miR-192对结直肠癌细胞系增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的 探究微小RNA-192(miR-192)对结直肠癌(CC)细胞系增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 分别设立A组(SW1116 CC细胞转染生理盐水)、B组(SW1116 CC细胞转染miR-192模拟物)及C组(SW1116 CC细胞转染miR-192抑制剂)。分别以MTT法检测各组细胞增殖情况,以流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,以划痕实验检测细胞迁移能力,以Transwell实验检测细胞侵袭能力。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测各组细胞miR-192及WNT家族成员2B(WNT2B)mRNA表达水平。结果 B组SW1116 CC细胞存活率、单克隆形成数目分别为(57.32±6.19)%、(284.59±15.08)个,均低于A组的(76.21±8.23)%、(601.47±23.16)个与C组的(89.52±10.62)%、(2 150.68±34.79)个,而凋亡率为(20.52±2.52)%,高于A组的(13.78±1.62)%与C组的(11.62±1.41)%;C组SW1116 CC细胞存活率、单克隆形成数目均高于A组,而凋亡率低于A组(均P<0.05)。B组SW1116 CC细胞划痕宽度为(785.10±46.18)mm,高于A组的(601.32±33.21)mm与C组的(326.99±17.48)mm,而C组划痕宽度低于A组,B组穿膜细胞数为(624.67±19.05)个,少于A组的(875.23±27.30)个与C组的(1 204.17±34.59)个,且C组穿膜细胞数多于A组(均P<0.05)。B组SW1116 CC细胞miR-192 mRNA相对表达水平为(3.01±0.26),相较于A组的(1.87±0.20)及C组的(0.97±0.23)均更高,且C组miR-192 mRNA相对表达水平低于A组,B组WNT2B mRNA表达水平为(2.16±0.26),相较于A组的(4.11±0.50)与C组的(6.08±0.72)均更低,且C组WNT2B mRNA表达水平高于A组(均P<0.05)。结论 miR-192可抑制CC的恶性演进,其主要作用机制之一可能与调控WNT2B表达有关。

猪miR-192靶向调控Wnt7a基因表达的研究

【目的】鉴定猪miR-192与Wnt家族成员7A(Wnt7a)基因之间的靶向关系,为进一步构建miR-192介导的胚胎通讯提供依据。【方法】使用miRNA pull-down鉴定miR-192和Wnt7a基因间的互作关系;利用生物信息学软件RNAhybrid 2.2预测miR-192和Wnt7a基因3′-UTR的结合位点,构建含有miR-192结合位点的Wnt7a基因3′-UTR野生型和突变型基因片段,克隆至双荧光素酶报告基因质粒,通过NotⅠ、XhoⅠ酶切和测序进行鉴定;鉴定成功的质粒分别与miR-192 mimics和mimics NC共转染猪子宫内膜上皮细胞,检测双荧光素酶活性;将miR-192 mimics、mimics NC、miR-192 inhibitor、inhibitor NC分别与构建的Wnt7a基因3′-UTR野生型和突变型双荧光素酶报告基因质粒共转染至猪子宫内膜上皮细胞,通过实时荧光定量PCR和Western blotting检测Wnt7a基因mRNA和蛋白的表达水平。【结果】pull-down结果显示,miR-192 mimics组与其阴性对照组相比,Wnt7a基因相对表达量极显著升高(P<0.01),miR-192 input组相对于其阴性对照组极显著降低(P<0.01);RNAhybrid 2.2软件预测到miR-192种子区与Wnt7a基因3′-UTR存在结合位点(UGACCUA);转染Wnt7a野生型质粒的miR-192 mimics和miR-192 mimics NC组相比双荧光素酶活性显著降低(P<0.05),转染Wnt7a突变型质粒的miR-192 mimics和miR-192 mimics NC组之间双荧光素酶活性无显著差异(P>0.05)。实时荧光定量PCR结果表明,miR-192 mimics组Wnt7a基因mRNA相对表达量显著低于其阴性对照组(P<0.05),miR-192 inhibitor组显著高于其阴性对照组(P<0.05)。Western blotting结果表明,过表达miR-192极显著抑制了Wnt7a蛋白的表达(P<0.01),抑制miR-192后Wnt7a蛋白的表达量极显著上升(P<0.01)。【结论】miR-192能够与Wnt7a基因3′-UTR发生靶向作用并抑制其表达。研究结果可为今后深入研究miR-192在妊娠着床过程中的调控机制提供理论依据。

miR-192-5p靶向CKIP-1促进骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化

背景:酪蛋白激酶2结合蛋白1(casein kinase 2-interaction protein-1,CKIP-1)是一种重要的骨形成负调控基因,其敲除鼠骨质显著增强、骨形成和骨密度也显著提高。而miRNA作为较早发现的小分子调控物,对大多数编码基因具有调控作用,在成骨分化中发挥重要作用。目的:探讨miRNA/CKIP-1对骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及其分子机制。方法:采用miRNA-Seq技术检测2022年3-6月在开封市中心医院骨外科就诊32例骨质疏松患者及同期体检中心健康人群骨髓间充质干细胞中miRNA的变化情况;利用Targetscan网站预测靶向调控CKIP-1的miRNA,利用荧光素酶报告基因实验检测miRNA与CKIP-1启动子区DNA的结合;在骨髓间充质干细胞中转染miR-192-5p类似物(miR-192-5p mimics)/阴性对照(NC mimics)或miR-192-5p抑制剂(miR-192-5p inhibitor)/阴性对照(NC inhibitor),成骨诱导后第7,14天,通过实时荧光定量PCR技术及茜素红染色检测成骨标志基因Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素、抗骨桥蛋白、骨唾液蛋白及CKIP-1的表达水平和骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的情况;采用蛋白质免疫印迹实验及茜素红染色检测miR-192-5p/CKIP-1/轴对细胞成骨分化的的调控作用。结果与结论:与健康组相比,骨质疏松组有16个miRNA表达明显升高,53个miRNA表达明显降低(P<0.05);利用Targetscan网站预测,并通过荧光素酶报告基因实验验证,发现miR-192-5p与CKIP-1有互补的核苷酸序列(P<0.05);过表达miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著升高(P<0.05),抑制miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著降低(P<0.05),而沉默CKIP-1的表达后,Runx2、骨钙素及骨桥素的蛋白水平增加(P<0.05),逆转了敲低miR-192-5p对细胞成骨分化的抑制作用。上述结果证实,miR-192-5p在骨质疏松症中表达降低;miR-192-5p通过靶向抑制CKIP-1的表达,促进骨髓间充质干细胞成骨分化。

糖尿病肾病患者血清LncRNA KCNQ1OT1、miR-192-5p与白蛋白尿短期进展及预后的关系

目的分析糖尿病肾病(DN)患者血清长链非编码RNA KCNQ1反向链/反义转录物1(LncRNA KCNQ1OT1)、微小核糖核酸-192-5p(miR-192-5p)与白蛋白尿短期进展及预后的关系。方法选取2021年4月—2022年12月康复大学青岛中心医院/青岛市中心医院内分泌风湿免疫科收治的DN患者102例为观察组,根据2次检测(间隔6个月)24 h尿白蛋白及SCr水平分为未进展亚组(n=78)和进展亚组(n=24),根据随访1年预后情况分为预后良好亚组(n=84)和预后不良亚组(n=18),选择同期医院健康体检者58例为健康对照组。采用qRT-PCR检测血清LncRNA KCNQ1OT1、miR-192-5p相对表达量;Pearson法分析LncRNA KCNQ1OT1与miR-192-5p的相关性;多因素Logistic回归分析患者白蛋白尿短期进展的影响因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LncRNA KCNQ1OT1,miR-192-5p对患者预后的预测价值。结果与健康对照组比较,观察组血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高,miR-192-5p水平降低(t/P=17.619/<0.001、16.120/<0.001);与未进展亚组比较,进展亚组血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高,miR-192-5p水平降低(t/P=7.698/<0.001、9.485/<0.001);与未进展亚组比较,进展亚组患高血压比例降低及FPG、HbA_(1c)、BUN、SCr升高,差异均有统计学意义(χ^(2)/P=9.835/0.002,t/P=2.593/0.011、2.356/0.020、4.582/<0.001、3.139/0.002);与预后良好亚组比较,预后不良亚组血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高,miR-192-5p水平降低(t/P=7.602/<0.001,9.380/<0.001);LncRNA KCNQ1OT1与miR-192-5p呈负相关(r/P=-0.452/<0.001);高血压、血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高为患者白蛋白尿短期进展的危险因素[OR(95%CI)=1.532(1.058~2.219)、1.638(1.100~2.438)],miR-192-5p水平升高为患者白蛋白尿短期进展的保护因素[OR(95%CI)=0.671(0.517~0.871)];LncRNA KCNQ1OT1、miR-192-5p以及二者联合预测患者预后的AUC分别为0.808、0.822、0.896,联合预测显著优于各自单独预测(Z/P=2.030/0.042、2.116/0.034)。结论DN患者血清LncRNA KCNQ1OT1水平升高,miR-192-5p水平降低,两者均为DN患者发生白蛋白尿短期进展的影响因素,且对患者预后具有一定辅助预测价值。

梅毒血清固定患者外周血单个核淋巴细胞中miR-31和mi R-192水平表达及其诊断价值研究

目的 探讨梅毒血清固定患者外周血单个核淋巴细胞中微小核糖核酸(micro RNA,miR)-31和微小核糖核酸(micro RNA,miR)-192的表达水平及其诊断价值。方法 选取2020年11月~2022年11月江阴市人民医院收治的梅毒患者81例,根据患者进行驱梅治疗后的血清转变情况分为血清固定组(n=37)和转阴组(n=44),根据临床病理分期分为一期梅毒患者组(n=45)和二期梅毒患者组(n=36),根据梅毒快速血浆反应素试验(rapid plasma response test,RPR)分为反应素初始滴度<1∶8梅毒患者组(n=31),1∶8~1∶32梅毒患者组(n=26)和> 1∶32梅毒患者组(n=24)。另选取同期进行健康体检的50例志愿者为健康对照组。实时荧光定量PCR检测各组外周血miR-31和miR-192水平;Logistic回归分析梅毒患者发生血清固定的影响因素;受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析外周血miR-31,miR-192水平对梅毒患者发生血清固定的诊断价值。结果 血清固定组、转阴组和健康对照组外周血miR-31(0.36±0.10,0.68±0.13,1.01±0.22)和miR-192(0.51±0.12,0.73±0.19,1.03±0.05)表达水平逐渐升高,差异具有统计学意义(F=167.815,173.090,均P <0.05);病理分期为Ⅰ期患者外周血miR-31(0.56±0.13),miR-192(0.76±0.14)水平显著高于Ⅱ期(0.38±0.10,0.47±0.08),差异具有统计学意义(t=6.842,11.059,均P <0.05);反应素初始滴度<1∶8、反应素初始滴度为1∶8~1∶32、反应素初始滴度> 1∶32的梅毒患者血清miR-31(0.56±0.18,0.48±0.12,0.39±0.09)和miR-192(0.80±0.20,0.64±0.13,0.49±0.12)表达水平逐渐降低,差异具有统计学意义(F=10.057,26.166,均P <0.05);miR-31[OR(95%CI)=0.537(0.338~0.853)]和miR-192 [OR(95%CI)=0.375(0.192~0.732)]均是梅毒患者发生血清固定的保护因素(均P <0.05);外周血miR-31,miR-192以及两者联合诊断梅毒患者发生血清固定的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.729(95%CI:0.618~0.821),0.821(95%CI:0.720~0.898)和0.927(95%CI:0.847~0.973),联合诊断的敏感度和特异度分别为83.78%,84.09%,二者联合优于外周血miR-31和mi R-192各自单独诊断,差异具有统计学意义(Z=3.836,2.563,均P <0.05)。结论 外周血miR-31和miR-192在梅毒血清固定患者体内下调,二者联合诊断梅毒血清固定具有较高效能。

支气管哮喘患儿血清中miR-192-3p表达水平与气道炎症的相关性分析

目的分析血清miR-192-3p表达水平与支气管哮喘患儿气道炎症的相关性。方法回顾性选取2020年3月至2021年3月上海交通大学附属第六人民医院门诊儿科诊疗的82例支气管哮喘患儿,其中支气管哮喘发作期41例为发作期组;支气管哮喘缓解期41例为缓解期组;另选小儿40例作为对照组。测定并对比3组研究对象75%呼气中期流量(MEF75)、50%呼气中期流量(MEF50)、25%呼气中期流量(MEF25)、最大呼气中期流量(MMEF)指标及血清miR-192-3p水平、白细胞介素13(IL-13)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)、趋化素样因子-1(CKLF-1)水平;分析血清miR-192-3p表达水平与支气管哮喘患儿肺功能指标及炎症因子水平的相关性;采用受试者工作特征曲线分析血清miR-192-3p表达水平对儿童支气管哮喘的诊断效能。结果缓解期组、发作期组患儿MEF75、MEF50、MEF25、MMEF均明显低于对照组,且发作期组患儿的MEF75、MEF50、MEF25、MMEF水平均明显低于缓解期组患儿,差异均有统计学意义(P<0.05)。缓解期组与发作期组患儿血清miR-192-3p相对表达量均明显低于对照组,且发作期组患儿血清miR-192-3p相对表达量低于缓解期组,差异均有统计学意义(P<0.05)。缓解期组与发作期组患儿的IL-13、TGF-β1、VEGF、CKLF-1水平均高于对照组,且发作期组患儿的IL-13、TGF-β1、VEGF、CKLF-1水平均高于缓解期组,差异均有统计学意义(P<0.05)。入组哮喘患儿血清miR-192-3p相对表达量与血清IL-13、TGF-β1、CKLF-1水平呈正相关(P<0.05),与血清VEGF、肺功能MEF75、MEF50、MEF25、MMEF水平呈负相关(P<0.05)。以0.758为临界值,血清miR-192-3p相对表达量诊断儿童支气管哮喘的曲线下面积为0.828,敏感度为87.69%,特异度为67.24%。结论血清miR-192-3p相对表达量在支气管哮喘患儿血清中明显降低,且与气道肺功能及炎症因子相关,对儿童支气管哮喘有较高的诊断效能。

miR-192-5p和miR-22-3p在痛风性关节炎患者中的表达水平及调节机制

目的:分析痛风性关节炎患者血清miR-192-5p和miR-22-3p的表达水平及调节机制。方法:将秦皇岛市第一医院2020年1月2021年12月收治65例痛风性关节炎患者和65例健康体检人员分别分为观察组和对照组,采用实时荧光定量PCR法检测患者血清miR-192-5p和miR-22-3p的表达水平及相对表达量,采用红细胞沉降压积仪检测红细胞沉降率(ESR),用全自动生化分析仪检测血尿酸(BUA)。结果:与对照组比较,观察组患者血清miR-192-5p和miR-22-3p相对表达量升高(均P<0.05),ESR和BUA升高(均P<0.05),血清TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-10表达水平升高(均P<0.05),Th1细胞表达水平和Th1/Th2比值升高(均P<0.05),Th2细胞表达水平降低(P<0.05)。ROC曲线分析发现,血清miR-192-5p和miR-22-3p在痛风性关节炎中具有良好的诊断效能。结论:痛风性关节炎患者血清miR-192-5p和miR-22-3p异常升高,其可能机制与炎症反应和免疫反应相关。

miR-192进化分析、靶基因预测及组织表达分析

【目的】研究miR-192的生物进化进程和潜在靶基因功能,以及miR-192在大围子猪(脂肪型猪)和大约克夏猪(瘦肉型猪)脂肪组织中的差异表达。【方法】利用miBase数据库获取miR-192成熟序列,并利用Ensembl数据库定位miR-192在不同物种基因组的分布特征;采用Mega 11.0软件程序构建miR-192系统进化树;通过实时荧光定量PCR检测miR-192在大围子猪和大约克夏猪背部脂肪组织中的表达情况,并比较表达差异;利用不同在线网站预测猪miR-192靶基因,并对靶基因进行GO功能和KEGG通路富集分析。【结果】miR-192在生物进化过程中具有高度保守性;实时荧光定量PCR结果显示,miR-192在大围子猪背部脂肪组织的表达量极显著高于大约克夏猪(P<0.01);GO功能和KEGG通路富集分析结果表明,miR-192靶基因主要起转录前调节和结合的作用,且主要在染色质和细胞核中发挥作用,多数基因富集在与脂肪代谢相关的信号通路;对3个网站不同物种预测结果取交集共获得猪miR-192保守靶基因5个。【结论】miR-192在生物进化过程中具有高度保守性,可能通过靶向调节靶基因的表达,从而在猪脂肪组织分化中起作用,为进一步探讨miR-192在脂肪组织分化中的调控机制提供理论基础。

血清CG、TBA、miR-192在直肠癌中的表达及意义

目的:探讨血清甘胆酸(CG)、总胆汁酸(TBA)、微小RNA-192(mi R-192)与直肠癌的关联性,并分析各指标预测直肠癌经肛联合经腹全直肠系膜切除(TME)术后早期复发的效能。方法:选取2019年1月—2020年4月收治的100例直肠癌患者(直肠癌组)、60例直肠良性疾病患者(良性组)及60例健康人群(对照组),比较3组血清CG、TBA、mi R-192水平,采用Logistic回归方程分析直肠癌的相关影响因素,直肠癌组均行经肛联合经腹TME术治疗,术后随访6个月,统计术后早期复发情况,比较复发与未复发患者一般资料及术后2、4周血清CG、TBA、mi R-192水平变化,采用受试者工作特征曲线(ROC)及曲线下面积(AUC)分析各指标预测直肠癌术后早期复发的效能。结果:直肠癌组CG、TBA高于良性组和对照组,mi R-192低于良性组和对照组(P<0.05);CG、TBA、mi R-192均为发生直肠癌的影响因素(P<0.05);直肠癌术后复发患者术后2周、4周的CG、TBA高于未复发患者,mi R-192低于未复发患者(P<0.05);术后4周CG、TBA、mi R-192预测直肠癌术后早期复发的AUC大于术后2周,其中术后4周CG预测的AUC最大,为0.849,截断值预测敏感度、特异度分别为75.00%、85.71%。结论:血清CG、TBA、mi R-192水平异常变化与直肠癌的发生存在显著关联性,术后检测各指标水平可辅助临床预测直肠癌术后早期复发。

MicroRNA-192在肿瘤中作用机制的研究进展

微小RNA(MicroRNAs,miRNAs)是一类进化上高度保守的内源性非编码小分子RNA,参与包括细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等多种生物学过程。随着对miRNA研究的不断深入,已经发现这些小分子物质可以调节肿瘤细胞的多种重要的生物学行为,与肿瘤的发生、发展密切相关。在许多研究中,MicroRNA-192(miR-192)被认为是一个潜在的判断预后和诊断的生物学标记物,甚至是一些肿瘤可能的治疗靶点。本文就miR-192在不同肿瘤中的作用机制作一综述。

血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p联合检测对早期鼻咽癌的诊断价值

目的探讨血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p联合检测对早期鼻咽癌的诊断价值。方法纳入收治的早期鼻咽癌患者90例为研究组,鼻咽炎患者90例为炎症组、90例健康体检者为对照组。检测3组血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p的表达水平。用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)的AUC分析血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p检测在早期鼻咽癌中的诊断意义。结果研究组、炎症组、对照组血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p的表达水平具有显著差异(P<0.05)。血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p单项检测研究组与炎症组的灵敏度为91%、89%、98%,特异度分别为90%、90%、94%。血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p单项检测研究组与对照组的灵敏度为96%、94%、95%,特异度均为95%。血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p联合检测对早期鼻咽癌的诊断灵敏度为94.44%,特异度为93.89%,准确度为94.07%。结论血清中miR-140-3p、miR-192-5p、miR-223-3p的表达水平检测可作为早期鼻咽癌的潜在标志。

铱-192源外照射致局部放射损伤临床诊疗技术规范专家共识

瞄准先进的局部放射损伤的基础研究及临床诊疗技术的国际前沿,结合国内尤其是核工业总医院30余年从事放射损伤基础研究和临床救治的实践经验,从多个维度建立铱-192源外照射致局部放射损伤的精准评估技术体系,建立局部放射损伤优化的救治策略和疗效估评方案,并在局部放射损伤的诊疗全过程中加以验证,从而实现对铱-192源外照射致局部放射损伤的精准评估、规范救治、预后判断、康复管理和长期医学随访,提高局部放射损伤的治愈率,降低致残率,为局部放射损伤的诊疗提供理论指导和技术支撑。

原发性高血压患者血清miR-192表达水平与左室肥厚的关系

目的 探讨原发性高血压患者血清中miR-192表达与左心室肥厚的相关性。方法 收集2018年6月至2019年12月期间治疗的187例原发性高血压患者临床资料,行超声心动图检查获得LVPWd、IVST、LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV、LAD、LVEF和LVMI等指标,并根据超声心动图检查结果将患者分为肥厚组和对照组。实时荧光定量PCR检测血清中miR-192表达,ELISA法测定TGF-β1、Ⅰ型前胶原羧基末端肽(PⅠCP)和Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)水平。结果 经超声心动图检查,187例原发性高血压患者中,76例出现左心室肥厚(肥厚组),111例未发现左心室肥厚(对照组);肥厚组患者LVPWT、IVST、LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV、LAD、LVMI和hs-CRP均较对照组升高(P <0.05);肥厚组患者血清中miR-192、TGF-β1、PⅢNP和PⅠCP水平较对照组升高(P <0.05);Pearson相关分析结果显示,原发性高血压患者血清中miR-192水平与LVPWT、IVST、LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV、LAD、LVMI、TGF-β1、PⅠCP和PⅢNP呈正相关(P <0.05);多元线性回归分析结果显示,LVPWT、IVST、LVEDD、LVESV、TGF-β1、PⅠCP和PⅢNP是影响原发性高血压患者血清中miR-192水平的相关因素(P <0.05)。结论 血清miR-192水平在原发性高血压左心室肥厚患者中升高,且与左心室肥厚程度及心肌纤维化有关。

miR-192-5p在恶性肿瘤中作用机制的研究进展

恶性肿瘤是威胁人类健康的常见疾病,其治疗也是加重社会经济负担的主要因素之一。恶性肿瘤患者的死亡率高,预后极差。因此,如何提高恶性肿瘤患者的生存率、改善预后至关重要。miRNA是一类小的非编码RNA,通过参与基因表达的转录后调控,在肿瘤细胞的增殖、分化、迁移和凋亡等过程中发挥重要作用。近年来,人们逐渐开始研究miR-192-5p在恶性肿瘤中的表达及作用,本文将对miR-192-5p在不同恶性肿瘤中作用机制的研究进展进行综述。

SA-192高频焊翅片管漏水原因

某SA-192高频焊翅片管发生漏水,采用宏观观察、尺寸测量、化学成分分析、金相检验、扫描电镜和能谱分析、硬度测试等方法对其漏水原因进行分析。结果表明:漏水的主要原因是焊接时高频电流集中在钢管表面,输入功率大而焊接速率小,造成表面局部受热严重,出现过烧缺陷;过烧缺陷导致钢管表面堆积大量焊渣,降低了基体材料的塑性和韧性,促使表面凹坑和孔洞的形成。

基于蒙特卡罗模拟散射效应和异质性对高剂量率192Ir近距离治疗剂量分布的影响

目的:探究散射效应和异质性对高剂量率192Ir近距离治疗剂量分布的影响。方法:用MCNP5蒙特卡罗方法模拟Flexisource HDR192Ir放射源的TG-43剂量学参数:剂量率常数Λ、径向剂量函数g(r)、各向异性函数F(r,θ)。基于临床分别构建身体围度差异、偏心、浅表三种非完全散射和组织成分差异、肺插植、腔道插植三种异质性的简化模型,分别计算放射源的径向剂量分布,并通过比较各简化模型和标准模型的同点径向剂量的偏差来评价散射效应和异质性对剂量分布的影响。结果:Λ、g(r)和F(r,θ)模拟值和TPS数据的偏差均小于1%;非完全散射:TPS高估2 cm、5 cm、10 cm处的真实剂量可达约4%、14.8%、16.4%;皮质骨:TPS高估2 cm、5cm、10 cm处的真实剂量约0.7%、1.14%、10%;肿瘤介质:TPS高估真实剂量平均约1.1%;肺介质:TPS高估0.5 cm~6 cm内的真实剂量平均约1.80%,低估6 cm~15 cm内的真实剂量平均约7.77%;肺插植:半径1 cm肿瘤,TPS高估0.5 cm~8 cm内的真实剂量平均约4%,低估8 cm~15 cm内的真实剂量平均约7.8%;腔道插植:半径为1 mm、4 mm、8 mm腔道,TPS低估真实剂量平均约0.75%、1.30%、2.48%。结论:忽略散射效应和异质性会引入显著的剂量误差。临床治疗时,校正患者真实的剂量分布是必要的。

MiR-192靶向负调控Bim表达诱导肺癌顺铂耐药

背景与目的顺铂是非小细胞肺癌化疗的一线药物,但获得性耐药限制了其疗效的发挥。本研究的目的是筛选鉴定与肺癌顺铂耐药相关的microRNAs,探讨其与肺癌顺铂耐药的影响及分子机制。方法应用miRNA芯片及RT-PCR筛选鉴定A549与A549/DDP肺癌细胞间的差异表达miRNAs,将差异表达miR-192转染A549和A549/DDP细胞株,CCK-8检测miR-192对半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)的影响,流式细胞术检测细胞凋亡,生物软件预测及双荧光素酶报告基因法寻找miR-192的靶基因,RT-PCR及Western blot检测靶基因表达水平在转染前后的变化。结果 MiR-192在A549/DDP中显著高表达,表达量是A549细胞表达量的37.59±0.35倍。在低表达miR-192的A549细胞中过表达miR-192,细胞对顺铂的IC50显著增高,顺铂引起的细胞凋亡率显著降低;反之,在高表达miR-192的A549/DDP中抑制miR-192的表达,顺铂的IC50显著降低,顺铂引起的细胞凋亡率显著增加。miR-192可靶向作用促凋亡基因Bim的3’-UTR,并在转录后水平负向调控Bim的表达。结论 MiR-192通过靶向负调控促凋亡基因Bim表达,诱导肺腺癌细胞株A549产生顺铂耐药,并减少顺铂引起的细胞凋亡。

猪miR-192/-215的组织表达谱及其关键靶基因分析

【目的】在前期通过Illumina Solexa高通量测序技术并结合荧光定量验证筛选出断奶仔猪E.coliF18菌株感染下表达量极显著上调的micro RNAs—miR-192和miR-215的基础上,为了解miR-192和miR-215的组织表达情况,进一步筛选确定miR-192和miR-215靶向调控E.coli F18菌株感染的关键靶基因,为探讨miR-192和miR-215调控断奶仔猪E.coli F18感染的分子调控机制奠定基础。【方法】试验采用Real-time PCR方法检测miR-192和miR-215在35日龄梅山仔猪各个组织中的分布情况,同时利用MEGA 5.0分析了其保守性,Target Scan预测miR-192和miR-215的靶基因,并对靶基因分别进行Gene Ontology和Pathway通路的富集分析,进一步利用DAVID对靶基因蛋白进行功能分类,最后将预测的靶基因与课题组前期筛选出的断奶仔猪E.coli F18感染抗性相关的调控基因取交集。【结果】miR-192和miR-215在35日龄梅山仔猪十二指肠和空肠中均高度表达,二者成熟序列在脊椎动物中高度保守。miR-192和miR-215对应的靶基因相同,具有156个靶基因,只在轴突导向通路(axon guidance pathway)显著富集(P-value<0.05)以及25个GO功能中显著富集(P-value<0.05)。靶基因蛋白按功能分为12类,其中信号转导功能的磷蛋白(phosphoprotein)和DNA结合蛋白(dna-binding)占主要部分。靶基因与前期筛选的E.coli F18感染抗性相关的调控基因(GEO登录号:GSE26854)取交集,发现DLG5、ALCAM、FRMD4B、MIPOL1和ZFHX3等5个基因为miR-192和miR-215的重要靶基因,其中DLG5为维持小肠上皮细胞结构完整性的重要因子。【结论】miR-192与miR-215是参与维持断奶仔猪肠道正常功能与抗F18大肠杆菌感染的重要因子,DLG5可能是miR-192和miR-215靶向调控E.coli F18菌株感染中关键的靶基因,今后需要进一步验证其能否作为梅山猪抗F18大肠杆菌的有效遗传标记。

HBx基因下调miR-192对人肝癌细胞株HepG2周期的影响

目的探讨HBx基因通过调节miR-192的表达影响人肝癌细胞株HepG2周期进展的机制。方法流式细胞仪分析以下3组细胞的周期变化:HepG2/HBx细胞(HepG2细胞稳定转染HBx基因)、HepG2/pcDNA3.1细胞(HepG2细胞稳定转染空载体pcDNA3.1)以及HepG2细胞。3组细胞中miR-192的表达采用Taqman探针荧光定量PCR法检测。流式细胞术观察转染miR-192后HepG2细胞的周期分布变化,SYBR Green荧光定量PCR和Westernblot分别检测miR-192对HepG2细胞p53、CDKN1A mRNA和蛋白表达的影响。结果 3组细胞中,HepG2/HBx细胞G0/G1期细胞比例明显降低[(52.78±4.08)%vs(67.37±4.87)%,(65.08±5.15)%],S期和G2/M期比例明显升高[S期:(25.22±1.84)%vs(19.78±1.26)%,(18.84±1.68)%;G2/M期:(22.00±2.07)%vs(12.85±1.29)%,(16.08±1.44)%]。HepG2/HBx细胞miR-192表达显著下调[(49.1±5.9)%vs(98.0±8.9)%,(100.0±9.1)%]。转染miR-192引起HepG2细胞G0/G1期和G2/M期阻滞,同时p53、CDKN1A mRNA(p53:1.68±0.12 vs 0.90±0.06;CD-KN1A:2.36±0.12 vs 1.05±0.06)和蛋白(p53:3.07倍;CDKN1A:2.82倍)的表达水平亦显著上升。结论 miR-192通过促进p53和CDKN1A表达引起HepG2细胞周期阻滞,而HBx通过下调miR-192加速HepG2细胞周期进程。

氟伐他汀联合达格列净对中心性肥胖2型糖尿病患者糖脂代谢及miR-192、miR-26a、miR-221水平的影响

目的探究氟伐他汀联合达格列净对中心性肥胖2型糖尿病(T2DM)患者糖脂代谢及微小RNA-192(miR-192)、miR-26a、miR-221水平的影响。方法选取2018年12月—2020年12月开滦总医院内分泌科收治的中心性肥胖2型糖尿病患者200例作为研究对象,按治疗方法不同分为氟伐他汀组93例和两药联合组(联合组)107例。氟伐他汀组采用氟伐他汀进行治疗,联合组在氟伐他汀组基础上加服达格列净进行治疗。观察2组患者治疗效果,治疗前、后体质量、BMI、腰围、臀围、空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 hPG)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素细胞功能指数(HOMA-β);采用放射免疫分析法检测治疗前、后血清空腹胰岛素(FINS)、2 h胰岛素(2 hINS)、空腹C肽(FCP)、2 h C肽(2 hCP);全自动生化分析仪检测脂代谢指标;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清成纤维细胞生长因子21(FGF21)、蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B(PTP1B)、B型脑钠肽(BNP)水平;实时荧光定量(RT-PCR)检测微小RNA水平。结果治疗后,联合组治疗总有效率高于氟伐他汀组(96.26%vs.88.17%,χ^(2)/P=4.407/0.036);与氟伐他汀组比较,联合组患者体质量、BMI、腰围、臀围,血清FPG、2 hPG、FINS、2 hINS、FCP、2 hCP、HOMA-IR,空腹FFA、2 hFFA、TC、TG、LDL-C,血清FGF21、PTP1B、BNP水平降低(t/P=6.139/0.001、5.145/0.001、4.396/0.001、3.729/0.001、2.997/0.003、3.314/0.001、4.685/0.001、4.399/0.001、6.498/0.001、9.046/0.001、13.860/0.001、4.191/0.001、7.109/0.001、5.543/0.001、4.820/0.001、10.210/0.001、2.326/0.021、11.890/0.001、23.580/0.001),HOMA-β、HDL-C水平升高(t/P=2.600/0.010、6.112/0.001)。与氟伐他汀组比较,联合组miR-192、miR-26a、miR-221水平升高(t/P=18.860/0.001、8.590/0.001、23.040/0.001)。结论氟伐他汀联合达格列净可有效改善中心性肥胖2型糖尿病患者的糖、脂代谢紊乱,降低miR-192、miR-26a、miR-221水平。