液化天然气(LNG)储罐专用500MPa级耐-165℃低温钢筋的研制

-165℃低温钢筋是LNG储罐工程建设的重要基础材料之一,目前完全依赖进口。文章在借鉴国内低温容器钢板的基础上,采用低P、低S的成分设计,成功开发出LNG储罐专用500MPa级耐-165℃低温钢筋,对低温钢筋的常温力学性能、-165℃低温力学性能、金相组织进行了研究,结果表明试制的低温钢筋具有较高的强度和塑性,尤其是良好的-165℃低温下的力学性能及缺口敏感性,可以满足LNG储罐的技术要求,填补了国内产品的空白。

耐-165℃低温钢筋控轧控冷工艺研究

利用膨胀仪、Gleeble热模拟机对耐-165℃低温钢筋的连续冷却转变规律进行了研究。测试了试验钢的显微硬度,观察了不同冷速下钢的转变组织,进行了-165℃低温力学性能检验,对冷却速率和变形条件对组织和性能的影响进行了研究。结果表明：低温钢筋适宜的冷却速度为5~15℃/s,组织主要为铁素体＋贝氏体,有利于材料韧性的发挥;组织中铁素体含量随变形温度的降低逐渐增加,适宜的变形温度为850~950℃;采用上述适宜的变形温度和冷却速率轧制的钢筋具有良好的低温力学性能,在-165℃试验条件下,无缺口试样屈服强度Re L最小值为707 MPa,最大力伸长率Agt最小值为4.1%;缺口试样Agt最小值为1.5%;缺口敏感性NSR最小值1.05。这些完全满足石化行业LNG储罐的技术要求。

血管内皮生长因子165/骨形态发生蛋白改善缺氧复氧状态下成骨细胞损伤

背景:研究发现,血管内皮生长因子165和骨形态发生蛋白两种因子在缺氧复氧过程中相互作用,通过调节细胞内信号通路的活化,参与骨细胞损伤的修复过程。目的:进一步探究血管内皮生长因子165/骨形态发生蛋白与缺氧复氧成骨细胞损伤的关系分析。方法:取成骨细胞,建立缺氧复氧损伤模型,建模前后Real-Time PCR法和免疫印迹法检测血管内皮生长因子165、骨形态发生蛋白2的mRNA及蛋白表达。分别给予建模后成骨细胞不同质量浓度(10,20,40ng/mL)血管内皮生长因子165或骨形态发生蛋白2处理12,24,36,48,72 h,CCK-8法检测细胞增殖,DAPI检测细胞凋亡。结果与结论:(1)与建模前相比,建模后成骨细胞中血管内皮生长因子165、骨形态发生蛋白2的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.05);(2)成骨细胞增殖率随着血管内皮生长因子165质量浓度的升高而明显升高(P<0.05);成骨细胞凋亡率随着血管内皮生长因子165质量浓度的升高而明显降低(P<0.05);(3)成骨细胞增殖率随着骨形态发生蛋白2质量浓度的升高而明显升高(P<0.05);成骨细胞凋亡率随着骨形态发生蛋白质量浓度的升高而明显降低(P<0.05);(4)结果表明,血管内皮生长因子165、骨形态发生蛋白在缺氧复氧成骨细胞损伤中低表达,给予血管内皮生长因子165、骨形态发生蛋白处理后缺氧复氧成骨细胞损伤明显降低,且呈浓度依赖性,提示血管内皮生长因子、骨形态发生蛋白对缺氧复氧成骨细胞损伤有明显保护作用。

不同途径导入rAAV-VEGF_(165)基因对大鼠脑缺血边缘区血管生成的影响

目的探讨脑池内及静脉导入重组腺病毒介导血管内皮细胞生长因子(rAAV—VEGF165)基因对大鼠脑缺血边缘区血管生成的影响。方法用线栓加环扎法建立SD大鼠持续性大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型。SD大鼠48只,随机分为脑脊液导入组、静脉导入组、单纯梗死组和假手术组,治疗组于术后24h内将rAAV—VEGF165基因通过小脑延髓池或静脉内导入。各组分别于7d和14d断头取脑,CD31免疫组化染色检测脑组织微血管密度。结果各组脑缺血边缘区CD31阳性细胞密度(个／高倍视野,×200)分别为:7d 组:脑脊液导入组92．73±5．18、静脉导入组77．40±5．43、单纯梗死组46．50±5．33和假手术组13．90±1．49(P< 0．05);14d组:脑脊液导入组104．05±4．30、静脉导入组89．88±5．77、单纯梗死组65．33±2．31和假手术组13．90± 1．49(P<0．05)。结论 rAAV—VEGF165基因可以通过脑池内及静脉内导入转染到大鼠缺血脑组织中并表达 VEGF,促进新生血管的形成和侧支循环的建立,治疗脑缺血。

探究慢病毒介导BMP-2及VEGF-165转染山羊骨髓间充质干细胞向软骨方向分化的影响

目的:探究慢病毒介导骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)及血管内皮生长因子-165(vascular endothelial growth factor-165)转染山羊骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向软骨方向分化的影响。方法:采用全骨髓贴壁法培养原代山羊的BMSCs,传代后在慢病毒的介导下导入目的基因,研究山羊BMSCs作为基因共转移靶细胞的可行性,以及细胞的体外培养条件、增殖情况,转染后向成软骨方向分化等生物学变化。结果:Lv-BMP2-VEGF165组BMP-2 mRNA的表达与BMP-2组无明显差异(P>0.05),VEGF-165 mRNA的表达与VEGF-165组无明显差异(P>0.05);Lv-BMP2-VEGF165转染组OCN mRNA的表达高于单基因转染组(P<0.05);BMP-2和VEGF-165蛋白只有在Lv-BMP2-VEGF165组中高效率表达;Lv-BMP2-VEGF165组OCN蛋白的表达显著高于其他各组(P<0.01),Lv-BMP2-VEGF165转染组碱性磷酸酶活性明显高于其他组。结论:BMP-2、VEGF-165、BMP-2/VEGF-165可成功转入到山羊BMSCs内,并能长期稳定表达,在新骨形成过程中,二者的协同作用能通过促进碱性磷酸酶的生成、骨钙素的合成并使细胞向成软骨方向发展。

VEGF165-tPA双基因真核表达载体的构建和体外表达

目的构建人血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)和人组织型纤溶酶原激活因子(tPA)双基因的新型真核表达载体pIRES-VEGF165-tPA,并通过转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞,验证载体的体外表达情况。方法将目的基因片段VEGF165和tPA插入到真核表达载体pIRES质粒中,体外瞬时转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞,通过实时荧光定量RT-PCR和Western blot分别检测mRNA和蛋白水平的表达。结果成功构建pIRES-VEGF165-tPA双基因真核表达载体,测序结果与预期相符;荧光计数显示体外瞬时转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞的转染效率约为(15.6±3.1)%;实时荧光定量RT-PCR和Western blot证实转染pIRES-VEGF165-tPA质粒组细胞在mRNA和蛋白水平的表达均高于各对照组(均P<0.01)。结论成功构建pIRES-VEGF165-tPA双基因真核表达载体,并且实现其在人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞中的表达,为进一步探索其在机械瓣膜抗凝方面的作用奠定了基础。

APP5肽类似物165对链脲佐菌素损伤SH-SY5Y细胞的保护作用

目的探讨体外APP5肽类似物165(下称P165)对链脲佐菌素(STZ)损伤SH-SY5Y细胞的保护作用。方法STZ0.8mmol/L作用于SH-SY5Y细胞的损伤模型。通过测定噻唑蓝(MTT)代谢率、乳酸脱氢酸(LDH)漏出率,瑞氏染色观察细胞形态,Western blot检测相关蛋白,观察P165的保护作用。结果与正常对照组细胞的MTT代谢率(1.00±0.01)和LDH漏出率(201.56±47.54)比较,STZ损伤组细胞MTT代谢率降低(0.84±0.01),LDH漏出率升高(317.83±76.95),差异有统计学意义(P<0.05),细胞胞体面积缩小,胰岛素信号通路相关蛋白IRS-1、PI3K表达减少;P16530μmol/L组细胞MTT代谢率升高(0.91±0.01),LDH漏出率降低(228.53±35.65),细胞形态恢复正常,胰岛素信号通路相关蛋白IRS-1、PI3K表达恢复正常。结论体外STZ与SH-SY5Y细胞共孵育,可能影响胰岛素/胰岛素受体信号转导系统对细胞的促生长作用,而P165可能通过激活该信号通路逆转这种损伤,可作为一种神经营养因子起到保护作用。

脂质体法介导pIRES2-EGFP-hVEGF165转染人胎盘源间充质干细胞

目的:构建人血管内皮生长因子165(hVEGF165)的真核表达质粒pIRES2-EGFP-hVEGF165,通过脂质体法将其转入人胎盘源间充质干细胞(HPMSCs)中,鉴定hVEGF165的表达活性及携带目的基因的HPMSCs的多向分化潜能。方法:采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从人白血病细胞HL-60中扩增出hVEGF165的基因片段,构建pIRES2-EGFP-hVEGF165重组质粒,经酶切检测其构建的正确性,通过脂质体法转染HPMSCs后分别采用RT-PCR、Western blotting法及MTT法检测其转录和表达活性;荧光显微镜下观察增强型绿色荧光蛋白(EGFP),检测含有报告基因EGFP空载体及携带报告基因和目的基因的真核表达载体转染靶细胞的情况;并再次鉴定转染后HPMSCs的多向分化潜能。结果:成功构建重组质粒pIRES2-EGFP-hVEGF165;RT-PCR、Western blotting及MTT法检测表明,构建的质粒pIRES2-EGFP-hVEGF165具有转录及表达活性;绿色荧光显微镜下观察到EGFP表达,目的基因成功转入靶细胞,携带目的基因的HPMSCs仍保持多向分化潜能。结论:成功构建具有表达活性的hVEGF165真核表达质粒pIRES2-EGFP-hVEGF165,hVEGF165在HPMSCs中具有转录及表达活性,且对HPMSCs的增殖具有促进作用;HPMSCs本身可能具有hVEGF165的内分泌功能。

链脲佐菌素对大鼠海马p-CREB表达的影响及APP5肽类似物165的治疗作用

目的探讨链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)对大鼠海马磷酸化环磷腺苷反应成分结合蛋白(phosphatedcylinc AMP response element binding protein,p-CREB)表达的影响以及APP5肽类似物165的治疗作用。方法将42只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和APP5肽类似物165治疗组。将STZ溶解于人工脑脊液,新鲜配制成浓度为25mg/mL,分别于第1、3天按体重3mg/kg行双侧脑室注射。APP5肽治疗组于3周后开始行APP5肽类似物165灌胃,连续4周。对照组和模型组则以等量生理盐水灌胃。4周后取脑组织海马行免疫组织化学染色和Western-blotting检测p-CREB。结果模型组p-CREB阳性神经细胞数(137.44±22.62)较对照组(27.33±9.91)明显增多(P<0.05),胞质淡染;APP5肽治疗组p-CREB阳性神经元数目(29.78±10.72)与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组海马p-CREB表达多于对照组和APP5肽治疗组,APP5肽治疗组与对照组接近。结论脑室注射小剂量STZ可使海马p-CREB阳性神经元表达增多,而APP5肽类似物165可使p-CREB阳性神经元表达恢复至正常水平。

PcDNA3.1-VEGF165质粒转染神经母细胞瘤细胞后VEGF165的表达

目的:观察PcDNA3.1-VEGF165质粒转染神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)后VEGF165在体外的表达。方法:将PcDNA3.1-VEGF165质粒应用脂质体介导的方法转染到SH-SY5Y(Ⅰ组),同时建立空白对照组(Ⅱ组),两组其他试验条件均保持一致。脂转48h后,用ELISA和Western-blot定量检测VEGF165可溶性产物。应用RT-PCR对SH-SY5Y产生的mRNA进行定性检测。对两组ELISA的定量结果进行统计学分析比较。结果:脂转组(Ⅰ组)PcDNA3.1-VEGF165质粒转染48h后神经母细胞瘤细胞即有VEGF165高效表达,RT-PCR可扩增到一条特异性的泳带,Western-blot显示转基因神经母细胞瘤细胞上清液中有一分子量为23kD的特异性条带。空白对照组(Ⅱ组)有微量的VEGF165表达(84.14±33.89ng/ml),脂转组的VEGF165表达量(1005.15±185.50ng/ml)明显高于对照组,两组比较差异有显著性(P<0.05)。结论:神经母细胞瘤细胞体外培养有微量VEGF165表达,PcDNA3.1-VEGF165质粒可通过脂质体转染体外培养的神经母细胞瘤细胞,被转染的神经母细胞瘤细胞能够高效表达VEGF165。

腺病毒载体介导人BMP-2与VEGF-165对骨髓间充质干细胞形态特征及增殖能力影响的实验研究

目的探讨携带骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)与血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor 165,VEGF-165)双基因的腺病毒载体转染骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)后对细胞形态特征及增殖能力的影响。方法选取4只新西兰大白兔抽取骨髓液,分离鉴定获得第3代BMSCs做为实验对象,实验分成4组:Ad-BMP-2-VEGF-165转染组(A组);Ad-BMP-2转染组(B组);AdVEGF-165转染组(C组);BMSCs对照组(D组),每组6个复孔,连测3次。首先,将腺病毒载体转染BMSCs,获得最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI);其次,转染后1-3d观察转染各组细胞与D组形态和贴壁状况差异变化;再次,ELISA法检测转染各组目的蛋白表达量与D组的差异;最后,MTT法测定1-7d各组细胞增殖曲线,并进行组间比较。结果 BMSCs分离鉴定成功,第3代细胞高表达CD29(99.82%),CD44(94.14%)抗原。腺病毒转染组最佳MOI值分别为A组MOI=80,B组MOI=80,C组MOI=100。腺病毒转染后各组细胞形态和贴壁特性未见明显改变,边界清晰,细胞呈梭形,细胞核较大呈圆形或椭圆形,生长旺盛。转染组细胞高表达目的蛋白,在第5d目的蛋白浓度到高峰,A组BMP-2浓度为1525.47±58.16pg/ml,B组为1506.48±92.65pg/ml;A组VEGF-165浓度为1732.14±126.25pg/ml,C组为1733.59±127.07pg/ml,转染组在不同时间点的目的蛋白表达量与D组差异均具有统计学意义(P<0.05)。MTT法显示第1d、第2dBMSCs未见明显增长,第3d开始呈指数增长,第5d达高峰;第3d,A组、B组吸光度(optical density,OD)值分别为0.113±0.004、0.112±0.003,均高于C组、D组(P<0.05);第4d,A、B、C各组OD值分别为0.113±0.004、0.110±0.003、0.105±0.001,均高于D组0.102±0.004,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BMP-2与VEGF-165对BMSCs形态和贴壁性无明显影响,但是均可以促进BMSCs增殖,且两者对细胞的增殖无明显叠加作用。

VEGF-165基因修饰的MSCs诱导分化后治疗兔股骨头缺血性坏死的实验研究

目的:探讨VEGF-165基因联合单纯骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)治疗激素性股骨头坏死的可行性。方法:1)体外分离、培养兔MSCs,纯化并鉴定兔MSCs;免疫荧光法检测细胞表面标志;传代培养后以1μgPcDNA3.1-hVEGF165∶3μl阳离子脂质体Lipofectamine的比例转染,通过ELISA检测转染后细胞中外源性VEGF的表达。2)测定在正常条件培养和成骨条件培养下,转染后细胞上清中碱性磷酸酶、骨钙素的水平。3)实验动物连续三天大剂量(40mg/kg)臀部肌肉注射甲泼尼龙琥珀酸钠,通过MRI和组织病理学检查,建立动物模型。4)随机分成4组,每组14只。经皮穿刺于右侧股骨头,(1)生理盐水组,(2)单纯MSCs组,(3)hVEGF165基因转染MSCs组,(4)诱导分化后的hGVEF165基因转染MSCs组。8周后,组织病理学检查成骨和细胞成活情况。结果:1)hVEGF165基因转染的MSCs能成功分泌VEGF蛋白。2)成骨条件培养下,基因转染组细胞碱性磷酸酶和骨钙素的分泌量明显高于未转染组(P<0.05);而在正常条件培养下,基因转染组细胞碱性磷酸酶和骨钙素的表达分泌量较低。3)成功建立ANFH模型。4)组织学评分:生理盐水组1.8±0.72;单纯MSCs组8.54±0.37;hVEGF165基因转染MSCs组11.96±0.26;诱导分化后的hGVEF165基因转染MSCs组13.7±0.43,各组间差异有显著性(P<0.05)。诱导分化转基因干细胞组与单纯干细胞组和生理盐水组之间差异非常显著(P<0.01)。结论:诱导分化后的hVEGF165基因转染MSCs组成骨能力更好,修复股骨头缺血性坏死的能力也是最强。

β淀粉样肽前体蛋白N端328-332类似物165对谷氨酸引起神经毒作用的影响

目的通过观察β淀粉样肽前体蛋白N端328-332(APP5肽)类似物165对谷氨酸引起神经毒性作用的影响,进一步证实APP5肽类似物165的神经营养作用。方法以人神经母细胞瘤株SY5Y为细胞模型,分为正常对照组、谷氨酸500μmol/L损伤组和谷氨酸500μmol/L加APP5肽及类似物165各40μmol/L保护组。以MTT代谢率、LDH漏出率、细胞轴突长度和胞体面积作为观察指标。结果与正常对照组相比,谷氨酸损伤组MTT代谢率降低,LDH漏出率升高,轴突长度和胞体面积均缩小;而加入APP5肽及类似物165保护后,可使上述指标得以改善。结论APP5肽及类似物165具有神经营养作用,可减轻谷氨酸引起的神经元损伤。

局部应用VEGF-165抑制兔颈移植静脉内膜增生的研究

目的探讨局部应用VEGF-165抑制兔颈移植静脉内膜增生的机制。方法健康家兔24只,均建立颈外静脉-颈总动脉移植模型并分为对照组及实验组。对照组移植静脉周围仅应用Pluronic-F-127,实验组移植静脉周围应用Pluronic-F-127+VEGF-165。观察静脉移植血管外膜、内膜增生情况,移植静脉VEGF及eNOS的表达量,增殖细胞核抗原PCNA表达情况。分析外膜厚度与静脉桥血管内膜增生的关系。结果与对照组相比,实验组移植静脉内膜增厚明显减轻、而外膜明显增厚,移植静脉eNOS的表达量明显增加;实验组移植静脉平滑肌细胞向外膜方向迁移;术后免疫组化检查显示,实验组移植静脉血管壁内膜VEGF-165的蛋白含量高;两组移植静脉PCNA的表达量未及明显差异。结论 VEGF-165可以通过增加内皮eNOS表达加速移植静脉血管内皮化,促进移植静脉外膜生长促进平滑肌向外膜迁移减轻移植静脉内膜增厚。

VEGF-165-GMs复合自体颗粒骨修复兔陈旧性桡骨缺损的实验研究

目的探讨VEGF-165-GMs复合自体颗粒骨修复兔陈旧性桡骨缺损的效果。方法 24只新西兰大白兔双侧桡骨均建立1.5 cm的陈旧性骨缺损实验模型,随机分为A、B、C三组,A组植入自体颗粒骨+VEGF-165-GMs 1mg;B组植入200 mg自体颗粒骨;C组VEGF-165-GMs 1 mg;分别于术后3、6、9周切取标本,通过X线摄片、骨密度测量、生物力学测试、组织形态学观察等手段,观察各个时期新骨形成的情况。结果 A、B组均能较好地修复陈旧性骨缺损,A组术后各时间点X线评分、骨密度测量、生物力学测试、组织形态学观察均明显优于B组。C组各时间点均无骨性愈合迹象,9周时可见骨断端完全硬化,髓腔封闭。结论 VEGF-165-GMs复合自体颗粒骨修复陈旧性骨缺损可以明显促进局部血运重建,促进新生骨形成,提高骨改建塑形的速度和质量。

静液压传动在KQTG-165钻机底盘上的应用

介绍了KQTG-165钻机底盘静液压传动系统的布置方式和液压原理,分析该设备的容积调速特性和DA阀控制方式,说明了静液压传动在井下无轨设备领域有着广泛的应用前景。

bmp-2和vegf165共表达基因修饰的BMSCs对腱骨界面愈合的研究

目的探讨骨形态发生蛋白-2(bmp-2)和血管内皮生长因子165(vegf165)共表达基因修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)对兔前交叉韧带重建术后腱骨界面的组织形态学和生物力学的影响。方法将66只大白兔,随机分成实验组、对照组及正常组。实验组术后在腱骨界面注入经慢病毒转染稳定表达bmp-2和vegf165的BMSCs和纤维蛋白胶(FG),对照组腱骨界面注入BMSCs和FG,分别在术后第3、8和12周进行组织学观察和生物力学检测。结果组织学病理显示,实验组新生血管和成纤维细胞浸润高于对照组,并在术后第12周形成典型的4层直接止点结构,其组织愈合情况优于同期对照组。生物力学显示相同时间点实验组最大载负荷明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 bmp-2和vegf165共表达基因修饰的BMSCs对腱骨界面愈合有促进作用。

E3泛素连接酶RNF165在A亚群禽白血病病毒复制中的作用

【目的】探明鸡源环指蛋白165(ring finger protein 165,RNF165)在A亚群禽白血病病毒(ALV-A)复制中的作用,为进一步研究鸡源RNF165对ALV-A致病性的影响提供参考。【方法】将ALV-A接种于DF-1细胞和1日龄雏鸡,通过Western blotting和实时荧光定量PCR方法分别从体外和体内两个方面验证ALV-A对宿主RNF165表达的影响;参考已公布的RNF165基因序列设计过表达引物,通过PCR扩增RNF165基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1;将验证表达的重组质粒转染DF-1细胞,1 d后接种ALV-A,使用Western blotting检测过表达RNF165对病毒复制的影响;最后设计突变引物,构建RNF165功能结构域突变质粒,将过表达质粒和突变质粒分别转染DF-1细胞,1 d后接种ALV-A,Western blotting测定gp85蛋白表达差异。【结果】ALV-A感染DF-1细胞后未能检测到内源性的RNF165蛋白,但基因转录水平较对照组明显下调(P<0.01)。在体内试验中,与对照组相比,感染病毒雏鸡肝脏中RNF165基因和蛋白表达水平均有所下调(P<0.01);通过PCR成功扩增到大小为1068 bp的目的片段并成功克隆至pcDNA3.1,Western blotting结果显示,在39 ku处出现目的条带,RNF165过表达后促进了病毒复制;测序结果显示,成功构建出功能结构域突变质粒,与过表达质粒组相比,RNF165突变质粒组病毒的复制水平受到显著抑制。【结论】ALV-A感染抑制DF-1细胞和雏鸡肝脏RNF165的表达,在体外试验中,过表达RNF165会促进ALV-A的复制,且这种影响与其保守结构域有关。

Lentiviral-mediated vascular endothelial growth factor 165 gene transfer into neural stem cells promotes proliferation

We constructed a lentiviral vector carrying vascular endothelial growth factor 165, which was used to transfect neural stem cells. The transfection rate was approximately 50%, as determined by flow cytometry. Vascular endothelial growth factor protein was detected in neural stem cells and promoted proliferation.

经VEGF165转染的成纤维细胞-脱细胞异种真皮替代物的构建及其对创面愈合作用的实验研究

目的:构建经血管内皮生长因子(VEGF)165转染的成纤维细胞-脱细胞异种真皮替代物,观察其在促进大鼠深度创面愈合过程中的作用。方法:采用分子生物学方法将扩增的VEGF165基因克隆人真核表达载体pcDNA3.1(+),在脂质体介导下将重组质粒转染至经传代培养的鼠成纤维细胞(NIH/3T3),再将转染后的NIH/3T3接种于猪脱细胞真皮表面得到成纤维细胞-脱细胞异种真皮替代物;而后将此替代物与自体薄皮片移植于SD大鼠深度创面(实验组),对动物创面愈合情况进行观察。单纯脱细胞异种真皮替代物移植大鼠作为对照组。结果:构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)-VEGF165可成功转染至鼠成纤维细胞,移植后实验组皮片成活率(93.76±3.40)%,对照组皮片成活率(85.01±1.74)%,两者差异有显著性(t=8.873,P<0.01)。组织学观察显示,移植第4周实验组毛细血管数量明显多于对照组。结论:成功构建了经VEGF165转染的成纤维细胞-脱细胞异种真皮替代物,且其具有明显的促进动物创面愈合作用。