甘蔗割手密种转录因子NAP亚家族的鉴定及SsNAP2a参与叶片衰老的功能分析

NAP(NAC-like,activated by apetala3/pistillata)是转录因子NAC基因家族中一类参与调控植物生长发育、叶片衰老及响应激素和非生物胁迫应答的亚家族。本研究利用甘蔗割手密种基因组数据和生物信息学方法,首先,基于比较基因组学对NAP亚家族成员进行鉴定、系统进化分析、保守结构域及顺式调控元件预测;其次,克隆获得割手密种SsNAP2的等位基因SsNAP2a,分析该基因在不同生长发育阶段的表达及其在激素和非生物胁迫下的表达特征;最后,利用瞬时表达和亚细胞定位分析SsNAP2a基因的功能。结果表明,在割手密种基因组中共鉴定5个NAP亚家族成员,亚细胞定位预测所有成员编码蛋白均定位于细胞核上,这些基因的Ka/Ks比值均小于1,表明纯化选择在演化中起到关键作用。系统聚类分析表明,5个代表性的被子植物(拟南芥、菠萝、水稻、玉米和高粱)与已报道的12个物种及甘蔗的NAP亚家族成员,共计46个,分为4个Clade,其演化的顺序Clade I>Clade II>Clade III>Clade IV。此外,在SsNAP亚家族成员的启动子区域预测到较多响应脱落酸和茉莉酸、低温等逆境胁迫的顺式作用元件,推测其参与多种激素和非生物胁迫相关应答通路。进一步,从割手密种SES208中克隆到SsNAP2a基因,该cDNA全长序列1173 bp(GenBank登录号为OQ335094),编码390个氨基酸残基,其与等位基因SsNAP2编码蛋白的序列相似性为97.70%,有10个氨基酸残基的差异,表明同源8倍体的割手密种等位基因序列差异较大。qRT-PCR分析表明,SsNAP2a基因在割手密种不同生长发育阶段中组成型表达,尤其在衰老的蔗皮和根中的表达量最高;在乙烯利(ethylene,ET)、脱落酸(abscisic acid,ABA)、4℃低温和40℃高温处理下,其表达量呈现显著诱导表达;而在8%聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)胁迫下显著下调表达。亚细胞定位表明,SsNAP2a融合蛋白定位在细胞核上。瞬时过表达SsNAP2a基因7 d后,本氏烟(Nicotianabenthamiana)叶片有明显的卷曲、皱缩等衰老现象,ET合成相关基因(NtEFE26,NtAccdeaminase)显著上调表达,而水杨酸、茉莉酸和ABA合成相关基因(NtPR-1a/c、NtPR3和NtAREB1)显著下调表达,表明SsNAP2a基因参与多种激素信号传导途径诱发叶片衰老。以上研究结果为挖掘甘蔗NAP亚家族基因成员参与叶片衰老的生物学功能奠定了研究基础,也为培育甘蔗抗衰老分子育种提供候选的基因资源。

中国老年人午睡时长和夜间睡眠与抑郁症状的关联:基于2020年CHARLS数据的实证分析

背景随着我国进入中度老龄化社会,老年人心理健康问题逐年增加,而生活习惯与老年人的心理健康密切相关。目的探讨我国老年人午睡时长、夜间睡眠与抑郁症状的关系,基于生活习惯角度推荐睡眠时间,为老年人抑郁早期防控提供科学依据。方法基于2023-11-16公开发布第五轮(2020年)中国健康与养老追踪调查项目(CHARLS),纳入符合研究标准的8233名为研究对象。采用抑郁评定量表(CSE-D10)评估老年人抑郁症状,午睡时长划分5级:不午睡、<30 min、30~59 min、60~89 min、≥90 min,夜间睡眠分为5级:≥8 h、7~<8 h、6~<7 h、5~<6 h、<5 h。采用多因素Logistic回归分析探究影响老年人发生抑郁症状的因素,随机森林模型分析午睡时长、夜间睡眠在老年人发生抑郁症状中的重要程度,限制性立方样条曲线进一步探索午睡时长、夜间睡眠时长与抑郁症状发生风险之间的剂量-反应关系。结果2020年调查期间,中国老年人抑郁症状的发生率为24.84%(2045/8233)。多因素Logistic回归分析结果显示,午睡时长30~59 min是老年人发生抑郁症状的保护因素(OR=0.814,95%CI=0.673~0.985,P=0.034),夜间睡眠时间<5 h是老年人发生抑郁症状的危险因素(OR=1.705,95%CI=1.435~2.027,P<0.001)。女性、未婚/分居/离异/丧偶、失能、身体疼痛、强度体力活动、自评健康状况下降、生活满意度下降、卒中、帕金森病会增加老年人发生抑郁症状的风险(P<0.05)。随机森林模型显示,午睡时长、夜间睡眠时间对抑郁症状影响的重要性较高。午睡时长与发生抑郁症状之间存在非线性关系(P_(nonlinear)<0.05),老年人发生抑郁症的风险在午睡时长30 min后随着时间的增加而持续降低,最低水平约为50 min,午睡时长超过75 min后抑郁症状的发生风险会增加。老年人患抑郁症状的发生风险在夜间睡眠6 h后随着时间的增加而持续降低,最低水平约为7 h,睡眠时间超过9 h后抑郁的风险会增加(Poverall<0.05)。结论中国老年人群抑郁症的患病率较高(24.84%),午睡时长、夜间睡眠的持续时间与抑郁症之间呈J型关系,建议老年人每天午睡30~75 min,适度的午睡时长有效降低老年人发生抑郁症状的风险,同时夜间睡眠6~9 h降低抑郁症状的发生风险,对老年人群抑郁症的早期防控具有一定的意义。

利用粉煤灰合成低硅铝比NaP分子筛

以粉煤灰分级处理获得的硅铝组分Na2SiO3和NaAlO2为原料,通过水热反应制备了NaP型分子筛.考察了钠盐不同阴离子和有机空间位阻剂对NaP分子筛制备的影响,优化了水热合成NaP分子筛的工艺参数,采用X射线衍射(XRD)、扫描电子显微镜(SEM)和BET方程对NaP分子筛产品的晶型、形貌和孔容进行分析表征,对NaP分子筛吸附水溶液中Ni2+的性能进行了评价.结果表明,合成NaP分子筛的最佳原料摩尔比为n(Na2O)∶n(SiO2)∶n(Al2O3)∶n(H2O)=3.23∶1.95∶1∶226,反应温度为120℃,晶化时间为8h.当钠盐中阴离子为Br-时,可增大P型分子筛产率并提高其纯度.添加有机空间位阻剂三乙醇胺(TEA)[n(TEA)∶n(Al2O3)=1∶1]时,合成的P型分子筛粒径较小且具有较大的孔容,此时对应的Ni2+去除率较高,可达96.2%.

表达幽门螺杆菌NAP蛋白的减毒沙门疫苗菌株预防幽门螺杆菌感染

目的建立表达幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)中性粒细胞活化蛋白(Hp-NAP)的减毒沙门疫苗菌,并利用人类幽门螺杆菌感染的小鼠模型研究疫苗菌对Hp感染的免疫保护作用。方法利用分子克隆技术构建携带Hp-NAP基因的重组原核表达质粒pTrc99A-NAP,经PCR及酶切鉴定后测定其基因序列,并与美国国立医学图书馆基因文库中相关序列的同源性进行比较。重组质粒pTrc99A-NAP转化减毒伤寒沙门菌SL3261,培养后筛选阳性菌落,抽提质粒进行PCR及酶切鉴定。表达的Hp-NAP蛋白用SDS-PAGE和West-blotting进行鉴定,用薄层扫描分析蛋白含量。C57BL/6小鼠随机分成4组,分别灌胃给予生理盐水(A组)、减毒鼠伤寒沙门菌SL3261(B组)、携带pTrc99A的SL326组(C组)、携带pTrc99A-NAP的SL326组重(D组)。免疫后4周,予Hp攻击,攻击菌量107CFU/只,灌胃2次,每日1次。攻击4周后处死动物,取胃组织分别行改良Giemsa染色及定量细菌培养,观察Hp定植情况。结果核苷酸序列测定及同源性分析证实,克隆的Hp-NAP基因与GenBank中相关序列的同源性为98%(397/402),氨基酸序列的同源性为98%(131/133)。pTrc99A-NAP转化的减毒沙门菌,可表达Mr约15000的Hp-NAP蛋白,表达量约占菌体蛋白量的37·5%;表达的新生蛋白能与小鼠抗Hp血清特异性反应,具有良好的免疫原性。同空白对照组、SL3261组和SL3261(pTrc99A)组相比,表达Hp-NAP的疫苗株组实验动物的胃组织Hp定植密度明显下降(P<0·05)。结论成功构建表达Hp-NAP的减毒沙门疫苗菌;重组疫苗菌对小鼠Hp感染具有一定免疫预防作用,可作为未来多组分重组减毒沙门疫苗菌的侯选菌株之一。

植物转录因子NAP亚家族的研究进展

植物转录因子NAP(NAC-Like,Activated by AP3/PI)是近年来发现的一类与调控植物生长发育、控制叶片衰老以及响应外界环境胁迫等功能有关的转录因子,是NAC(NAM、ATAF1/2和CUC2)家族中的一个重要成员,也是一类植物特有的转录因子。转录因子NAP在结构上具有NAC家族的保守结构,即在N端具有保守的NAC区以及在C末端具有相对多样性的TAR区,但也有不同于其它NAC亚家族的一些特点,如其TAR区也有一定的保守性等;同时,NAP亚家族的基因表达产物主要集中在细胞核中,表明转录因子NAP是一个核蛋白;再者转录因子NAP的基因主要包括3个外显子和2个内含子。自从第一个转录因子NAP于1998年由Robert等在拟南芥中对控制花发育的AP3/PI的靶基因进行研究时发现以来,目前已在水稻、小麦、大豆、棉花、竹子、葡萄、番红花等植物中相继发现,表明NAP是存在于植物界中的一个特有的转录因子。转录因子NAP具有多种生物学功能,广泛参与植物种子、根、花等的生长发育,对植物生长发育过程起着重要的调节作用;与此同时,转录因子NAP也在叶片凋亡过程中起着举足轻重的作用,对叶片在衰老过程中涉及到的大分子物质的降解以及营养物质的再分配等过程起着重要的调控作用;而且,转录因子NAP对包括干旱、盐渍、冷害等外界环境胁迫有一定的响应,是一类参与调控植物体内各种生理反应的关键因子;同时,转录因子NAP也与植物尤其是农作物的品质有密切的关系,这也为农作物育种提供了一种新的思路和方法。最新研究表明,NAP主要受脱落酸和乙烯调控,已发现一个定位在高尔基体的PP2C家族中的成员SAG113为转录因子NAP的一个直接的靶基因,而且发现SAG113在控制气孔运动方面尤其是在衰老叶片中可能是ABA调控中的一个负调控元件,通过酵母杂交试验以及电泳迁移率变动分析技术得出转录因子NAP受到ABA的调控并直接与其靶基因SAG113启动子区域的一个特定的区域进行专一性的结合,即在衰老叶片中转录因子NAP通过ABA-NAP-SAG113 PP2C调节链提高其靶基因SAG113的表达,以及通过促进气孔开放从而导致水分丧失和通过足够的氧气进入到组织中使得乙烯释放进而使呼吸作用加快等加速叶片衰老的信号这一调控机制。文章主要对NAP转录因子的结构特点、生物学功能以及调控机制等方面在植物中的研究现况进行较为详细的阐述,以期为后续研究提供一定的参考。

膨润土碱熔活化水热合成NaP沸石分子筛

为利用膨润土合成NaP沸石分子筛,研究了膨润土的成分,该膨润土的主要成分为蒙脱石和石英。采用向膨润土中加碱在850℃碱熔1 h的方法,活化了膨润土中的蒙脱石和石英,获得了高活性的原料。采用水热合成的方法,通过正交实验,确定了合成NaP沸石分子筛的优化条件:二氧化硅与三氧化二铝物质的量比为5、氧化钠与二氧化硅物质的量比为1.6、水与氧化钠物质的量比为50、50℃老化2 h、95℃晶化9 h。X射线衍射和扫描电镜分析结果表明,所得产物为纯净的NaP沸石分子筛,平均粒径为1μm,干沸石的钙离子交换量(以碳酸钙计)为315 mg/g。

有机空间位阻剂对NaP分子筛的调控作用

以粉煤灰中提取出的硅酸钠和铝酸钠为原料,通过水热合成法制备NaP型分子筛。通过正交实验优化了晶化时间、晶化温度和溶液硅水比等工艺参数,提出了通过空间位阻效应调控晶粒生长过程的方法,探索了结构空间位阻作用对NaP型分子筛生长过程晶型、粒径的调控规律。采用XRD、FI-IR、SEM、BET等手段对产物的晶型、粒径和形貌进行表征,并对不同条件下制备的NaP型分子筛的吸附性能进行了评价。结果表明,水热反应体系中引入空间位阻效应能有效调控Na P型分子筛的形貌和粒径;空间位阻效应的影响规律为环状结构>链状结构,长链结构>短链结构。吸附性能测试表明,Zn^(2+)有效吸附去除率可达99.8%。

GST-NAP融合蛋白可溶性表达及柱上切割GST标签

利用基因工程的方法,以实验室保存的p MAL-C2X-NAP质粒为模板,PCR扩增NAP基因,构建重组质粒p GEX-NAP.重组质粒通过酶切和测序鉴定后转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),再经IPTG低温诱导获得可溶性GST-NAP融合蛋白,最后利用谷胱甘肽琼脂糖凝胶树脂进行纯化,Prescission蛋白酶进行柱上切割去除GST标签.结果表明,p GEX-NAP重组质粒构建正确,在大肠杆菌中经IPTG低温诱导表达,可获得大量可溶性GST-NAP融合蛋白.Prescission蛋白酶柱上切割去除GST标签后,经Western Blot验证NAP蛋白能被兔抗NAP多克隆抗体特异识别.

煤系高岭土合成NaP分子筛的XRD分析及表征

本文将高岭土在一定温度下煅烧1 h,使高岭土变成无定形态的活性偏高岭土,再调整合成体系的配比,最后水热晶化合成了NaP分子筛。采用XRD对原矿、预处理产物和合成的产物进行了分析,采用SEM对产物进行了形貌表征,用激光粒度分析仪对产物粒度进行了分析,最后用化学滴定法测定了产物的钙镁离子交换量。结果表明:在800℃恒温1 h能有效活化高岭土,在n(SiO2)/n(Al2O3)=3.5、n(Na2O)/n(SiO2)=1.4、n(H2O)/n(Na2O)=45、室温老化3 h、95℃晶化9 h的条件下,获得的晶化产物为NaP分子筛,平均粒径为2.298μm,Ca2+交换量为315 mg CaCO3/g干沸石,Mg2+交换量为83 mg MgCO3/g干沸石。

NaP沸石分子筛的合成及软化硬水的实验研究

按照物质的量之比为4.2Na2O.Al2O3.3SiO2.189H2O的比例,以煤系高岭土为主要原料,合成了NaP沸石分子筛,并用合成的产物作为硬水软化剂,对模拟硬水和自来水进行了软化实验,结果表明:在室温、pH=7的条件下,分别用0.9gNaP沸石分子筛,对50mL初始浓度为400.15mg/L的Ca2+溶液和50mL初始浓度为105.14mg/L的Mg2+溶液进行处理,反应时间为10min,Ca2+和Mg2+去除率均达到97%以上。在上述相同条件下软化自来水,可以使水中的Ca2+减少95.43%、Mg2+减少93.27%。

NAP-2(73)的生物信息学分析及其多克隆抗体制备

目的生物信息学分析NAP-2(73),以及制备其多克隆抗体。方法生物信息学分析预测出NAP-2(73)蛋白质的等电点、亲水性、抗原性等理化特性,以这些分析预测为依据,设计出一段抗原多肽,免疫家兔得到多克隆抗体,并用ELISA、West-ernblot等方法鉴定其滴度和特异性。结果对NAP-2(73)的功能性位点、抗原性和亲水性等进行了预测分析,成功制备了多克隆抗体,其血清中抗NAP-2(73)抗体效价为1:729000,并以此抗体证实了NAP-2(73)在肝癌细胞和组织中的表达。结论利用生物信息学,高效价和特异性强的抗NAP-2(73)抗体被成功制备,为进一步研究奠定了基础。

以硅藻土为原料合成NaP型分子筛

以硅藻土为起始原料,采用低温水热合成反应合成NaP型分子筛。最佳反应条件为:反应体系摩尔配比9SiO2∶Al2O3∶4.8Na2O∶95.7H2O,晶化温度90℃,晶化时间24h。采用XRD对结晶产物的结晶度进行了表征,利用离子交换法测定了合成分子筛的钙离子交换容量。结果表明,以硅藻土为原料可合成出结晶度较高、质量较好的NaP沸石。

动态晶化法合成NaP分子筛的研究

以硅酸钠和偏铝酸钠为原料,采用水热动态晶化法制备NaP分子筛,通过XRD,SEM,BET,PSD,FTIR表征手段对样品进行分析,考察了不同的硅铝比、晶化温度和动态转速对分子筛合成的影响,并对晶化过程进行了研究。结果表明在一定范围内提高初始原料的硅铝比、晶化温度、晶化时间和动态转速,有利于提高NaP分子筛的纯度。通过优化合成条件,在硅铝比为2.00,晶化温度为120℃,晶化时间为8 h,动态转速为70 r/min的条件下合成了粒径约为1.8μm的NaP分子筛。与静态晶化相比,动态晶化过程成核期较短,导致所需晶化时间显著降低,且合成产物具有较大的比表面积和孔径分布。

幽门螺杆菌中性白细胞激活蛋白与麦芽糖结合蛋白融合表达产物rMBP-NAP的分离纯化

目的 :从E .coliTB1(pMAL c2x napA)细菌中分离纯化与麦芽糖结合蛋白融合表达的重组幽门螺杆菌中性白细胞激活蛋白rMBP NAP ,筛选幽门螺杆菌口服疫苗抗原组分。方法 :0 .3mmol/LIPTG在 37℃ ,2 30r/min条件下诱导基因工程菌E .coliTB1(pMAL c2x napA) 3h。 4℃ 4 0 0 0g离心 2 0min收获细胞。过柱缓冲液重悬细胞 ,-2 0℃冻存过夜 ,在冰水浴中超声破碎工程菌 ,4℃ ,90 0 0g离心 30min ,十二烷基磺酸钠 聚炳烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)分析工程菌中rMBP NAP可溶性 ;低相对分子质量蛋白Marker做标准对照 ,GeneTool测定诱导蛋白相对分子质量。FPLC分子排阻层析法分离rMBP NAP ;SDS PAGE凝胶扫描法测纯化蛋白质的纯度 ,Bradford法检测蛋白质含量。结果 :E .coliTB1(pMAL c2x napA)诱导表达的rMBP NAP主要以可溶性形式存在于超声上清中 ,占上清中蛋白总量的 39.35 % ,相对分子质量约为 5 70 0 0 ,与预期结果一致 ;分子大小排阻层析一步法纯化rMBP NAP纯度可达 91% ,含量可达 0 .12 1g/L。结论 :FPLC分子排阻层析可从大肠工程菌超声菌液中快速纯化rMBP NAP。

六盘水煤矸石酸浸渣制备NaP分子筛

将煤矸石酸浸渣在750℃下煅烧除炭,与Na_2CO_3按质量比1∶1.2混合,在800℃煅烧1.5 h,制备Na P分子筛,优化工艺条件为:n(SiO_2)/n(Al_2O_3)为4.5,n(Na_2O)/n(SiO_2)为1.5, n(H_2O)/n(Na_2O)为35,94℃晶化9 h。结果表明,煤矸石酸浸渣经碱熔可完全活化,采用水热晶化的方法,可制备结晶良好的NaP分子筛。

Trx-NAP 5融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其活性检测

目的:用大肠杆菌表达获得重组线虫抗凝血肽5(rNAP 5),为研究开发NAP5的功能与应用提供原料来源。方法:将扩增的NAP5基因经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后与表达载体pET-32a连接。构建好的重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)后,分别经IPTG和乳糖诱导表达,并探讨诱导表达条件,分析表达产物的可溶性情况。表达产物经镍亲和纯化后,用凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(aPTT)检测体外抗凝活性。结果:成功构建了pET-32a/NAP5表达载体,IPTG和乳糖均能诱导目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中高效地可溶性表达。优化条件下每升LB培养基可获可溶性目的融合蛋白量达65.3mg。纯化的蛋白能明显延长PT及aPTT,7.0mg/L的蛋白平均约延长5.09倍aPTT,2.55倍PT。结论:在大肠杆菌中成功表达了具有很好生物活性的Trx-NAP5融合蛋白,为研究开发NAP5的功能与应用奠定了基础。

神经短肽NAP对体外培养的兔视网膜神经细胞的作用

目的以感染神经营养因子4-神经保护短肽融合基因(NT4-NAP)的兔虹膜色素上皮细胞(IPECs)为替代分泌细胞,探讨NAP对兔视网膜神经上皮细胞生长的作用。方法分别培养兔IPECs和视网膜神经上皮细胞;构建NT4-NAP融合基因,同时构建重组腺相关病毒载体rAAV-GFP和rAAV-NAP(含融合基因NT4-NAP),采用斑点杂交法测定病毒滴度。rAAV-GFP感染体外培养的兔IPECs,以荧光表达检测病毒的感染情况。rAAV-NAP感染兔IPECs3d后收集含NAP蛋白的上清液,将其加入兔视网膜神经上皮细胞的培养基中,观察细胞的生长状况,同时以未加上清液的兔视网膜神经上皮细胞为对照。结果经斑点杂交证实rAAV-GFP滴度为2.25×1011cfu/mL,rAAV-NAP滴度为2.25×1010cfu/mL。感染rAAV-GFP的兔IPECs表达出明显的绿色荧光。在加入含有NAP蛋白上清液的培养基中,兔视网膜神经上皮细胞生长良好,存活细胞数目多,细胞突起粗而长,培养14d时其突起长度〔(14.6±1.1)μm〕与对照组〔(3.1±0.6)μm〕相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论神经短肽NAP对体外培养的兔视网膜神经上皮细胞有促进生长的作用。

油页岩灰合成NaP沸石对沼液中氮磷吸附性能的研究

基于"以废治污"科学理念,本文以废弃油页岩干馏灰渣为原料,采用碱熔融-水热法得到油页岩灰渣与NaP沸石复合物,经CaCl_2改性处理后作为吸附剂。实验表明,制备的吸附剂对沼液中的氮磷有良好的回收效果,对NH_3-N、磷的回收率分别达到45.7%~82.6%、65.3%~85.6%。对沼液中的NH_3-N、磷的回收分别在初始8h和2h内,吸附效果随吸附剂的添加量的增加而增加。吸附剂对沼液中NH_3-N、磷的去除回收机理分别是离子交换作用与沉淀作用。

嗜中性活性肽2(NAP-2)在人肝癌细胞株和肝癌组织的表达

目的:探讨NAP-2在人肝癌细胞株SMCC-7721和人肝正常细胞株HL-7702、肝癌组织及其癌旁组织表达的差异性。方法:采用免疫细胞化学法(Immunocytochemistry,ICC)检测人肝癌细胞株SMCC-7721和人肝正常细胞株HL-7702中NAP-2蛋白的表达,免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC)检测30例肝癌组织及其癌旁组织中NAP-2蛋白的表达。结果:NAP-2在人肝癌细胞株SMCC-7721表达率为100%,人肝正常细胞株HL-7702无表达。在肝癌组织中强阳性表达率为63.33%,癌旁组织无强阳性表达;经统计学分析,两者NAP-2的表达呈显著差异(P<0.01)。结论:NAP-2在肝癌发生、发展过程中可能起着一定作用。

rMBP-NAP依赖IL-12/IL-23轴对肝癌H22荷瘤小鼠的抑瘤作用研究

目的研究r MBP-NAP在肝癌H22荷瘤小鼠模型中的肿瘤生长抑制作用以及IL-12/IL-23在其发挥抗肿瘤作用中的角色。方法 BABL/c小鼠左前肢腋下皮下注射2×106个H22肿瘤细胞,建立荷瘤小鼠模型,荷瘤后第2天将小鼠随机分为两组,PBS组和r MBP-NAP组,并通过皮下瘤旁注射给药的方式进行治疗,期间监测肿瘤体积。取荷瘤小鼠脾脏制成单细胞悬液,分为对照组和抗体阻断组,同时加入丝裂霉素C处理过的H22细胞和r MBP-NAP与脾细胞共培养,抗体阻断组中分别加入anti-IL-12抗体和anti-IL-23抗体,对照组中加入同型抗体。于培养3 d和7 d后检测IFN-γ的表达。结果相对于PBS组,r MBP-NAP治疗组小鼠的肿瘤生长显著减缓。r MBP-NAP刺激后,荷瘤小鼠脾细胞分泌大量IFN-γ,共培养3 d和7 d后,IFN-γ表达持续累积。anti-IL-12抗体和anti-IL-23抗体阻断后,均可导致IFN-γ的表达量显著性下降。结论 r MBP-NAP能够显著性抑制H22荷瘤小鼠肿瘤的生长。