端粒酶、γ-干扰素、腺苷酸脱氨酶及结核感染T细胞斑点试验在诊断结核性和恶性胸腔积液中的作用分析

目的 评价端粒酶、γ-干扰素(IFN-γ)、腺苷酸脱氨酶(ADA)及T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)检测在诊断结核性和恶性胸腔积液中的价值。方法 纳入40例早期结核性胸膜炎患者(结核组)和40例恶性胸腔积液患者(肿瘤组),分别在治疗前抽取患者胸腔积液及空腹血液,应用酶联免疫吸附分析法检测端粒酶的含量和IFN-γ的浓度,应用比色分析法检测ADA的活性,采用Elispot斑点计数检测T-SPOT.TB阳性率。结果 结核组和肿瘤组的端粒酶含量分别为(1.46±0.73)×10~(-3) nmol/L和(3.34±1.72)×10~(-3) nmol/L,结核组端粒酶含量低于肿瘤组(P<0.01);结核组和肿瘤组的IFN-γ含量分别为(137.44±38.93) U/L和(27.94±8.46) U/L,ADA含量分别为(68.42±9.58) U/L和(15.39±4.43) U/L,2组患者IFN-γ含量和ADA含量比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结核组IFN-γ浓度、ADA活性及T-SPOT.TB阳性率均高于肿瘤组(P<0.01)。联合应用端粒酶、IFN-γ、ADA及T-SPOT.TB 4个诊断指标的诊断试验鉴别诊断结核性和恶性胸腔积液的敏感度为0.974,特异度为0.974。结论 联合应用端粒酶、IFN-γ、ADA及T-SPOT.TB 4个诊断指标的诊断试验在结核性胸腔积液和恶性胸腔积液的鉴别诊断中具有重要意义。

基于γ-干扰素释放试验的麻风分枝杆菌感染筛查诊断

目的:探讨γ-干扰素释放试验(IGRA)在麻风分枝杆菌感染诊断中的应用价值。方法:在麻风患者、健康人群的PBMCs中进行IGRA检测。麻风患者进一步按多菌型(MB)和少菌型(PB)展开研究,使用I-SPOT-TB试剂盒(酶联免疫斑点法)检测释放IFN-γ的效应T细胞频数。比较分析MB和PB患者IGRA检测的阳性率,结合qPCR结果对PB患者进行讨论分析。结果:以患者的病理诊断为确诊依据,纳入29例麻风患者,20名健康人群作为对照。用rESAT6-CFP10刺激后,MB和PB患者IFN-γ的激活程度和IGRA阳性率均无统计学差异。37.5%的PB患者qPCR阴性,IGRA阳性;12.5%的PB患者IGRA阴性,qPCR阳性;IGRA阳性或qPCR阳性的PB患者达75%。结论:IGRA阳性提示分枝杆菌感染的可能,IGRA联合qPCR可作为早期筛查麻风的辅助检测方法。

鸡γ-干扰素的原核表达及其单克隆抗体制备与鉴定

【目的】通过原核表达系统表达鸡γ-干扰素(chicken interferon-gamma,ChIFN-γ),并制备其单克隆抗体,为建立检测天然ChIFN-γ的免疫学方法提供试验材料。【方法】将密码子优化的ChIFN-γ基因克隆至原核表达载体pET-21a(+)中,构建重组质粒pET21a-ChIFN-γ;重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后,利用IPTG诱导表达重组蛋白;用该纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫合格的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合;用建立的ELISA方法筛选分泌针对ChIFN-γ蛋白特异性抗体的杂交瘤细胞,并制备腹水,Protein A/G纯化腹水获得特异性抗体;对单克隆抗体的类和亚类进行鉴定;Western blotting和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测单克隆抗体的反应性、亲和力和特异性交叉反应;用辣根过氧化物酶标记单克隆抗体,用两两配对的方法进行抗体配对。【结果】成功制备可溶性重组ChIFN-γ蛋白;Western blotting结果显示,ChIFN-γ与相应抗体结合呈现特异性条带(16 ku);获得7株针对ChIFN-γ的特异性杂交瘤细胞株:3E8、5F8、2G12、5A10、3D8、3B5、3G2。Western blotting和IFA结果显示,7株单克隆抗体反应性良好,均能特异性识别真核表达的ChIFN-γ;单克隆抗体的类和亚类鉴定结果显示,3E8、5F8、3D8、3B5和2G12重链均为IgG1,5A10重链为IgG2a,3G2重链为IgM,7株单克隆抗体的轻链均为Kappa型;所获得的7株单克隆抗体解离常数(dissociation constant,Kd)在1.04~58.33 nmol/L之间,为高亲和力抗体,并获得5组配对抗体。【结论】本研究成功制备了ChIFN-γ蛋白及其单克隆抗体,为进一步开展ChIFN-γ在禽类免疫学、病毒学及疫苗效果评价等相关研究奠定基础。

洛匹那韦/利托那韦联合α-干扰素治疗新型冠状病毒感染的疗效及对免疫功能的影响

目的探讨洛匹那韦/利托那韦(LPV/r)联合α-干扰素(INF-α)治疗新型冠状病毒感染的临床疗效及对免疫功能的影响,并主动监测药物不良反应(ADR)发生情况。方法回顾性分析2020年1月28日至6月17日270例新型冠状病毒感染患者临床资料,根据治疗药物分为LPV/r组、INF-α组和联合组,每组各90例。收集并比较所有患者一般资料;统计并分析所有患者临床症状好转时间、核酸转阴时间、肺部影像学检查;比较3组淋巴细胞计数、CD4^(+)T淋巴细胞计数、CD8^(+)T淋巴细胞计数;统计所有患者ADR主动监测结果。结果与LPV/r组和INF-α组比较,联合组患者退热时间、呼吸道症状缓解时间、核酸转阴时间均缩短,肺部影像学检查改善率升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。3组患者治疗后淋巴细胞计数、CD4^(+)T淋巴细胞计数、CD8^(+)T淋巴细胞计数均高于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05);与LPV/r组和INF-α组比较,联合组患者淋巴细胞计数、CD4^(+)T淋巴细胞计数、CD8^(+)T淋巴细胞计数均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。经临床药师结合患者个体情况综合评估,3组患者肝功能异常、关联性评价、严重程度分级及出院转归比较,差异均无统计学意义(P>0.05);联合组患者肝功能异常人数多于INF-α组,差异有统计学意义(P<0.05);联合组患者肝功能异常人数与LPV/r组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。LPV/r组、INF-α组和联合组ADR总发生率分别为32.22%、12.22%、37.78%,LPV/r组与联合组最常见的为累及消化系统,主要表现为腹泻、恶心和呕吐,其次为皮疹/瘙痒。与INF-α组比较,LPV/r组和联合组腹泻、消化系统不良反应总人数及ADR总人数均较多,差异均有统计学意义(P<0.05);LPV/r组与联合组各项ADR发生率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论LPV/r联合INF-α能明显提高单一用药治疗新型冠状病毒感染的疗效,尤其在缩短核酸转阴时间、提升肺部影像学检查改善率、增强免疫功能方面疗效更明显,但与单用INF-α比较会产生一定的不良反应,临床用药时应对其安全性予以重视。

γ-干扰素诱导蛋白10鉴别结核分枝杆菌不同感染状态效能的Meta分析

目的:评价γ-干扰素诱导蛋白10(IP-10)鉴别结核分枝杆菌不同感染状态的诊断效能.方法:检索Cochrane Library、PubMed、Web of Science、中国知网、维普、万方等数据库,检索自建库至2023年1月的相关文献,进行数据提取和质量评价,采用RevMan 5.3和Stata 17.0软件进行统计分析.结果:共纳入75篇文献,96项研究,共11116例患者.Meta分析结果为IP-10用于鉴别结核感染和非结核感染的合并敏感度为0.82(95%CI:0.79~0.84),特异度为0.87(95%CI:0.84~0.90),阳性似然比为6.40(95%CI:5.20~8.00),阴性似然比为0.21(95%CI:0.18~0.24),诊断比数比为31(95%CI:23~420),受试者工作曲线的曲线下面积为0.91(95%CI:0.88~0.93).结论:IP-10有助于鉴别结核不同感染状态,但最终确诊需要结合病史、症状等进行综合诊断.

灯盏乙素通过环状GMP-AMP合酶-干扰素基因刺激因子通路抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症

目的探讨灯盏乙素对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症的影响。方法培养BV-2小胶质细胞系,将BV-2小胶质细胞分为对照组(Ctrl)、环状GMP-AMP合酶(cGAS)抑制剂RU320521(RU.521)组、LPS组、LPS+RU.521组、LPS+灯盏乙素预处理(LPS+S)组、LPS+S+RU.521组,共6组。Western blotting及免疫荧光双标染色法检测并观察BV-2小胶质细胞中cGAS、干扰素基因刺激因子(STING)、核因子κB(NF-κB)、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、PYD结构域蛋白3(NLRP3)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达变化(n=3)。结果Western blotting和免疫荧光双标染色均显示,与对照组相比,LPS诱导后,BV-2小胶质细胞中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+S组中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著下降(P<0.05)。使用cGAS通路抑制剂RU.521后显示了与灯盏乙素预处理组相似的作用效果。此外,NF-κB在各组的变化不明显(P>0.05)。结论灯盏乙素干预抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症反应,可能与cGAS-STING信号通路有关。

艾滋病合并肺结核患者结核感染γ-干扰素释放试验结果假阴性的影响因素分析

目的:分析艾滋病合并肺结核患者结核感染γ-干扰素释放试验(TB-IGRA)结果假阴性的影响因素。方法:选取2021年1月—2023年3月孝感市第一人民医院感染科收治的艾滋病合并肺结核患者76例作为研究对象,均进行TB-IGRA,根据TB-IGRA结果分为真阳性组与假阴性组,比较两组临床资料,分析TB-IGRA结果假阴性的独立影响因素。结果:76例患者TB-IGRA结果阳性54例,TB-IGRA诊断艾滋病合并肺结核的灵敏度为71.1%(54/76),假阴性率为28.9%(22/76)。人类免疫缺陷病毒(HIV)病毒载量、年龄、CD4^(+)T细胞计数均为艾滋病合并肺结核患者TB-IGRA结果假阴性的独立影响因素(P<0.05)。结论:艾滋病合并肺结核患者TB-IGRA结果假阴性的影响因素包括HIV病毒载量、年龄、CD4^(+)T细胞计数,实际诊断时,需结合临床进行综合判断。

化学免疫分析结核γ-干扰素释放试验在肺结核诊断中的价值探究

目的 分析化学免疫分析结核γ-干扰素释放试验在肺结核诊断中应用的价值。方法 选取2020年1月—2023年4月江苏省淮安市楚州中医院接受检查的109例疑似肺结核患者作为研究对象,全部研究对象均行结核菌素皮肤试验和化学免疫分析结核γ-干扰素释放试验,将抗酸染色试验的结果为金标准,比较两种检测方式在肺结核诊断中的应用结果及诊断效能。结果 结核γ-干扰素释放试验在肺结核诊断中真阳性例数多于结核菌素皮肤试验。化学免疫分析结核γ-干扰素释放试验的灵敏度(94.74%)和准确度(93.58%)高于结核菌素皮肤试验的84.21%、81.65%,差异有统计学意义(χ^(2)=5.588,7.144,P均<0.05)。结论 在肺结核疾病诊断中,应用化学免疫分析结核γ-干扰素释放试验具有较高价值,诊断结果与金标准较为接近,诊断效能较高。

基于荧光免疫层析法的γ-干扰素释放试验对活动性肺结核的诊断价值

目的 评价荧光免疫层析法(IGRA)的γ-干扰素释放试验对活动性肺结核的诊断价值。方法 回顾性分析2023年1~6月浙江金华广福肿瘤医院疑似或待排肺结核患者758例,均进行IGRA检测。根据最终诊断将患者分为活动性肺结核病组268例和非结核病组490例,探讨IGRA对话动性肺结核的诊断效能。结果 IGRA检测活动性肺结核的敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值分别为86.57%、83.06%、73.65%、91.87%。ROC曲线分析得出最佳诊断界值为0.353IU/mL,其检测敏感度及特异度分别为86.57%(95%CI:81.96-90.14)、82.86%(95%CI:79.27-85.94)。结论 IGRA的γ-干扰素释放试验对辅助诊断活动性肺结核具有较好的敏感度和阴性预测值,该检测产品操作简单、报告时间短,非常适用于结核感染的筛查和活动性肺结核的快速辅助诊断。

γ-干扰素体外释放试验在结核病诊断中的临床价值

探讨γ-干扰素(IFN-γ)体外释放试验(TB-IGRA)在结核病诊断中的临床价值。方 法 以2023年1月至2023年12月间在梧州市某医院进行TB-IGRA检测的150例患者(其中包括30例正常对照者)作为研究对象。查看其病例与临床资料,并与抗酸杆菌检测(液基夹层杯)、结核菌培养、结核抗体检测(TB-AB)比较其检测的灵敏度和特异性。结果 在150名被选取的患者中,已确诊为结核病的有64例(肺结核41例,肺外结核23例),其中IGRA57例为阳性,灵敏度较高,可达到89.06%。肺部感染引起的结核与肺外其他组织器官感染所引起的结核在阳性检出率上来进行比较,并没有显著性差异(P>0.05);TB-IGRA试验的阳性检出率要明显高于本次试验中的其他三种检测方式。本次试验中临床资料确诊为非结核的病例为86例(包括确诊肺部感染或其他疾病者56例和30例健康对照者),其中71例通过TB-IGRA测定的结果为阴性,特异性为82.56%。结论 γ-干扰素体外释放试验对检测各种结核病具有取材方便、检测快速、灵敏度高、特异性好等优点;临床应用价值较高,值得在临床应用和推广。

γ-干扰素释放试验对菌阴性肺结核辅助诊断价值探讨

目的 探讨在菌阴性肺结核辅助诊断中γ-干扰素释放试验的价值。方法 在2017年01月~2021年12月收治的菌阴性肺结核患者中选取90例配合研究作为观察组,并在同期抽取到院体检的健康人员90例作为对照组。对所有研究对象实施γ-干扰素释放试验、酶联免疫吸附试验检测,以纤维支气管镜灌洗液细菌学检测结果或纤维支气管镜活检或CT引导穿刺病理诊断作为检测金标准,对检测结果进行详细分析。结果 γ-干扰素释放试验结果准确率为94.44%,灵敏度为98.84%,特异度为75.00%,阳性预测值为98.84%,阴性预测值为75.00%;酶联免疫吸附试验结果准确率为73.33%,灵敏度为92.96%,特异度为78.95%,阳性预测值为94.29%,阴性预测值为75.00%;两组数据比较诊断准确率有统计学意义(P<0.05),两组灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值比较无统计学差异(P>0.05);观察组淋巴细胞计数(1.56±0.62)×109/L、腺苷脱氨酶(13.25±3.35)U/L、红细胞沉降率(33.75±5.26)mm/h均高于对照组(P<0.05)。结论 临床上多种方法均可应用在菌阴性肺结核疾病诊断中,γ-干扰素释放试验为首选方法,此种方法具有较高检测准确率、灵敏度、阳性预测值,临床上可大力推广。

三种α-干扰素亚型结构与功能的研究

目的 利用自制的 6株单克隆抗体对α2a 干扰素、α2b 干扰素和α1b 干扰素的结构与功能进行分析。方法 采用细胞ELISA法、抗增殖活性和抗病毒活性等试验。结果 对干扰素抗病毒活性有影响的单克隆抗体对干扰素抗增殖活性也有影响 ,而对干扰素抗增殖活性有影响的 ,不一定对干扰素抗病毒活性有影响。结论 干扰素表面细胞受体结合位点与单克隆抗体结合位点是分开的。干扰素的抗病毒活性位点也是它的抗增殖活性位点 ,而干扰素的抗增殖活性作用的发挥可能还有其它位点的参与 ;单克隆抗体的中和活性不是通过阻断干扰素分子与细胞表面受体结合造成的。

γ-干扰素释放试验联合纤维支气管镜在肺结核诊断中的应用价值

目的:探讨γ-干扰素释放试验与纤维支气管镜的联合诊断应用于肺结核患者的诊断中,集中对该种检查方式的诊断效能进行分析,旨在为临床对肺结核的诊断中提供更有效的检查方式。方法:选取2017年1月至2021年12月广西壮族自治区南溪山医院接收的初步判断为肺结核的130例患者作为研究对象,依次为患者进行γ-干扰素释放试验、纤维支气管镜检查以及痰或灌洗液细菌学检查,将痰或灌洗液细菌学结核分枝杆菌培养检查作为金标准判断γ-干扰素释放试验、纤维支气管镜检查以及联合检查的诊断灵敏度、特异度。结果:经痰或灌洗液细菌学检查可见109例阳性患者及21例阴性患者,计算可见γ-干扰素释放试验(96例阳性及34例阴性)的灵敏度为83.49%、特异度为76.19%、漏诊率为16.51%;纤维支气管镜检查(98例阳性及32例阴性)的灵敏度为84.40%、特异度为71.43%、漏诊率为15.74%;联合检查(106例阳性及24例阴性)的灵敏度为94.50%、特异度为85.71%、漏诊率为5.50%。按照从高到低的顺序排列可见,特异度:联合检查>纤维支气管镜检查>γ-干扰素释放试验;特异度:联合检查>γ-干扰素释放试验>纤维支气管镜检查;漏诊率:γ-干扰素释放试验>纤维支气管镜检查>联合检查。结论:在对肺结核患者进行诊断时,采取γ-干扰素释放试验联合纤维支气管镜的联合检查,能够在短时间内有效的识别肺结核患者,同时在联合检查时能够弥补单纯采取该两种检查的不足,漏诊率低的同时具有相当高的灵敏度和特异度。

南昌地区某院就诊患者γ-干扰素释放试验的应用价值研究

目的了解江西省南昌地区某院就诊患者γ-干扰素释放试验(IGRA)检测结核分枝杆菌潜伏感染流行病学特征。方法收集江西省南昌地区某院2017年1月至2020年12月来院就诊的2561例患者血液,用γ干扰素释放试验检测患者潜在感染状况。结果就诊患者IGRA阳性率为39.55%(1013/2561),不同年份患者之间IGRA阳性率比较,差异无统计学意义(χ^(2)=4.775,P>0.05),不同性别、不同年龄组患者之间IGRA阳性率比较,差异有统计学意义(χ^(2)=9.442,χ^(2)=18.487,均P<0.05)。结论南昌地区某院就诊患者结核杆菌潜伏感染相对较高,提示应加强人员监测力度,提高结核分枝杆菌潜伏感染的早期诊断率。

γ-干扰素释放试验、Xpert MTB/RIF联合检测诊断艾滋病合并肺结核的价值分析

目的:分析γ-干扰素释放试验联合利福平耐药结核分枝杆菌实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)诊断艾滋病合并肺结核的价值。方法:选取2018年1月-2021年12月苏州市第五人民医院收治的126例艾滋病疑似合并肺结核患者作为研究对象,均进行结核分枝杆菌培养、γ-干扰素释放试验与Xpert MTB/RIF检测,以结核分枝杆菌培养结果为“金标准”,比较不同诊断方式的效能。结果:结核分枝杆菌培养结果显示,126例艾滋病患者中,36例(28.57%)诊断为肺结核。联合检测诊断艾滋病合并肺结核的灵敏度、准确度、阴性预测值高于γ-干扰素释放试验、Xpert MTB/RIF单一检测,差异有统计学意义(P<0.05);γ-干扰素释放试验、Xpert MTB/RIF检测单项诊断艾滋病合并肺结核的灵敏度、准确度、阴性预测值以及三种方式诊断艾滋病合并肺结核的特异度、阳性预测值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:γ-干扰素释放试验联合Xpert MTB/RIF诊断艾滋病合并肺结核的效果较好,可作为辅助诊断艾滋病合并肺结核的方法。

SVA及α-干扰素对PK-15细胞microRNA转录谱影响的分析

为探究猪塞内卡病毒A(SVA)感染、干扰素(IFN-α)处理对猪肾细胞(PK-15)微RNA(microRNA,miRNA)转录谱的影响,本研究分别构建SVA感染的PK-15(PK-15/SVA)、IFN-α处理的PK-15(PK-15/IFN),SVA感染再经IFN-α处理的PK-15细胞(PK-15/SVA/IFN),通过荧光定量PCR(qPCR)分别检测各组细胞中SVA VP1及IFN-αmRNA的转录水平。结果显示,与PK-15相比,PK-15/SVA及PK-15/SVA/IFN细胞中SVA VP1基因的转录水平极显著升高(P<0.001),PK-15/SVA/IFN中IFN-α的转录水平显著或极显著升高(P<0.05、P<0.01)。通过转录组测序技术(RNA-Seq)分析各组细胞miRNA的转录谱,采用Spss软件统计各组细胞中转录差异miRNA的数量;利用基于负二项分布的DESeq2筛选各组细胞中转录显著差异miRNA;采用miRanda、PITA和RNAhybrid 3个软件预测各组细胞转录显著差异miRNA的靶基因,通过miREvo和mirdeep2软件预测各组细胞中的新miRNA并通过与猪miRNA序列比对得到已知miRNA;分别采用GO功能和KEGG富集分析各组细胞转录显著差异miRNA涉及的生物学功能及信号通路。统计分析结果显示,与PK-15相比,PK-15/IFN、PK-15/SVA和PK-15/SVA/IFN中均存在转录显著差异miRNA,且在SVA感染后细胞中转录的miRNA数量增多,IFN-α刺激则会减少细胞中转录的miRNA数量,SVA感染后再经IFN-α处理则转录的miRNA数量又有所降低。筛选结果显示,与PK-15相比,PK-15/SVA中有167种转录显著差异miRNA,其中94种转录显著上调,73种转录显著下调;与PK-15相比,PK-15/IFN中有98种转录显著差异miRNA,其中55种转录显著上调,43种转录显著下调。预测结果显示,共有290种转录显著差异miRNA有对应靶基因,且共预测到292种新miRNA和345种已知miRNA。选取6种转录显著差异miRNA采用Graphpad prism6.0进行miRNA-mRNA的互作网络展示。结果显示,miR-221-5p的靶基因显著多于其他miRNA,且其靶基因主要与癌症、病毒感染的治疗及宿主的免疫反应有关。GO功能结果显示,在经IFN-α处理或SVA感染后,转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于细胞组分和生物过程等功能。KEGG分析结果显示,与PK-15相比,PK-15/SVA和PK-15/IFN细胞中转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于Rap1和NF-κB信号通路;与PK-15/IFN相比,PK-15/SVA/IFN细胞中转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于PI3K-Akt、NF-κB和肿瘤坏死因子(TNF)等抗病毒免疫相关信号通路;与PK-15/SVA相比,PK-15/SVA/IFN细胞中转录显著差异miRNA的靶基因主要富集于Rap1、NF-κB、TNF和MAPK信号通路。16种转录显著差异miRNA的qPCR结果与RNA-Seq结果一致。综上所述,本研究首次证实IFN-α处理、SVA感染均显著影响PK-15细胞miRNA转录谱,前者促进miRNA的转录,后者则抑制miRNA的转录。其中转录显著差异miRNA的靶基因与宿主抗病毒及肿瘤免疫均等信号通路密切相关,该结果为阐明SVA感染宿主细胞后非编码RNA转录谱变化的分子机制研究奠定基础。

肺泡灌洗液γ-干扰素释放试验在肺结核诊断中的价值及其影响因素的分析

目的探讨肺泡灌洗液γ-干扰素释放试验,在肺结核诊断中的价值及其假阴性影响因素的分析。方法回顾性收集2019年1月—2021年1月于河北省胸科医院就诊的活动性肺结核患者205例,非结核患者106例为研究对象,探讨肺泡灌洗液γ-干扰素释放试验,对肺结核的诊断价值;分析肺泡灌洗液γ-干扰素释放试验假阴性的可能影响因素。结果肺泡灌洗液-γ干扰素释放试验,在肺结核诊断中的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确率分别为:85.9%(176/205)、77.4%(82/106)、88%(176/200)、73.9%(82/111)、83%(258/311)。对可能影响肺泡灌洗液-γ干扰素释放试验的因素进行Logistic分析,发现白细胞计数、中性粒细胞百分比、血沉升高及淋巴细胞百分比降低是肺结核患者灌洗液γ-干扰素释放试验假阴性的独立危险因素。结论肺泡灌洗液γ-干扰素释放试验,在活动性肺结核诊断中具有较高的诊断效能。白细胞计数、中性粒细胞百分比、血沉升高及淋巴细胞百分比降低是肺结核患者灌洗液γ-干扰素释放试验假阴性的独立危险因素。

γ-干扰素释放试验在抗酸杆菌涂片阴性肺结核患者诊断中的应用价值研究

目的:研究γ-干扰素释放试验(IGRAs)在抗酸杆菌涂片阴性肺结核患者临床诊断中的应用价值。方法:回顾性分析2017年1月—2018年12月于广西壮族自治区南溪山医院行IGRAs与纤维支气管镜灌洗或刷检标本抗酸杆菌阴性患者320例的临床资料,根据患者是否患有肺结核分为两组,将纤维支气管镜标本涂片阴性肺结核患者178例纳入肺结核组,肺炎、肺癌等疾病患者142例纳入其他肺部疾病组。比较两组患者ICRAs与结核菌素皮肤试验(TST)检测结果,比较两种检查的诊断价值。结果:肺结核组患者IGRAs与TST阳性率均高于其他肺部疾病组,差异有统计学意义(P<0.001)。IGRAs对抗酸杆菌涂片阴性肺结核诊断的敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值均高于TST,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抗酸杆菌涂片阴性肺结核患者IGRAs与TST阳性检出率均高于其他肺部疾病患者,但IGRAs具有更高敏感度、特异度、阳性预测值与阴性预测值,诊断价值较高。

结核分枝杆菌特异性γ-干扰素化学发光免疫检测体系的建立

目的建立一种用于便携式检测结核分枝杆菌特异性γ-干扰素的化学发光免疫检测体系,为下一步研制便携式检测试剂盒奠定基础。方法利用生物素-链霉亲和素系统偶联磁珠和抗体,利用酰胺键结合方式偶联吖啶酯和标记抗体。采用正交实验法,优化结核分枝杆菌特异性γ-干扰素检测试剂盒所需的吖啶酯标记检测抗体及磁珠偶联包被抗体的方法、缓冲液配方、封闭液配方等条件。最后将建立的检测体系与商品化酶联免疫吸附试验(ELISA)参照试剂盒进行比较。结果建立的检测体系与商品化ELISA参照试剂盒阳性符合率为99.20%,阴性符合率为98.91%,总符合率为99.10%,Kappa值为0.982,最低检出限0.66 pg/mL。结论建立的便携式结核分枝杆菌特异性γ-干扰素化学发光免疫检测体系与ELISA参照试剂盒相比具有类似的检测能力,可用于临床辅助诊断。

山羊α-干扰素基因克隆、原核表达及其抗病毒活性研究

为研究雷州山羊α-干扰素基因的遗传变异及重组α-干扰素的抗病毒活性,采用RT-PCR扩增雷州山羊α-干扰素基因,分析其核苷酸序列;采用PCR方法扩增山羊α-干扰素基因成熟肽编码序列,构建原核表达载体pET-mIFN-α,并在大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达;采用SDS-PAGE和Western-blot检测重组蛋白rG-mIFN-α;通过细胞病变抑制法测定其抗小反刍兽疫病毒(PPRV)和山羊痘病毒(GPV)活性。结果表明,雷州山羊α-干扰素全基因由570个核苷酸组成,编码189个氨基酸;与GenBank上发表的山羊、林麝、弯角大羚羊、黄牛、瘤牛、绵羊、猪、人和鼠的核苷酸序列同源性分别为99.8%、95.6%、96.8%、94.7%、94.7%、96.8%、81.6%、77.8%和70.0%;氨基酸序列同源性分别为100%、92.6%、94.7%、92.1%、93.2%、93.7%、67.9%、61.6%和55.3%,提示反刍动物α-干扰素基因的核苷酸和氨基酸序列高度保守;rG-IFNα主要以包涵体形式存在,分子质量约32 ku;重组山羊α-干扰素能显著抑制PPRV和GPV感染引起的细胞病变,其抗PPRV和GPV效价分别为1.6×10^(4)U/mg和1.35×10^(4)U/mg。