^3H-TdR对骨髓间充质干细胞代谢的量效关系研究

目的:研究不同剂量的3H-TdR对骨髓间充质干细胞生长代谢的影响,以确定安全的3H标记剂量。方法:在骨髓间充质干细胞培养瓶加入不同浓度的3H-TdR,描绘各细胞生长曲线,用Hochest染色观察细胞凋亡情况及用流式细胞仪检测细胞周期和骨髓间充质干细胞特有细胞表面标志物CD29、CD166、CD44、CD45的变化,观察对干细胞SOD、MDA的影响。结果:研究发现以4μCi/2ml浓度的3H-TdR标记干细胞时干细胞生长受到抑制,3μCi/2ml以上的浓度细胞均有不同程度的凋亡,流式细胞仪发现高浓度的核素能使干细胞被阻滞在S期及G2-M期,而且其细胞内的SOD下降及MDA升高,上述变化都有随核素剂量变化而变化的趋势;而用1μCi/2ml和正常组差异无统计学意义(P>0.05),标记过的骨髓间充质干细胞连续传代培养其增殖能力不受影响。结论:较高浓度的3H-TdR对干细胞的培养、示踪有影响,而1μCi/2ml的3H-TdR进行示踪研究是安全的。

^3H-TdR掺入法检测镉致鲫外周血单个核细胞的增殖抑制

以Cd2+浓度1.25、2.503、.75 mg.kg-1腹腔注射染鲫后,用3H-胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法研究镉对鲫外周血单个核细胞(PBMC)增殖的影响.检测鲫PBMC的增殖.结果显示:1.25 mg.kg-1组与对照组在不同时间放射性活度(dpm)的差异均无显著性;0d和3d时各染镉组与对照组dpm的差异均无显著性;5d时2.50 mg.kg-1及3.75 mg.kg-1组与对照组及1.25 mg.kg-1组dpm的差异有显著性且呈剂量效应,7d和10d时dpm与5d时基本相同;14d时3.75 mg.kg-1组与其余组dpm的差异有显著性,但已出现缩小的趋势.因此低浓度Cd2+对鲫PBMC增殖的影响不大,高浓度Cd2+则能诱导鲫PBMC增殖抑制.

大鼠呼吸道上皮细胞~3H-TdR标记指数

本文利用~3H-TdR 掺入技术研究大鼠呼吸道上皮细胞的标记类型和数量。大鼠腹腔注射7.4×10~4Bq/g(体重)~3H-TdR6小时后,制片计数气管和支气管上皮标记及非标记的基底细胞和粘液细胞,计算出标记指数。结果表明,气管及支气管基底细胞标记指数分别为0.0052和0.0198,粘液细胞标记指数分别为0.0014和0.0047,说明两类细胞都是具有分裂能力的癌形成相关细胞。

^3H-TdR涂层支架转移细胞内照射预防兔骼动脉支架后再狭窄的实验研究

目的:探讨3H-TdR探讨涂层支架置入对涂层支架预防兔骼动脉支架后再狭窄的预防作用。方法:12只新西兰大白兔,按支架放射性活度分为三组,每组4只,能量分别为:2.12、6.21、8.22MBq,于每只动物一侧骼动脉内置入不同活度的3H-TdR.支架,对侧骼动脉内置入非放射性支架作对照。高脂饲养28 d后进行骼动脉血管造影和组织病理学分析,放射性自显影检测,观察治疗效果,同时检测外周血及组织中放射量。结果:组织病理学分析显示不同剂量3H-TdR支架组新生内膜狭窄百分比均明显低于对照组,支架内细胞增生厚度明显低于对照组,内膜光滑,少血栓形成。放射性自显影显示大量平滑肌细胞核内有显像颗粒,内层到外逐渐递减,中层以外很少。血液及外周组织检测未见放射性物质。结论:3H-TdR支架能明显抑制支架置入后兔骼动脉新生内膜增生和支架后再狭窄的发生,外周血及组织中无明显放射性物质检出。

流式细胞术法与^3H—TdR掺入法观察细胞增殖的相关性研究

目的:研究3H TdR掺入法和流式细胞术法研究指标的相关性, 探讨用流式细胞术法来替代3H-TdR掺入法的数据依据。方法: 用3H -TdR掺入法和流式细胞术法对细胞DNA合成和有丝分裂进行检测。结果: 流式细胞仪指标与3H-TdR掺入实验指标呈高度的正相关关系, 相关系数分别为: PI与cpm相关系数为r=0. 964;SPF与3H TdR,掺入的相关悉数r=0. 876,且经检验有统计学意义 (P<0. 01 )。结论:主动脉平滑肌细胞增殖指数、S期细胞分数与3H TdR掺入值密切相关。

^3H—TdR掺入法检测鸡不同组织淋巴细胞增殖反应的条件优化

为了检测感染免疫抑制病毒后鸡群的细胞免疫变化，以建立的^3H—TdR掺入法观察了外周血、脾脏、胸腺、法氏囊中淋巴细胞的增殖反应，对影响该方法的细胞密度、丝裂原浓度（ConA或LPS）、犊牛血清（FCS）浓度等条件进行优化。结果表明，外周血淋巴细胞增殖试验的最佳条件：细胞10^5～10^6／mL，ConA5mg／L，FCS10％；脾脏中淋巴细胞最佳条件：细胞5×10^6／mL，ConA10mg／L，FCS10％；胸腺中淋巴细胞最佳条件：细胞10^6／mL，ConA40mg／L，FCS10％；法氏囊中淋巴细胞最佳条件：细胞5×10^6／mL，LPS40mg／L，FCS10％。

^3H—TdR参入裸鼠移植瘤作为抗癌药物筛选方法的初步研究

将~3H-TdR参入裸鼠移植瘤内,用液体闪烁计数技术测量其中氚的含量。结果表明:不同的市售抗癌药无论对可移植性人脑胶质瘤还是对患者手术标本移植在裸小鼠皮下的肿瘤都有不同的抑制~3H-TdR参入作用。初步提示,此法可用于筛选抗癌药物。

~3H－TdRβ线与^（60）Coγ线引起的人淋巴细胞微核效应

采用人外周血淋巴细胞体外培养胞浆阻滞微核测试法，观察用３Ｈ－ＴｄＲβ线和６０Ｃｏγ线照射引起的剂量－效应关系，并计算了３Ｈ，ＴｄＲβ线的相对生物效应值。３Ｈ－ＴｄＲβ线内照射和６０ＣＯγ线外照射的剂量效应关系均符合Ｙ＝Ａ＋ＢＸ２＝ＣＸ２线性－平方数学模式，淋巴细胞微核频率随β线和γ线剂量的增加而增加。３Ｈ－ＴｄＲβ线的ＲＢＥ均值为１．１９，表明其β线产生的生物效应是γ线的１．１９倍。

猪血小板衍生生长因子对NIH3T3细胞DNA合成的影响

目的 :检测猪血小板衍生生长因子 (p PDGF)的致丝裂活性。方法 :以 NIH3T3细胞作为靶细胞 ,利用 3H- Td R掺入合成 DNA的方法 ,检测 p PDGF的致丝裂活性。结果 :p PDGF可促进处于静止状态的 NIH3T3细胞 DNA合成 ,并呈现出明显的浓度依赖关系 ,在 30 ng/ m l的浓度时 DNA合成达到高峰 ,2 4 h DNA合成最为显著 ,经 2 -巯基乙醇处理的 p PDGF其致丝裂活性基本丧失。结论 :p PDGF具有良好的生物学活性 ,2

复方莪术对MGC80—3胃癌细胞的影响

采用MTT比色分析,3H—TdR掺入及电镜观察复方莪术对MGC80—3胃癌细胞的影响。结果发现复方莪术能明显杀伤人低分化胃腺癌MGC80—3细胞,较低浓度即呈现明显细胞毒效应,IC50为1∶150稀释度。3H—TdR掺入试验表明:复方莪术能明显抑制MGC80—3胃癌细胞DNA的合成,掺入抑制率为78.5%。透射电镜下发现实验组细胞膜破裂,胞浆消失,呈裸核。

牛血小板衍化生长因子的生物学活性研究——对BALB/c 3T3细胞DNA合成的影响

目的：检测牛血小板衍化生长因子的致丝裂活性。方法：以ＢＡＬＢ／ｃ３Ｔ３细胞为靶细胞，利用３Ｈ－ＴｄＲ掺入合成ＤＮＡ的方法。结果：５ｎｇ／ｍｌ牛血小板衍化生长因子可明显促进处于静止状态的ＢＡＬＢ／ｃ３Ｔ３细胞ＤＮＡ合成，３０ｎｇ／ｍｌ浓度使细胞ＤＮＡ合成达最高峰，并在２４ｈ最为显著；热处理对其致丝裂活性无影响；而经２－巯基乙醇处理后其活性基本丧失。结论：牛血小板衍化生长因子具有良好的致丝裂活性，耐热，２－巯基乙醇可使其丧失活性。

实验动物塑料笼具浸出液对^3H—TdR掺入HeLa细胞DNA的影响

本文采用塑料薄片浸出液与ＨｅＬａ细胞作体外细胞培养方法，观察塑料笼具浸出液对ＨｅＬａ细胞合成ＤＮＡ的影响，并与溶出试验，形态观察及增殖计数进行比较，结果表明，这几种方法有较好的相关性。其中，３Ｈ－ＴｄＲ掺入方法能较早，灵敏，准确地反映塑料对细胞ＤＮＡ合成的抑制作用，为评价塑料材料的生物毒性提供一个快速，敏感，简便的方法。

高比活度〔甲基-~3H〕-胸腺嘧啶核苷的制备

以 (5 - F3 ) -胸腺嘧啶核苷 (Td R)为前体 ,采用 Pd O/ Ba SO4 为催化剂 ,在 2 .5 mo L/ L KOH水溶液中进行催化卤氚取代反应。获得的标记物比活度为 9.1TBq/ g,与目前所用方法制备的标记物比活度 3TBq/ g相比提高 2倍。标记物放化纯度 >95 % ,示踪灵敏度可提高 70

硒酸钠对人前列腺癌细胞PC-3细胞株活力和增殖的影响

目的:研究硒酸钠(一种主要的无机含硒化合物)对人前列腺癌细胞系PC3生长和增殖的影响。方法:用硒酸钠对体外培养的人前列腺癌细胞PC3进行药物处理,然后用MTT法测定细胞的活力,用3HTdR掺入法测定细胞的增殖情况。结果:24小时作用时,硒酸钠中剂量组A值显著低于对照组,高剂量组A值与对照组有极显著差异。48小时作用时,硒酸钠低剂量组A值显著低于对照组,中剂量和高剂量组A值与对照组有极显著差异;48小时的硒酸钠处理抑制PC3细胞的增殖,中剂量组与对照组相比有显著差异,高剂量组与对照组有极显著差异。结论:硒酸钠可抑制PC3细胞的活力,抑制细胞增殖,并且这两种作用都呈剂量依赖效应。

Wg3h细胞系转染PSV_2-neo质粒前后生长特性及表面超微结构改变的研究

本文对转染PSV_2-neo质粒后的Wg3h细胞系(Wg3h-neo)在长期传代中的生长特性和表面超微结构与母系Wg3h细胞进行了比较研究。结果发现:转染后Wg3h细胞的DNA合成及生长速度明显高于母系Wg3h细胞,生长饱和密度增大。在软琼脂培养中不形成集落,接种在裸鼠不长肿瘤。在扫描电镜下,细胞表面的微绒毛较母系Wg3h细胞丰富。Southern印迹杂交实验证明PSV_2-neo质粒已整合到宿主细胞的基因组中。转染后Wg3h细胞的生长特性和表面超微结构均发生了某些转化特征。

人参皂甙对U_(937)细胞株抑制作用的研究

本研究用噻唑兰（MTT）比色分折法测定了人参皂甙对 U937细胞生长的抑制作用;并与3H—TdR 掺入法进行了对比,发现在实验的4种人参皂甙中,以二醇组皂甙的抑制作用最强。人参皂甙可以减少3H—TdR 掺入 U937细胞的数量。两种方法的测定结果相同。但人参皂甙的作用强度与药物剂量之间并不成直线关系。

碘、T_3对培养早期的鸡胚脑细胞摄取~3H—亮氨酸和~3H—TdR的影响

应用细胞培养方法研究了碘、T_3对体外原代单层培养早期的鸡胚脑细胞摄取~3H—亮氨酸和~3H—TdR 的影响。结果表明,碘离子对鸡胚脑细胞摄取亮氨酸有作用,但对 TdR 摄取的作用不明显;T_3对脑细胞摄取亮氨酸和 TdR 均有明显的促进作用。

3H—TdR法分析小鼠增殖肝提取物活性

苯巴比妥钠诱导增殖的小鼠肝脏加热提取物５ ～２００ｍｇ／Ｌ，明显刺激人Ｌ０２ 肝细胞系３ Ｈ－ ＴｄＲ掺入，抑制５ － Ｆｕ 对人Ｌ０２ 肝细胞的杀伤作用； 相同剂量的非加热提取物抑制人Ｌ０２ 肝细胞生长。苯巴比妥钠５ ～２０ｍｇ／Ｌ，对人Ｌ０２ 细胞３ Ｈ－ ＴｄＲ 掺入及５ － Ｆｕ 杀伤作用无影响。经胰蛋白酶预处理后， 小鼠增殖肝加热提取物活性消失。这说明苯巴比妥钠本身对人Ｌ０２ 肝细胞不是一种丝裂原性药物， 其诱导小鼠肝脏增殖作用与肝脏局部体液因素有关， 该因素为蛋白或肽类物质。

脑组织修复与3H—TdR掺入之间的关系

目的：研究脑组织修复与3H-TdR掺入之间的关系。方法：昆明小鼠25只，20只制成脑损伤模型，分别于术后3天，1、2、3周取损伤部位脑组织，进行3H-TdR(氚标胸腺嘧啶核苷）放射活度测定，5只作对照，结果：术后3天和1周3H-TdR液闪计数分别为4592±2002和4111±2234，对照组为1576±96，两组间有明显差异（P<0.01,P<0.05)，结论：伤后脑组织提取3H-TdR以3天至1周后最多。

脑组织修复与3H—TdR掺入之间的关系

为研究脑组织修复与3H－TdR（氚标胸腺嘧啶核苷）掺入之间的关系，本实验采用昆明小鼠20只，制成脑损伤模型，分别于术后3天、1周、2周、3周取损伤部位的脑组织，进行3H－TdR放射活度测定。5只作对照。结果：术后3天和1周3H－TdR液闪计数最高，分别为45．92±20．02和41．11±22．34，对照组为15．76±96。两组间有明显差异（P＜0．01；P＜0．05）．说明伤后3天至1周脑组织摄取3H－TdR最多。