基于TLR-4/MyD88/NF-κB对健脾化滞丸治疗溃疡性结肠炎的机制进行拆方研究

目的:通过建立脾虚湿蕴型溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型,探讨健脾化滞丸及其不同拆方对TLR-4/MyD88/NF-κB通路的影响。方法:64只Wistar大鼠随机分为正常对照组8只、模型组56只,采用中医证候联合乙醇-2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠法复制UC大鼠模型,造模成功后,将模型大鼠随机分为模型组(M)、美沙拉嗪组(A)、健脾化滞丸全方组(B)、健脾清化方组(C)、健脾清化活血方组(D)、健脾清化导滞方组(E)、清化导滞活血方组(F),每组8只,给予相应药物灌胃4周,疗程结束后处死所有大鼠并取材,观察大鼠体质量变化、疾病活动度及结肠病理改变,ELISA及免疫组化检测大鼠结肠组织TNF-α表达;RT-PCR及Western blot检测大鼠结肠组织TLR-4、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达。结果:健脾化滞丸全方、健脾清化方、健脾清化活血方组及健脾清化导滞方组大鼠体质量明显高于模型组(P<0.01),各治疗组均能明显改善UC模型大鼠结肠组织病理损伤及疾病活动指数,其中健脾化滞丸全方组及健脾清化活血方组作用最好。各治疗组均可抑制结肠组织TLR-4、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达(P<0.001),其中美沙拉嗪组、健脾化滞丸全方组、健脾清化导滞方组及清化导滞活血方组在降低NF-κB mRNA及蛋白表达上明显优于健脾清化方组及健脾清化活血方组(P<0.05)。各组均能降低结肠组织TNF-α表达(P<0.001),组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:健脾化滞丸及各拆方均可能通过TLR-4/MyD88/NF-κB通路发挥作用,其中黄连、煨木香、凤尾草、炮姜可能为本方核心药物,对临床具有一定指导意义。

多发性硬化中TLRs/MyD88/NF-κB信号通路的作用及机制

背景:多发性硬化是以T细胞介导的中枢神经系统慢性炎性脱髓鞘疾病,Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)/髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)/核转录因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路在疾病发生发展过程中有重要作用,探究出信号通路的具体作用机制对进一步治疗该疾病,改善患者的预后至关重要。目的:综述TLRs/MyD88/NF-κB信号通路及其在多发性硬化/实验性自身免疫性脑脊髓炎模型中的作用,并就抑制该信号通路为多发性硬化的治疗提供新的思路和策略。方法:检索中国知网、万方及PubMed数据库在2002年1月至2022年12月与文章主题相关的文献,最终纳入61篇文献进行分析。结果与结论:①TLRs/MyD88/NF-κB信号通路是介导炎性免疫反应的重要信号通路;②TLRs/MyD88/NF-κB信号通路通过调节树突状细胞的抗原提呈、破坏血脑屏障的完整性、促进T细胞、B细胞和小胶质细胞的激活等途径,在多发性硬化的发展中发挥了重要的作用;③通过靶向作用于TLRs、MyD88和NF-κB分子,抑制TLRs、MyD88和NF-κB的激活或信号传导,减少促炎因子的分泌可以达到治疗多发性硬化的目的;④动物实验研究表明,中药的活性成分如黄酮类和苷类、中药复方如补阳还五汤也可通过影响TLRs/MyD88/NF-κB信号通路治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎,这为寻找靶向TLRs/MyD88/NF-κB信号通路治疗多发性硬化的药物指明方向。

中医药干预TLRs/MyD88信号通路治疗痛风性关节炎的研究进展

痛风性关节炎(gouty arthritis, GA)作为一种炎症反应性疾病,其发病的关键是尿酸钠盐(monosodium urate, MSU)结晶沉积在关节及其周围组织,而引起的一系列炎症阶连反应。研究表明,TLRs是决定MSU结晶沉积导致GA的主要因素,TLRs/MyD88信号通路在GA的炎症反应过程中发挥着至关重要的作用,是GA最重要的信号转导通路之一,越来越多学者集中于对该通路的研究。中医药治疗充分发挥其“多途径、多环节、多靶点”的优势,近年来在GA的机制研究上取得显著成果。该文通过概述了TLRs/MyD88信号通路的结构和功能,对近5年来中医药基于TLRs/MyD88信号通路治疗GA的作用机制进行总结和分析,以期揭示现代中医药作用的靶点和调控机理,为中医药靶向防治GA及中医药现代化研究开拓思路。

TLR-7对阿尔茨海默病细胞模型β淀粉样蛋白表达及炎症反应的调控作用及机制

目的探究Toll样受体7(TLR-7)在阿尔茨海默病人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)模型中对β淀粉样蛋白表达及神经炎症反应的调控作用及机制。方法构建稳定表达β淀粉样前体蛋白瑞典型突变(APPswe)的阿尔茨海默病模型细胞SH-SY5Y/APPswe,将细胞分为SH-SY5Y组、SH-SY5Y/APPswe组、TLR-7敲低SH-SY5Y/APPswe(SH-SY5Y/APPswe+sh-TLR-7)组、敲低对照SH-SY5Y/APPswe(SH-SY5Y/APPswe+sh-NC)组、TLR-7敲低+miR-15b抑制SH-SY5Y/APPswe(SH-SY5Y/APPswe+sh-TLR-7+miR-15b inhibitor)组和TLR-7敲低+微小RNA-15b(miR-15b)抑制对照SH-SY5Y/APPswe(SH-SY5Y/APPswe+sh-TLR-7+inhibitor NC)组。蛋白质印迹法检测β淀粉样前体蛋白(APP)的表达;实时荧光定量PCR实验检测TLR-7、miR-15b、β淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达;酶联免疫吸附实验检测β淀粉样蛋白42(Aβ42)以及IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌;荧光素酶报告基因实验检测核因子κB(NF-κB)活性。结果与SH-SY5Y组比较,SH-SY5Y/APPswe组细胞APP表达水平上调,Aβ42分泌水平增加[(11.24±0.76)ng/mL比(2.09±0.17)ng/mL,P<0.01)];与SH-SY5Y/APPswe+sh-NC组比较,SH-SY5Y/APPswe+sh-TLR-7组miR-15b表达水平上调[(2.98±0.21)比(1.10±0.05),P<0.01],BACE1 mRNA表达水平下降[(0.72±0.06)比(1.02±0.03),P<0.01],Aβ42分泌水平下降[(6.09±0.42)ng/mL比(10.52±0.67)ng/mL,P<0.01],IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达水平下降[IL-1β:(3.34±0.25)比(4.62±0.41),P<0.01;IL-6:(3.75±0.34)比(5.43±0.31),P<0.01;TNF-α:(1.25±0.11)比(2.07±0.18),P<0.01],IL-1β、IL-6和TNF-α分泌水平下降[IL-1β:(61.40±7.76)pg/mL比(101.76±7.95)pg/mL,P<0.01;IL-6:(547.29±39.11)pg/mL比(893.35±101.43)pg/mL,P<0.01;TNF-α:(256.17±24.32)pg/mL比(375.28±33.99)pg/mL,P<0.01],NF-κB活性下降[(3.25±0.31)比(5.01±0.52),P<0.01]。与SH-SY5Y/APPswe+sh-TLR-7+inhibitor NC组比较,SH-SY5Y/APPswe+sh-TLR-7+miR-15b inhibitor组miR-15b表达水平下降[(0.67±0.13)比(2.96±0.35),P<0.01],BACE1 mRNA表达水平升高[(1.39±0.42)比(0.71±0.05),P<0.05],Aβ42分泌水平升高[(19.54±3.01)ng/mL比(7.47±1.58)ng/mL,P<0.01],IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达水平升高[IL-1β:(6.07±0.43)比(3.55±0.33),P<0.01;IL-6:(5.98±0.28)比(4.02±0.22),P<0.01;TNF-α:(1.88±0.21)比(1.36±0.20),P<0.01],IL-1β、IL-6、TNF-α分泌水平升高[IL-1β:(155.32±13.67)pg/mL比(68.62±5.41)pg/mL,P<0.05;IL-6:(1255.49±119.79)pg/mL比(439.73±60.01)pg/mL,P<0.05;TNF-α:(423.66±34.32)pg/mL比(227.82±26.53)pg/mL,P<0.05],NF-κB活性升高[(5.91±0.66)比(3.58±0.27),P<0.01]。结论TLR-7可能通过miR-15b调控NF-κB信号通路,并影响阿尔茨海默病模型细胞β淀粉样蛋白的分泌及神经炎症反应。

支气管肺泡灌洗液及血清NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α在肺炎诊断中的应用价值

目的探讨支气管肺泡灌洗液(BALF)及血清核转录因子-κB(NF-κB)、Toll样受体2(TLR-2)、Toll样受体4(TLR-4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)在肺炎诊断中的应用价值。方法选取2023年1月—2024年3月于吉林大学第二医院就诊的57例肺炎患者纳入研究组,另取同期体检的健康者57例纳入对照组,均采集外周静脉血与肺泡灌洗液,检测NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α水平,采用Pearson相关性分析患者血清及BALF中NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α的相关性。结果研究组患者血清NF-κB(41.74±4.75)μg/L、TLR-2(5.32±1.12)ng/L、TLR-4(6.44±1.61)ng/L、TNF-α(4.36±1.03)ng/L水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组患者BALF中NF-κB(8.19±2.62)μg/L、TLR-2(2.97±0.79)ng/L、TLR-4(4.24±1.18)ng/L、TNF-α(2.04±0.59)ng/L水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,患者血清及BALF中NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α水平呈正相关性(P<0.05)。结论肺炎患者血清及BALF中NF-κB、TLR-2、TLR-4、TNF-α均呈高表达,联合检测有助于早期诊断及评估病情。

基于TLR-4/NF-κB信号通路探究金花茶提取物对非酒精性脂肪肝的作用

探讨金花茶提取物对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠模型的改善作用及其机制。随机选取10只SD大鼠为空白组,剩余50只则灌服高糖高脂乳剂复制非酒精性脂肪肝模型,14 d后造模大鼠按血清中总胆固醇(TC)水平随机分为模型组、辛伐他汀组(8 mg/kg)及金花茶高、中、低剂量组(260、130、65 mg/kg)。分组后连续给药6周,于末次给药前进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT)并计算血糖曲线下面积(AUC),末次给药后采集血清及肝组织,检测血脂指标总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)及游离脂肪酸(FFA),肝脂指标TC及TG,肝功能指标谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST),肝脏脂质过氧化指标丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD);测定大鼠血清炎症因子指标白介素6(IL-6)、白介素8(IL-8)及肿瘤坏死因子(TNF-α);检测血清胰岛素(FINS)并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);HE染色法观察肝脏病理形态学变化并进行非酒精性脂肪肝病活动度积分(NAS)评分;测定肝组织中Toll样受体4(TLR-4)和核因子κB(NF-κB)的基因及蛋白的表达。结果表明:与模型组相比,金花茶药物组AUC、HOMA-IR及血清中FINS、TG、TC、LDL-C、FFA、ALT、AST、IL-6、IL-8、TNF水平显著降低(P<0.05),HDL-C水平明显升高(P<0.05);肝组织TG、TC、MDA中含量显著降低(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.05);肝脏脂肪肝病样变减轻,肝细胞形态异常及炎症浸润明显改善,NAS评分显著下降(P<0.05);TLR-4、NF-κB蛋白及mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05),其中以金花茶高剂量的改善效果最佳。综上所述,金花茶提取物可通过TLR-4/NF-κB信号通路来调节糖脂代谢紊乱,降低炎症反应和减轻炎症浸润,改善NAFLD大鼠肝脏病变。

拉考沙胺联合奥卡西平治疗局灶性癫痫的疗效及对脑电图频段功率、血清TLR-4、NF-κB水平影响

目的探讨拉考沙胺联合奥卡西平治疗局灶性癫痫的疗效及对患者脑电图频段功率、血清Toll样受体-4(TLR-4)、核转录因子-κB(NF-κB)水平影响。方法选取2022年1月至2023年2月本院收治的局灶性癫痫患者102例,根据随机数字表法分为基线组和试验组,每组51例。基线组采用奥卡西平治疗,试验组采用拉考沙胺联合奥卡西平治疗。两组均治疗6个月后评估疗效。比较两组患者治疗前、治疗6个月癫痫发作频率、脑电图频段功率,检测血清TLR-4、NF-κB水平。分析两组患者治疗6个月TLR-4、NF-κB水平与疗效的关系。统计两组患者治疗期间不良反应发生率。结果试验组治疗总有效率高于基线组(P<0.05)。治疗6个月,两组患者癫痫发作频率降低,且试验组低于基线组(P<0.05);两组α、β频段功率升高,δ、θ频段功率降低,且试验组变化幅度大于基线组(P<0.05)。治疗6个月,试验组、基线组TLR-4(r=-0.820、-0.666,P均<0.001)、NF-κB(r=-0.744、-0.643,P均<0.001)水平与疗效均呈负相关。治疗期间试验组不良反应发生率与基线组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论拉考沙胺联合奥卡西平治疗局灶性癫痫疗效显著,可有效改善患者脑电图频段功率,减少发作频率,且安全性有保障。

芍药苷-6-氧-苯磺酸酯(CP-25)通过TLR-4/NF-κB信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨芍药苷-6-氧-苯磺酸酯(CP-25)通过Toll样受体4(TLR-4)/核因子κB(NF-κB)信号通路对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:CCK-8实验检测人卵巢癌细胞A2780、SK-OV-3、HO8910及正常卵巢细胞HOSEpiC的活性。A2780细胞分为对照组(0.01%二甲基亚砜)、CP-25低(0.5 mg/ml CP-25)、中(1 mg/ml CP-25)、高(2 mg/ml CP-25)浓度组和CP-25高浓度+LPS组(2 mg/ml CP-25和0.1μg/ml TLR-4激活剂LPS)。CCK-8和克隆形成实验评估细胞增殖能力;流式细胞术和TUNEL染色分析细胞凋亡情况;Western blot分析增殖蛋白Ki67、凋亡相关蛋白(Cleaved caspase-3、Caspase-3、Bax、Bcl-2)、TLR-4、p-NF-κB p65、NF-κB p65蛋白表达水平;免疫荧光染色观察TLR-4、NF-κB p65蛋白表达。结果:与HOSEpiC细胞相比,A2780、SK-OV-3、HO8910细胞活性随CP-25浓度增加而逐渐减弱(P<0.05),且CP-25在低、中、高浓度下对A2780细胞的生长有50%左右的抑制作用,故采用A2780细胞进行实验。与对照组相比,CP-25低、中、高浓度组A2780细胞克隆形成率显著下降,细胞凋亡率和凋亡指数明显上升,Ki67、Bcl-2、TLR-4、p-NF-κB p65表达水平和细胞核NF-κB p65水平显著降低,Cleaved caspase-3/Caspase-3、Bax表达显著升高(P<0.05),且呈现浓度依赖性。与CP-25高浓度组相比,CP-25高浓度+LPS组细胞活性、克隆形成率明显升高,细胞凋亡率和凋亡指数明显降低,Ki67、Bcl-2、TLR-4、p-NF-κB p65表达水平和细胞核NF-κB p65水平明显升高,Cleaved caspase-3/Caspase-3和Bax表达明显降低(P<0.05)。结论:CP-25通过抑制TLR-4/NF-κB信号通路抑制卵巢癌细胞增殖并促进其凋亡。

TLRs/NF-κB信号通路及肠道菌群特征与溃疡性结肠炎患者疾病活动度的关系

目的研究Toll样受体(TLRs)/核因子(NF)-κB信号通路及肠道菌群特征与溃疡性结肠炎(UC)患者疾病活动度的关系。方法前瞻性分析2021年1月至2023年1月山西白求恩医院收治的84例UC患者纳入本研究,设为观察组。将观察组患者根据Walmsley评分分为活动性溃疡性结肠炎(AUC)组(Walmsley评分>4分)45例和缓解性溃疡性结肠炎(RUC)组(Walmsley评分<4分)39例。另选同期发现为结肠息肉患者40例设为对照组。收集患者相关基线资料,比较3组患者肠道菌群分布、TLRs及NF-κB的相对表达量,分析TLRs及NF-κB的相对表达量与疾病活动度的相关性。结果3组基线资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。AUC组、RUC组双歧杆菌数量分别为(7.06±0.15)、(6.25±0.31)lg CFU/g,均低于对照组[(8.45±0.53)lg CFU/g],大肠埃希菌数量分别为(8.95±0.24)、(10.12±0.43)lg CFU/g,均高于对照组[(7.46±0.47)lg CFU/g],差异均有统计学意义(P<0.05);RUC组乳杆菌数量为(5.04±0.12)lg CFU/g,低于对照组[(7.09±0.41)lg CFU/g],组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。AUC组患者TLR2、TLR4、TLR5、TLR9及NF-κB的mRNA表达量分别为2.95±0.14、2.24±0.15、3.12±0.15、2.65±0.34、2.31±0.18,RUC组TLR2、TLR4、TLR5、TLR9及NF-κB的mRNA表达量分别为1.06±0.32、1.38±0.31、1.94±0.14、1.85±0.19、1.62±0.21,均高于对照组(1.01±0.21、1.01±0.21、0.98±0.06、1.03±0.08、0.94±0.03),AUC组患者TLRs及NF-κB的mRNA表达量均高于RUC组,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,TLR2、TLR4、TLR5、TLR9及NF-κB的相对表达量与Walmsley评分均呈正相关(r=0.458、0.384、0.556、0.641、0.674,P<0.05)。结论不同疾病活动度患者TLRs/NF-κB信号通路及肠道菌群分布存在差异,提示TLRs/NF-κB信号通路及肠道菌群可能影响UC患者疾病活动度。

紫草素调控TLRs信号通路对结核分枝杆菌感染小鼠肺部炎症、免疫功能及炎性因子的作用

目的分析紫草素对结核分枝杆菌感染小鼠肺部炎症、免疫功能及炎性因子的作用及作用机制。方法随机选取SPF级C57BL/6小鼠87只,随机抽取15只作为对照组,将剩余72只小鼠建立结核分枝杆菌感染小鼠模型,建模成功45只,成功率62.50%,随机分为模型组、紫草素组、紫草素+Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、核转录因子κB(nuclear transcription factorκB,NF-κB)p65信号通路激动剂组(紫草素+LPS组)各15只,紫草素组腹腔注射40 mg/kg紫草素;紫草素+LPS组腹腔注射40 mg/kg紫草素及0.25 mg/kg LPS;对照组及模型组腹腔注射等量生理盐水。末次给药后,观察各组小鼠肺重指数及肺部组织结核菌荷菌量、肺组织病理学形态改变、免疫功能指标、炎性因子及通路相关因子表达水平。结果与对照组对比,模型组小鼠肺重指数、肺病变指数、肺部组织结核菌荷菌量均明显增多(P均<0.05);与模型组对比,紫草素组小鼠肺重指数、肺病变指数、肺部组织结核菌荷菌量均明显减少(P均<0.05);与紫草素组对比,紫草素+LPS组小鼠肺重指数、肺病变指数、肺部组织结核菌荷菌量均明显增多(P均<0.05)。对照组小鼠肺组织结构正常,细胞排列紧密,肺泡结构完整,未见炎性细胞浸润情况;模型组小鼠肺组织结构受损严重,肺泡数量减少,可见大量炎性细胞浸润,可见结核结节形成;紫草素组肺组织结构基本完整,偶见炎性细胞浸润;紫草素+LPS组肺组织结构、细胞排列、炎性细胞浸润及结核结节情况与模型组相似,但较优于模型组。与对照组对比,模型组小鼠CD3^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)/CD8^(+)、白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)水平均明显降低,CD8^(+)T淋巴细胞、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及TLR4、MyD88、NF-κB p65表达水平均明显升高(P均<0.05);与模型组对比,紫草素组小鼠CD3^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)/CD8^(+)、IL-10表达水平均明显升高,CD8^(+)T淋巴细胞、IL-6、TNF-α及TLR4、MyD88、NF-κB p65表达水平均明显降低(P均<0.05);与紫草素组对比,紫草素+LPS组小鼠CD3^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)/CD8^(+)、IL-10表达水平均明显降低,CD8^(+)T淋巴细胞、IL-6、TNF-α及TLR4、MyD88、NF-κB p65表达水平均明显升高(P均<0.05)。结论紫草素可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB p65信号通路改善结核杆分枝菌感染小鼠肺部组织结核分枝杆菌荷菌量,抑制肺部炎症反应,提高免疫功能,从而发挥一定的肺保护作用。

芪苈强心胶囊联合沙库巴曲缬沙坦钠对老年慢性心力衰竭患者血清Gal-3、Copeptin水平及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨芪苈强心胶囊辅助治疗老年CHF对患者Gal-3、Copeptin水平及TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法:采用随机数表法将2021年3月至2023年3月平顶山市第一人民医院112例老年CHF患者分为采用沙库巴曲缬沙坦钠(诺欣妥)治疗的常规组(n=56例)和采用芪苈强心胶囊辅助治疗的联合组(n=56例)。观察两组疗效、心功能、血清半乳糖凝集素-3(Gal-3)、Copeptin水平、Toll样受体(TLR4)、核因子-κ(NF-κB)水平及不良反应。结果:治疗3个月后,联合组的临床治疗总有效率、心输出量(CO)、左心室射血分数(LVEF)高于常规组(P<0.05);联合组TLR4、NF-κB、Gal-3、Copeptin水平低于常规组(P<0.05);两组患者用药期间不良反应发生率对比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:芪苈强心胶囊联合沙库巴曲缬沙坦钠可调节TLR4、NF-κB水平,促进老年CHF患者心功能恢复,并抑制心肌重构,进而有效提高临床治疗疗效,且不增加患者不良反应发生风险。

基于TLR-4/NF-κB信号通路及水通道蛋白1表达探讨大陷胸汤干预重症急性胰腺炎早期肺损伤的效应机制

目的:探讨大陷胸汤对重症急性胰腺炎(SAP)早期肺损伤的影响及作用机制。方法:将60只大鼠随机分为实验组、模型组和对照组,每组20只。实验组予大陷胸汤灌胃,对照组及模型组予蒸馏水灌胃,在连续灌胃7 d后,模型组与实验组以胰胆管注射牛磺胆酸钠的方式制备SAP模型,于造模后12、24、48、72 h各时间点分别处死5只大鼠取材,观察大鼠一般情况、胸腹水量、肺湿干重比、胰腺组织及肺组织病理学改变、肺组织白细胞介素(IL)-1及Toll样受体4(TLR-4)水平、肺组织核因子(NF)-κB及水通道蛋白1(AQP1)表达水平。结果:与对照组相比,模型组大鼠一般情况较差,胰腺炎症反应以及肺损伤程度较重,胸腹水量、肺湿干重比、肺组织NF-κB表达水平、IL-1及TLR-4水平升高(P<0.05),肺组织AQP1表达水平下降。与模型组相比,实验组大鼠一般情况较好,肺损伤程度较轻,胸腹水量、肺湿干重比、肺组织NF-κB表达水平、IL-1及TLR-4水平下降(P<0.05),肺组织AQP1表达水平升高,造模后72 h后,胰腺组织坏死程度与同期模型组相比明显好转。结论:大陷胸汤可在一定程度上减轻SAP大鼠早期肺损伤,其机制可能与抑制TLR-4/NF-κB炎症信号通路,增强AQP1表达有关。

有氧运动对CAP大鼠前列腺组织miR-155表达、TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的探讨有氧运动对慢性非细菌性前列腺炎(CAP)大鼠前列腺组织miR-155表达、Toll样受体(TLR)4/核转录因子(NF)-κB信号通路的影响。方法雄性健康SD大鼠随机分为正常对照组(正常组)、CAP模型对照组(模型组)、游泳运动观察组(运动组),每组10只,注射消痔灵进行大鼠造模,模型形成期7 d,后运动组进行50 min/(次·d)的游泳运动,每周运动6 d,持续28 d,正常组和模型组不进行任何运动,自由活动取食;末次运动结束后2 h处死大鼠,采用ELISA检测前列腺组织白细胞介素(IL)-8、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α表达,Western印迹检测TLR4、NF-κB P65蛋白相对表达,实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-155表达,观察各组前列腺组织病理学改变。结果28 d游泳运动结束后,与正常组比较,模型组和运动组前列腺组织内IL-8、IL-6、TNF-α、TLR4、NF-κB P65和miR-155表达均显著升高(P<0.05);与模型组比较,运动组上述各项观察指标均显著降低(P<0.05);相关分析显示,TLR4、NF-κB P65与IL-8、IL-6、TNF-α表达呈正相关,miR-155与TLR4、NF-κB P65、IL-8、IL-6、TNF-α表达呈正相关(均P<0.01);病理观察显示,正常组前列腺组织学观察未见异常改变,模型组前列腺组织内可见腺体上皮细胞及纤维组织明显增生,间质中淋巴细胞等慢性炎症细胞浸润;与模型组比较,运动组前列腺腺体上皮细胞轻度增生,间质轻度纤维化,慢性炎症细胞浸润现象明显好转。结论有氧运动能够对CAP大鼠炎症起到缓解作用,其作用机制可能与miR-155调控TLR4/NF-κB信号通路有关。

TLR4/9介导牙周炎宿主CD25+B细胞表达IL-10、IL-35及TGF-β的效应及机制

目的分析牙周炎宿主CD25^(+)B细胞中IL-10、IL-35及TGF-β的表达特点,评价TLR4/9的表达活化对上述过程的影响。方法SD大鼠随机分为健康组、早期牙周炎组、晚期牙周炎组,采用结扎法建立牙周炎模型。检测各组动物牙龈及外周血CD25^(+)B细胞内IL-10、IL-35和TGF-βmRNA的表达水平,牙龈CD25^(+)B细胞内TLR 2/4/7/9、MyD88、TRAF6的表达活化水平。建立细胞培养体系,分析TLRs/MyD88信号对CD25^(+)B细胞表达分泌IL-10、IL-35和TGF-β的影响。结果早期牙周炎组牙龈CD25^(+)B细胞内IL-10、TGF-βmRNA表达水平高于健康组(P<0.05)。晚期牙周炎组牙龈CD25^(+)B细胞内IL-10、IL-35及TGF-βmRNA表达水平高于健康组(P<0.05),外周血CD25^(+)B细胞内IL-10 mRNA高于健康组(P<0.05),余差异无统计学意义(P>0.05)。相比健康组,晚期牙周炎组牙龈CD25^(+)B细胞内TLR4/9及MyD88的表达磷酸化水平均升高(P<0.01)。细胞实验结果显示,TLR4激动剂上调IL-10、IL-35、TGF-βmRNA表达及IL-10的浓度(P<0.05),TLR9激动剂上调IL-10、TGF-βmRNA表达及IL-10的浓度(P<0.05),TLR4/TLR9激动剂联合应用上调所有检测指标的表达及浓度(P<0.05),MyD88拮抗抑制上述过程(P<0.05)。结论牙周炎晚期,牙龈CD25^(+)B细胞表达IL-10、IL-35和TGF-β水平升高,这一过程可能受TLR4/9-MyD88信号调控。

五味子调控TLR/NF-κB信号通路改善睡眠作用机制研究

目的 研究五味子调控TLR/NF-κB信号通路改善睡眠作用机制。方法 48只大鼠随机分为空白组、模型组、安定组、五味子组,每组12只,腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA),建立大鼠失眠模型,灌胃给予五味子提取物,14天后,无菌条件下迅速摘取脾脏组织,进行脾脏病理组织形态学检查。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠脾脏Toll样受体9(TLR9),髓样细胞分化因子88(MyD88),白介素1受体激酶1(IRAK1),白介素1受体激酶4(IRAK4),肿瘤坏死因子相关受体6 (TRAF6),核因子κB(NF-κB) mRNA水平。结果 五味子能够改善脾脏组织及形态结构,下调PCPA致失眠大鼠TLR9,MyD88,IRAK1,IRAK4,TRAF6,NF-κB mRNA水平(P<0.01)。结论 五味子能通过下调TLR/NF-κB信号通路相关基因mRNA的表达,影响机体免疫系统功能,改善睡眠。

白虎加桂枝汤对急性痛风性关节炎大鼠TLRs和NALP3信号通路的影响

目的分析白虎加桂枝汤对急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)大鼠TLRs和NALP3信号通路的影响。方法于SD大鼠右侧踝关节处注入200μL尿酸钠溶液以构建AGA模型,本研究中最终成功构建40只AGA大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、低剂量组(0.265 g/100 g)、中剂量组(0.53 g/100 g)、高剂量组(1.06 g/100 g),每组各10只,并纳入10只健康SD大鼠为对照组,低剂量组、中剂量组、高剂量组大鼠分别灌胃不同剂量的白虎加桂枝汤,模型组和对照组灌胃等体积生理盐水,各组均连续灌胃7 d,并标准饲养。比较各组大鼠不同时刻踝关节周长、尿酸、血肌酐、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、步态评分和滑膜组织中NALP3、TLRs相关蛋白及其mRNA表达水平。结果灌胃1、3、7 d时对照组大鼠的踝关节周长、尿酸、血肌酐、IL-1β、TNF-α水平、步态评分最低,且呈现剂量反应(P<0.05)。灌胃1、3、7 d时对照组大鼠滑膜组织中NALP3、TLR3、TLR7蛋白表达及其mRNA表达最低,且呈现剂量反应(P<0.05)。结论白虎加桂枝汤能够改善AGA大鼠的炎症反应,改善肾功能,减轻踝关节组织病理损伤,其机制可能与抑制TLRs和NALP3信号通路相关。

痰热清对AECOPD患者外周血单个核细胞TLRs/NF-κB信号通路相关细胞因子及气道重塑的影响

目的:探讨痰热清对慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者外周血单个核细胞蛋白质家族(TLRs)/核因子κB(NF-κB)信号通路相关细胞因子及气道重塑的影响。方法:选择2018年4月—2021年7月麻城市人民医院收治的132例AECOPD患者,采用信封法随机分为观察组、对照组,各66例。对照组采用常规治疗,观察组给予常规治疗+痰热清注射液治疗,分析对患者TLRs/NF-κB信号通路相关因子、气道重塑、肺功能、炎症因子、血气分析指标的影响。结果:治疗10 d后,两组Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)、NF-κB的mRNA水平均较治疗前降低,且观察组上述指标低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗10 d后,两组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)、C反应蛋白(CRP)均较治疗前降低,且观察组以上指标显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗10 d后,两组第1秒用力呼气容积(FEV_(1))、用力肺活量(FVC)、呼气流量峰值(PEF)均较治疗前升高,且观察组上述指标均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗10 d后,两组气道壁厚度与气道管腔外径比值(T/D)、气道壁面积(WA)均较治疗前降低,气道腔面积(AI)升高,且观察组T/D、WA低于对照组,AI高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗10 d后,两组动脉血氧分压(PaO_(2))较治疗前升高,动脉血二氧化碳分压(PaCO_(2))较治疗前降低,且观察组PaO_(2)高于对照组,PaCO_(2)低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:AECOPD在应用痰热清注射液治疗后,可有效改善血气分析指标、肺功能指标,降低机体炎症因子及TLRs/NF-κB mRNA水平,进而改善气道重塑指标。

miR-184在葡萄膜炎发病过程中对白细胞介素-18和TLR-8表达的调控作用机制

目的:检测miR-1、miR184与多巴胺转运体在多巴胺细胞系SH-SY5Y内的表述,研究miR、miR-184在SH-SY5Y细胞系中对DAT基因表述的作用与其体制。方法:使用microRNA.org、miRBase、TargetScan.等网络数据库预估与文献检索相融合的模式,选择可以作用于DAT基因的候补miRNAs,并化学合成候补miRNAs模拟物转染到SH-SY5Y细胞内。依次转染后12h与24h后,提炼NC-mimics组、NC-inhibitor组、miRNAs mimics组与miRNAs inhibitor组细胞总RNA与蛋白;使用实时荧光定量RT-PCR检测各组细胞内的候补miRNA、DATmRNA表述情况;使用Western Blot检测各组细胞内DAT蛋白表述水平。结果:(1)通过生物信息理论检测融合检索资料选择出的候补miRANs是miR-1、miR-184;(2)miRNAs表述水平:miR-1 mimics 12h组与miR-1 mimics 24h组的miR-1表述量明显超过对照组(Ps<0.001),miR-1 inhibitor 12h组、miR-1 inhibitor 24h组合对照组比较没有明显差异(Ps>0.05);miR-184 mimics24h处理组中miR-184的表述量和对照组比较都有明显差异(P<0.01),miR-184 inhibitor 12h、miR-184 mimics12h与miR-184 inhibitor 24h处理组与对照组比较并无明显差异(Ps>0.05);(3)DATmRNA表述水平:miR-1 mimics 12h处理组内DAT mRNA的表述量和对照组比较有明显差异(P<0.05),miR-1 mimics 24h、miR-1 inhibitor 12h组与miR-1inhibitor 24h组DAT mRNA的表述量和对照组比较都缺乏明显差异(Ps>0.05),miR-184 mimics 12h组、miR-184 inhibitor 12h组与miR-184 inhibitor 24h组DAT mRNA的表述量和对照组比较都缺乏明显差异(Ps<0.05)。结论miR-1、miR-184参加SH-SY5Y细胞内DAT基因表述的控制,过表达的miR-1与miR-184都能压抑SH-SY5Y细胞内的DAT蛋白的表述。

基于TLR-4/NF-κB信号通路探讨归术益坤方联合粪菌移植对多囊卵巢综合征大鼠的治疗作用

目的 探讨归术益坤方联合粪菌移植治疗多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome, PCOS)的潜在机制。方法 将30只6周龄SD雌性大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、粪菌移植组、中药组、中药联合粪菌移植组,每组各6只。采用来曲唑诱导PCOS大鼠模型,以对照组大鼠新鲜粪便、归术益坤方进行干预,观察大鼠动情周期。检测大鼠血清性激素[黄体生成素(Luteinizing hormone, LH)、促卵泡激素(Follicle-stimulating hormone, FSH)、睾酮(Testosterone, T)]、空腹胰岛素(Fasting insulin, FINS)、空腹血糖(Fasting plasmaglucose, FPG)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immuno sorbent assay, ELISA)检测大鼠白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)、瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor, TNF-α)水平;HE染色观察大鼠卵巢形态学变化;Western Blot检测卵巢组织Toll样受体4(TLR-4)、磷酸化NF-κB p65相对表达量。结果 与对照组比较,模型组大鼠出现动情周期紊乱、卵巢呈多囊样改变,T、LH、LH/FSH、体质量、FPG、FINS、HOMA-IR、IL-18、TNF-α水平均明显升高(P<0.01),卵巢组织TLR-4、磷酸化NF-κB p65表达量上升(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,归术益坤方联合粪菌移植可显著改善上述指标(P<0.05);粪菌移植可降低T、LH、LH/FSH、体质量、FPG、HOMA-IR、TNF-α(P<0.05),下调卵巢组织TLR-4、磷酸化NF-κB p65表达(P<0.01),归术益坤方可降低T、LH、LH/FSH、体质量、FPG、FINS、HOMA-IR、IL-18、TNF-α(P<0.05),下调卵巢组织TLR-4、磷酸化NF-κB p65表达量(P<0.01)。结论 归术益坤方联合粪菌移植可明显改善PCOS大鼠生殖功能和代谢异常,潜在机制可能是改善肠道微生态,下调TLR-4/NF-κB信号通路,改善慢性炎症状态。

半夏泻心汤调控TLRs/NF-κB/MyD88信号通路干预溃疡性结肠炎的实验研究

目的观察半夏泻心汤对溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)大鼠肠道粘膜中的Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)/核转录因子κB(Nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells,NF-κB)/髓样分化蛋白88(Myeloid differentiation factor SS,MyD88)信号通路及抑制因子基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases,MMPs)MMP-1、MMP-2表达影响,并探讨其作用机制。方法建立葡聚糖硫酸钠盐(Dextran sulphate sodium salt,DSS)诱导产生UC模型,根据随机数字表法,将35只无特定病原体(Specific pathogen free,SPF)级大鼠进行分组,分为正常组、模型组、低浓度给药组(0.473 g·mL^(-1))、中浓度给药组(0.945 g·mL^(-1))和高浓度给药组(1.890 g·mL^(-1))。除正常组外,其余4组大鼠连续10天使用2.5%浓度的葡聚糖硫酸钠盐溶液每天2 mL进行灌胃,造模成功后,连续给药1周,观察大鼠疾病活动指数(Disease activity index,DAI)变化;采用苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色法,确认结肠组织病变损伤程度;同时应用蛋白质免疫印迹试验(Western blot)法,检测TLR4、NF-κB、MyD88蛋白在各组大鼠结肠中的表达;实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)技术则测定了大鼠结肠黏膜TLR4、NF-κB、IκB-α(人核因子κB抑制蛋白α,NF-κB inhibitorα)、MMP-1、MMP-2的mRNA的表达。结果造模后大鼠体质量、食欲、被毛、活动度、尿量较造模前均出现不同程度的下降,同时部分大鼠出现腹泻、便血的症状。模型组与正常组相比,大鼠结肠组织中TLR4、NF-κB、MyD88蛋白的表达,及TLR4、NF-κB、IκB-α、MMP-1、MMP-2的mRNA表达均显著升高(P<0.01);给予半夏泻心汤治疗后,UC大鼠体质量下降、腹泻、便血等症状明显减轻。低、中、高剂量的半夏泻心汤实验组中,大鼠结肠黏膜组织TLR4、NF-κB、MyD88蛋白的表达相较于模型组有不同程度地降低;MMP-1、MMP-2水平也有所下降。结论半夏泻心汤可能通过影响TLRs/NF-κB/MyD88信号通路及其相关因子的表达,改善溃疡性结肠炎大鼠结肠损伤程度,进而防治UC。