葎草酮对人胃癌细胞SGC-7901 N-乙酰基转移酶1活性及基因表达的抑制作用

目的探讨葎草酮抗肿瘤作用以及其与N-乙酰基转移酶1(NAT1酶)之间的关系。方法采用HPLC法,以对氨基苯甲酸(PABA)为底物,测定PABA被NAT1乙酰化为乙酰化对氨基苯甲酸(Ac-PABA)的量,间接反映NAT1酶的活性。采用RT-PCR法,测定葎草酮对NAT1mRNA表达的影响。结果葎草酮能够显著降低SGC-7901完整细胞和细胞质中Ac-PABA的生成量;随着作用时间的增加,Ac-PABA的生成量逐渐增加,但与其相同时间点的阴性对照组比较,葎草酮组Ac-PABA的生成量明显减少;葎草酮能够降低SGC-7901细胞中NAT1 mRNA的表达。结论葎草酮通过抑制NAT1的活性和基因表达两个方面减少芳香胺类化合物代谢为乙酰化的芳香胺类致癌物的量,从而预防癌症的发生,防止癌症的进一步恶化。

铁死亡调控基因亚精胺/精胺N1-乙酰基转移酶1在脑胶质瘤中的表达及临床意义

目的探讨铁死亡调控基因亚精胺/精胺N1-乙酰基转移酶1(SAT1)在脑胶质瘤患者中的表达趋势及临床意义。方法纳入中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA,http://www.cgga.org.cn/)及美国癌症基因组图谱计划(TCGA,http://www.cancergenome.nih.gov/)数据库中3批次共1720例(CGGA-325组、CGGA-693组及TCGA组分别为325、693、702例)脑胶质瘤患者的临床资料及其胶质瘤组织样本表达谱数据,分析SAT1基因的表达趋势及与患者病理、分子病理指标、预后等因素的相关关系。应用细胞模型研究SAT1基因在脑胶质瘤中的生物学功能。采用Kaplan-Meier生存曲线比较SAT1基因表达量不同的脑胶质瘤患者的生存差异;应用受试者工作特征(ROC)曲线评估SAT1对脑胶质瘤患者1年和3年总生存率的预测作用。结果在脑胶质瘤患者样本中,SAT1在异柠檬酸脱氢酶(IDH)野生型胶质母细胞瘤中表达水平最高,在IDH突变联合1p19q缺失的低级别胶质瘤中表达水平最低(CGGA-325组、CGGA-693组及TCGA组患者中,均P<0.001)。在世界卫生组织(WHO)Ⅲ级及Ⅳ级的患者中,SAT1高表达的患者预后更差(不同数据库、不同级别SAT1高表达及低表达患者的中位生存期分别为:CGGA325组WHOⅢ级患者,485 d和1321 d,P<0.05;CGGA-325组WHOⅣ级患者,286 d和493 d,P<0.05;CGGA-693组WHOⅢ级患者,836 d和2982 d,P<0.05;CGGA-693组WHOⅣ级患者,356 d和459 d,P<0.05;TCGA组WHOⅢ级患者,31.57个月和114个月,P<0.05;TCGA组WHOⅣ级患者,11.24个月和13.77个月,P<0.05)。CGGA-325组患者中,应用ROC曲线评估SAT1对患者1年和3年生存的预测能力,其曲线下面积(AUC)分别为0.725、0.793;在CGGA-693组数据中,其AUC分别为0.615、0.671;在TCGA组中,其AUC分别为0.791、0.808(均P<0.001);在细胞模型中,下调SAT1基因表达,可抑制胶质瘤细胞增殖率(两种细胞系作用24 h及48 h后,均P<0.05)。结论SAT1基因与脑胶质瘤患者级别、分子亚型、预后等显著相关,可能通过激活肿瘤细胞增殖发挥作用。

心肺复苏后大鼠脑组织精脒/精胺-N1-乙酰基转移酶2与HIF-1α表达的动态变化规律

目的研究心肺复苏后大鼠脑组织中精脒/精胺-N1-乙酰基转移酶2(spermidine/spermine-N1-acetyltrans-ferase2,SSAT2)与缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α)表达的动态变化规律,分析二者相关性。方法 88只成年SD大鼠随机数字表法分为正常对照组(n=8)、假手术组(n=40)和心肺复苏组(n=40)。其中假手术组和心肺复苏组再分为1、8、24、48、72 h 5个亚组,每亚组8只。采用RT-PCR、Western blot法分别检测脑组织中HIF-1αmRNA和HIF-1α、SSAT2蛋白的表达。结果 SSAT2的表达在复苏后明显降低,1 h[(0.314±0.027),P<0.01]表达最低,随后逐渐升高(P<0.01),至72 h[(0.731±0.024),P>0.05]时回升到正常对照组水平(0.736±0.02),而假手术组SSAT2的表达与正常对照组相比无显著变化(P>0.05)。HIF-1αmRNA的表达在复苏后1 h[(0.245±0.021),P<0.05]时降低,但8 h[(0.430±0.019),P<0.05]时明显增强,后24 h[(0.387±0.018),P<0.05]、48 h[(0.385±0.019),P<0.05]下降,至72 h时回落到正常对照组水平(0.343±0.022);但HIF-1α蛋白在复苏后1 h[(0.755±0.012),P<0.01]显著增高,随后逐渐下降(P<0.01),至72 h[(0.033±0.002),P<0.01]时仅轻度增高,而在正常对照组和假手术组未能检测出HIF-1α表达。SSAT2表达与HIF-1α表达在复苏后72 h内呈负性相关(r=-0.945,P<0.01),SSAT2表达与HIF-1αmRNA表达在复苏后8～48 h呈负相关(r=-0.614,P=0.01)。结论在心肺复苏后一定时间内,大鼠脑组织SSAT2表达减弱,HIF-1αmRNA及蛋白表达增加,两者呈负相关表达,提示SSAT2对HIF-1α蛋白、HIF-1αmRNA可能起负性调节作用。

人精胺/精眯N^1-乙酰基转移酶单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备鼠抗人精胺/精眯N1-乙酰基转移酶(SSAT)单克隆抗体,分析该抗体的效价、抗原特异性及其在Western blot和免疫组织化学等分析技术中的可用性。方法在BL21(DE3)中原核表达带6×His标签的SSAT重组蛋白,并用Ni-NTA树脂亲和层析纯化。用SSAT重组蛋白免疫Balb/C小鼠,通过杂交瘤技术制备抗SSAT单克隆抗体,所得抗体的特异性及效价用ELISA、Western blot及免疫组织化学技术检测。结果成功建立了稳定分泌鼠抗人SSAT的单克隆抗体杂交瘤细胞株,该单克隆抗体可用于ELISA、Western blot、免疫组织化学、免疫荧光等分析技术。结论成功制备SSAT单克隆抗体,为SSAT相关的分子和病理研究奠定了基础。

小鼠供肾选择性缺失Ndst1对肾移植术后急性排斥反应的影响及其机制研究

目的探讨小鼠供肾选择性缺失N-脱乙酰基酶-N-磺基转移酶(Ndst)1对肾移植术后受体小鼠急性排斥反应的影响及其机制。方法建立小鼠肾移植模型。根据品系和处理方式不同,将小鼠分为3组:野生型(WT)组(n=10)、Ndst1-/-组(n=9)、黏液瘤病毒T7蛋白(M-T7)治疗组(n=7)。术后第10日对各组小鼠实施安乐死,对各组小鼠移植肾分别进行病理学检查和糖胺聚糖(GAGs)中的双糖[硫酸乙酰肝素(HS)和硫酸软骨素(CS)]含量分析。分析病理学评分与双糖含量变化的相关性。结果与WT组比较,Ndst1-/-组和M-T7治疗组小鼠移植肾组织的早期排斥反应的总体病理学评分显著降低(均为P<0.05)。与WT组比较,Ndst1-/-组小鼠移植肾组织中HS的6-O硫酸化比例、D0S6含量显著增加(均为P<0.05),CS的D0A4和D2A4含量显著下降(均为P<0.05)。与WT组比较,M-T7治疗组小鼠移植肾组织中HS的6-O硫酸化比例、CS的6-O硫酸化和2-O硫酸化比例、HS的D0S6和D2S6含量均显著增加(均为P<0.05),HS的D2A0含量、CS的D0A4和D2A4含量明显降低(均为P<0.05)。小鼠移植肾组织中双糖含量变化与急性排斥反应相关病理学评分均具有相关性(均为P<0.05)。结论供肾选择性缺失Ndst1可减轻肾移植术后的急性排斥反应,其机制可能与移植肾组织中双糖HS的6-O硫酸化比例增加有关。

miR-519e-5p/SAT1轴介导铁死亡信号通路调节子宫内膜异位症的发生发展

目的探讨微小RNA-519e-5p(miR-519e-5p)靶向调节精胺N1-乙酰基转移酶1(SAT1)对子宫内膜异位症(EMS)的影响。方法收集2023年1—6月在上海健康医学院附属周浦医院住院治疗的卵巢子宫内膜异位症患者的异位内膜组织,检测miR-519e-5p、SAT1蛋白表达;从异位病变组织分离细胞,将细胞分为Control组、anti-miR-NC组、anti-miR-519e-5p组、anti-miR-519e-5p+NC组、anti-miR-519e-5p+sh-SAT1组,分别检测萤光素酶活性、细胞活性、活细胞数和死细胞数、Fe^(2+)、ROS、GSH和MDA;普鲁士蓝染色观察铁颗粒分布情况;RT-qPCR检测miR-519e-5p、SAT1 mRNA表达;Western blot检测SAT1、GPX4、SLC7A11、MUC1、ACSL4蛋白表达。结果与正常子宫内膜组织比较,子宫内膜异位症患者异位内膜组织中miR-519e-5p显著增加,SAT1表达显著降低(P<0.05);萤光素酶报告基因检测结果显示,miR-519e-5p与SAT1存在靶向关系;抑制miR-519e-5p后,细胞活性、GSH、GPX4、SLC7A11、MUC1显著降低,Fe平均光密度值、Fe^(2+)、MDA、ROS、ACSL4显著增加(P<0.05);沉默SAT1并抑制miR-519e-5p表达,细胞活性、GSH、GPX4、SLC7A11、MUC1显著增加,Fe平均光密度值、Fe^(2+)、MDA、ROS、ACSL4显著降低(P<0.05)。结论miR-519e-5p在子宫内膜异位症中上调表达,抑制miR-519e-5p表达可激活铁死亡信号通路,抑制子宫内膜异位症的发生。

p53/SAT1/ALOX15铁死亡通路蛋白与特发性炎性肌病的相关性

目的通过免疫组化法分别检测实验性自身免疫性肌炎(EAM)小鼠模型肌肉组织中p53、精脒/精胺N1-乙酰基转移酶1(SAT1)、花生四烯酸-15-脂加氧酶(ALOX15)蛋白的表达,探讨特发性炎性肌病(IIM)的发病机制与p53/SAT1/ALOX15铁死亡通路蛋白的相关性。方法随机将13只BALB/c小鼠分为EAM模型组(n=7)、对照组(n=6),通过粗略提取的豚鼠骨骼肌匀浆与完全弗氏佐剂混匀后皮下注射建立EAM小鼠模型,在末次免疫处理后1周,通过对小鼠临床表现的观察和体重、四肢的肌力、血清肌酸激酶水平、骨骼肌HE染色结果的测定等综合方法评定是否造模成功。通过免疫组化法分别检测EAM小鼠及对照组小鼠肌肉组织中p53、SAT1、ALOX15蛋白表达水平。结果经综合方法判定,EAM组小鼠6只造模成功(1只死亡)。EAM模型组小鼠肌肉组织中p53、SAT1、ALOX15三种蛋白的阳性表达率及免疫组化表达评分均高于对照组(P<0.05,P<0.01)。Pearson相关分析结果显示,p53分别与SAT1、ALOX15呈正相关(r=0.976,P=0.001;r=0.963,P=0.002),SAT1与ALOX15呈正相关(r=0.951,P=0.004)。结论p53/SAT1/ALOX15铁死亡通路蛋白可能参与了特发性炎性肌病的发病。