DHPLC快速诊断中国人静止型-α^(4.2)地中海贫血

目的 开发基于断裂点序列信息的 -α4.2 缺失检测技术。方法 对中国人 -α4.2 基因断裂点区域及其正常同源片断的进行测序获得可用于基因诊断的信息 ,设计PCR/DHPLC方法快速检测 -α4.2 基因。结果 序列同源性分析表明 :1个包含 4个单核苷酸位点的单体型存在于所有的 1 0个中国人 -α4.2 基因中 ,采用盲法检测了 4 0个样本的基因型以验证DHPLC方法的可靠性 ,检测结果和Gap -PCR的完全一致。结论 DHPLC是一种快速、敏感和可靠的 -α4.2

人β地中海贫血突变基因重组载体pcDNA3.1-LCR-β^(41/42)的构建

目的构建人β地中海贫血突变基因β41 /42及具有调控功能的基因座控制区(LCR)重组载体,为该病基因治疗的体外细胞模型和转基因小鼠模型的建立奠定基础。方法抽提β41 /42纯合子患者的DNA,PCR扩增人β珠蛋白基因座控制区 (LCR)和β41 /42基因,将其串联克隆至pcDNA3. 1 中,酶切及测序鉴定重组载体。结果所构建的重组载体中含人β珠蛋白基因座控制区(LCR)和β41 /42基因,测序结果及引入方向正确。结论成功构建了含 5. 5kgβ珠蛋白基因座控制区(LCR)的β41 /42人重型地中海贫血基因的重组载体。

HKαα及其复合-α4.2缺失型α地中海贫血的临床分析

目的:探讨香港型地中海贫血(HKαα)及其复合-α^(4.2)缺失型α地中海贫血(HKαα/-α^(4.2))的临床表型和血液学特征,为临床诊疗和遗传咨询提供参考。方法:收集2021年5月至2022年3月在广西医科大学第一附属医院进行地中海贫血检测的病例,采用血细胞分析仪进行血液学分析,高效液相色谱法(HPLC)进行血红蛋白分析;采用跨越断裂点聚合酶链反应(Gαp-PCR)和荧光PCR熔解曲线法(FCMA)进行α和β地中海贫血基因分析。结果:共检出165例患者,其中-α^(3.7)或-α^(4.2)缺失型α地中海贫血杂合子90例,--^(SEA)/-α^(3.7)或--^(SEA)/-α^(4.2)缺失型血红蛋白H(Hb H)病75例。在165例中检出1例罕见的HKαα/-α^(4.2)及5例HKαα。基因型为HKαα/-α^(4.2)的患者血常规检测结果:红细胞计数(RBC)5.59×10^(12)/L,血红蛋白(Hb)166 g/L,红细胞平均容积(MCV)88.60 fL,红细胞平均血红蛋白量(MCH)29.70 pg,红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)335.00 g/L;5例HKαα的患者血常规结果:RBC(4.77±0.26)×10^(12)/L,Hb(135.68±4.37)g/L,MCV(86.25±4.05)fL,MCH(28.47±1.12)pg,MCHC(330.48±3.75)g/L。6例患者中,Hb分析结果均未见异常,均无贫血表现,无黄疸及肝脾肿大。基因分析结果:6例患者ααα^(αnti4.2)基因检测结果均为阳性,1例基因型为HKαα/-α^(4.2),5例基因型为HKαα。结论:首次发现HKαα/-α^(4.2)患者无贫血症状,且血液学检测正常,提示此类病例在临床上较容易漏诊和误诊。

核磁共振功能成像T2~*对重型β-地中海贫血患儿脑组织铁过载的评价

目的分析核磁共振功能成像T2~*在重型β-地中海贫血患儿脑组织铁过载的评价中的应用价值。方法 2009年1月至2016年9月深圳市第二人民医院儿科收治住院的长期高量输血的重型β-地中海贫血患儿100例,为观察组,同期选取进行核磁共振成像T2~*检查的健康体检者25例为对照组。根据血清铁蛋白水平将观察组分为两个亚组:轻度组(1.0~2.5g/L)57例,重度组(>2.5g/L)43例。观察组及对照组均行核磁共振功能成像T2~*检查,比较两组脑组织不同部位T2~*值。比较轻度组与重度组脑组织T2~*及脑脊液铁代谢蛋白水平并进行相关性分析。结果观察组脑组织不同部位T2~*值均显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),且观察组脑组织不同部位T2~*值从低到高依次为苍白球<红核<黑质<壳核<齿状核<尾状核<灰质<白质<小脑。重度组脑组织T2~*值、转铁蛋白、亚铁转运膜蛋白1、血红素氧化酶1显著低于轻度组,铁蛋白、铜蓝蛋白、铁调素显著高于轻度组,差异有统计学意义(P<0.05)。转铁蛋白、亚铁转运膜蛋白1、血红素氧化酶1与T2~*值呈正相关(r=0.309、0.617、0.326,P<0.05),与铁蛋白、铜蓝蛋白、铁调素呈负相关(r=-0.512、-0.474、-0.639,P<0.05)。结论核磁共振成像T2~*技术有助于评价β-地中海贫血患儿脑组织铁过载及评估疾病程度,值得临床上推广应用。

常见的缺失型α地中海贫血2的基因检测

应用聚合酶链反应技术检测缺失型α地中海贫血－２。特异性引物选择性扩增α２和α１基因，ＰＣＲ产物经琼脂糖凝胶电泳后即可对－α３．７和－α４．２缺失型作出基因诊断。此方法简便，快速和可靠。本研究为在缺失型α地中海贫血－２高发区进行－α３．７和－α４．２缺失型的筛查和产前诊断提供了一个新的方法。

β地中海贫血合并α珠蛋白基因三联体2例临床分析

目的探讨β地中海贫血(地贫)合并α珠蛋白基因三联体致中间型地贫的诊断。方法回顾分析2例β杂合子患儿的临床资料,以及患儿外周血β珠蛋白基因测序及α珠蛋白基因三联体检测结果。结果例1,女,4岁,为β^(CD41-42)杂合子;例2,男,13岁,为β^(CD17)杂合子。2例患儿的临床表现均为中重度贫血、肝脾肿大,β珠蛋白基因测序未发现罕见变异点。例1的Gap-PCR特异性引物检测ααα^(anti4.2)片段阳性,例2荧光定量PCR相对定量检测ααα^(anti3.7)片段阳性。结论β杂合子且未见罕见变异,但临床表现为中重度贫血时,应考虑存在α珠蛋白基因三联体。

α地中海贫血基因携带者血常规参数临床观察

目的探讨α地中海贫血基因携带者血常规参数变化情况。方法采用回顾性分析的方法,分析深圳市龙岗区大鹏人民医院收治的70例α地中海贫血患者、30例缺铁性贫血患者、100例健康体检人员的血常规参数资料。结果α地中海贫血组Hb、MCV及RDW与健康对照组、缺铁性贫血组均有明显差异,P<0.05,-αα/-α3.7组的Hb、MCV结果均明显高于-sea/αα组,P<0.05;RDW明显低于-sea/αα组,P<0.05。地中海贫血组患者MCV、红细胞脆性实验、血红蛋白电泳阳性率均明显高于缺铁性贫血组,P<0.05,-αα/-α3.7组患者血红蛋白电泳阳性率略低于-sea/αα组,P<0.05,差异均有统计学意义。结论 Hb、MCV、RDW及红细胞脆性实验、血红蛋白电泳阳性率可以作为临床筛查α地中海贫血的有效诊断方法,值得临床推广。

在Yunnanese（Aγδβ）^0—地贫3′缺失端点下游鉴别到两个增强子样顺序

利用荧光酶报告基因系统搜索了Yunnanese (Aγδβ) 0 地中海贫血缺失 3′端点下游 11 5kb区域内的调控顺序 .确定缺失 3′端点立即下游区 1 7kb片段 ,在人红白血病细胞K5 6 2及鼠红白血病细胞MELGM979中 ,可使γ 珠蛋白基因启动子驱动的荧光酶基因表达增加 3 8～ 4 0倍 ,而在HeLa细胞中仅增加 1 5倍 .位于缺失 3′端点约 10kb的一个长 1 4kb片段在K5 6 2和MELGM979中 ,可使γ 基因启动子驱动的荧光酶基因表达增加 2 4～2 9倍 ,而在HeLa细胞中无增加 .结果说明这两段顺序均有增强子活性 ,并且这种活性具有一定的红细胞特异性 .进一步证明 1 7kb片段内包含多个转录调节蛋白结合模体的 430bp片段包含了 1 7kb片段的大部分增强子活性 .这些结果为缺失导致增强子样顺序并入到接近Gγ 基因 ,是Yunnanese (Aγδβ) 0 地贫缺失突变体中胎儿Gγ 珠蛋白基因 ,在成人期持续活跃表达原因的假设提供了实验证据 .