豚鼠内淋巴囊Na-K-ATP酶亚基异构体的表达

目的 研究豚鼠内淋巴囊组织中Na ,K ATP酶α、β亚基各个异构体的表达及其意义。方法 分别采用免疫组化法和原位杂交法观察豚鼠内淋巴囊组织中Na,K ATP酶α和 β亚基异构体的分布。结果 Na,K ATP酶不同的亚基异构体在豚鼠内淋巴囊上皮细胞和上皮下组织的表达有差异。内淋巴囊上皮细胞的胞膜主要表达α1 、β1 和 β2 异构体 ,且 β2 表达较 β1 表达更强 ,上皮下组织细胞的胞膜则主要表达α1 和α2 异构体 ,且α1 表达较α2 表达强 ,而上皮细胞和上皮下组织中均未见有α3异构体表达。结论 内淋巴囊组织的Na ,K ATP酶由不同亚基异构体组成 ,它们协同作用参与保持内耳内环境的稳定。

Na-K-2Cl联合转运子-1和α_2 Na,K-ATP酶在耳蜗钾离子循环中的作用及与听觉功能的关系

目的应用 Na-K-2Cl 联合转运子-1(Na-K-2Cl Co-transporter 1,NKCC1)^(-/-)、NKCC1^(+/-)、α_2,Na,K-ATP 酶^(+/-)和 NKCC1^(+/-)/α_2Na,K-ATP 酶^(+/-)等不同基因型小鼠作为实验平台,对耳蜗钾离子循环模式与听觉功能进行研究,检验 NKCC1 和α_2Na,K-ATPase 在耳蜗钾循环中的地位和作用。方法应用 NKCC1^(-/-)、NKCC1^(+/-)和α_2Na,K-ATPase^(+/-)等基因敲除和转基因小鼠,同时培育 NKCC1^(+/-)/α_2Na,K-ATPase^(+/-)双半拷贝基因小鼠,采用听性脑干反应和耳蜗内电位检测技术对小鼠的听觉功能进行检测。应用 NKCC1 通道阻断剂速尿和 Na,K-ATP 酶通道阻断剂哇巴因,对 Castel鼠系进行通道阻断-听觉功能实验,进一步在小鼠体内检测耳蜗钾循环模式,对内耳钾循环与听觉生理之间的关系进行印证。结果 NKCC1^(+/-)小鼠和α_2Na,K-ATP 酶^(+/-)小鼠的听性脑干反应短声阈值(声压级)分别为(38.49±12.29)dB 和(53.32±7.62)dB,与野生型小鼠的(23.13±3.78)dB 比较均有提高,差异有统计学意义(t 值分别为3.559和10.267,P<0.05)。NKCC1^(+/-)小鼠和α_2Na,K-ATP 酶^(+/-)小鼠的耳蜗内电位值分别(78±7)mV 和(71±14)mV,分别低于野生型小鼠的(98±16)mV。NKCC1^(+/-)/α_2Na,K-ATP 酶^(+/-)小鼠听性脑干反应短声阈值为(24.14±8.83)dB,低于α_2Na,K-ATPase^(+/-)小鼠和 NKCC1^(+/-)小鼠,差异有统计学意义(t 值分别为6.128和2.255,P<0.05)。注射速尿后的 Castel 小鼠听性脑于反应听阈明显升高,与注射前比较其差异有统计学意义(t=12.162,P<0.05);注射哇巴因后的 Castel 小鼠也出现听阈升高(t=7.644,P<0.05)。而次序注射哇巴因和速尿后,Castel 小鼠听性脑干反应听阈明显低于单独注射速尿(t=4.515,P<0.01)。结论 NKCC1和α_2,Na,K-ATP 酶是耳蜗钾循环中的关键通道,任何一通道蛋白出现功能失衡均可影响内淋巴钾离子浓度及耳蜗内电位的维持,进而影响听觉功能。NKCC1 和α_2Na,K-ATP 酶在耳蜗钾循环诸通道中处于一种限制性动态平衡关系,在内耳钾代谢和耳蜗听觉功能的发挥中具有重要意义。本实验在小鼠实体中验证了 NKCC1和α_2Na,K-ATP 酶在内耳钾循环径路中的重要作用,同时也模拟了内耳钾循环模式。

银杏叶提取物EGb761对失神经骨骼肌Na^+-K^+-ATP酶活性的影响

目的 观察银杏叶提取物 (ginkgobilobaextract,EGb 761)对失神经肌肉Na+ K+ ATP酶活性的影响。方法 选用SD大鼠 16只 ,按术后注射药物的不同随机分为银杏叶提取物组 (实验组 )和生理盐水组 (对照组 )。显露左侧坐骨神经 ,切断并切除 0 .5cm神经段。分别将神经远、近端反折后结扎。术后两组分别经腹腔注射EGb 761(10 0mg/kg-1·d-1)和同体积的生理盐水。术后 6周取左侧小腿三头肌 ,测定其Na+ K+ ATP酶活性。结果 实验组失神经肌肉Na+ K+ ATP酶的活性优于对照组 ,两者差异有显著性意义 (t =2 .5 1,P <0 .0 5 )。结论 银杏叶提取物能改善大鼠失神经骨骼肌Na+ K+ ATP酶的活性 。

P型Na^＋-K^＋-ATP酶与偏头痛关系的实验研究

目的利用硝酸甘油实验性偏头痛模型探讨P型Na^＋-K^＋-ATP酶在偏头痛发病机制中的作用。方法20只SD大鼠（雌雄各半）随机分为生理盐水对照组和模型组。模型组按TassorelliCristina法复制偏头痛大鼠模型（每周1次，连续4次），第4次造模后分别取三叉神经节及三叉颈复合体、大脑额叶组织；RT-PCR及Westem印迹法分别测定P型Na^＋-K^＋-ATP酶的mRNA和蛋白的表达量，免疫沉淀法测定其活性，同时用Fluo-3／AM荧光法测定细胞内钙离子浓度。结果模型组大鼠三叉神经节及三叉颈复合体（0．72±0．05，0．59±0．05，5．21±0．51）及大脑额叶组织（0．70±0．05，0．60±0．05。3．61±0．49）的P型Na泵mRNA及蛋白表达和活性均明显低于生理盐水对照组（0．83±0．10．0．67±0．06，6．53±0．73；0．81±0．08，0．71±0．09，6．61±0．73），差异有统计学意义；模型组大鼠三叉神经节及三叉颈复合体（211182±12973）及大脑额叶组织（186511±18297）的细胞内钙离子浓度均明显高于生理盐水对照组（135243±18105，143289±25175），差异有统计学意义。结论P型Na^＋-K^＋-ATP酶可能通过其表达量及活性的变化参与了偏头痛的发生发展过程。

低浓度哇巴因升高豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度可能的信号转导途径

目的:观察哇巴因(ouabain,OUA)对豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度([Ca^(2+)])的影响,并探讨低浓度OUA是否可通过Na^+,K^+-ATPase的信号转导途径升高[Ca^(2+)]。方法:分离豚鼠心室肌细胞,激光共聚焦显微镜术测定单个心室肌细胞[Ca^(2+)]的荧光密度,另用不同浓度OUA孵育急性分离的豚鼠心室肌细胞后,分别取其沉淀用Western印迹检测观察OUA对酪氨酸蛋白(Src)磷酸化的影响。结果:在正常台氏液及无钙台氏液中,OUA(10^(-9),10^(-8),10^(-7),10^(-6)mol·L^(-1))均可浓度依赖性地升高细胞内钙浓度(P<0.05或0.01),且在正常台氏液中升高更为显著(P<0.05)。蛋白酪氨酸激酶抑制剂三羟异黄酮(genistein,GST)(1、10、50、100μmol·L^(-1))可浓度依赖性地抑制正常台氏液中的OUA效应。磷酸化Src包括相对分子质量120 000和70 000两个条带,各剂量OUA(10^(-4),10^(-6),10^(-8)mol·L^(-1))均能使Src的两个磷酸化条带的密度较阴性对照组显著升高(P<0.05),而GST(100μmol·L^(-1))可显著抑制OUA的升高效应。结论:低浓度OUA可能通过使酪氨酸蛋白磷酸化,激活OUA/Na^+,K^+ATPase/Src信号转导通路,促使钙通道开放及内钙释放,从而升高豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度。

哇巴因与地高辛对大鼠肝脏钠泵A亚单位基因表达的影响

目的 观察哇巴因与地高辛对大鼠肝脏钠泵基因表达的影响 .方法 分别给大鼠注射哇巴因 (2 0 μg· kg- 1·d- 1 )、地高辛 (32 μg·kg- 1·d- 1 )和生理盐水 (1m L· kg- 1·d- 1 ) ,观察给药后 6wk大鼠血压的动态变化 ;并分别应用分子生物学 RT- PCR及免疫组织化学技术 ,探讨各组大鼠肝脏钠泵 α1 ,α2 及 α3 亚单位 m RNA及蛋白水平基因表达的改变 .结果 给予哇巴因 2 wk后大鼠血压开始升高 ,至 6 wk时明显高于生理盐水组 (17.7± 1.2 ) vs(15 .4± 1.1) k Pa,P<0 .0 1) ,而实验过程中地高辛组血压与对照组比较差异不明显 .无论是在 m RNA水平还是在蛋白水平 ,哇巴因对大鼠肝脏钠泵α1 亚单位表达无影响 ,而地高辛使α1 亚单位表达增强 ;两组大鼠 α2 亚单位表达均无改变 ;哇巴因使 α3 亚单位蛋白水平表达减弱 ,而 m RNA水平增强 ,地高辛组大鼠肝脏钠泵 α3 亚单位无论在 m RNA水平及蛋白水平表达均增强 .结论 哇巴因在高血压发病中可能起着重要作用 ;哇巴因与地高辛可导致不同的钠泵基因表达改变 。

地高辛抗血清拮抗大鼠缺血再灌注引起的脑损伤(英文)

研究地高辛抗血清对缺血再灌注脑损伤的拮抗作用 ,采用了大鼠全脑缺血再灌注模型 ,比色法检测脑匀浆液中超氧化物歧化酶 (SOD)活性、丙二醛 (MDA)含量、脑细胞膜Na+ K+ 交换ATP酶活性、血清肌酸激酶(CK)含量 ;用放射免疫法检测脑匀浆液中内洋地黄素含量。结果发现 ,全脑缺血再灌注导致脑组织SOD活性和ATP酶活性显著下降 ,脑组织MDA水平、内洋地黄素水平和血清CK水平显著升高。地高辛抗血清能改善由于脑缺血再灌注所造成的SOD、ATP酶活性的下降以及MDA、CK和内洋地黄素水平的升高。结果表明 ,地高辛抗血清对脑缺血再灌注脑损伤具有保护作用 ,其作用机制与减轻脂质过氧化、促进自由基的清除以及改善脑能量代谢有关。这些作用可能是通过拮抗内洋地黄素的作用而实现的。

小肠上皮细胞钙转运机制研究进展

钙离子跨上皮细胞转运分为细胞旁途径和跨细胞途径。前者是经紧密连接顺电化学梯度进行；后者则需要借助上皮细胞顶膜上的钙离子通道蛋白TRPV6、胞浆钙结合蛋白CB、基底侧膜上的质膜钙ATP酶（PMCA）与钠一钙交换体（NCX）介导。1，25-二羟维生素D3、甲状旁腺激索（PTH）、降钙素（CT）等钙调激素对钙离子跨膜转运发挥调节作用。

特布他林对海水浸泡人肺泡上皮细胞钠钾泵及钠通道的影响

目的探讨特布他林对海水浸泡的人肺泡上皮细胞（A549）钠水转运通道的影响。方法将常规培养的A549细胞分为海水处理（SG）组、特布他林（20txmol／L孵育6h）处理（TG）组和阴性对照（NG）组。采用甲基噻唑基四唑（MTY）法检测细胞存活率，流式细胞仪检测细胞的凋亡和坏死情况，Westernblotting法检测钠钾泵仪1亚单位（Na＋／K＋-adenosinetriphosphatase—cd，NKA—od）、钠通道d亚单位（epithelailsodiumchannds—d，a-ENaC）的表达，水解比色法检测Na＋-K＋-ATP酶（Na-／K＋-exchangingATPase，NKA）活性。结果MTI＂法及流式细胞仪检测结果均显示，特布他林处理对海水孵育后细胞的存活率无影响。NG组的NKA—al和仅-ENaC蛋白表达显著高于SG组（P〈0．01）和TG组（t=3．71，3．78，P〈0．01），TG组显著高于SG组（t=2．58，2．64；P〈0．05）。与NG组NKA酶活性[（31．298±5．779）μmol／（mg·h）]比较，sG组[（14．211±3．885）p．mol／（mg·h）]和TG组[（19．521±1．648）μmol／（mg·h）]明显降低（t=2．54，2．71；P〈0．05）；TG组的NKA酶活性[（19．521±1．648）μmol／（mg·h）]较SG组升高（t=2．51，P〈0．05）。结论特布他林不影响人肺泡上皮细胞存活，并且可以抑制海水浸泡引起的仪-ENaC、NKA—cd含量及NKA活性的下降。