miR-122在肝病中的研究进展

肝脏有着独特的再生功能,同时,肝脏在人体很多重要的需要相互协调、相互制约的生物学过程中都扮演着举足轻重的角色。越来越多的证据表明,miRNA参与调节肝脏的生长、再生和代谢。因此,肝内的miRNA网络的改变与包括肝炎、肝硬化、脂肪肝、肝癌等诸多肝脏疾病有关。其中,miR-122是肝脏miRNA中含量最丰富也是肝脏生物学和疾病的最关键因子。目前,miR-122已经被证实是丙型肝炎关键宿主因子和药物靶标。这对使用直接靶向药物治疗和干扰素治疗是个有力的补充。文章综述总结了目前所了解到的miR-122在肝脏生理学和疾病中所扮演的角色,其在丙肝和乙肝中的作用以及基于miRNA的治疗肝脏疾病的方法。

miR-122-5p靶向调控人骨髓间充质干细胞诱导成骨分化的分子机制研究

目的:研究miR-122-5p对人骨髓间充质干细胞hBMSCs细胞成骨分化诱导的作用分子机制。方法:运用茜素红S、碱性磷酸酶活性ALP染色试剂盒检测hBMSCs成骨分化的钙结节与成骨活性;使用双荧光素酶报告基因实验验证miR-122-5p与BRCC3之间的靶向关系;运用qRT-PCR分别检测Runx2、Osterix、wnt3a、β-catenin、GSK3-β、miR-122-5以及BRCC3基因的表达情况;Western印迹检测β-catenin蛋白的表达量。结果:过表达miR-122-5p对人骨髓间充质干细胞hBMSCs细胞成骨分化诱导21天后的钙结节与干细胞成骨活性均有明显促进作用,对成骨分化中wnt/β-catenin信号通路主要转录因子Runx2、Os‐terix及wnt3a、β-catenin、GSK3-β主要基因均激活作用,过表达BRCC3对干细胞成骨分化中wnt/β-catenin信号通路主要转录因子Runx2、Osterix及wnt3a、β-catenin、GSK3-β主要基因有抑制作用;并且通过双荧光素酶报告基因与回复性实验确定miR122-5p与BRCC3之间的靶向关系,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-122-5p靶向抑制BRCC3的表达诱导hBMSCs细胞通过wnt/β-catenin通路进行成骨分化诱导。

彩色多普勒超声检查联合血清miR-122-5p、miR-106b水平对卵巢癌的诊断价值

目的 探讨彩色多普勒超声检查联合血清微小RNA(miRNA)-122-5p、miR-106b水平对卵巢癌的早期诊断价值以及与卵巢癌周围血管侵袭的相关性。方法 回顾性选取2019年5月至2021年12月沧州市中心医院收治的102例卵巢肿瘤患者为研究对象,所有患者均行彩色多普勒超声检查,采用实时定量聚合酶链反应测定血清中miR-122-5p和miR-106b的表达水平。以病理诊断结果作为金标准,将研究对象分为卵巢癌组(n=51)和良性卵巢肿瘤组(n=51);卵巢癌组又分为侵袭组(n=32)和非侵袭组(n=19)。比较卵巢癌组与良性卵巢肿瘤组的临床资料(年龄、体重指数、生育和绝经)、彩色多普勒超声图像特征(实性包块、伴腹水、乳头状结构≥4、肿瘤最大直径>10 cm)、彩色多普勒超声血流参数[搏动指数(PI)和血流阻力指数(RI)]、血清miR-122-5p、miR-106b水平。应用多因素Logistic回归模型探究相关变量对卵巢癌的独立预测作用。应用受试者工作特征(ROC)曲线评估彩色多普勒超声检查联合血清miR-122-5p、miR-106b水平对卵巢癌的诊断价值。并比较侵袭组与非侵袭组彩色多普勒超声血流参数及血清miR-122-5p、miR-106b水平,采用Pearson相关性分析对彩色多普勒超声血流参数、miR-122-5p、miR-106b与卵巢癌周围血管侵袭的相关性进行分析。结果 卵巢癌组实性包块、伴腹水、乳头状结构≥4以及肿瘤最大直径>10 cm所占比例分别为80.39%、76.47%、74.51%、78.43%,均高于良性卵巢肿瘤组(9.80%、11.76%、29.41%、45.10%),PI、RI、血清miR-122-5p表达水平分别为0.94±0.27、0.48±0.11、1.01±0.27,均低于良性卵巢肿瘤组(1.47±0.32、0.71±0.19、1.42±0.30),miR-106b表达水平为4.57±1.13,高于良性卵巢肿瘤组(2.86±0.65),差异均有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归模型分析显示,PI、RI、miR-122-5p、miR-106b是卵巢癌的独立预测因子,OR值分别为1.080、1.116、1.689、1.301(P<0.05)。ROC曲线分析显示,PI、RI、miR-122-5p和miR-106b以及联合诊断卵巢癌的曲线下面积(AUC)分别为0.869、0.874、0.859、0.898、0.969,其联合诊断的价值高于单独应用。侵袭组PI、RI和血清miR-122-5p表达水平均低于非侵袭组,血清miR-106b表达水平高于非侵袭组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,彩色多普勒超声血流参数PI、RI及血清miR-122-5p水平与卵巢癌周围血管侵袭呈负相关(r=-0.743、-0.696、-0.822,P<0.05),血清miR-106b水平与卵巢癌周围血管侵袭呈正相关(r=0.863,P<0.05)。结论 彩色多普勒超声检查联合血清miR-122-5p、miR-106b水平可以提高卵巢癌的早期诊断价值,并且可根据这些指标评估卵巢癌周围血管侵袭程度,值得应用推广。

miR-122在PM_(2.5)诱导的肺损伤中的作用机制

目的探索PM_(2.5)引起的肺损伤的分子机制,以期为肺损伤的诊疗提供新的靶点。方法对PM_(2.5)诱导下肺损伤的多组学数据进行差异基因筛选及分子功能分析,确定肺损伤相关的分子靶标,构建PM_(2.5)诱导的SD大鼠肺损伤模型并进行初步验证。结果HE染色结果显示,暴露组的大鼠肺泡间隔增宽,肺泡腔增大,部分肺泡断裂、融合;Masson染色结果发现暴露组大鼠肺部呈现出少量纤维化。本次实验结果发现,在PM_(2.5)诱导条件下,miR-122表达显著上调,其靶基因胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor 1,IGF1R)表达显著下调。结论PM_(2.5)会导致大鼠的肺损伤,推测miR-122通过调控其靶基因IGF1R进而影响PI3K-AKT信号通路并引起细胞凋亡,加剧肺损伤。

UCA1/miR-122-5p/CPEB1轴促进肺腺癌的顺铂耐药发生机制研究

目的探讨尿路上皮癌胚抗原1(UCA1)/miR-122-5p/pcDNA-胞质多聚腺苷酸元件结合蛋白1(CPEB1)轴促进肺腺癌的顺铂耐药发生机制研究。方法通过实时荧光反转录定量PCR(RT-qPCR)检测UCA1相关miRNA分子,并通过细胞转染获得miR-122-5p和CPEB1相关细胞株。通过双荧光素酶报告实验分别验证UCA1与miR-122-5p、CPEB1与miR-122-5p的结合。药物敏感性实验获得顺铂药物半抑制浓度(IC50);通过肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析CPEB1在肺腺癌中的表达情况以及与免疫细胞功能的关系。结果miR-122-5p在肺腺癌细胞中的表达水平明显升高,并通过双荧光素酶报告实验以验证UCA1与miR-122-5p结合,构建miR-122-5p抑制物和模拟物转染肺腺癌细胞株,发现miR-122-5p抑制后,顺铂IC50浓度下降,而miR-122-5p过表达后,顺铂IC50浓度升高。CPEB1在肺腺癌细胞中的表达水平明显降低,双荧光素酶报告实验证实CPEB1是与miR-122-5p结合,CPEB1过表达后,顺铂IC50浓度减低;对TCGA数据库分析显示肺腺癌组织CPEB1 mRNA明显低于癌旁组织,ROC曲线分析显示CPEB1表达水平能较好地用于诊断肺腺癌(AUC=0.849),进一步分析显示CPEB1表达水平与肺腺癌患者的细胞功能如T细胞、B细胞、CD8+T细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞、肥大细胞存在密切关联。结论UCA1与miR-122-5p存在结合位点,后者可影响肺腺癌的顺铂耐药,并与靶基因CPEB1结合;肺腺癌中CPEB1呈低表达,降低肺腺癌顺铂药物的敏感性。UCA1/miR-122-5p/CPEB1轴有望为干预肺腺癌顺铂耐药的靶点。

不同中医证型胃癌患者外周血miR-21、miR-122水平变化及临床意义

目的:观察探讨不同中医证型胃癌(GC)患者外周血miR-21、miR-122水平变化及临床意义。方法:选取2022年1月~2023年1月我院收治的100例GC患者为研究对象,根据其临床表现和体征进行中医证型分型,比较不同中医证型GC患者外周血miR-21、miR-122水平、毒副反应发生率及化疗半年后的存活情况。结果:100例GC患者中47例为脾胃湿热证,17例为脾胃虚寒证,15例为肝胃不和证,13例为瘀血内阻证,8例为痰浊凝滞证。不同中医证型GC患者外周血miR-21水平为脾胃湿热证>脾胃虚寒证>肝胃不和证>瘀血内阻证>痰浊凝滞证,miR-122水平为脾胃湿热证<脾胃虚寒证<肝胃不和证<瘀血内阻证<痰浊凝滞证,且两组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。脾胃湿热证患者胃肠道反应和骨髓抑制发生率明显高于痰浊凝滞证和瘀血内阻证(P<0.05),神经系统反应及肾损害发生率明显高于瘀血内阻证(P<0.05);脾胃虚寒证患者骨髓抑制发生率明显高于痰浊凝滞证和瘀血内阻证(P<0.05),神经系统反应发生率明显高于瘀血内阻证(P<0.05);肝胃不和证患者神经系统反应发生率明显高于瘀血内阻证(P<0.05)。不同中医证型GC患者化疗后随访6个月的生存率为脾胃湿热证<脾胃虚寒证<肝胃不和证<瘀血内阻证<痰浊凝滞证,但组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:不同中医证型GC患者外周血miR-21、miR-122表达存在差异,检测二者水平对评估患者病情进展及预后有一定价值。

miR-122靶向调控RhoA基因影响乙型肝炎病毒复制与表达的机制研究

目的探讨miR-122通过调控小G蛋白超家族成员RhoA基因对隐匿性乙型肝炎病毒(HBV)复制与表达的影响及其作用机制。方法实时荧光定量PCR测定HBV(+)与HBV(-)的肝癌患者组织、HepG2细胞与HepG2.2.15细胞中miR-122表达差异,实时荧光定量PCR和Western Blot检测HBV(+)与HBV(-)的肝癌患者组织、HepG2细胞与HepG2.2.15细胞中RhoA mRNA和RhoA蛋白的表达差异;按照实验分组将pEGFP-C1-miR-122与pcDNA3.0-V14RhoA转染至HepG2.2.15细胞,实时荧光定量PCR测定miR-122与RhoA mRNA表达,Western Blot检测RhoA蛋白表达;生物信息学方法预测miR-122与RhoA基因的靶向结合位点,构建野生型RhoA 3′非翻译区(3′UTR)和突变型RhoA 3′UTR双荧光素酶表达载体,检测细胞荧光素酶活性变化;酶联免疫吸附试验测定细胞培养上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)与乙型肝炎e抗原(HBeAg)水平,实时荧光定量PCR检测细胞培养上清液中HBV DNA水平,Western Blot检测细胞内Rho相关蛋白激酶(ROCK)-1与ROCK-2相对表达水平。结果相较于HBV(-)肝癌患者组织,HBV(+)肝癌患者组织中miR-122表达下调,RhoA mRNA和RhoA蛋白相对表达水平上调(P<0.05);与HepG2细胞比较,HepG2.2.15细胞中miR-122表达也下调,RhoA mRNA和RhoA蛋白相对表达水平上调(P<0.05)。经预测发现RhoA mRNA 3′UTR与miR-122在特定区域存在碱基互补现象,miR-122 mimic和RhoA 3′UTR WT重组质粒共转染的细胞中相对荧光素酶活性降低(P<0.05)。此外,过表达miR-122的HepG2.2.15细胞中RhoA mRNA和RhoA蛋白相对表达水平下调(P<0.05)。与空白组比较,miR-122组HepG2.2.15细胞培养上清液HBsAg与HBeAg水平均降低,HBV DNA表达降低,ROCK-1与ROCK-2表达均上调(P<0.05);而V14RhoA组HBsAg与HBeAg水平则高于空白组,HBV DNA表达升高,ROCK-1与ROCK-2表达均上调(P<0.05)。结论miRNA-122可通过下调RhoA基因表达抑制HBV的复制和表达,其机制可能与抑制Rho/ROCK信号通路激活有关。

白花香莲解毒颗粒治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的临床疗效及对血浆外泌体miR-122表达的影响

目的:观察壮药白花香莲解毒颗粒治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的临床疗效及对血浆外泌体miR-122表达的影响。方法:将120例HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者随机分为两组,对照组60例给予恩替卡韦治疗,观察组60例给予恩替卡韦联合白花香莲解毒颗粒治疗,两组均治疗48周,同时选取健康体检者30例作为健康组。观察治疗前后两组临床疗效、乙肝两对半定量、血浆外泌体miR-122、乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA)的水平、肝功能及不良反应事件发生情况。结果:治疗48周,观察组总有效率[90%(54/60)]明显高于对照组[71.67%(43/60)](P<0.05)。治疗12、24、48周时,两组HBeAg滴度、血清丙氨酸氨基转移酶水平逐渐下降,且观察组显著低于对照组(P<0.05);观察组血浆中miR-122相对表达量高于治疗前(P<0.05),对照组血浆中miR-122相对表达量与治疗前比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗12、24、48周时,两组血清HBV-DNA水平逐渐下降(P<0.05);观察组治疗12、24周时HBV-DNA水平低于对照组(P<0.05),但治疗48周后,两组HBV-DNA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:白花香莲解毒颗粒能够抑制HBV-DNA的复制及HBeAg分泌,改善肝功能,其疗效机制可能与调节血浆外泌体miR-122的表达有关。

血清miR-122与STEMI患者动脉粥样硬化疾病负担和长期临床结局的关系

目的 探讨ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者血清微小RNA(miRNA)-122与动脉粥样硬化疾病负担及长期临床结局的相关性。方法 前瞻性纳入2014年9月至2016年5月104例在该院接受经皮冠状动脉介入治疗的STEMI患者,使用SYNTAX评分和Gensini评分评估STEMI患者动脉粥样硬化疾病负担。同期纳入100例无已知心血管疾病的健康志愿者作为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-122表达水平。结果 STEMI组患者血清miR-122水平显著高于对照组(Z=-8.064,P<0.001)。血清miR-122水平≥2.25与多支血管疾病发生率升高有关(OR=2.04,95%CI:1.09~3.83,P=0.031)。STEMI患者血清miR-122水平与SYNTAX评分、Gensini评分呈正相关(r=0.447、0.402,均P<0.001)。多元线性回归分析显示,血清miR-122水平是影响SYNTAX评分(t=5.228,P<0.001)和Gensini评分(t=2.955,P=0.009)的独立临床因素。随访期间,有26例(25.0%)患者出现了新的临床事件,发生不良临床事件患者的血清miR-122水平高于未发生不良事件患者(Z=-2.837,P=0.005)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,血清miR-122水平预测患者不良临床结局的曲线下面积为0.755(95%CI:0.664~0.845)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-122水平≥2.25是STEMI患者不良临床结局的独立危险因素(P<0.05)。结论 STEMI患者血清miR-122水平升高与更高的动脉粥样硬化疾病负担及不良临床结局有关。

miR-122-5p靶向KDM2A对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的探讨miR-122-5p靶向组蛋白去甲基化酶2A(histone demethylation protein 2A,KDM2A)对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。方法体外培养人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC),利用qRT-PCR和Western blot方法检测miR-122-5p和KDM2A对BMSC成骨相关指标(OPN、OCN和RUNX2)表达情况的影响;茜素红染色和碱性磷酸酶染色检测miR-122-5p和KDM2A对BMSC钙沉积和碱性磷酸酶活性的影响;双荧光素酶实验验证miR-122-5p和KDM2A之间的结合关系;miR-122-5p inhibitor和si-KDM2A共转染研究两者对BMSC成骨分化的影响。结果miR-122-5p mimic和si-KDM2A能够促进BMSC成骨相关基因的表达水平、钙结节沉积及碱性磷酸酶活性,miR-122-5p和KDM2A两者之间存在靶向结合关系,且miR-122-5p能够靶向抑制KDM2A表达,进而促进BMSC成骨相关基因的表达水平、钙结节沉积及碱性磷酸酶活性。结论miR-122-5p靶向抑制KDM2A表达,进而促进BMSC成骨分化。

血清miR-122-5p、miR-34a水平与急性颅脑损伤减压术患者临床预后的关系

目的探讨血清微小核糖核酸-122-5p(miR-122-5p)、微小核糖核酸-34a(miR-34a)水平与急性颅脑损伤减压术患者临床预后的关系。方法选取2019年1月—2020年1月绵阳市中心医院接受的急性颅脑损伤减压术治疗患者83例作为研究对象,根据疾病预后情况分为预后良好组51例与预后不良组32例,同期选择体检健康人员38例作为健康组,检测3组受试者血清miR-122-5p、miR-34a水平,分析两种血清与急性颅脑损伤减压术患者临床预后的关系,再根据受试者操作特征曲线(ROC)分析疾病诊断的灵敏度、特异度。结果血清miR-122-5p、miR-34a水平健康组与预后良好组均高于预后不良组,差异具有统计学意义(P<0.005)。急性颅脑损伤与血清miR-122-5p、miR-34a水平呈正相关(P<0.001)。根据ROC曲线可知,miR-122-5p灵敏度、特异度分别为65.6%、81.6%(P<0.001),miR-34a灵敏度、特异度分别为84.4%、63.2%(P<0.000),miR-122-5联合miR-34a灵敏度、特异度分别为87.5%、86.8%(P<0.000)。结论血清miR-122-5、miR-34a与急性颅脑损伤减压术患者临床预后有关,可以作为评估急性颅脑损伤减压术患者临床预后的主要方法,且miR-122-5联合miR-34a检测效果更好。

超声造影联合血清miR-122-5p、miR-133a-3p水平对肝细胞癌的诊断价值

目的探究超声造影(CEUS)联合血清miR-122-5p、miR-133a-3p水平对肝细胞癌(HCC)的诊断价值。方法选取45例HCC患者及45例慢性乙型肝炎患者作为研究对象。采集患者血液标本,分离血清,采用荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测患者血清miR-122-5p、miR-133a-3p表达量。同时为患者进行CEUS,评估其诊断价值。另外绘制受试者工作曲线(ROC)、进行COX多因素分析评估CEUS联合血清miR-122-5p、miR-133a-3p水平对肝细胞癌的诊断价值。结果HCC组始消时间、持续时间、达峰时间及始增时间均低于对照组(P<0.05);绘制CEUS各项指标诊断HCC的ROC曲线显示,单独检测时始增时间的敏感度最高,始消时间、持续时间的特异度最高,联合检测的AUC为0.978,特异度及敏感度均处于较高水平。HCC组血清miR-122-5p、miR-133a-3p表达水平均明显低于对照组;绘制血清miR-122-5p、miR-133a-3p水平诊断HCC的ROC曲线,单独检测时,miR-133a-3p的敏感度最高,miR-122-5p的特异度最高,两者联合检测具有较高的敏感度及特异度。CEUS联合血清miR-122-5p、miR-133a-3p水平诊断HCC的ROC曲线显示,AUC为0.999,截断值为0.712,敏感度、特异度分别为97.78%,99.99%,约登指数为0.9778,95%CI为0.958~1.000。行多因素COX分析显示,始消时间、达峰时间、始增时间、血清miR-122-5p、miR-133a-3p均为影响HCC诊断的因素(P<0.05)。结论CEUS联合血清miR-122-5p、miR-133a-3p水平对肝细胞癌具有较高的诊断价值。

妊娠期糖尿病患者血清microRNA-122联合microRNA-7047-5p预测不良围生儿结局价值

目的探讨妊娠期糖尿病患者血清microRNA-122(miR-122)联合microRNA-7047-5p(miR-7047-5p)预测不良围生儿结局价值。方法选取2018年4月—2023年4月亳州市人民医院接收的100例妊娠期糖尿病患者作为观察组,选取同期该院孕检的90例健康孕妇作为对照组。检测两组血糖水平、血清miR-122、miR-7047-5p,采用Pearson法分析评估血清miR-122、miR-7047-5p水平与血糖水平的相关性;根据随访结果将观察组围生儿结局分为良好组(85例)与不良组(15例),比较两组血清miR-122、miR-7047-5p相对表达量,构建受试者工作特征(ROC)曲线评估血清miR-122、miR-7047-5p联合预测妊娠期糖尿病患者不良围生儿结局的价值。结果观察组空腹血糖(FBG)、2 h餐后血糖(2 hPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)水平高于对照组(P<0.05)。观察组miR-122相对表达量高于对照组(P<0.05),miR-7047-5p相对表达量低于对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,miR-122与FBG、2hPG、HbA1c均呈正相关(r=0.167、0.228和0.255,均P<0.05),miR-7047-5p与FBG、2 hPG、HbA1c均呈负相关(r=-0.358、-0.408和-0.386,均P<0.05)。不良组miR-122相对表达量高于良好组(P<0.05),miR-7047-5p相对表达量低于良好组(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-122和miR-7047-5p联合预测GDM患者不良围生儿结局的敏感性为73.3%(95%CI:0.449,0.922),特异性为85.9%(95%CI:0.766,0.925),曲线下面积为0.836(95%CI:0.720,0.952)。结论在妊娠期糖尿病患者中,血清microRNA-122和microRNA-7047-5p与血糖水平相关,且两者联合检测可以有效预测GDM患者的不良围生儿结局,具有较高的预测敏感性和特异性。

食管鳞癌中miR-122-5P的表达及其临床病理学意义

目的探究食管鳞癌组织中miR-122-5P的表达、临床病理学意义及生物学行为。方法选取食管鳞癌患者74例,收集手术切除的食管鳞癌组织及其配对的癌旁正常食管组织。采用原位杂交技术检测miR-122-5P的表达,比较食管鳞癌组织与癌旁正常食管组织miR-122-5P表达差异,分析其表达及与肿瘤直径、病理分级、淋巴结转移等临床病理特征的关系。结果miR-122-5P在食管鳞癌中的阳性表达率35.1%(26/74)明显低于癌旁正常食管组织77.0%(57/74)(χ^(2)=26.363,P=0.000)。miR-122-5P与食管鳞癌的肿瘤部位、浸润深度表达差异有统计学意义(χ^(2)=16.662,P=0.000;χ^(2)=10.723,P=0.005)。食管鳞癌组织中miR-122-5P的表达水平与患者性别、年龄、病理类型、肿瘤直径、病理分级、脉管转移、神经转移及淋巴结转移差异均无统计学意义(P>0.05)。结论miR-122-5P在食管鳞癌组织和癌旁组织表达不同,食管鳞癌组织中表达下调,推测其可能具有抑癌基因的功能。

DR患者外周血miR-1281和miR-122的变化及其与视网膜病变严重程度的关系

目的:探究糖尿病视网膜病变(DR)患者外周血miR-1281和miR-122的变化及临床意义。方法:选取2型糖尿病非视网膜病变患者(NDR组)55例、非增殖型DR患者(NPDR组)42例、增殖型DR患者(PDR组)30例及健康人群40例(对照组)作为研究对象,使用实时荧光定量聚合酶链反应测定其血清miR-122和miR-1281的相对表达量。结果:NPDR组和PDR组患者血清miR-122水平显著高于对照组和NDR组,且PDR组患者显著高于NPDR组,差异有统计学意义(P<0.05);miR-1281水平在NDR组、NPDR组和PDR组中均显著高于对照组,且其表达水平在NDR组、NPDR组和PDR组中显著上升,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-122和miR-1281与患者病程、糖化血红蛋白及HOMA-IR指数均存在显著正相关;miR-122和miR-1281对于鉴别增殖型DR的曲线下面积分别为0.81和0.86。结论:血清miR-122和miR-1281表达在DR患者中增加,可用作DR严重程度的评价指标。

非ST段抬高心肌梗死Killip分级与血清miR-33、miR-122表达水平、心电图QRS波时限相关性分析

目的研究非ST段抬高心肌梗死患者基利普分级(Killip)与血清微小RNA33(microRNA-33,miR-33)、微小R NA-122(microR NA-122,miR-122)水平及心电图QRS波时限的关系,为非ST段抬高心肌梗死疾病评估提供理论基础。方法本研究为前瞻性病例对照研究,选取南充市中心医院2018年10月—2021年1月治疗的心肌梗死患者96例为观察组,根据Killip分级等级分为Ⅰ级(21例)、Ⅱ级(42例)、Ⅲ级(19例)和Ⅳ级(14例)。选取同期在该院体检健康的成年人80名为对照组。对比全部受试者血清miR-33、miR-122水平和心电图QRS波时限。采用Pea rson相关分析冠心病患者血清miR-33、miR-122水平及心电图QRS波时限与Killip分级的关系。结果不同Killip等级患者血清miR-33、miR-122水平及心电图QRS波时限对比,差异有统计学意义(F=72.16、56.81、23.40,P均<0.001);其中KillipⅣ级患者的miR-33、miR-122水平和心电图QRS波时限高于对照组Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级,KillipⅢ级患者的miR-33、miR-122水平和心电图QRS波时限高于对照组Ⅰ级、Ⅱ级,KillipⅡ级患者的miR-33、miR-122水平和心电图QRS波时限高于对照组Ⅰ级,差异具有统计学意义(t=2.15~13.77,P均<0.05)。经Pea rson相关分析得出,患者血清miR-33、miR-122水平及心电图的QRS波时限均与Killip分级呈正相关(r=0.411、0.398、0.428,P均<0.001)。结论非ST段抬高心肌梗死患者血清miR-33、miR-122水平、心电图QRS波时限和Killip分级呈正相关,可为非ST段抬高心肌梗死患者的病情评估提供一定的临床参考价值。

Taqman探针实时荧光定量PCR检测肝脏疾病患者血清中miR-122的表达水平及其临床意义

目的:运用Taqman探针实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测肝脏疾病患者血清中miR-122的表达水平并探讨其临床意义。方法:设计miR-122及U6 snRNA的茎环引物和Taqman探针,运用Taqman探针实时荧光定量PCR检测27例肝癌术前(HCC)患者、15例乙型肝炎(hepatitis B)患者、15例丙型肝炎(hepatitis C)患者、15例正常对照者(HC)、11例肝癌术后(PHCC)患者及10例肝癌术后复发(recurrence)患者血清中miR-122的表达水平,并分析miR-122与肝脏疾病相关标志物的关系。结果:Taqman探针实时荧光定量PCR方法能检测血清中miR-122的表达。HCC、hepatitis B、hepatitis C及recurrence患者血清中miR-122的表达水平均高于HC和PH-CC患者(P<0.05),hepatitis C患者血清miR-122表达水平高于HCC、hepatitis B和recurrence患者(P<0.05),但HCC、hepatitis B和recurrence患者血清miR-122的表达水平无明显差异(P>0.05),PHCC患者血清miR-122的表达水平比HCC和recurrence患者低(P<0.05)。血清乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性和(或)乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)阳性患者血清miR-122的表达水平高于阴性者(P<0.05)。血清丙型肝炎病毒抗体(HCV-Ab)阳性患者血清miR-122的表达水平高于阴性者(P<0.05)。血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)与miR-122的表达水平有正相关性(r=0.34,P<0.05)。血清甲胎蛋白(AFP)≥400μg/L组血清miR-122的表达高于AFP<400μg/L组(P<0.05)。结论:Taqman探针实时荧光定量PCR适用于检测血清miR-122的表达水平。在HCC、hepatitis B、hepatitisC及recurrence患者血清中miR-22均有不同程度的增高,尤其是hepatitis C患者,且PHCC患者血清miR-122表达下降,复发后升高。血清miR-122的表达与肝脏疾病的某些指标有关,提示血清miR-122可作为肝脏疾病,特别是肝癌早期诊断、手术疗效及预后判断的新指标。

miR-122-5p通过靶向NOP14抑制黑素瘤的细胞增殖

目的探讨在黑素瘤组织中miR-122-5p的表达情况,同时研究miR-122-5p对人黑素瘤细胞株SK-MEL-110和A375细胞增殖、细胞周期及凋亡的调控效应。方法荧光定量PCR检测miR-122-5p在黑素瘤和色素痣组织中的表达;培养SK-MEL-110和A375细胞,瞬时转染miR-122-5p inhibitor及阴性对照inhibitor后,荧光定量PCR检测miR-122-5p的表达,MTT及流式细胞仪方法检测对细胞增殖、周期和凋亡的影响,荧光定量PCR和Western Blot法检测NOP14的mRNA和蛋白水平;应用双荧光素酶基因报告法进一步验证NOP14是否为miR-122-5p的靶基因。结果 miR-122-5p在人色素痣和黑素瘤组织中的相对表达量分别为1.23±0.270和7.65±1.37。转染miR-122-5p inhibitor后,miR-122-5p在SK-MEL-110和A375细胞中的相对表达量分别为0.21±0.08和0.17±0.05。miR-122-5p inhibitor可以显著抑制黑素瘤细胞株SK-MEL-110和A-375细胞的增殖能力,明显增加G1期细胞的比例,但对SK-MEL-110和A-375细胞的凋亡没有明显影响。转染miR-122-5p inhibitor对NOP14 mRNA水平没有明显的影响,但可以显著提高NOP14的蛋白水平表达。荧光素酶报告基因检测显示,共转染miR-122-5p mimics和野生型psi-CHECK2-3′UTR质粒组相对荧光素酶活性为0.21±0.14,较NC和野生型psi-CHECK2-3′UTR质粒转染组(0.56±0.1)显著下降(P<0.01)。结论 miR-122-5p在黑素瘤组织中高表达,提示miR-122-5p可能参与黑素瘤的发生发展过程。miR-122-5p可能通过NOP14影响SK-MEL-110和A-375细胞的周期,进而抑制细胞的增殖。

实时荧光定量RT-PCR检测肝癌组织中miR-122a及miR-224的表达

目的运用实时荧光定量RT-PCR方法分析miR-122与miR-224两种miRNAs在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达,探讨以miRNAs为靶点在早期肝癌中的临床诊断意义。方法采用基于2(-△△CT)的实时荧光定量RT-PCR法对35例肝癌组织及癌旁组织的miR-122a及miR-224进行了定量分析,结果经由Northernblot验证。结果与正常组织相比,在所有的被检肝癌组织中,均发现了miR-122a有不同程度的表达下调(P<0.01),而上述肝癌组织中的miR-224的定量结果显示该miRNA表达显著增加(P<0.001)。结论HCC组织中存在上述两种miRNAs表达水平的改变,实时荧光定量RT-PCR法为早期、准确的在临床上检测肝组织癌变提供了新的思路。

氧化苦参碱对乙肝病毒的抑制作用及对miR-122表达的影响

目的:探讨氧化苦参碱抗乙型肝炎病毒的作用机制。方法:用不同浓度的氧化苦参碱处理Hep G2.2.15细胞,采用cck-8法检测不同药物浓度对Hep G2.2.15细胞增殖的影响;氧化苦参碱处理Hep G2.2.15细胞72 h后收集实验组和对照组上清和细胞,检测氧化苦参碱对上清中HBs Ag、HBe Ag和HBV DNA的抑制作用以及对细胞中mi R-122的表达的影响。结果:药物浓度在4 mg/m L及以下的细胞存活率均高于95%;药物处理Hep G2.2.15细胞后72 h对HBs Ag、HBe Ag和HBV DNA的抑制率分别是66.26%、46.53%和65.95%,mi R-122的相对表达量是对照组的3.5倍。结论:氧化苦参碱有可能通过提高细胞中mi R-122的表达从而抑制病毒的复制和抗原的表达。