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Selection of phages and conditions for the safe phage therapy against Pseudomonas aeruginosa infections 被引量:2
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作者 Victor Krylov +13 位作者 Olga Shaburova Elena Pleteneva Sergey Krylov Alla Kaplan Maria Burkaltseva Olga Polygach Elena Chesnokova 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2015年第1期33-44,共12页
The emergence of multidrug-resistant bacterial pathogens forced us to consider the phage therapy as one of the possible alternative approaches to treatment. The purpose of this paper is to consider the conditions for ... The emergence of multidrug-resistant bacterial pathogens forced us to consider the phage therapy as one of the possible alternative approaches to treatment. The purpose of this paper is to consider the conditions for the safe, long-term use of phage therapy against various infections caused by Pseudomonas aeruginosa. We describe the selection of the most suitable phages, their most effective combinations and some approaches for the rapid recognition of phages unsuitable for use in therapy. The benefi ts and disadvantages of the various different approaches to the preparation of phage mixtures are considered, together with the specifi c conditions that are required for the safe application of phage therapy in general hospitals and the possibilities for the development of personalized phage therapy. 展开更多
关键词 pseudomonas aeruginosa BACTERIOphages phage therapy pseudolysogeny phage-bacteria INTERACTIONS phage-phage INTERACTIONS
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Common Preconditions for Safe Phage Therapy of <i>Pseudomonas aeruginosa</i>Infections
2
作者 V. Krylov E. Pleteneva +4 位作者 O. Shaburova M. Bourkaltseva S. Krylov E. Chesnokova O. Polygach 《Advances in Microbiology》 2014年第12期766-773,共8页
One of the approaches to the treatment of infections caused by multiply-(MDR) or extra drug- resistant (XDR) pathogenic strains may be application of bacterial viruses (bacteriophages)— phage therapy. Results of a lo... One of the approaches to the treatment of infections caused by multiply-(MDR) or extra drug- resistant (XDR) pathogenic strains may be application of bacterial viruses (bacteriophages)— phage therapy. Results of a long, but quite limited use of phage therapy in several Eastern European countries, as well as experiments on animal models in Western countries support the possibility to use phage therapy. However, given the role of phages in the evolution of bacterial pathogens, it is necessary to discuss and evaluate negative consequences of mass introduction of phage therapy, as the measures necessary for its safe use. We discuss some actions in case of transiting to world-wide use of phage therapy with purpose to prolong the active life of phage therapy and to diminish possible complications. 展开更多
关键词 phage Therapy Safety Measures pseudomonas aeruginosa
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铜绿假单胞菌耐药机制及治疗技术研究新进展 被引量:2
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作者 张昊亭 高福泉 张斌 《中国医药科学》 2024年第8期53-57,共5页
铜绿假单胞菌(PA)是最常见的条件致病菌之一,严重危害人类的健康。随着广谱抗生素的大量应用,导致多重耐药菌株的出现,从而使治疗更加棘手。研究发现,免疫力低下的人群容易诱发PA的感染,随着临床耐药PA检出率的增加及抗生素的治疗效果减... 铜绿假单胞菌(PA)是最常见的条件致病菌之一,严重危害人类的健康。随着广谱抗生素的大量应用,导致多重耐药菌株的出现,从而使治疗更加棘手。研究发现,免疫力低下的人群容易诱发PA的感染,随着临床耐药PA检出率的增加及抗生素的治疗效果减弱,部分患者的生活质量及预后受到很大影响。PA的感染难以控制的原因是复杂的耐药机制,其中包括生物膜的形成、孔蛋白的介导作用、外排泵以及抗菌灭活酶的产生等。由于抗生素的应用不能有效控制PA的感染,所以针对耐药机制在药物治疗方面进行研究,其中包括外排泵抑制剂、抗生素佐剂、相关灭活酶抑制剂、外膜透化剂。此外,噬菌体疗法、中药疗法、一氧化氮疗法及纳米技术等特殊治疗也展现出良好的治疗效果,疫苗领域及增强自身免疫力也是未来预防PA感染的重要研究方向。因此,研究PA的耐药机制及治疗技术对PA感染的预防和治疗具有深远的意义。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 耐药机制 治疗技术 噬菌体疗法 中药疗法 纳米技术
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一株铜绿假单胞菌噬菌体全基因组分析及与抗生素体外联合应用效果
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作者 王晋宇 张凯川 +3 位作者 王芮杰 高铎 蒋祺丰 贾坤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期727-738,共12页
旨在为解决耐药铜绿假单胞菌感染提供不同方法。以鸡源铜绿假单胞菌为宿主菌,从医院污水中分离纯化出铜绿假单胞菌噬菌体,并进行生物学特性研究与基因组学分析,同时采用棋盘法与三种抗生素联合应用测试其效果。结果显示:从医院污水中分... 旨在为解决耐药铜绿假单胞菌感染提供不同方法。以鸡源铜绿假单胞菌为宿主菌,从医院污水中分离纯化出铜绿假单胞菌噬菌体,并进行生物学特性研究与基因组学分析,同时采用棋盘法与三种抗生素联合应用测试其效果。结果显示:从医院污水中分离到一株铜绿假单胞菌噬菌体PaVOB,TEM显示病毒颗粒具有一个平均直径为73.02 nm的二十面体头部和一个平均长度为155.57 nm的长尾部,属于有尾噬菌体目,长尾噬菌体科,具有双链DNA基因组,宿主谱较窄,耐低温(-20℃)并且在37℃达到最适温度,有良好的酸碱耐受性,在pH为3~12时保持活性,最佳MOI为0.001,一步生长曲线显示潜伏期为10 min,爆发量为50 PFU·cell^(-1),吸附性试验表明PaVOB在10 min的吸附率为99.1%。PaVOB基因组全长为72179 bp,(G+C)%含量为54.81%,与VB PaeP FBPa1亲缘关系小于0.1,ORF预测显示,PaVOB包括74个ORF,软件预测均未发现毒力基因、耐药基因和tRNA存在。此外,抗生素联合应用结果显示,PaVOB与头孢曲松联合应用有协同作用,在效价为107 PFU·mL^(-1)时与恩诺沙星产生协同作用,与庆大霉素产生无关作用。铜绿假单胞菌噬菌体PaVOB对环境适应能力强,且基因组信息清晰,能够选择性地与不同抗生素联合应用发挥协同作用,具有治疗临床耐药铜绿假单胞菌感染的可能性。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 噬菌体 生物学特性 基因组学 抗生素联合应用
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铜绿假单胞菌噬菌体PaP2生物学特性的研究 被引量:12
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作者 黄建军 胡晓梅 +7 位作者 饶贤才 张克斌 金晓琳 周莹冰 李明 申晓冬 朱军民 胡福泉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第13期1133-1136,共4页
目的 确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP2的形态与大小、裂菌特性、最佳感染复数、一步生长特性等基本的生物学特性。方法 电镜观察纯化噬菌体颗粒 ;制备PaP2噬斑 ,观察其特点 ;提取噬菌体感染的细菌基因组 ,用SmaⅠ酶切 ,通过脉冲场电泳观... 目的 确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP2的形态与大小、裂菌特性、最佳感染复数、一步生长特性等基本的生物学特性。方法 电镜观察纯化噬菌体颗粒 ;制备PaP2噬斑 ,观察其特点 ;提取噬菌体感染的细菌基因组 ,用SmaⅠ酶切 ,通过脉冲场电泳观察酶切产物的带型特点 ;测定不同感染复数 ,培养 3 5h后细菌 噬菌体液中的噬菌体滴度 ;加入宿主菌及噬菌体使MOI =10 ,进行一步生长实验 ,在 0时刻和每隔 15min测定噬菌体滴度。结果 噬菌体PaP2头部直径约为 5 2nm ,无囊膜 ,有一短尾 ;噬斑雾状半透明 ,直径约 1~ 2mm ;被噬菌体感染的宿主菌基因组的SmaⅠ酶切产物带型 ,比未感染宿主菌的多出了 1条大于噬菌体基因组的片段 ;当MOI =10时宿主菌产生的子代噬菌体滴度最高 ;绘制出了一步生长曲线。结论 PaP2属短尾噬菌体科 ,是溶原性噬菌体 ;最佳感染复数是 10 ;感染宿主菌的潜伏期是 75min ,裂解期是 90min ,平均裂解量是 3 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌噬菌体 短尾噬菌体 溶原性 最佳感染复数 一步生长实验
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铜绿假单胞菌噬菌体PaP1生物学特性的研究 被引量:18
6
作者 李明 申晓冬 +4 位作者 周莹冰 黄建军 胡晓梅 饶贤才 胡福泉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期860-863,共4页
目的 确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP1的形态大小、核酸类型、裂菌特性、最佳感染复数和一步生长曲线等基本生物学特性。方法 对CsCl梯度离心纯化后的噬菌体PaP1颗粒进行电镜观察;提取PaP1基因组核酸,通过限制性内切酶图谱分析其核酸类型... 目的 确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP1的形态大小、核酸类型、裂菌特性、最佳感染复数和一步生长曲线等基本生物学特性。方法 对CsCl梯度离心纯化后的噬菌体PaP1颗粒进行电镜观察;提取PaP1基因组核酸,通过限制性内切酶图谱分析其核酸类型;制备PaP1的单个噬斑,观察噬斑特点;按照感染复数(MOI)分别为0 0 0 0 1、0 0 0 1、0 0 1、0 1、1和10加入噬菌体纯培养液和宿主菌,3 7℃160r/min培养3 5h后测定噬菌体滴度;加入噬菌体及宿主菌使MOI =10 ,3 7℃温育15min后进行一步生长实验,于0时刻和每隔10min取样5 0 μl测定上清中噬菌体滴度。结果 PaP1噬菌体头部呈多面体立体对称,直径约70nm ,无囊膜,有一个约60nm长的尾;PaP1噬斑直径约2mm ,圆形透明;当MOI为0 0 1时PaP1感染其宿主菌产生的子代噬菌体滴度最高;根据一步生长实验结果绘制出了一步生长曲线。结论 PaP1属于肌尾科裂菌性噬菌体,其基因组为双链DNA分子;最佳感染复数为0 0 1,感染宿主菌的潜伏期是2 0min ,爆发期是40min ,平均爆发量约为65。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌噬菌体 裂菌性 最佳感染复数 一步生长曲线
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铜绿假单胞菌噬菌体D204的生物学特性和基因组学研究 被引量:11
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作者 徐彬 高晶 +1 位作者 郭晓奎 秦金红 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期1-5,共5页
目的 针对铜绿假单胞菌多耐药菌的不断出现,寻找高效、广谱的铜绿假单胞菌噬菌体。方法 以医院临床上分离到的铜绿假单胞菌为宿主菌,从环境污水中分离纯化铜绿假单胞菌噬菌体,磷钨酸负染法电镜观察噬菌体的形态和大小,测定其效价、宿主... 目的 针对铜绿假单胞菌多耐药菌的不断出现,寻找高效、广谱的铜绿假单胞菌噬菌体。方法 以医院临床上分离到的铜绿假单胞菌为宿主菌,从环境污水中分离纯化铜绿假单胞菌噬菌体,磷钨酸负染法电镜观察噬菌体的形态和大小,测定其效价、宿主谱、酸碱稳定性和热稳定性,绘制一步生长曲线、吸附曲线和感染曲线,并抽取噬菌体DNA进行测序及分析。结果 分离到1株铜绿假单胞菌噬菌体,并命名为D204。D204在pH值为4~11及温度37~50℃环境下具有较高活性,电子显微镜观察发现此噬菌体由直径约为50 nm的多面体头部和约15 nm的短尾组成。一步生长曲线表明噬菌体在裂解宿主菌时,潜伏期为30 min,爆发期为40 min,裂解量约为160 pfu/cell。吸附曲线显示50 min时,其吸附率达95%以上。感染曲线显示当感染复数为0.1和1时,对宿主菌生长有抑制作用,在180 min后可完全抑制宿主菌生长。其基因组为环状双链DNA,全长为50 609 bp,GC含量为44.8%。预测共有75个开放阅读框。结论 分离、筛选出的铜绿假单胞菌噬菌体D204具有较强的裂解宿主的能力,其对酸碱和热比较稳定,裂解宿主时潜伏期较短,可以作为铜绿假单胞菌的储备噬菌体。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 噬菌体 基因组 生物学特性
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医院内宽嗜性铜绿假单胞菌噬菌体的分离筛选 被引量:5
8
作者 代芳芳 赵秀英 +4 位作者 于艳华 张立丽 陈铭 袁星星 李宁 《首都医科大学学报》 CAS 2013年第5期727-732,共6页
目的从未经处理的医院下水道污水中分离筛选宽嗜性铜绿假单胞菌噬菌体,检测其对临床常规检出的铜绿假单胞菌的嗜性覆盖范围,探究其潜在的临床治疗价值。方法用双层琼脂噬菌斑形成法对铜绿假单胞菌噬菌体进行分离鉴定和感染谱的筛选,并... 目的从未经处理的医院下水道污水中分离筛选宽嗜性铜绿假单胞菌噬菌体,检测其对临床常规检出的铜绿假单胞菌的嗜性覆盖范围,探究其潜在的临床治疗价值。方法用双层琼脂噬菌斑形成法对铜绿假单胞菌噬菌体进行分离鉴定和感染谱的筛选,并用重复片段PCR基因指纹方法 (repetitive element PCR genomic fingerprinting,Rep-PCR)进行感染谱内宿主菌同源性分析,确认噬菌体的感染谱;用双层琼脂噬菌斑形成法检测筛出的宽嗜性铜绿假单胞菌噬菌体对临床常规检出的铜绿假单胞菌的嗜性覆盖范围。结果从16家医院未经处理的下水道污水中分离到14株铜绿假单胞菌噬菌体,确定其中4株感染谱较广,4株宽嗜性噬菌体的交叉组合对临床日常分离30株铜绿假单胞菌吞噬覆盖率为96.7%(29/30);30株铜绿假单胞菌中对亚胺培南耐药菌株12株,对药敏实验全部药物敏感菌株5株,其他耐药菌株13株,4株宽嗜性噬菌体交叉组合对耐亚胺培南菌株吞噬覆盖率为91.7%(11/12),对药敏实验敏感菌株的吞噬覆盖率为100%(5/5),对其他耐药菌株交叉吞噬覆盖率为100%(13/13)。结论从分离鉴定的14株铜绿假单胞菌噬菌体中筛选出4株宽嗜性噬菌体,其交叉组合能够吞噬型解临床日常筛出30株铜绿假单胞菌中的29株,对耐亚胺培南和其他临床常规药物的耐药菌株的交叉吞噬覆盖率在90%以上,交叉组合吞噬覆盖率高,为其进一步在临床抗菌治疗方面的应用提供基础和依据。 展开更多
关键词 宽嗜性 铜绿假单胞菌噬菌体 铜绿假单胞菌 耐药菌株
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铜绿假单胞菌噬菌体PaP3基因组电转化宿主菌的条件初探 被引量:2
9
作者 周莹冰 申晓冬 +4 位作者 丛延广 李明 黄建军 胡晓梅 胡福泉 《医学研究生学报》 CAS 2007年第11期1134-1138,共5页
目的:研究将铜绿假单胞菌噬菌体PaP3基因组DNA电转入其宿主菌并获得噬斑的基本条件。方法:以铜绿假单胞菌PA3作受体菌,将噬菌体PaP3基因组DNA通过电转化导入受体菌中,研究细胞生长状态、感受态细胞的制备方式、电场强度、DNA浓度和... 目的:研究将铜绿假单胞菌噬菌体PaP3基因组DNA电转入其宿主菌并获得噬斑的基本条件。方法:以铜绿假单胞菌PA3作受体菌,将噬菌体PaP3基因组DNA通过电转化导入受体菌中,研究细胞生长状态、感受态细胞的制备方式、电场强度、DNA浓度和细胞密度等条件对转化效率的影响。结果:在含50μg/ml红霉素的LB培养液中培养宿主菌14—16h,以100mmol/L蔗糖溶液为介质,在25℃条件下制备感受态并使其浓度达到10μ/ml,电转参数为12kV/cm,300Ω,25μF,在此组条件下能获得较高的转化效率,最高可达2.1×10^3pfu/μg的DNA。结论:确定了一组电转条件,成功地将铜绿假单胞菌噬菌体完整基因组导入PA3中,并形成噬斑,为铜绿假单胞菌噬菌体的深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 噬菌体 基因组 电转化
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铜绿假单胞菌噬菌体PaP2的结构蛋白及其编码基因的研究 被引量:2
10
作者 黄建军 胡晓梅 +4 位作者 朱军民 申晓冬 李明 饶贤才 胡福泉 《医学研究生学报》 CAS 2004年第4期292-295,共4页
目的 :确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP2结构蛋白的构成及其编码基因。 方法 :CsCl梯度离心纯化噬菌体PaP2颗粒 ,SDS PAGE电泳 ,确定结构蛋白条带及其相对分子质量 ;然后电转印于PVDF膜上 ,用Edman降解法进行N端测序。根据所测的N端氨基酸... 目的 :确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP2结构蛋白的构成及其编码基因。 方法 :CsCl梯度离心纯化噬菌体PaP2颗粒 ,SDS PAGE电泳 ,确定结构蛋白条带及其相对分子质量 ;然后电转印于PVDF膜上 ,用Edman降解法进行N端测序。根据所测的N端氨基酸残基序列在PaP2预测基因编码的蛋白质中检索 ,从而逆推其编码基因。 结果 :SDS PAGE显示PaP2含有 10条带 ,其中 1、3、4、5、8、9等 6条带的含量足以回收进行N端测序 ,测得N端氨基酸残基分别依次为 :Met Ile Glu Leu Gly、Ala Ile Ser Pro、Ala Arg Phe Ile Asp、Ser Val Tyr Ala Gly、Ala Ile Ser Arg Asn 和Ser Phe Ser Leu Gly。据此推论出它们的编码基因分别是ORF18340 2 3889、ORF4 4 19 6 4 19、ORF16 5 89 1832 2、ORF82 74 95 30、OrF15 70 8 16 6 2 5、ORF75 6 3 830 9。 结论 :噬菌体PaP2含有 10个结构蛋白 ,其中 6个主要结构蛋白的编码基因分别是orf 2 4、orf 8、orf 2 3、orf 12、orf 2 2、orf 11。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 噬菌体 蛋白质N端测序 编码基因
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快速从医院废水中大规模分离铜绿假单胞杆菌噬菌体 被引量:4
11
作者 范华昊 范俊芬 +12 位作者 滑玉会 裴广倩 张文惠 张博 陈晨 李建彬 王晓娜 安小平 米志强 王琳 尹秀云 陈建魁 童贻刚 《生物技术通讯》 CAS 2012年第4期567-571,共5页
目的:从医院废水中快速分离多株不同的铜绿假单胞杆菌噬菌体,研究其生物学特性,为建立铜绿假单胞杆菌噬菌体库做准备。方法:利用噬菌斑法从未经处理的医院污水中分离和鉴定铜绿假单胞杆菌噬菌体,根据感染谱的不同确定它们为不同的铜绿... 目的:从医院废水中快速分离多株不同的铜绿假单胞杆菌噬菌体,研究其生物学特性,为建立铜绿假单胞杆菌噬菌体库做准备。方法:利用噬菌斑法从未经处理的医院污水中分离和鉴定铜绿假单胞杆菌噬菌体,根据感染谱的不同确定它们为不同的铜绿假单胞杆菌噬菌体;重点研究其中一株宿主谱较广的噬菌体的生物学特性,采用负染法电镜观察噬菌体的形态和大小,提取该噬菌体的基因组并进行酶切电泳分析,测定噬菌体感染复数并观察其一步生长曲线。结果:通过噬菌斑法分离出90株铜绿假单胞杆菌噬菌体。电镜观察显示,噬菌体Pa27P1头部呈立体对称,有一长尾;酶切结果显示,噬菌体Pa27P1的基因组为双链DNA;生长曲线表明噬菌体Pa27P1感染宿主菌的潜伏期为25 min,爆发时间为25 min,裂解量为514。结论:90株铜绿假单胞杆菌噬菌体中有5株具有较广的噬菌谱,其组合能裂解所有18株铜绿假单胞杆菌,为深入研究铜绿假单胞杆菌噬菌体的生物学特性及其功能提供了依据。 展开更多
关键词 铜绿假单胞杆菌噬菌体 大规模分离 细菌耐药 生物学特征
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铜绿假单胞菌噬菌体PaP3整合位点的鉴定 被引量:1
12
作者 王琳 饶贤才 +2 位作者 胡福泉 陈志瑾 谭银玲 《医学研究生学报》 CAS 2006年第5期394-398,共5页
目的:确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP3在宿主菌基因组中的整合位点。方法:利用在噬菌体PaP3基因组中无酶切位点的Pst Ⅰ对溶原性细菌全基因组进行酶切,获得含有噬菌体PaP3全基因组及部分宿主菌DNA序列的大片段;然后进行第二次酶切,获得噬菌... 目的:确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP3在宿主菌基因组中的整合位点。方法:利用在噬菌体PaP3基因组中无酶切位点的Pst Ⅰ对溶原性细菌全基因组进行酶切,获得含有噬菌体PaP3全基因组及部分宿主菌DNA序列的大片段;然后进行第二次酶切,获得噬菌体基因组与宿主菌基因组的交界点序列,并进行克隆、测序,鉴定出杂合位点attR。根据λ噬菌体的整合机制,利用PCR反应扩增出另一杂合位点attL,根据测序结果及Blast检索确定attP 与attB的位置和DNA序列。结果:经序列比对发现,attP及attB的核心位点分别位于噬菌体PaP3基因组中的 t-RNAPro基因及铜绿假单胞菌PA3基因组中的t-RNALys基因中,其核心位点的DNA序列为21 bp(5'-GGTCGTAGGT- TCGAATCCTAC-3')。在核心位点的两侧存在正向重复序列及反向重复序列。结论:该研究为铜绿假单胞菌噬菌体的整合酶及整合机制的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 整合位点 整合作用 铜绿假单胞菌噬菌体
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噬菌体治疗耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌合并铜绿假单胞菌肺部感染的病例报道 被引量:9
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作者 陈培芬 孔英君 +5 位作者 文思 顾晓雯 周央 谭新 马迎飞 卢洪洲 《新发传染病电子杂志》 2022年第2期71-75,共5页
82岁男性患者,因反复肺部感染半年入院。患者既往有阿尔茨海默病史。本次入院前多次痰培养为耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌和耐碳青霉烯铜绿假单胞菌,使用包括替加环素在内的多种抗生素,患者痰细菌培养未转阴、肺部感染未改善。入院后予鲍曼... 82岁男性患者,因反复肺部感染半年入院。患者既往有阿尔茨海默病史。本次入院前多次痰培养为耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌和耐碳青霉烯铜绿假单胞菌,使用包括替加环素在内的多种抗生素,患者痰细菌培养未转阴、肺部感染未改善。入院后予鲍曼不动杆菌噬菌体加铜绿假单胞菌噬菌体鸡尾酒疗法,每天2次雾化吸入,疗程分别为10d和19d;联合静脉滴注替加环素、哌拉西林他唑巴坦和阿米卡星。患者耐受良好,痰培养未见鲍曼不动杆菌生长,痰中铜绿假单胞菌荷菌量减少,临床症状和胸部X线片提示肺部感染明显好转。 展开更多
关键词 噬菌体 耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌 耐碳青霉烯铜绿假单胞菌 肺部感染 耐药细菌
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宽嗜性铜绿假单胞菌噬菌体的生物学特性及对临床菌株的嗜性覆盖研究 被引量:1
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作者 王文杰 《医学临床研究》 CAS 2014年第7期1259-1262,共4页
【目的】研究宽嗜性铜绿假单胞菌(PA )的生物学特性,为临床控制PA感染提供思路。【方法】对5家医院下水道中分离出的PA噬菌体,采用双层琼脂噬菌斑形成法纯化后筛选出宽嗜性噬菌体,观察宽嗜性噬菌体的特征,绘制一步生长线,提取核... 【目的】研究宽嗜性铜绿假单胞菌(PA )的生物学特性,为临床控制PA感染提供思路。【方法】对5家医院下水道中分离出的PA噬菌体,采用双层琼脂噬菌斑形成法纯化后筛选出宽嗜性噬菌体,观察宽嗜性噬菌体的特征,绘制一步生长线,提取核酸行酶切分析。【结果】共分离出8株PA噬菌体,筛选出3株宽嗜性噬菌体,其中PAp-3表现出较宽的噬菌谱。电镜下PAp-3呈透明、圆形、边界清晰的菌斑;PAp-3基因组为23 kb ,当感染复数(MOI)为0.001时,其感染宿主产生子代PA噬菌体滴度最高,为6.4×10^10 PFU/mL ,感染宿主菌的潜伏期30 min ,爆发时间55 min ,裂解量100。3株宽嗜性噬菌体交叉组合对临床分离出的20株PA吞噬覆盖率为95.00%(19/20)。【结论】宽嗜性噬菌体具有较广的噬菌谱,潜伏期较短,裂解量大,交叉组合吞噬覆盖率高,可为噬菌体作为抗菌生物制剂提供依据。 展开更多
关键词 假单胞菌 铜绿 假单胞菌属噬菌体 生理学 抗药性 微生物
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通过RNA-seq初步考察铜绿假单胞菌噬菌体PaP3对宿主转录组的全局性调控
15
作者 赵霞 陈灿煌 +3 位作者 倪青山 王竞 胡福泉 谭银玲 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期277-285,共9页
目的定性定量地考察铜绿假单胞菌噬菌体PaP3在感染宿主菌PA3后对宿主转录组的全局性调控作用。方法利用高通量链特异性的RNA-seq对PaP3感染宿主菌PA3后5个时间点(5 min、10 min、20 min、30 min、80 min)的转录本进行深度测序,并以铜绿... 目的定性定量地考察铜绿假单胞菌噬菌体PaP3在感染宿主菌PA3后对宿主转录组的全局性调控作用。方法利用高通量链特异性的RNA-seq对PaP3感染宿主菌PA3后5个时间点(5 min、10 min、20 min、30 min、80 min)的转录本进行深度测序,并以铜绿假单胞菌PAO1株及噬菌体PaP3基因组序列为参照,通过生物信息学对检测数据做定性定量的分析。结果以未感染噬菌体的细菌为对照,在铜绿假单胞菌PA3被噬菌体PaP3感染后的不同时间点共检测到5 536个差异表达基因,共归属于27条PseudoCAP功能注释,KEGG Pathway显著性富集分析发现差异表达基因共涉及45条代谢路径。此外,在5个样本中还预测出1 438个新转录本及1 329个新的候选sRNA,发现19种已注释的sRNA及91种新的候选sRNA出现差异表达。结论噬菌体PaP3可能通过抑制宿主菌PA3转录调节相关基因而对宿主的转录组进行全局性的调控,这为深入理解噬菌体与宿主相互作用的机制奠定了基础,也为探索噬菌体通过细菌与人体免疫系统的相互作用提供了多方面多层次的信息。 展开更多
关键词 RNA-SEQ 铜绿假单胞菌噬菌体 转录组 转录调控 SRNA
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铜绿假单胞菌噬菌体PaP1主要结构蛋白编码基因的确定
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作者 李明 黄建军 +3 位作者 申晓冬 胡晓梅 饶贤才 胡福泉 《医学研究生学报》 CAS 2006年第5期387-390,共4页
目的:确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP1主要结构蛋白的编码基因。方法:CsCl梯度离心纯化噬菌体PaP1 颗粒,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离该噬菌体的结构蛋白,转印PVDF膜后,对主要结构蛋白进行N-端测序,根据测序结果和... 目的:确定铜绿假单胞菌噬菌体PaP1主要结构蛋白的编码基因。方法:CsCl梯度离心纯化噬菌体PaP1 颗粒,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离该噬菌体的结构蛋白,转印PVDF膜后,对主要结构蛋白进行N-端测序,根据测序结果和实测分子量,在PaP1基因组序列中检索推定基因表达产物分子量相近、 N-端氨基酸残基序列相同的蛋白质所对应的编码基因。结果:SDS-PAGE显示PaP1至少含有7种结构蛋白,其中相对分子质量为38400的蛋白是主要的结构蛋白,其N-端5个氨基酸残基顺序为:Ala-Asn-Thr-Arg-Ser。结论:噬菌体PaP1至少含有7个结构蛋白,其中相对分子质量为38 400的蛋白系主要结构蛋白,其编码基因为 ORF6841-7875。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 噬菌体 结构蛋白 编码基因
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噬菌体降低铜绿假单胞菌所致腐蛋的效果 被引量:2
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作者 刘晓文 张庆 +7 位作者 宋新慧 骆延波 胡明 李璐璐 齐静 张印 赵效南 刘玉庆 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1756-1763,共8页
铜绿假单胞菌是孵化过程中造成腐蛋的主要病原菌,拟尝试用裂解性噬菌体防治。选用腐蛋中筛选的铜绿假单胞菌PA-MH12,以此为宿主从河水中筛选到1株裂解性噬菌体MH12-Q,对其进行了生物学特性研究,体外进行了对铜绿假单胞菌所致腐蛋的防控... 铜绿假单胞菌是孵化过程中造成腐蛋的主要病原菌,拟尝试用裂解性噬菌体防治。选用腐蛋中筛选的铜绿假单胞菌PA-MH12,以此为宿主从河水中筛选到1株裂解性噬菌体MH12-Q,对其进行了生物学特性研究,体外进行了对铜绿假单胞菌所致腐蛋的防控效果试验。结果显示:噬菌体MH12-Q属于肌尾噬菌体科(Myoviridae),效价可达到1013pfu·mL-1,完全裂解效价(CLC)为1010pfu·mL-1,最适生长温度为37℃,pH稳定性好,最适pH为6~8,且其在pH4~10的效价都能维持在较高的水平。最佳感染复数(OMOI)为0.001,感染宿主的潜伏期为30 min,爆发期为70 min。噬菌体MH12-Q可使高浓度铜绿假单胞菌的感染率从70%降低到40%。铜绿假单胞菌噬菌体MH12-Q的生物学性质适合生产应用,对孵化场腐蛋具有较好的防控作用,能够提高感染铜绿假单胞菌的鸡胚成活率。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 腐蛋 裂解性噬菌体 生物学性质 防治
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铜绿假单胞菌噬菌体治疗的研究进展 被引量:12
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作者 杨雨卉 乐率 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期814-820,共7页
噬菌体是专门裂解细菌的病毒,有望用于治疗超级耐药细菌感染。截止2017年1月10日,Pub Med数据库共存有1900多株噬菌体基因组序列,其中铜绿假单胞菌噬菌体为202株,约占所有测序噬菌体的十分之一。铜绿假单胞菌是临床中最常见的条件致病... 噬菌体是专门裂解细菌的病毒,有望用于治疗超级耐药细菌感染。截止2017年1月10日,Pub Med数据库共存有1900多株噬菌体基因组序列,其中铜绿假单胞菌噬菌体为202株,约占所有测序噬菌体的十分之一。铜绿假单胞菌是临床中最常见的条件致病菌之一,且抗生素耐药情况日趋严重。2017年2月,世界卫生组织将铜绿假单胞菌列为迫切需要新型抗生素来治疗的超级细菌之一。因此,铜绿假单胞菌噬菌体及其治疗耐药菌感染的研究备受关注。本文先就铜绿假单胞菌噬菌体的研究情况进行分析,然后对铜绿假单胞菌噬菌体治疗现状进行综述。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 抗生素耐药 噬菌体治疗
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铜绿假单胞菌噬菌体的分离鉴定和全基因组序列分析 被引量:1
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作者 谢丹莹 谢景昊 +5 位作者 黄若超 陆鑫 杨晨 郭爽 李和平 王月影 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第12期1-10,共10页
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一种人兽共患的机会性病原体,给养殖业造成巨大经济损失,噬菌体在防治铜绿假单胞菌感染性疾病方面具有应用前景。本试验以实验室保存的铜绿假单胞菌临床分离株PA31为宿主菌,通过点滴法和双层琼... 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)是一种人兽共患的机会性病原体,给养殖业造成巨大经济损失,噬菌体在防治铜绿假单胞菌感染性疾病方面具有应用前景。本试验以实验室保存的铜绿假单胞菌临床分离株PA31为宿主菌,通过点滴法和双层琼脂平板法从水样中分离纯化噬菌体;以PA31和实验室保存的大肠杆菌(Escherichia coli)、沙门菌(Salmonella)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)临床分离株作为宿主菌,通过点滴法分析噬菌体的裂解谱;利用负染法在透射电镜下观察噬菌体形态,双层平板法测定噬菌体的最佳感染复数和一步生长曲线,测定pH和温度对噬菌体稳定性的影响;采用Illumina NovaSeq平台测定噬菌体的全基因组序列,利用A5-MiSeq、SPAdes、GeneMarkS、Rfam、Diamond、BLASTp和MEGA 11.0生物信息软件进行拼接、注释和比较基因组学分析。结果显示,分离出1株铜绿假单胞菌噬菌体vB_PaeM_Ty,其仅能裂解宿主菌PA31和Escherichia coli-39、Enterococcus faecalis-8a,具有一定的宿主特异性;纯化vB_PaeM_Ty效价为1×10^(12)PFU/mL,该噬菌体为肌尾病毒科,最佳感染复数为1.0。一步生长曲线显示,vB_PaeM_Ty感染宿主菌PA31的潜伏期为20 min,裂解期为40 min,裂解量约为142 PFU/mL;在pH 3~12、温度45~70℃范围内噬菌体活性稳定;噬菌体vB_PaeM_Ty的核酸类型为双链DNA(dsDNA),基因组长50051 bp,GC含量为47.23%,编码74个开放阅读框(ORFs);其全基因组比对结果显示,vB_PaeM_Ty与假单胞菌噬菌体K4的同源性最高,基因组序列已经提交GenBank,登录号为OQ555403。结果表明,本试验分离鉴定了1株新的噬菌体vB_PaeM_Ty,其为烈性噬菌体,耐高温环境,且耐酸碱,包含多种功能相关蛋白,提示该噬菌体具有治疗铜绿假单胞菌耐药菌的潜力。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 噬菌体 分离纯化 生物学特性 基因组分析
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铜绿假单胞菌噬菌体K4的性质及其在食品防腐方面的应用 被引量:3
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作者 庞文静 韩庆竹 +4 位作者 尤甲甲 李东航 李佩泽 李玥莹 杨洪江 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2022年第16期130-139,共10页
目的:为研究噬菌体在控制细菌污染方面的应用,本文对铜绿假单胞菌噬菌体K4的生物学性质及抑菌活性进行了探究。方法:包括一步生长曲线、稳定性研究、基因组测序、比较基因组学分析以及抑菌曲线等方法。结果:K4潜伏期约为15 min,释放量约... 目的:为研究噬菌体在控制细菌污染方面的应用,本文对铜绿假单胞菌噬菌体K4的生物学性质及抑菌活性进行了探究。方法:包括一步生长曲线、稳定性研究、基因组测序、比较基因组学分析以及抑菌曲线等方法。结果:K4潜伏期约为15 min,释放量约为85 PFU/infection center,具有较强的感染性;在不同感染复数(MOI)下,噬菌体K4对宿主菌均有明显的抑制效果;基因组分析显示,K4基因组长度为50358 bp,编码77个蛋白和1个tRNA-Arg;比较基因组学分析发现,噬菌体K4与Paundecimvirus属的Pseudomonas virus PA11基因组序列的一致性达95.08%,证实噬菌体K4是该属的新成员。在应用实验中,噬菌体K4能够显著抑制牛奶和午餐肉等样品中宿主菌的生长,同时噬菌体的数量也有显著增加。本研究结果显示,噬菌体K4生长速度快,具有较强的杀菌活性,基因组不携带整合酶、抗性以及毒力因子等编码基因。结论:噬菌体K4可以用于控制食品中铜绿假单胞菌的污染。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 噬菌体 抑菌活性 基因组注释 应用
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