重组新城疫病毒rL-RVG通过p53-YAP1-ACSL4通路诱导肺腺癌细胞铁死亡

目的旨在探究重组新城疫病毒rL-RVG是否通过p53-YAP1-ACSL4通路影响肺腺癌细胞铁死亡。方法体外培养人肺腺癌细胞系A549、PC9,将处于对数增殖期的细胞分为对照组(NC组)、新城疫病毒感染组(NDV组)、重组新城疫病毒感染组(rL-RVG组)、铁死亡诱导剂组(Erastin组)及铁死亡抑制剂组(NAC组)。在病毒感染和铁死亡诱导剂、抑制剂干预后,通过CCK-8、划痕实验和Transwell来检测细胞的功能学变化,包括细胞活力、迁移能力和侵袭能力;光学显微镜观察细胞形态改变。使用流式细胞术和荧光显微镜来测定细胞中ROS的含量,用酶标仪对MDA含量进行测定,通过Western blot和实时荧光定量PCR来检测铁死亡相关蛋白p53、YAP1及ACSL4的表达。结果与NC组相比,rL-RVG组细胞生长、迁移及侵袭能力明显下降(P<0.01);ROS及MDA水平升高且与铁死亡诱导剂组相比含量显著提高(P<0.01),铁死亡抑制剂干预后含量均减少(P<0.01);铁死亡关键蛋白p53、YAP1、ACSL4表达量明显升高(P<0.01);Si-RNA敲减YAP1和ACSL4后相应蛋白的表达量减少(P<0.01),并且ROS和MDA含量均减少(P<0.01)。结论rL-RVG可以有效地阻止肺腺癌细胞的增殖、迁移和扩散,并且能够通过p53-YAP1-ACSL4轴增加脂质过氧化物和细胞活性氧的含量,最终诱导肿瘤细胞铁死亡。

重组新城疫病毒rL-RVG抑制人肺腺癌细胞系增殖

目的探讨表达狂犬病毒糖蛋白的重组新城疫病毒rL-RVG抑制人肺腺癌细胞系A549和PC9增殖。方法体外培养人肺腺癌细胞系A549、PC9,将处于对数增殖期的细胞分为对照组、新城疫病毒感染组(NDV)、重组新城疫病毒感染组(rL-RVG)、铁死亡诱导剂组(Erastin)和重组新城疫病毒联合铁死亡诱导剂组(rL-RVG+Erastin)。病毒及药物感染细胞24 h后,光学显微镜下观察细胞形态,CCK-8法检测细胞增殖能力,划痕试验检测细胞迁移能力,细胞毒性检测试剂盒测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)含量,Western blot检测铁死亡相关蛋白p53、SLC7A11、GPX4的表达。结果与对照组相比,NDV组、rL-RVG组、Erastin组细胞数、细胞增殖能力及迁移的距离明显降低(P均<0.001),LDH释放量和总ROS水平显著提高(P<0.01),p53蛋白表达明显增加(P<0.001),而SLC7A11、GPX4蛋白表达明显降低(P<0.001)。rL-RVG组与NDV组相比上述结果更明显(P<0.05),rL-RVG+Erastin组与rL-RVG组和Erastin组相比细胞数、细胞增殖能力及迁移的距离明显减少(P<0.05),LDH释放量和总ROS水平显著提高(P<0.05),P53蛋白表达明显增加(P<0.001),而SLC7A11、GPX4蛋白表达明显降低(P<0.001)。结论rL-RVG可以发挥类似Erastin抑制肿瘤细胞增殖的作用,且其效果远远强于NDV。这为rL-RVG诱导的细胞死亡提供了新的见解,并强调了病毒在治疗肿瘤中的关键作用。

重组新城疫病毒rl-RVG抑制人肺腺癌A549系细胞迁移及相关机制

目的观察表达狂犬病毒糖蛋白的重组新城疫病毒(rl-RVG)对人肺癌细胞系A549的迁移影响,初步探讨其可能的机制。方法重组新城疫病毒rl-RVG直接感染A549细胞为rl-RVG实验组,新城疫病毒La Sota株处理的A549细胞组及未感染病毒的A549细胞组作为对照组。Western blot法检测NDV-HN蛋白及狂犬病毒糖蛋白(RVG),细胞增殖实验测定新城疫病毒使用的最佳作用浓度;划痕实验及Transwell法测A549迁移;Western blot法及免疫荧光法检测E-cadherin,MMP2蛋白表达。结果空白对照组无NDV、rl-RVG表达,rl-RVG仅在感染rl-RVG细胞组有表达,NDV在感染rl-RVG细胞组及感染NDV细胞组皆有表达;与空白对照组相比,rl-RVG及NDV稀释浓度大于5×10-5对细胞的增殖有抑制作用(P<0.05);rl-RVG组迁移的距离及细胞数明显减少(P<0.05)。与空白对照组及NDV感染组相比,rl-RVG组E-cadherin蛋白表达水平上调(P<0.05),MMP2蛋白表达水平减弱(P<0.05)。结论重组新城疫病毒rl-RVG能抑制人肺癌细胞系A549的迁移,并可能通过影响肺腺癌A549上皮细胞-间质转化(EMT)过程中的调控因子E-cadherin,MMP2蛋白而对细胞迁移而作用。

重组新城疫病毒rl-RVG抑制A549荷瘤鼠的瘤体生长

目的探讨稳定表达狂犬病毒糖蛋白的重组新城疫病毒疫苗对人肺腺癌A549细胞荷瘤鼠的生长抑制及其可能促凋亡机制。方法将rl-RVG感染到成功建立的A549荷瘤鼠瘤体内,检测对瘤体生长抑制率;RT-PCR检测NDV HN基因及RVG基因的表达;TUNEL检测肿瘤细胞的凋亡;蛋白印迹法测caspase系列、Bax、Bcl-2表达;NDV及PBS作为对照。结果与对照组相比,rl-RVG组荷瘤鼠瘤体增长明显缓慢;RVG及NDV基因表达;rl-RVG组肿瘤细胞凋亡明显增加(P<0.05);rl-RVG组caspase-3,8和9高表达(P<0.01),Bax/Bcl-2比值明显高于对照组(P<0.01)。结论 rl-RVG成功感染至A549荷瘤鼠,其对A549荷瘤鼠瘤体生长有着明显的抑制作用,且可能与rl-RVG激活机体的Bcl-2和caspase家族诱导凋亡相关。

数字RVG软件预测根管工作长度的应用体会

目的探讨数字RVG软件预测根管工作长度的准确性。方法从RVG Sopro Imaging图像分析应用软件系统调取图像清晰根尖片287张,同一患者同一牙位在RVG Sopro Imaging图像分析应用软件系统上用电子尺测量根尖片上根管工作长度,临床操作时使用Root-ZX根管长度测量仪测量根管工作长度,共测量352个根管,分别计算平均值。结果用RVG Sopro Imaging图像分析应用软件系统测量的根管工作长度平均值为(18.08±3.72)mm,用Root-ZX根管长度测量仪测量的根管工作长度平均值为(17.22±2.54)mm,两者t检验差异有显著的统计学意义(P<0.01)。结论采用数字RVG软件系统上电子尺测量根尖片的根管工作长度有放大作用,不能直接指导临床操作。

上颌种植体边缘骨吸收的RVG测量分析

目的 :探索放射直视影像 (RVG)对上颌种植体边缘骨吸收进行测量分析的临床应用。方法 :3 2例患者的 5 4枚上颌种植体 ,分别于负载前、负载后 1年和 2年拍摄RVG ,观察和测量种植体边缘骨吸收变化 ,统计学分析种植体在不同时期测量值的一致性。结果 :上颌种植体边缘水平骨吸收于负载后 1年平均 0 .3 6mm ,负载后 2年平均为 0 .87mm ;垂直骨吸收于负载后 1年平均为 0 .97mm ,负载后 2年平均为 1.18mm。t检验显示种植体在不同时期测量值两者间比较差异无显著性意义 (P >0 .5 )。结论

基于RVG的企业价值评估模型及其应用

介绍了增长的相对价值(RVG)这一新的衡量标准,论述了RVG的计算方法,分析了RVG的应用问题。

重组新城疫病毒疫苗rl-RVG对A_(549)荷瘤小鼠瘤体生长的抑制作用

目的:探讨稳定表达狂犬病毒糖蛋白的重组新城疫病毒(NDV)疫苗(rl-RVG)对人肺腺癌A549细胞荷瘤鼠的生长抑制及其可能的免疫机制。方法:建立A_(549)荷瘤鼠模型并随机分为rlRVG组、NDV组和对照组,每组10只,分别于瘤体注射rl-RVG,NDV和PBS,每周2次,共3周。测量三组瘤体体积;PCR法测NDV及狂犬病毒糖蛋白(RVG)的表达,蛋白印迹法检测皮下瘤体组织RVG、NDV蛋白表达;流式细胞术检测荷瘤小鼠脾脏自然杀伤细胞(NK)细胞数。结果:与对照组相比,rl-RVG组及NDV组荷瘤鼠瘤体增长明显缓慢;NDV在rl-RVG组和NDV组中均有表达,而RVG在rl-RVG组中表达,对照组未见二者表达;rl-RVG组及NDV组瘤体NK细胞数明显增多,且rl-RVG组明显高于NDV组。结论:rl-RVG成功转染至A549荷瘤鼠,对其瘤体生长有着明显的抑制作用,可能与rl-RVG激活机体的免疫反应相关。

上颌第一前磨牙髓腔形态的影像学研究

目的:利用RVG(radio visio graphy)数字化X线成像系统测量上颌第一前磨牙髓腔解剖形态的相关数值,为临床诊断、治疗提供重要参考依据。方法:收集拔除的上颌第一前磨牙70颗,牙齿发育完全、根尖完整,用RVG数字成像系统分别拍摄近远中向数字X线片,在图像上测量髓腔形态的相关数值。结果:上颌第一前磨牙颈部髓室的颊腭向厚度(4.34±0.49)mm,颊尖至颊侧髓角之间的距离(5.84±0.58)mm,腭尖至腭侧髓角之间的距离(5.95±0.56)mm;牙尖至髓顶的距离(7.62±0.75)mm,牙尖至髓底的距离(10.38±1.44)mm;髓室高度(2.98±0.98)mm;髓顶至根分叉的距离(7.67±1.79)mm,髓底至根分叉的距离(4.59±1.48)mm。2根管口之间的距离(3.22±0.76)mm,2根管根中1/2之间的距离(3.71±1.43)mm,2根尖孔之间的距离(3.91±2.23)mm。结论:提供成人上颌第一前磨牙髓腔解剖的形态特征,为临床诊断和治疗时参考。

稳定表达狂犬病毒糖蛋白的重组新城疫病毒对人肺腺癌A549细胞荷瘤鼠瘤体生长的影响

目的:探讨重组稳定表达狂犬病毒糖蛋白的新城疫病毒疫苗(recombinant avirulent newcastle disease virus LaSota strain expressing the rabies virus glycoprotein,rl-RVG)对人肺腺癌A549细胞荷瘤鼠的生长抑制作用及其可能的免疫机制。方法:建立A549荷瘤鼠模型并随机分为rl-RVG组、新城疫病毒(NDV)组和对照组,每组10只,分别于瘤体注射rl-RVG,NDV和PBS,每周2次,共3周。测量3组瘤体体积;免疫组织化学法测NDV及狂犬病毒糖蛋白(rabies virus glycoprotein,RVG)的表达;HE染色观察荷瘤小鼠的瘤体、脾、肺等组织病理改变;流式细胞术检测荷瘤小鼠脾脏NK细胞数。结果:与对照组相比,rl-RVG组及NDV组荷瘤鼠瘤体增长缓慢;NDV在rl-RVG组和NDV组中均有表达,而RVG仅在rl-RVG组中表达;rl-RVG组及NDV组瘤体出现大量凋亡坏死组织、脾脏多核巨细胞明显增多、肺组织炎症反应明显;rl-RVG组和NDV组NK细胞数明显增多,且rl-RVG组明显高于NDV组。结论:rl-RVG成功转染至A549荷瘤鼠,对其瘤体生长有着明显的抑制作用,可能与rl-RVG激活机体的免疫反应相关。

不同医生多次读X线数字成像牙片结果的一致性研究

目的:研究不同医生多次读X线数字成像(rad io visiography、RVG)牙片结果的一致性。方法:100个离体上颌第一前磨牙,分别拍摄颊舌向和近中远中向RVG牙片共200张。经两位医生的3次盲法读片,判断根管类型,用Kappa值来分析读片结果。结果:两位医生3次比较的Kappa值分别为:0.5255、0.468和0.5373,属中度一致性;每位医生首次读片和间隔2周的3次读片结果Kappa值分别为:0.7704、0.7824、0.7837和0.7722、0.76、0.6904,属高度一致性。结论:RVG牙片对临床诊断和治疗具有一定的参考价值,应充分利用但不能依赖,要参考多方面的信息才能作出正确的判断。

狂犬病病毒糖蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫学特性分析

目的 :利用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统对狂犬病病毒糖蛋白(rabies virus glycoprotein,RVG)基因进行克隆、表达、纯化,并对重组RVG进行免疫学特性鉴定。方法:参照Gen Bank收录的狂犬病病毒CVS-11株RVG基因序列,设计特异性引物,扩增目的基因。RVG基因经Bam HⅠ/KpnⅠ双酶切后定向克隆到p Fast Bac-GP67B载体上,阳性重组转座质粒进一步转化E.Coli DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选及PCR鉴定后获得重组穿梭载体r Bacmid-RVG,将其转染至对数生长期的Sf-9昆虫细胞,进行重组RVG的真核表达。His-Trap HP纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。重组RVG免疫小鼠,检测其免疫原性和血清中和活性。结果:用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统表达并纯化了重组RVG,分子量约58 000。经重组RVG免疫后的小鼠血清具有中和活性。结论:重组RVG具有天然RVG的活性,为进一步研制亚单位疫苗及制备筛选中和抗体奠定了基础。

全人源抗狂犬病病毒糖蛋白抗体的制备及鉴定

目的:利用重组狂犬病病毒糖蛋白(RVG)免疫人源Ig M转基因小鼠,制备全人源抗重组RVG蛋白单克隆抗体,并对其免疫学特性进行初步鉴定。方法:以重组RVG蛋白作为抗原免疫人源Ig M转基因小鼠,采用杂交瘤技术制备筛选全人源抗重组RVG蛋白杂交瘤细胞株,双抗体夹心ELISA实验鉴定单抗的人源性及抗体类型,并对其特异性及与灭活狂犬病病毒CVS-11株的结合能力进行鉴定。结果:建立了5株稳定分泌抗重组RVG的全人源单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为5D1、6H11、9A3、15D6、19E6,均为人源Ig M免疫球蛋白,5株单抗均能特异性识别重组RVG蛋白,其中3株能与灭活狂犬病病毒CVS-11株特异性结合。结论:筛选制备了特异性全人源抗重组RVG蛋白的单克隆抗体,能与灭活狂犬病病毒CVS-11株特异性结合,为进一步研制用于狂犬病防治的抗体药物奠定了基础。

影响Dentaport ZX测定牙齿工作长度准确率因素分析

目的:探讨影响Dentaport ZX测定牙齿工作长度准确性的因素。方法:随机选择53位病人67个恒牙129个根管为研究对象,先用手感法测量长度,再用Dentaport ZX测量长度,充填主牙胶尖后在牙科数字化X线片成像系统(RVG)上拍片确定牙齿工作长度,两者进行对比并进行统计学处理。结果:Dentaport ZX准确率为89.92%,手感法准确率为71.31%。影响Dentaport ZX测定牙齿工作长度因素主要是侧枝根管及根尖孔直径等。结论:Dentaport ZX测定牙齿工作长度使用方便,准确率较高,减少X线片辐射值得推广。

手感法结合X线直视摄影术测量根管工作长度准确性及影响因素的研究

目的研究手感法与X线直视摄影术(Radio-visio-graphy,RVG)相结合测量根管工作长度的准确性及影响因素。方法通过对55颗离体单根牙和105颗临床根管治疗患牙采用手感法结合RVG测量根管工作长度,研究其准确度及影响因素。结果离体牙实验表明,手感法结合RVG测量根尖有吸收牙的准确度较正常牙组低,二者有显著性差异(P<0.05)。冠根完整性及根尖周病变对手感法结合RVG临床测量准确性有影响。结论运用手感法结合RVG确定根管工作长度较准确,能达到根管充填的满意率。但根尖周病变、牙根吸收或冠根不完整均会降低其准确性。

乳牙髓腔形态的影像学研究

目的:探讨乳牙髓腔形态规律。方法:利用RVG数字成像系统采集乳牙唇(颊)-舌向和近-远向X图像,观察髓腔形态并测量相关数据,将测量结果进行统计学分析。结果:乳前牙髓室和根管在牙颈部相连续,无明显界限,大多数乳前牙唇-舌位片显示根尖1/3段根管随牙根明显向唇侧弯曲并且上颌牙比下颌牙明显。上颌乳切牙根颈、根中1/3冠端处根管的唇舌径小于近远中径,而下颌乳切牙则相反,其差异有统计学意义(P<0.05)。乳尖牙根颈、根中1/3和所有乳前牙根尖1/3冠端处根管的唇舌径和近远中径大小无统计学意义。上乳磨牙髓室关系为:颊舌径>近远中径>髓室高度;下颌乳磨牙髓室关系为:近远中径>颊舌径>髓室高度。结论:本研究获得乳牙的RVG数字成像系统的实验结果可为临床应用提供参考。

Raypex 5根尖定位仪测定牙根管长度的准确率及影响因素分析

目的观察Raypex 5根尖定位仪测定牙根管长度的准确率,探讨影响准确率的因素。方法选择210例牙髓病及根尖周病患者,其中225颗患牙含416个根管,先用手感法测量长度,再用根尖定位仪测定长度,充填主牙胶尖后在数字化X线成像系统上拍片确定牙齿工作长度,两者对比并进行统计学处理。结果 Raypex 5根尖定位仪测定牙根管长度准确率为93.99%,手感法准确率为74.76%。两者差异具有统计学意义(P<0.05);根尖定位仪测量单根管至四根管的准确率明显高于手感法,两者间的差异也具有统计学意义(P<0.05)。结论 Raypex 5根尖定位仪测定牙根管长度操作简便,较少的X线辐射,准确率较高。

3种技术诊断离体第一第二磨牙根管系统对比研究

目的以透明牙技术为参照,探讨牙科数字成像系统(radiovisiography,RVG)和显微CT(micro-computed tomography,MCT)扫描两种检查技术在研究离体磨牙根管系统解剖结构中的作用,为磨牙根管治疗提供影像学依据。方法253颗离体磨牙分别摄颊舌向、近远中向RVG和行MCT扫描,再制作根管染色透明牙,应用RVG、MCT和透明牙对各牙根中上2/3、根尖1/3区根管系统结构和管间交通支进行分类统计,以评估RVG、MCT技术在根管结构诊断中的应用价值。结果透明牙、MCT两组显示牙根中上2/3区根管系统均显著优于RVG(P<0.05);MCT与透明牙对磨牙中上2/3区根管系统的显示差异无统计学意义(P>0.05)。MCT、透明牙、RVG对磨牙根尖1/3区根管系统的显示差异有统计学意义(P<0.05),根管显示率透明牙为100%,MCT为89.84%,RVG为77.97%。结论MCT与透明牙在显示牙根中上2/3区根管系统方面基本等效;在根尖1/3区透明牙对变异细小分歧根管的显示优于MCT及RVG技术,MCT技术在根尖1/3区细小分歧的显示明显优于RVG。

CBCT影像系统在根管治疗中的评价作用

目的探讨CBCT影像系统在根管治疗中的评价价值。方法采用回顾性方法分析,方便选取该院自2016年2月-2018年2月收治的96例根管治疗患者的临床资料,均给予CBCT与RVG扫描,比较两种检查方法疾病检出率、根管充填长度、根管充填密度评价根管充填质量。结果 CBCT扫描根管治疗术后疾病检出率(29.17%)明显高于RVG扫描(11.46%),差异有统计学意义(χ^2=5.232,P=0.001<0.05)。CBCT扫描的根管充填长度合格率(84.38%)明显高于RVG扫描(77.08%),差异有统计学意义(χ^2=7.334,P=0.003<0.05)。CBCT扫描的根管充填密度合格率(88.54%)明显高于RVG扫描(73.96%),差异有统计学意义(χ^2=8.454,P=0.015<0.05)。结论 CBCT影像系统用于根管治疗中,可根管治疗后疾病检出率,并从根管充填长度、根管充填密度评价根管充填质量,具有较高可靠性,值得临床推广应用。

牙科数字成像系统判断根管类型的一致性检验

目的探讨牙科数字成像系统(radiovisiography,RVG)判断根管类型的一致性。方法选择100个新近拔除的上颌第一前磨牙,分别摄颊舌向和近远中向RVG影像,然后制成透明牙。经1位医生间隔1个月的两次分别读RVG影像和观察透明牙,判断根管类型。计算两次读RVG影像、观察透明牙以及两种方法判断结果间的Kappa值并分析。结果读RVG影像结果间的Kappa值为0.7704,高度一致;观察透明牙结果间的Kappa值为0.9324,完全一致;两次读RVG影像和观察透明牙结果间的Kappa值分别为0.3793和0.329,一致性均不合格。结论RVG对临床诊断和治疗有一定的参考价值,但不能精确判断根管形态。