转移中的作用和机制,采用Western blot检测RKIP在不同转移潜能的5-8F和6-10BNPC细胞中的表达水平,采用免疫组化方法检查RKIP在石蜡包埋NPC组织、正常鼻咽上皮组织(normal nasopharyngeal epithelial tissue,NNET))及颈淋巴结转移NPC组织(lymphnode metastatic NPC,LMNPC)中的表达水平,采用脂质体转染方法将正义、反义RKIP表达质粒及其相应空白载体分别转染5-8F和6-10B细胞,建立相应的稳定转染细胞系,分析RKIP表达水平改变对NPC细胞体外侵袭能力和NF-κB信号通路活性的影响.结果显示:RKIP在高转移5-8F细胞中的表达水平低于非转移6-10B细胞、在NPC组织中的表达水平低于NNET、在转移癌中表达缺失.上调RKIP表达能抑制5-8F细胞的侵袭能力,而下调RKIP表达能增强6-10B细胞的侵袭能力;上调RKIP表达能降低5-8F细胞的p-IκB-α水平和NF-κB的转录活性,而下调RKIP表达能增加6-10B细胞的p-IκB-α水平和NF-κB的转录活性.研究结果提示,RKIP可能是NPC的一个转移抑制蛋白,RKIP表达下调可能通过活化NF-κB信号通路促进NPC细胞侵袭和转移.

RKIP介导的ERK通路在电磁辐射致海马神经元损伤中的作用

目的:研究电磁辐射对原代培养海马神经元Raf激酶抑制蛋白(RKIP)和磷酸化ERK表达的影响,应用MEK的抑制剂U0126探讨RKIP介导的ERK通路在辐射损伤中的作用。方法:体外培养原代海马神经元,采用X-HPM、S-HPM及EMP作为辐射源,分别建立3种电磁辐射细胞模型。通过免疫荧光标记、激光扫描共聚焦显微镜检测RKIP和磷酸化ERK的表达;利用AnnexinV-PI双标记、流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡与坏死率。结果:三种电磁辐射后海马神经元RKIP表达均减少,磷酸化ERK表达均增加,且胞核移位发生,辐射组间均未见明显差异;U0126预处理组较单纯辐射组神经元的凋亡与坏死率明显降低,但仍高于假辐射组。结论:RKIP介导的ERK通路过度激活是电磁辐射致海马神经元凋亡与坏死的重要机制之一,U0126对电磁辐射损伤具有一定防护作用。

RKIP在胆总管结扎肝纤维化大鼠肝脏组织的表达

目的研究RKIP在胆总管结扎肝纤维化大鼠肝脏组织中的表达。方法SD大鼠60只,随机分为模型组(48只)、对照组(12只)。运用胆总管结扎方法制作大鼠肝纤维化模型,模型组分别于结扎后1、2、3、4w麻醉动物,假手术组与4w模型组同批麻醉,留取肝脏标本。组织切片经HE和Masson三色染色检测病理变化,Western印迹和免疫组织化学方法检测RKIP在肝组织的表达,用Western印迹方法检测RKIP和ERK的磷酸化水平。结果HE和Masson三色染色结果证明胆总管结扎大鼠肝纤维化模型制作成功。随着肝纤维化程度增高RKIP表达下降,RKIP和ERK的磷酸化水平则相应增加。结论胆总管结扎大鼠肝纤维化过程中肝脏组织Raf-1/MEK/ERK1,2信号转导途径的激活与RKIP的蛋白表达下降和磷酸化增加有关。

浸润性乳腺癌及转移淋巴结中RKIP和Ki-67的表达及意义

目的探讨RKIP和Ki-67在浸润性乳腺癌及其淋巴结转移灶中的表达及意义。方法应用免疫组化SP法检测RKIP和Ki-67在52例浸润性乳腺癌及其淋巴结转移灶中的表达情况。结果乳腺癌淋巴结转移灶与原发灶相比,RKIP表达水平明显下降,两者之间有统计学差异(P<0.01)。Ki-67指数在乳腺癌淋巴结转移灶明显高于原发灶(P<0.01);但RKIP与Ki-67之间,无论是原发灶,还是转移灶,都无相关关系(均P>0.05)。结论RKIP具有抑制浸润性乳腺癌转移的作用,属于转移抑制基因;Ki-67可反映乳腺癌的增殖活性及转移和预后,但RKIP的表达对乳腺癌细胞的增殖无明显影响。

RKIP蛋白在多个人肺癌细胞系中的表达下调

目的检测肺癌细胞系中RKIP的表达情况,探讨其与肺癌细胞侵袭、转移的关系。方法RT-PCR法检测多个人肺癌细胞系中RKIP的表达情况,构建表达人RKIP的融合蛋白,纯化后免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。ELISA鉴定血清特异抗体效价,Western blot鉴定血清特异抗体并检测肺癌细胞系中RKIP表达。结果成功构建表达人RKIP的融合蛋白,制备的多抗效价达到106,可特异检测细胞内RKIP表达;有转移性的3个肺癌细胞系中RKIP表达明显下调,且在转移性较高的A549细胞中下调更明显。结论获得了效价和特异性都良好的RKIP多抗,适合应用于RKIP的检测。RKIP表达下调与肺癌细胞侵袭、转移有关,有可能成为肺癌治疗的靶点。

RKIP基因对胃癌细胞生物学行为的影响

目的探讨RKIP基因对胃癌细胞株SGC7901恶性生物学行为的影响。方法采用脂质体转染技术,将RKIP真核表达重组质粒pc DNA3.1（＋）/RKIP和空载体质粒分别导入胃癌细胞系SGC7901,定量-反转录-PCR（q-RT-PCR）和Western blot分别检测RKIP m RNA及蛋白质表达,构建RKIP基因稳定表达的胃癌细胞系SGC7901。借助细胞生长曲线及集落形成实验观察胃癌细胞增殖的变化;划痕试验及Transwell实验检测胃癌细胞迁移能力和侵袭力的变化;流式细胞术检测RKIP表达对胃癌细胞的细胞周期和凋亡率的影响;并建立人胃癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型,观察RKIP对胃癌细胞增殖和转移能力的影响。结果转染RKIP基因的SGC7901细胞系RKIP m RNA和蛋白质表达量显著增加。转染组SGC7901细胞较对照组生长速度减慢,集落形成率显著下降,流式细胞术分析发现,RKIP延缓细胞由G0~G1期进入S期,诱导细胞凋亡,裸鼠接种实验显示,RKIP基因可使裸鼠成瘤平均时间延长,生成移植瘤体积显著减小。结论 RKIP与胃癌的增殖、凋亡和侵袭等生物学行为密切相关,RKIP基因重表达有助于SGC7901的恶性表型逆转,是肿瘤治疗的候选有效靶点。

胃癌组织中RKIP基因启动子甲基化及蛋白表达

目的探讨胃癌组织中RKIP基因启动子甲基化及蛋白的表达,分析RKIP基因启动子甲基化及蛋白表达与胃癌生物学行为的关系。方法采用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)技术和免疫组化SP法检测45例胃癌组织、21例癌旁胃黏膜组织中RKIP基因启动子甲基化及蛋白的表达。结果胃癌及癌旁胃黏膜组织中RKIP基因启动子的甲基化阳性率分别为48.89%和4.8%(P<0.05);RKIP蛋白在胃癌及癌旁胃黏膜组织中的阳性率分别为42.22%和90.48%(P<0.05);RKIP基因启动子甲基化及蛋白的表达分别与胃癌的分化程度及淋巴结转移有关(P<0.05)。RKIP基因启动子甲基化与蛋白表达呈明显负相关(P<0.05)。结论 RKIP基因启动子的异常甲基化是引起蛋白表达缺失的原因之一,RKIP蛋白表达缺失与胃癌的发生、发展有关。

RKIP及NPRL2在涎腺黏液表皮样癌中的表达及其临床意义

目的:研究口腔黏液表皮样癌组织中RKIP和抑癌基因NPRL2的表达,探讨其表达与口腔黏液表皮样癌各临床病理因素之间的关系。方法:应用免疫组织化学染色方法检测48例口腔黏液表皮样癌组织和13例正常组织中RKIP和NPRL2的表达,并对其与临床病理特征的关系进行统计学分析。结果:RKIP和NPRL2均表达于黏液表皮样癌细胞的胞浆和部分胞膜。黏液表皮样癌组织与正常组织中RKIP和NPRL2高表达的阳性率分别为52.08%,92.31%和47.92%,100.00%,黏液表皮样癌组织与两者比较有显著性差异(P<0.05)。结论:RKIP和NPRL2可能参与了黏液表皮样癌的发生、发展过程。

口腔涎腺腺样囊性癌组织中RKIP和NPRL2的表达及其意义

目的:探讨抑癌基因RKIP和NPRL2在口腔涎腺腺样囊性癌组织中的表达及其临床意义。方法:应用免疫组织化学方法检测RKIP蛋白和NPRL2蛋白在52例口腔涎腺腺样囊性癌组织、26例癌旁腺样囊性癌组织及15例正常涎腺组织中的表达,并分析RKIP和NPRL2的表达与腺样囊性癌临床病理学特征的关系。结果:免疫组化结果显示腺样囊性癌组织、癌旁及正常涎腺组织中RKIP和NPRL2的阳性率分别为48.08%、76.92%、93.33%和46.15%、80.77%、93.33%;腺样囊性癌组织中RKIP和NPRL2的表达显著低于癌旁及正常涎腺组织,差异有统计学意义(P<0.05),而腺样囊性癌组织和癌旁组织中两者蛋白的表达均呈显著正相关(P=0.000,P=0.005)。结论:RKIP和NPRL2表达的减少或缺失与腺样囊性癌的发生发展、侵袭转移密切相关。

喉癌组织RKIP基因甲基化表达调控研究

目的检测喉癌组织中Raf-1激酶抑制蛋白(Raf-1 kinase inhibitor protein,RKIP)基因启动子区域的甲基化状态及其蛋白表达情况,并探讨其临床意义。方法采用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)技术及免疫组化方法检测53例喉癌组织及34例癌旁组织中RKIP基因启动子区域的甲基化状态及蛋白表达情况。结果喉癌及癌旁组织中RKIP基因启动子甲基化发生率分别为17%、3%,两者比较差异具有统计学意义(P=0.045)。结论 RKIP基因启动子区高甲基化状态可能是造成喉癌组织中RKIP表达缺失的分子机制之一,RKIP蛋白表达缺失与喉癌的发生发展及转移有关。

RKIP PTEN基因启动子区甲基化与肺癌的关系

目的:探讨RKIP基因和PTEN基因启动子区甲基化与肺癌及其临床病理特征的关系。方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)法,分析肺癌组织及相应癌旁正常肺组织中RKIP和PTEN启动子区甲基化表达情况。结果:45.8%(38/83)的肺癌组织和13.3%(11/83)的癌旁肺组织RKIP基因启动子区发生甲基化,51.8%(43/83)的肺癌组织和15.7%(13/83)的癌旁肺组织PTEN基因启动子区发生甲基化,癌组织中RKIP和PTEN启动子区甲基化率显著增高(P<0.05);发生淋巴结转移的43例肺癌组织中,27例RKIP基因启动子区发生甲基化,30例PTEN基因启动子区发生甲基化,淋巴结转移组RKIP及PTEN基因启动子区甲基化均显著高于无淋巴结转移组(P<0.05)。结论:肺癌中RKIP和PTEN基因启动子区甲基化,可能是肺癌发生、发展及转移的重要原因之一。

RKIP基因表达上调对宫颈癌细胞生物学行为影响

目的:分析Raf激酶抑制蛋白(RKIP)基因表达上调对宫颈癌细胞生物学行为的影响。方法:将含正义(ss)RKIP cDAN真核表达载体传入宫颈癌细胞,使用Westernblot法检测传染前后细胞RKIP基因表达及其上调的稳定转染细胞系(ssRKIP),观察RKIP基因表达上调对宫颈癌细胞生物学行为的影响。结果:ssRKIP细胞、空载体pcDNA3.1(+)及为转染细胞的相对表达含量分别为2.13、1.12和1.08,转然后ssRKIP细胞的RKIP蛋白表达水平上条明显,pcDNA3.0(+)细胞的RKIP蛋白表达水平变化不明显。ssRKIP细胞的克隆形成分数、穿膜细胞数显著低于PcDNA3.1(+)转染组和未转染组,差异有统学意义(P<0.05),PcDNA3.1(+)转染组和未转染组的克隆形成指数和穿膜细胞数差异无统计学意义(P>0.05)。结论:RKIP基因可能属于抑癌基因,RKIP表达上调对肿瘤细胞增殖和侵袭能力具有抑制效果,可作为治疗宫颈癌的新靶点。

RKIP在下咽癌中的表达及意义

目的探讨Raf-1激酶抑制蛋白(Raf-1 kinase inhibitor protein,RKIP)在下咽癌中的表达及其临床意义,通过与癌旁组织RKIP的表达比较,分析RKIP在下咽癌的发生、发展及转移中的作用以及癌旁下咽鳞状上皮中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化方法检测46例下咽鳞癌及13例癌旁下咽鳞状上皮组织中RKIP的表达情况。对实验结果进行χ~2检验及Wilcoxon检验。结果 RKIP在下咽鳞癌中的表达低于癌旁下咽鳞状上皮,差异具有统计学意义(P=0.034)。RKIP在有转移的下咽癌中表达低于无转移的下咽癌,差异具有统计学意义(P=0.020)。RKIP在高、中、低不同分化程度的下咽癌中表达阳性率逐渐下降,差异具有统计学意义(P=0.005)。结论下咽癌的分化程度与RKIP的表达有关,下咽癌淋巴结转移的发生与RKIP低表达及缺失有关。

RKIP在人乳腺癌组织及细胞中的表达及其通过NF-κB信号通路对乳腺癌细胞迁移和侵袭作用的研究

目的探讨Raf激酶抑制蛋白(RKIP)在人乳腺癌组织及细胞中的表达及其通过核因子-κB(NF-κB)信号通路对乳腺癌细胞迁移和侵袭的作用。方法收集良性乳腺肿瘤组织28例和恶性乳腺肿瘤组织35例,采用免疫组织化学法检测两种组织中RKIP的表达水平。将含有RKIP基因的cDNA插入GV141载体中构建RKIP质粒,作为RKIP过表达组的转染质粒;以空白GV141载体构建空白质粒,作为对照组的转染质粒。将上述两组质粒转染乳腺癌MDA-MB-435细胞,应用Transwell小室实验检测RKIP过表达组和对照组细胞的迁移和侵袭能力,蛋白质印迹法(Western blot)检测RKIP蛋白的表达水平,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测NF-κB mRNA的表达水平。结果良性乳腺肿瘤组织中RKIP的表达水平较高,积分光密度(IOD)值为(0.527±0.057),高于恶性乳腺肿瘤组织的(0.217±0.048),差异有统计学意义(P<0.05)。RKIP过表达组迁移细胞数目和侵袭细胞数目均明显少于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。Western blot检测结果显示,RKIP过表达组的RKIP表达水平为(0.059±0.005),明显高于对照组的(0.009±0.002),差异有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR检测结果显示,RKIP过表达组中NF-κB mRNA的相对表达量为(0.120±0.016),明显低于对照组的(0.380±0.025),差异有统计学意义(P<0.01)。结论 RKIP与乳腺癌的恶化程度有关,RKIP能够抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭,且其作用机制可能是通过对NF-κB的负调控而实现。

pcDNA3.0-RKIP重组质粒构建及其在PC12细胞中的表达

目的:构建RKIP真核表达质粒,并检测其在PC12细胞中的表达。方法:从大鼠背根神经节细胞中提取总RNA,应用巢式PCR技术,扩增获得RK IP基因编码序列片段,克隆入真核表达载体pcDNA3.0,对重组质粒进行酶切和测序鉴定后,以Vigofect非脂质体介导法转染至PC12细胞,通过Western blot检测RKIP蛋白的表达。结果:酶切和测序结果证明pcDNA3.0-RKIP重组质粒的DNA序列完全正确,将其转染PC12细胞后,RKIP蛋白表达明显增加。结论:pcDNA3.0-RKIP真核表达质粒构建成功,并能在PC12细胞内表达,为深入研究RKIP的神经生物学功能提供了实验基础。

Raf激酶抑制蛋白(RKIP)的生物学功能研究

Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein,RKIP)属于磷脂酰乙醇胺结合蛋白(phosphatidylethanolamine-binding protein,PEBP)家族,广泛存在于各种生物中,参与了对细胞内多种信号转导通路的调节作用。RKIP可以与Raf-1结合,从而抑制MAPK信号转导通路,并参与了对G蛋白偶联受体信号通路和NF-κB信号通路的调控。RKIP在膜的生物合成、精子发生、神经发育和细胞凋亡等生理过程中发挥重要作用,并参与了老年痴呆症及糖尿病等的病理过程。此外,近年来的研究表明RKIP是一个新的转移抑制因子,可以抑制前列腺癌、人乳腺癌和黑色素瘤细胞的转移,并已成为一个新的前列腺癌诊断标志物。

RKIP在鼻咽癌侵袭转移中的作用及机制研究

目的:研究Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitory protein,RKIP)在鼻咽癌(nasopharyngeal c a r c i n o m a,N P C)侵袭转移中的作用及其机制。方法:采用免疫组织化学染色检测R K I P在转移潜能不同的NPC组织中的表达,分析其表达水平与NPC临床病理特征和患者预后的关系;采用脂质体转染技术建立RKIP表达改变的稳定转染NPC细胞系,采用刮痕愈合实验和Transwell小室侵袭实验检测细胞的体外运动和侵袭能力,采用Western blot检测NF-κB信号分子磷酸化水平。结果:RKIP在NPC组织中的表达显著低于正常鼻咽粘膜组织,在有转移NPC组织中的表达明显低于无转移NPC组织,在颈淋巴结转移癌组织中的表达明显低于原发癌;RKIP表达水平与NPC的淋巴结转移、远处转移、临床分期以及NPC患者的总生存期负相关;RKIP表达上调降低5-8F NPC细胞的体外运动和侵袭能力,而RKIP表达下调增强6-10B NPC细胞的体外运动和侵袭能力;RKIP表达水平与NPC细胞NF-κB信号通路的活性负相关,NF-κB抑制剂Bay11-7082能抑制RKIP下调的6-10B细胞的体外运动和侵袭。结论:RKIP可能是NPC的一个转移抑制蛋白,RKIP低表达的NPC患者预后差,RKIP表达下调通过活化NF-κB通路促进NPC的侵袭和转移。

食管鳞癌中MMP-10和RKIP的表达与预后的关系

目的:分析基质金属蛋白酶10(MMP-10)和Raf激酶抑制蛋白(RKIP)在食管鳞癌中的表达,并探讨二者与临床病理特征及预后的关系。方法:采用免疫组化SP法检测92例食管鳞癌组织、相应癌旁组织以及10例正常食管组织中MMP-10和RKIP的表达,分析其表达与食管鳞癌临床病理参数的关系和二者相关性,并做出预后分析。结果:MMP-10在癌组织中的阳性率明显高于癌旁组织和正常食管组织,RKIP在癌组织中的阳性率明显低于癌旁组织和正常食管组织,MMP-10的表达与淋巴结转移以及TNM分期有关(P<0.05),而RKIP的表达与淋巴结转移有关(P<0.05);MMP-10和RKIP的表达呈负相关(r=-0.372,P=0.000);MMP-10阳性组的生存率低于阴性组(P<0.01),RKIP阴性的生存率低于阳性组(P<0.01)。Cox回归分析得出淋巴结转移、MMP-10阳性表达以及RKIP阴性表达均可作为食管鳞癌患者的独立预后因子。结论:MMP-10和RKIP与食管鳞癌的发生、发展、侵袭、转移以及预后相关,RKIP可能通过下调MMP-10的途径参与到食管鳞癌的侵袭、转移。

过表达Raf激酶抑制蛋白(RKIP)抑制人肝星状细胞增殖

目的研究Raf激酶抑制蛋白(RKIP)对LX-2人肝星状细胞增殖的影响。方法用重组质粒pc DNA3.1-RKIP转染LX-2细胞,G418筛选并培养稳定转染的细胞。MTT法和集落形成试验检测过表达RKIP对LX-2细胞增殖、集落生成的影响;Western blot法检测RKIP、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、1型胶原蛋白(Col1)、基质金属蛋白酶1(MMP-1)、MMP-2及胞外信号调节激酶/丝裂原激活蛋白激酶(ERK/MAPK)信号通路相关蛋白的表达水平。结果与对照细胞相比,过表达RKIP明显抑制LX-2细胞增殖和集落形成,下调Col1、α-SMA、MMP-1和MMP-2蛋白表达,降低ERK/MAPK磷酸化水平。结论过表达RKIP抑制LX-2细胞的增殖,其机制与抑制ERK/MAPK信号通路有关。