苏铁羽叶褐斑病病原菌鉴定及其化学防治药剂的筛选

本研究旨在分离并鉴定造成苏铁属植物羽叶褐斑病的病原真菌,筛选出对该病原真菌具有强烈抑制作用的化学防治药剂,为苏铁的保护提供理论依据。首先,通过病斑组织分离、纯化后回接滇南苏铁叶片,根据科赫氏法完成其致病性验证。其次,对其进行形态鉴定;再应用SSU、LSU、GAPDH、tef1、rpb2、Alt、OPA10-2、ITS 8个基因序列,构建多基因进化树进一步鉴定病原真菌。最后,通过平板抑菌试验,从7种化学药剂中筛选出高效的抗菌药剂。本研究发现,形态学鉴定与多基因联合进化分析表明,该病原菌为链格孢属的巴斯基链格孢(Alternariaburnsii);在7种化学药剂平板抑菌试验中,氟酰羟·苯甲唑效果最佳,其浓度在0.67 mg/L时抑菌率达到73.48%。

江西省猕猴桃褐斑病发生情况、病原鉴定与高效药剂筛选

【目的】明确江西省猕猴桃褐斑病发生情况及其病原,筛选能有效抑制病原的杀菌剂,为猕猴桃褐斑病防控提供新的依据。【方法】以猕猴桃褐斑病为研究对象,调查江西省猕猴桃褐斑病发生情况。对褐斑病主要流行区的病叶进行病原分离,通过科赫氏法则验证、形态观察和分子鉴定确定病原。采用菌丝生长速率法对9种药剂进行室内毒力测定。【结果】猕猴桃褐斑病在赣西和赣北发生严重,11个调查点位中5个点位发病等级中值在5级及以上;猕猴桃褐斑病在赣东和赣南发生较轻,10个调查点位的发病等级中值均为0。通过科赫氏法则验证、形态观察和分子鉴定,确定病原为多主棒孢(Corynespora cassiicola)。室内药剂毒力测定结果表明,丙硫菌唑、环丙唑醇、克菌丹和腈菌唑对猕猴桃褐斑病菌具有极强的抑制作用,EC_(50)分别为17.36,6.97,5.30和2.50μg·mL^(-1)。【结论】猕猴桃褐斑病在赣北和赣西发生严重,病原鉴定为多主棒孢;丙硫菌唑、环丙唑醇、克菌丹和腈菌唑可作为猕猴桃褐斑病防治的潜在高效药剂。

葡萄穗轴褐枯病初步研究

葡萄穗轴褐枯病是我国葡萄产区一种新的病害,近几年在哈密市蔓延迅速。通过对哈密市回城乡采集的葡萄受害穗标样进行鉴定,葡萄穗轴褐枯病病原为半知菌亚门葡萄生链格孢霉(AlternariaviticolaBrun)。主要为害葡萄果穗幼嫩的穗轴组织。田间出现症状在5月下旬～6月下旬,病菌能以分生孢子在葡萄枝蔓表皮或芽鳞片内越冬,借风雨传播,不同品种对葡萄穗轴褐枯病抗病性有一定的差异。

北疆沿天山北坡一带葡萄穗轴褐枯病病原菌的鉴定

2015年在新疆沿天山北坡一带的‘夏黑’葡萄上,出现了一种果穗穗轴变褐、枯死、幼果萎缩的病害,部分果园发病率达到100%,减产30%~50%。为了查明其发病原因,采用常规组织分离法对发病的穗轴进行了病原分离和纯化,共获得104个链格孢属真菌Alternariaspp.菌株,选取其中10个代表性菌株,通过常规形态学鉴定、致病性测定及核糖体内转录间隔区ITS(ITS1/ITS4)和组蛋白3基因序列分析,结果表明,引起该病害的病原有两个,分别是Alternaria tenuissima和A.alternata,与国内大部分葡萄产区报道的A.viticola不同。

金银花褐斑病病原检测和ITS鉴定

为了提高金银花褐斑病防治的靶向性,加强对银花褐斑病病原的检测。依据科赫氏法则,采用‘巨花一号’金银花褐斑病病叶为试材,经过平板分离、菌种纯化、叶片接种试验和ITS鉴定。通过3次病原菌分离、检测,共分离真菌71株,从金银花叶片上首次筛查出番茄匍柄霉(Stemphylium solaini)、旋丝毛壳(Chaetomium bostrychodes)两种潜在致病菌;另外,还有2株具有生防价值的球毛壳菌(Chaetomium globosum)和黑附球菌(Epicoccum nigrum);试验证实拟茎点霉(Phomopsis sp.)为金银花褐斑病病原微生物。

杂柑褐斑病的病原鉴定

【目的】明确引起两杂柑品种(‘天草’和‘费尔切尔德’)严重落叶、枯梢现象的病原菌。【方法】在重庆柑橘园区采集典型染病杂柑叶片和果实,对染病组织进行分离,得到10株代表菌株,随机选取菌株FL-1和TCL-1进行形态学特征观察和致病性验证。采用多聚半乳糖醛酸酶基因(endoPG)片段引物PG2和PG3进行分子鉴定。【结果】鉴定菌株在PDA培养基上菌落颜色呈橄榄色,产生黑色色素浸入培养基内,褐色分生孢子,多呈链状分隔。将测序结果提交GenRank通过与NCBI已登录的柑橘褐斑病菌endoPG序列比对发现,相似率高达99%。【结论】通过培养性状、形态学特征研究结合分子鉴定技术表明2种杂柑上发生的病害病原菌为链格孢菌[Alternaria alternata(Fr.)Keissler],与重庆万州红橘爆发的病害同系柑橘褐斑病。

美国红枫褐斑病病原菌鉴定

【目的】鉴定江西省鄱阳县美国红枫褐斑病的病原,为该病害的防治和进一步研究奠定基础。【方法】实地调查该病害的发生时期和为害程度,对病害症状进行观察记载。随机采集30份不同发病阶段的病叶样品,采用PDA培养基按照常规组织分离法对其进行病菌分离和菌种纯化。选择代表性菌株PM-1和Pm^-2作为供试菌株,用浓度为1×10^6个·m L^-1的孢子悬浮液对美国红枫健康叶片进行刺伤接种,并对接种发病后病斑进行病菌再分离,以完成柯赫氏法则验证。将各分离菌株接种于PDA平板中央,于25℃黑暗条件下培养,逐日观察测量菌落大小、颜色、形状、质地及产孢情况等性状。对自然发病寄主上着生的病菌和人工培养的病菌分别制作切片,在显微镜下观察载孢体及分生孢子形态,并测量其大小。根据培养菌落形态特征和病菌形态大小,参考相关文献,对病原菌进行种类归属鉴定。提取病菌基因组DNA,采用真核生物核糖体基因转录间隔区（ITS）通用引物ITS1（5＇-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3＇）和ITS4（5＇-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3＇）对病菌ITS-5.8S r DNA区段进行PCR扩增和序列测定。使用BLAST工具软件,在Gen Bank中进行序列同源性搜索,并利用Meg A 5.2软件中的邻位加入法构建系统发育树,以对病菌进行分子鉴定。【结果】美国红枫褐斑病只为害叶片,5月中旬始发,6月中下旬进入盛发期,重病株发病率达60%以上。病斑常呈圆形、椭圆形或不规则形,中央黄褐色,边缘黑褐色,周围有黄色晕圈,后期病斑常联合成大斑,造成叶片大面积枯死而脱落。在潮湿条件下,在病斑上常形成黑色小点,为病菌的分生孢子盘和分生孢子。共分离获得25个培养性状一致的真菌菌株,菌落正面白色,绒状,平铺,背面淡黄色。分离菌株具有致病性,人工接种发病症状与自然发病症状相同。病菌载孢体为分生孢子盘,直径108-205μm;分生孢子纺锤形,直或微弯,5个细胞,大小（19.3-26.8）μm×（5.3-6.8）μm;中间3个细胞褐色,长11.9-17.0μm;顶细胞长圆锥形,顶生2-4根不分枝的附属丝,无色透明,长6.3-18.3μm;基细胞无色,具短柄,长1.8-7.5μm。病菌ITS-r DNA序列长606 nt,与Gen Bank中小孢拟盘多毛孢的序列同源性为100%,在系统发育树上,与小孢拟盘多毛孢的亲缘关系也最近。【结论】形态学和分子生物学鉴定结果表明,引起江西省鄱阳县美国红枫褐斑病的病原菌为小孢拟盘多毛孢[Pestalotiopsis microspora（Speg.）G.C.Zhao＆N.Li],属于子囊菌无性型拟盘多毛孢属真菌。

一种引致水稻稻叶褐条斑的病原鉴定初报

对广东稻区近年来水稻生产上发生较为普遍的水稻稻叶褐条斑病进行了病原分离鉴定,根据柯赫氏法则,初步鉴定其致病病原菌为稻黑孢霉菌〔Nigrospora oryzae(Berk.et Br.)petch〕;其症状与水稻窄条斑病类似,主要见于水稻生长中后期,在叶面上形成黄褐至黑褐色的短细条状斑,严重时均可致全叶枯死,引起穗枯,谷粒结实差或不结实,造成水稻严重减产。对该病在广东主栽水稻上的发生症状、病原鉴别进行了详细描述,并对该病原菌在国内外不同寄主上发生、防治状况进行了综述。

黄瓜褐斑病(Corynespora cassiicola)在广东首次报道

2011年5月和8月,在广东省高要市和增城市黄瓜主产区发现黄瓜褐斑病,致病性测定、形态学观察和rD-NA-ITS序列分析结果表明,引起广东黄瓜褐斑病的病原菌为多主棒孢霉(Corynespora cassiicola)。本文是多主棒孢霉在广东引起黄瓜褐斑病的首次报道。

蝴蝶兰褐斑病病原鉴定

对广州地区近年来新发生的蝴蝶兰褐斑病病原细菌进行分离、致病性测定、16S rDNA序列分析和Biolog测定。结果表明,该菌的16S rDNA序列与燕麦食酸菌燕麦亚种(Acidovorax avenae subsp.avenae)、燕麦食酸菌西瓜亚种(A.avenae subsp.citrulli)、燕麦食酸菌卡特兰亚种(A.avenae subsp.cattleyae)、水稻食酸菌(A.oryzae)的序列相似度达到99%;经Biolog进一步测定,该病菌属于燕麦食酸菌燕麦亚种(A.avenae subsp.avenae)的可能性达99%。初步确定引起广州地区蝴蝶兰褐斑病的病原菌为燕麦食酸菌(A.avenae)。

云南省荞麦褐斑病病原鉴定及其生物学特性分析

【目的】研究明确云南省荞麦褐斑病病原菌的种类及其生物学特性,为荞麦褐斑病的防控提供理论依据。【方法】通过测定病原菌的致病性、观察孢子形态及分析rDNA-ITS序列的系统发育树,对云南省荞麦褐斑病的病原菌种类进行鉴定,并测定其生物学特性。【结果】菌株S62R5的rDNA-ITS序列长度为553 bp(登录号:KR002908.1),与稻黑孢菌菌株(登录号:EU529994.1)的同源性达100%。菌丝生长的最适培养基为PDA、PSA,最适菌丝生长温度25、28℃,致死温度为53℃,10 min;菌丝适宜生长的pH为5~9,最适pH为6;光照对菌丝生长影响不显著;菌丝生长的最适碳源为葡萄糖和蔗糖,最适氮源为氯化铵。【结论】引起云南省荞麦褐斑病的病原菌为稻黑孢菌(Nigrospora oryzae)。

不同玉米品种对褐斑病抗性的初步鉴定

2006～2007连续两年采用田间病圃法鉴定了不同玉米品种对褐斑病的抗病性。2006年的试验结果表明,供试的28个品种对褐斑病的抗性存在着十分明显的差异,其中达到抗病水平的有21个,占鉴定总品种的75%;中感品种6个,占鉴定总品种的21.43%;高感品种只有中科4号1个,占鉴定总品种的3.57%。2007年的试验结果表明,10个品种中达到抗病水平的有7个,占鉴定总品种的70%;中感品种3个,占鉴定总品种的30%。

水稻胡麻叶斑病病原菌的分离及鉴定

【目的】对水稻胡麻叶斑病病原菌进行分离和鉴定,为进一步研究该病的发病机理和有效防控奠定基础。【方法】采用常规真菌分离方法分离水稻胡麻叶斑病病原菌,通过回接试验进行柯赫氏法则验证,对确认为水稻胡麻叶斑病病原菌的菌落进行形态学和分子鉴定。【结果】经回接试验确认分离的水稻胡麻叶斑病病原菌的分生孢子梗单生,褐色,不分枝,顶端呈膝状弯曲,分生孢子呈长椭圆形、梭形、倒棍棒状,正直或向一侧弯曲,褐色,两端渐狭,钝圆,种脐较平,有5～10个假隔膜。18SrDNA和ITS序列长度分别约为1.8kb和570bp,与待鉴定病原菌18SrDNA同源性最高的是狗牙根平脐蠕孢有性态(Cochliobolus cynodontis),二者的相似度为99%;与其ITS序列同源性最高的是稻平脐蠕孢(Bipolaris oryzae),二者的相似度也为99%。聚类分析发现,该病原菌与蟋蟀草平脐蠕孢(Bipolaris eleusines)的18SrDNA同源关系最近,与平脐蠕孢属(Bipolaris sp.)的ITS同源关系最近。【结论】成功分离到水稻胡麻叶斑病病原菌,形态学与分子鉴定结果均显示其为稻平脐蠕孢。

兰州地区葡萄褐斑病发生为害及菌种鉴定

1998～2000年对兰州地区葡萄褐斑病进行了系统观测和调查，结果表明该病害最初于6月中旬开始发病，7～8月为发病盛期，发病率为8%～36%，病情指数为3.0%～17.8%。对采集的病害标样经分离培养，致病性测定和形态特征观察，证明目前兰州地区的葡萄褐斑病是由葡萄拟尾孢菌（Pseudocercospora vitis（Lev.）Speg.）为害所致。

苦玄参褐斑病病原鉴定及致病因素分析

为明确近年来引起广西梧州地区苦玄参(Picria felterrae Lour.)褐斑病的病原菌种类及致病因素,依据柯赫氏法则进行了致病性测定和病原菌验证,通过形态学观察、rDNA-ITS序列分析确定病原菌;通过对不同光照条件下病情调查,分析光照对该病害发生的影响。结果表明,病原菌形态特征与[Alternaria porri(ELL.)Ciferri]一致,其rDNA-ITS序列与GenBank中[Alternaria porri(ELL.)Ciferri]相似性达99%;强光利于病原菌菌丝生长、孢子产生及萌发。可见梧州地区苦玄参褐斑病病原菌为葱链格菌[Alternaria porri(ELL.)Ciferri];光照是诱发苦玄参褐斑病的主要致病因素。

中国华北地区黄顶菊杂草上的3种新病害及病原菌鉴定

黄顶菊(Flanueria bidentis)是近年来入侵我国的一种恶性杂草.该研究对我国华北地区黄顶菊上的病害进行了调查,分离鉴定了黄顶菊3种主要真菌病害的病原,并通过致病性测定分析了它们在黄顶菊生物控制中的应用潜力.调查表明在黄顶菊不同生育期都有病害发生,但多数病害种类主要集中在成株期以后.按照柯赫氏证病律接种测试及分离纯化获得的真菌形态特征观察鉴定,黄顶菊褐斑病的病原菌为细极链格孢(Alternaria tenuissima),炭疽病病原菌为一种刺盘孢(Colletotrichum sp.),而白粉病的病原菌为瓜单丝壳(Podosphaera xanthii).田间观察发现有的病害在适宜的生境中发病较重,可显著抑制黄顶菊植株生长发育;温室致病性试验结果表明,这3种病原菌真菌对黄顶菊都有较强的致病性,其中白粉菌的致病性最强.研究结果显示,这些病原菌在黄顶菊的生物防治中可能具有较好的应用潜力,今后需要分别对它们作进一步系统的研究.

黄瓜霜霉病、角斑病及褐斑病的识别与防治

从发病症状、病原、传播途径和发生规律等方面对黄瓜霜霉病、细菌性角斑病和褐斑病3种病害进行了分析,并针对不同的病害提出了相应的防治药剂。

水稻胡麻斑病土壤拮抗菌的筛选·鉴定及抑菌谱分析

[目的]从土壤中筛选对水稻胡麻斑病病原菌(Helminthospotium oryzae Breda de Hann)具有稳定拮抗作用的细菌。[方法]利用稀释平板法对从土样中分离出的细菌进行拮抗菌的初筛,再采用室内平板筛选法进行复筛。将拮抗效果最佳的菌株进行培养,通过菌体形态特征观察和生理生化测试进行菌种鉴定,并采用平板对峙法进行拮抗菌的抑菌谱分析。[结果]从38份土样中分离了494株细菌,初筛获得拮抗菌株24株,复筛得到4株拮抗能力较强的菌株,经鉴定4种拮抗菌均为地衣芽孢杆菌属(Bacillus licheniformis),并得到其抑菌谱。[结论]为利用拮抗菌生物防治水稻胡麻斑病提供了理论依据。

葡萄穗轴褐枯病研究进展

论述了葡萄穗轴褐枯病的症状、病原、发生规律及防治方法等方面的研究进展,以期为该病的防治提供理论依据。

江西樱花褐斑病菌的鉴定及其对杀菌剂的敏感性

为明确江西樱花褐斑病病原菌的种类,以樱花典型褐斑病叶片为材料,采用组织分离法,通过形态特征鉴定并结合SSU、LSU、ITS、GAPDH、TEF、RPB2、Alt al和His 3等基因分子生物学方法进行病原鉴定。结果表明:江西樱花褐斑病病原菌为交链格孢(Alternaria alternata);采用生长速率法测定病原菌对10%苯醚甲环唑水粉散剂、12.5%烯唑醇可湿性粉剂、2×10^(8) cfu/g木霉可湿性粉剂、500 g/L异菌脲水悬浮剂、400 g/L氟硅唑乳油、325 g/L苯甲·嘧菌酯水悬浮剂、430 g/L戊唑醇水悬浮剂、250 g/L嘧菌酯水悬浮剂等8种药剂的敏感性,苯醚甲环唑、烯唑醇和木霉等对病原菌有明显的抑制作用,EC_(50)值分别为0.001、0.022 mg/L和0.168个孢子/mL。推荐这3种药剂作为江西樱花褐斑病防治的优选药剂。