金属有机框架Cu@Sc-MOF纳米酶对5'-三磷酸腺苷的比色/荧光检测

通过溶剂热法制备了一种铜/钪金属有机框架(Cu@Sc-MOF)纳米酶,在H2O2存在下,Cu@Sc-MOF可催化氧化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)得到蓝色氧化产物oxTMB,并在652 nm处产生特征吸收峰。同样,Cu@Sc-MOF也可氧化邻苯二胺(OPD)生成2-氨基吩嗪(DAP),并在570 nm产生特征荧光发射峰(激发波长为390 nm)。由于5’-三磷酸腺苷(ATP)与Cu2+络合,抑制了Cu@Sc-MOF的催化活性,使得652 nm处的吸光度和570 nm处的荧光强度减弱,基于Cu@Sc-MOF的类过氧化物酶活性,构建了一种用于检测ATP的比色/荧光双模式光谱法。比色和荧光分析法的线性范围分别为2.50~40.00μmol/L和1.00~22.50μmol/L,检出限(LOD)分别为0.60和0.27μmol/L。将上述比色/荧光双模式分析法用于肝癌细胞HepG2细胞裂解液中ATP的检测,加标回收率分别为92.0%~101%和93.2%~97.9%,具有良好的应用前景。

四种拟除虫菊酯类杀虫剂对枸杞蚜虫的毒力及对三磷酸腺苷酶和谷胱甘肽S-转移酶活性的影响

为寻找防治枸杞蚜虫的适用药剂，采用玻璃管药膜法，测定了4种拟除虫菊酯类杀虫剂对枸杞蚜虫的毒力及对其三磷酸腺苷酶（ ATPase）和谷胱甘肽S-转移酶（ GSTs）活性的影响。结果表明：枸杞蚜虫对联苯菊酯最敏感，LC50值为4.34 mg/L；氯菊酯、高效氯氰菊酯和甲氰菊酯的LC50值分别为17.08、40.50和184.84 mg/L。4种杀虫剂对枸杞蚜虫两种ATPase活性均有抑制作用，药剂浓度为1×10－4 mol/L 时，4种药剂对 Na＋-K＋-ATPase 活性的抑制率均高于对 Ca2＋-Mg2＋-ATPase的抑制率，其中对Na＋-K＋-ATPase活性的抑制率从高到低依次为：联苯菊酯＆gt;高效氯氰菊酯＆gt;氯菊酯＆gt;甲氰菊酯，而对Ca2＋-Mg2＋-ATPase的抑制率则是联苯菊酯最高（46.41％），高效氯氰菊酯最低（33.04％）。4种药剂对枸杞蚜虫GSTs活性的影响差异较大：联苯菊酯在低浓度时对GSTs具有诱导作用，高浓度时则表现为一定的抑制作用；不同浓度高效氯氰菊酯和氯菊酯对GSTs活性均表现为抑制作用，抑制率最高达85.02％；而甲氰菊酯处理后 GSTs 的活性则升高了193.07％~249.96％。

氟化物对家蚕幼虫中肠(钙,镁)-三磷酸腺苷酶活性的影响

添食NaF抑制家蚕幼虫中肠(钙,镁)-三磷酸腺苷酶[(Ca^(2+),Mg^(2+))-ATPase]的活性。该抑制作用随添食NaF的浓度提高,或添食日数延长而增加,有累积效应。添食适量的CaCl_2或CaCl_2和Na_2ATP能降低NaF对(Ca^(2+),Mg^(2+))-ATPase活性的抑制。试验结果说明,应用Lee的(Ca^(2+),Mg^(2+))-ATPase动力学模型可获得满意的解释。氟化物抑制家蚕幼虫体内组织细胞膜上(Ca^(2+),Mg^(2+))-ATPasc活性,致使Ca^(2+)在蚕体内平衡失调,是家蚕氟中毒的一种重要的毒理学上的分子机制。

多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶抑制剂AG014699联合化疗对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖的影响

目的研究多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）抑制剂AG014699联合多西他赛（DTX）或卡铂（CBP）对三阴性乳腺癌细胞株MDA—MB-231增殖的影响，探讨PARP抑制剂AG014699联合化疗是否有协同抗肿瘤效应。方法PARP抑制剂AG014699与DTX、CBP单独或联合作用于MDA—MB-231细胞，细胞增殖及细胞毒性实验法检测细胞增殖并用联合用药公式分析合用效应（q值0.85—1．15为单纯相加，〉1．15为协同，〈0．85为拮抗）；流式细胞仪分析细胞凋亡及周期分布。结果PARP抑制剂AG014699、DTX、CBP单独作用于MDA—MB-231细胞，均可抑制增殖，诱导凋亡，引起细胞周期阻滞；PARP抑制剂AG014699（10μmol／L）与DTX（10^-8、10^-7、10^-6、10^-5mol／L）、CBP（10^-5、10^-4mol／L）联合作用时，q值在0．85—1．15，显示相加效应；PARP抑制剂AG014699与CBP（10^-3mol／L）联合作用时，q值〉1．15，显示协同效应。PARP抑制剂AG014699联合DTX或CBP能进一步促进凋亡，并使G2／M期细胞比例增加。结论PARP抑制剂AG014699联合化疗药物DTX或CBP能显著抑制MDA—MB．231细胞增殖，发挥相加或协同抗肿瘤作用。

白细胞介素-1β对离体大鼠黄体细胞孕酮分泌及钠-钾三磷酸腺苷酶活性的影响

为探讨白细胞介素 -1β(IL -1β)对黄体细胞甾体激素分泌的影响及其与黄体细胞膜钠 -钾三磷酸腺苷酶 (Na+ -K+ ATPase)活性变化的关系 ,本研究以经孕马血清促性腺激素 -人绒毛膜促性腺激素 (PMSG-h CG)处理的未成年雌性 Wistar大鼠为模型 ,制备了黄体细胞悬液。用放射免疫测定 (RIA)和定磷法分别测定了 IL -1β对离体大鼠孵育的黄体细胞孕酮 (P)分泌及黄体细胞膜 Na+ -K+ ATPase活性。结果表明 ,IL-1 β(1 ng/ ml)可显著抑制离体孵育的黄体细胞基础 P及 h CG诱导的 P分泌 ,并可使黄体细胞膜 Na+ -K+ATPase活性明显降低。 IL -1β引起的 P分泌减少和 Na+ -K+ ATPase活性降低之间呈显著正相关。提示 Na+ -K+ ATPase活性降低可能是 IL-1 β抑制

转染三磷酸腺苷酶家族蛋白2 shRNA的人骨肉瘤细胞株U2-OS增殖、凋亡能力观察

目的观察转染三磷酸腺苷酶家族蛋白2(ATAD2)shRNA的骨肉瘤细胞株U2-OS增殖、凋亡的变化。方法以qRT-PCR法和Western blotting法分别检测人骨肉瘤细胞(U2-OS、MG-63、SaOS-2)和人正常成骨细胞(h FOB1.19)中ATAD2 mRNA、蛋白。在U2-OS细胞中转染ATAD2 shRNA慢病毒载体,采用qRT-PCR法和Western blotting法检测转染效果,CCK8方法检测细胞增殖变化,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成数目,碘化丙啶(PI)单染法检测细胞周期,膜联蛋白V-FITC(Annexin V-FITC)/PI双染法检测细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(C-Caspase-3)、细胞周期依赖性蛋白激酶4(CDK2)、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(C-Caspase-9)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)蛋白。结果骨肉瘤细胞中ATAD2 mRNA、蛋白表达水平高于正常成骨细胞(P均<0.05)。ATAD2 shRNA慢病毒载体转染后的骨肉瘤细胞中ATAD2表达水平下降(P<0.05)。转染ATAD2 shRNA后的骨肉瘤细胞增殖能力和克隆形成能力均降低,细胞G1期比例升高,细胞凋亡率升高,细胞中C-Caspase-3、C-Caspase-9蛋白表达升高,CDK2、CyclinD1蛋白表达降低(P均<0.05)。结论转染ATAD2 shRNA可抑制U2-OS细胞增殖,并诱导细胞凋亡。

S-甲基异硫脲对阿霉素致大鼠心肌线粒体腺苷三磷酸合酶活性改变的影响

目的研究S-甲基异硫脲(SMT)对阿霉素(ADR)所致大鼠心肌线粒体腺苷三磷酸合酶(ATPS)活性改变的影响。方法大鼠腹腔注射ADR(5.0 mg.kg-1)1次,给ADR处理的大鼠静脉注射不同剂量的SMT1次进行干预。分别用寡霉素—无机磷法、血红蛋白氧化法测定心肌线粒体的ATPS活性、一氧化氮合酶活性;分别用荧光素酶法、硝酸还原酶法测定心肌线粒体的腺苷三磷酸(ATP)含量、一氧化氮(NO)含量;用逆转录-聚合酶链反应方法检测心肌线粒体的ATPS6 mRNA、ATPS8 mRNA表达。结果SMT(5.0,10.0,20.0 mg.kg-1)拮抗ADR所致心肌线粒体的ATPS活性降低、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性增加(P<0.01);拮抗ADR所致心肌线粒体的ATP含量降低、NO含量增加(P<0.01);拮抗ADR所致心肌线粒体的ATPS6 mRNA、ATPS8 mRNA表达水平降低(P<0.01)。结论SMT拮抗ADR导致心肌线粒体的ATPS6 mRNA、ATPS8 mRNA表达水平降低而拮抗ADR导致ATPS活性降低,从而改善心肌线粒体供能;SMT拮抗ADR导致心肌线粒体的ATPS6 mRNA、ATPS8 mRNA表达水平降低可能与其选择性地抑制ADR所诱导心肌线粒体的iNOS活性使NO产生减少,从而减少NO抑制心肌线粒体的ATPS6 mRNA、ATPS8 mRNA表达有关。

补泻不同配伍补阴方对衰老大鼠三磷酸腺苷酶及Bcl-2和Bax表达的影响

目的从实验的角度分析和比较补泻不同配伍补阴方及两方共有"三补"药物组抗衰老作用机制。方法观察补泻不同配伍补阴方左归丸、六味地黄丸及两方共有"三补"药物组对D-半乳糖(D-gal)致亚急性衰老大鼠三磷酸腺苷酶(ATPase)及细胞凋亡相关因子Bcl-2和Bax表达的影响。结果亚急性衰老大鼠肝、脑组织中ATPase活力降低而脑海马区的Bcl-2和Bax表达升高,左归丸、六味地黄丸及两方共有"三补"药物组干预后,大鼠Na+-K+-AT-Pase和Ca2+-Mg2+-ATPase活力表现出不同程度的升高,Bcl-2的表达上调而Bax表达下调。结论左归丸、六味地黄丸及两方共有"三补"药物组的抗衰老作用可能与维持细胞膜的稳定性和改善细胞凋亡作用有关,两补阴方尽管存在补泻配伍方法上的不同,但在本研究中未出现显著性药理作用差异,提示"三补"在两方中发挥了优势性作用。

三磷酸腺苷敏感性钾通道开放剂对大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-8表达的影响

目的 研究三磷酸腺苷敏感性钾通道(KATP)开放剂对大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)-8 表达的影响.方法 200只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、对照组、KATP开放剂预处理组(开放剂组)及KATP开放剂+阻断剂预处理组(阻断剂组).应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,应用原位末端标记法(TUNEL)、免疫组化染色、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测脑缺血再灌注后各组脑组织凋亡细胞数和caspase-8 mRNA及蛋白的表达.结果 (1)缺血再灌注12 h、24 h、48 h、72 h各时间点凋亡细胞数,开放剂组较对照组和阻断剂组显著减少(P＜0.05～0.01),阻断剂组与对照组间各时间点差异无统计学意义.(2)缺血再灌注12 h、24 h、48 h、72 h各时间点caspase-8蛋白表达,开放剂组显著低于对照组和阻断剂组(P＜0.05～0.01),阻断剂组与对照组间各时间点差异无统计学意义.(3)缺血再灌注各时间点caspase-8 mRNA表达,开放剂组均显著低于对照组和阻断剂组(均P＜0.01), 阻断剂组与对照组各时间点相比差异无统计学意义.结论 KATP开放剂能显著减少脑缺血再灌注后神经元凋亡和caspase-8 mRNA及蛋白的表达;KATP开放剂可能通过抑制死亡受体通路发挥脑保护作用.

三磷酸腺苷酶家族蛋白-2在骨肉瘤中的表达及临床意义

目的通过实验分析骨肉瘤患者样本中三磷酸腺苷酶家族蛋白-2(ATAD-2)的表达情况以及对临床诊断和治疗的意义。方法收集骨肉瘤样本以及骨肉瘤周围组织的样本,各50例,检测ATAD-2表达情况。结果骨肉瘤样本中的ATAD-2的mRNA的表达量高于骨肉瘤周围组织的样本。结论临床上发现某些组织疑似骨肉瘤且三磷酸腺苷酶家族蛋白-2表达程度较高时,可考虑患骨肉瘤的可能性较大。

甲状腺激素对心肌肌质网钙、镁-三磷酸腺苷酶活性的影响及心得安的干预作用

目的:探讨甲状腺功能亢进症的循环系统变化机制及普洛奈尔对其影响作用。方法:测定肌注L-T4及L-T4加普洛奈尔所致甲状腺功能亢进兔和对照组的心肌肌质网钙、镁-三磷酸腺苷酶活性。结果:L-T4组及L-T4加普洛奈尔组心肌肌质网钙、镁-三磷酸腺苷酶活性明显高于对照组,而且酶活性与血TT3浓度呈显性正相关,L-T4加普洛奈尔组与L-T4组的心肌肌质网钙、镁-三磷酸腺苷酶活性无明显差别。结论:甲状腺激素对心肌肌质网钙、镁-三磷酸腺苷酶活性的激活作用是不依赖于β受体的直接作用。

甲硫腺苷磷酸化酶、组蛋白赖氨酸三甲基转移酶蛋白在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨甲硫腺苷磷酸化酶(MTAP)、组蛋白赖氨酸三甲基转移酶(SETD2)蛋白在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法将2018年11月至2019年11月在苏州市中西医结合医院进行手术治疗并经术后病理学检查证实的86例结直肠癌病人作为研究对象,并收集齐其癌组织标本以及对应的癌旁组织标本。采用免疫组织化学染色法检测所有标本MTAP、SETD2蛋白表达水平。采用χ^(2)检验和多因素Cox回归法探讨MTAP、SETD2蛋白表达与结直肠癌病人临床病理特征、预后的关系。结果结直肠癌组织中MTAP、SETD2阳性表达率(30.23%、27.91%)分别低于癌旁组织(58.14%、62.79%)(P<0.05)。MTAP、SETD2阳性表达水平随着TNM分期越晚、分化程度越低、伴有淋巴结转移而降低(P<0.05)。MTAP阳性3年生存率(73.08%)明显高于阴性(43.33%)(P=0.011);SETD2阳性3年生存率(70.83%)高于阴性(45.16%)(P=0.011)。单因素、多因素分析得出,TNMⅢ~Ⅳ期、伴淋巴结转移、低分化、MTAP阴性、SETD2阴性表达均为影响结直肠癌预后的危险因素(P<0.05)。结论直肠癌组织中MTAP、SETD2蛋白均呈低表达,其表达水平可能参与疾病发展,可成为评估病人预后不良的有效生物学指标。

荧光光度法研究Eu^(3+)-四环素络合物与三磷酸腺苷二钠(ATP)的相互作用及其分析应用

本文建立了一种荧光光度法定量测定三磷酸腺苷二钠(ATP)的新方法。利用荧光光谱和吸收光谱研究了三磷酸腺苷二钠(ATP)与四环素的相互作用,四环素(TC)与Eu3+形成二元络合物发射出铕(Ⅲ)位于612nm处的特征荧光,加入三磷酸腺苷二钠(ATP)后,体系的荧光强度进一步显著增强,且增强的荧光强度与ATP的加入量成正比,据此建立了荧光分光光度法测量ATP的方法。实验测得,ATP的线性范围是3.00×10-7~4.50×10-6mol.L-1,检出限为4.68×10-8mol.L-1,研究了共存物质的影响,该方法成功的用于样品中ATP的测定。本文还讨论了Eu3+-四环素与三磷酸腺苷二钠(ATP)的相互作用机理。

筋脉通胶囊对糖尿病周围神经病变患者钠—钾—腺苷三磷酸酶活性的影响

为观察筋脉通胶囊对糖尿病周围神经病变患者钠-钾-腺苷三磷酸酶(Na^+-K^+-ATPase)活性的影响,分别设立健康人组(30例)、糖尿病非神经病变组(非DN组,19例)及糠尿病神经病变组(DN组,60例),DN组随机分为治疗组、对照组各30例,观察Na^+-K^+-ATPase、临床症状、血糖、神经传导速度等指标的变化。观察到DN患者Na^+-K^+-ATPase活性较健康人明显下降,服用筋脉通胶囊后,患者的临床症状、血糖、红细胞膜Na^+-K^+-ATPase活性、神经传导速度明显改善,在改善神经传导速度方面较对照组更具优势。初步证明筋脉通胶囊在改善DN患者的临床症状、增加神经传导速度的同时,能提高Na^+-K^+-ATPase活性。

蛇床子素对小麦赤霉病菌葡萄糖、钙吸收和三磷酸腺苷酶活性的抑制

蛇床子素可抑制小麦赤霉病菌菌丝生长干重;含有14C标记的葡萄糖培养基中培养小麦赤霉病菌,以100μg/mL蛇床子素处理,其菌体内14C放射强度比对照降低43%,表明蛇床子素能抑制小麦赤霉病菌对葡萄糖的吸收;以100μg/mL蛇床子素处理小麦赤霉病菌12h,菌体内总钙含量仅为对照的60%,表明蛇床子素能抑制菌体对钙的吸收;蛇床子素处理对β-1,6葡聚糖酶活性没有显著影响;离体条件下,蛇床子素能抑制小麦赤霉病菌三磷酸腺苷(ATP)酶活性。

条石鲷鳃的组织发育及鳃上钠钾三磷酸腺苷酶活性的早期变化

为完善条石鲷的早期组织发育过程,探索条石鲷仔鱼早期高死亡率的内在发育机制,实验对鳃器官的早期发育进行观察,结果显示:条石鲷仔鱼在1日龄时出现鳃原基;2日龄,原始鳃弓形成;3日龄,鳃丝原基出现;6日龄,鳃丝两侧的扁平细胞向外突出而形成原始的鳃小叶,假鳃出现;7日龄,鳃小叶基部出现泌氯细胞;8日龄,泌氯细胞开始分泌蛋白样物质;14日龄,鳃的结构分化发育完善。钠钾三磷酸腺苷酶(Na+,K+-ATPase)的相对活性从胚胎分裂期不断增加,直至器官分化期。此后活性逐渐降低,并保持在一个较低的水平,直至9日龄活性才开始上升。而12日龄之后又不断下降,到14日龄降至最低值(0.246±0.126)U/g。此后急剧上升,到18日龄升至最高值(4.731±0.309)U/g。从20日龄起,Na+,K+-ATPase的相对活性保持稳定上升,直至本次实验结束。结果表明,Na+,K+-ATPase活性的变化与鳃组织,尤其是与泌氯细胞的发育密切相关,而且在其活性较低的阶段,条石鲷仔鱼的死亡率较高。

三七皂甙Rg1、Rb1对肝纤维化大鼠线粒体DNA三磷酸腺苷酶6、8亚基的作用机制研究

目的探讨三七皂甙(panax notoginseng saponins,PnS)Rg1、PnS Rb1干预下,肝纤维化大鼠线粒体DNA三磷酸腺苷(adenine triphosphate,ATP)酶6亚基、ATP酶8亚基的基因突变和ATP含量变化。方法 96只Wistar大鼠分为对照组、四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)肝纤维化大鼠模型组、PnS Rg1组、PnS Rb1组各24只。除对照组外,其余3组用5%CCl4橄榄油按5 ml/kg灌胃制作肝纤维化大鼠模型。PnS Rg1组在每次CCl4灌胃同时腹腔注射PnSRg1(5 mg/kg)。PnS Rb1组在每次CCl4灌胃同时腹腔注射Rb1(5 mg/kg)。用生物发光法测定各组大鼠实验前及实验开始2、4、6周末时线粒体内ATP含量并比较。提取肝细胞线粒体总RNA,逆转录为互补脱氧核糖核酸(complementary DNA,cDNA),用基因重组、测序,通过GenBank与线粒体DNA已知序列进行比较,研究PnS Rg1、PnS Rb1干预6周后线粒体DNA的ATP酶6亚基7904-8584区域和ATP酶8亚基7743-7946区域基因突变情况。结果 (1)与对照组相比,模型组大鼠线粒体DNA ATP酶6亚基7904-8584区域有3处突变:C8294G、T8505G、G8584A。用Fisher确切概率法分析,突变增加有显著性意义(P<0.01)。PnS Rg1组、PnS Rb1组与对照组相比突变增加没有显著性意义(P>0.05)。(2)与对照组相比,ATP酶8亚基7743-7946区域有2处突变:A7797non、T7863C。用Fisher确切概率法分析,突变增加有显著性意义(P<0.01)。PnS Rg1、Rb1组与对照组相比突变增加没有显著性意义(P>0.05)。(3)各组肝纤维化大鼠线粒体ATP含量与CCl4处理时间的相关性分析,用pearson's检验r=-0.935,呈负相关。(4)肝纤维化大鼠线粒体内ATP含量与ATP酶6亚基突变的相关性分析,用pearson's检验r=-0.943,呈负相关;肝纤维化大鼠线粒体内ATP含量与ATP酶8亚基突变的相关性分析,用pearson's检验r=-0.961,呈负相关。结论 PnS Rg1、Rb1可以显著抑制线粒体ATP含量下降,可以显著抑制线粒体DNA ATP酶6亚基、ATP酶8亚基突变,从而推断PnS Rg1、Rb1可能通过减少线粒体DNA ATP酶6、8亚基突变而抑制线粒体ATP含量下降,从而延缓肝纤维化发生发展。