miR-221-3p通过NRF2/GPX4轴调节铁死亡促进乳腺癌细胞转移的分子机制研究

目的:探究微小RNA(miR)-221-3p通过调节铁死亡对乳腺癌细胞转移的影响及机制。方法:培养人乳腺癌细胞系MCF-7,采用miR-221-3p模拟物(mimic)及mimic阴性对照(NC)转染MCF-7细胞,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测转染后细胞中miR-221-3p表达,试剂盒测定转染后细胞中二价铁离子(Fe^(2+))、活性氧(ROS)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平。将MCF-7细胞分为对照组、mimic NC组(转染mimic NC)、miR-221-3p mimic组(转染miR-221-3p mimic)、miR-221-3p mimic+Erastin组(转染miR-221-3p mimic并用10μmoL/L Erastin处理),CCK-8检测各组MCF-7细胞增殖活性,Transwell实验检测各组MCF-7细胞迁移数目与侵袭数目,试剂盒测定各组细胞中Fe^(2+)、ROS、GSH水平,细胞免疫荧光双标记染色观察各组MCF-7细胞中核因子E2相关因子2(NRF2)与谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)表达,蛋白质免疫印记(Western blot)观察各组MCF-7细胞中NRF2、GPX4、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)和铁蛋白轻链(FTL)蛋白表达。结果:转染miR-221-3p mimic后,MCF-7细胞中miR-221-3p相对表达量上调(P<0.05),Fe^(2+)含量减少、ROS水平降低(P<0.05),GSH水平升高(P<0.05)。与对照组、mimic NC组比较,miR-221-3p mimic组MCF-7细胞增殖活性升高(P<0.05),迁移数目和侵袭数目增加(P<0.05),Fe^(2+)含量减少、ROS水平降低(P<0.05),GSH水平升高(P<0.05),NRF2和GPX4荧光强度明显增强,NRF2、GPX4、SLC7A11和FTL蛋白相对表达量上调(P<0.05);与miR-221-3p mimic组比较,miR-221-3p mimic+Erastin组MCF-7细胞增殖活性降低(P<0.05),迁移数目和侵袭数目减少(P<0.05),Fe^(2+)含量增加、ROS水平升高且GSH水平降低(P<0.05),NRF2和GPX4荧光强度减弱,NRF2、GPX4、SLC7A11和FTL蛋白相对表达量下调(P<0.05)。结论:miR-221-3p通过抑制铁死亡促进乳腺癌细胞转移,其机制可能与激活NRF2/GPX4轴有关。

基于TLR4/NF-κB信号通路探讨大黄糖络丸对2型糖尿病大鼠肠道炎症损伤的影响

目的基于TLR4/NF-κB信号通路探讨大黄糖络丸对2型糖尿病(T2DM)大鼠肠道炎症损伤的影响及作用机制。方法将8只ZDF(fa/+)大鼠作为空白组,40只ZDF(fa/fa)大鼠经高脂饲料喂养后,随机分为模型组、二甲双胍组(0.18 g/kg二甲双胍)和中药高、中、低剂量组(2.16、1.08、0.54 g/kg大黄糖络丸),给药组分别以相应药液灌胃,连续12周。干预前后测定大鼠体质量和空腹血糖(FBG),干预结束后进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT),检测血清葡萄糖(GLU)、糖化血清蛋白(GSP)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量,ELISA测定血清空腹胰岛素(FINS)、游离脂肪酸(FFA)及结肠组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-22、脂多糖(LPS)、肠道分泌型免疫球蛋白A(SIgA)含量,HE染色观察结肠组织形态,Western blot检测结肠组织Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB p65(NF-κB p65)、p-NF-κB p65、核因子-κB抑制因子α(IκBα)、p-IκBα、髓样分化因子88(MyD88)、闭锁小带蛋白-1(ZO-1)表达。结果与空白组比较,模型组大鼠体质量、FBG显著升高(P<0.01),OGTT各时间点血糖显著升高(P<0.01),血清GLU、GSP、TG、TC、LDL-C、FINS、FFA和结肠组织TNF-α、IL-6、IL-22、LPS含量显著升高,血清HDL-C和结肠组织SIgA含量显著降低(P<0.01),结肠组织细胞核固缩,胞质溶解,炎性细胞浸润,结肠组织TLR4、NF-κB p65、p-NF-κB p65、p-IκBα、MyD88蛋白表达显著升高,IκBα、ZO-1蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,二甲双胍组和中药高、中剂量组体质量、FBG显著降低(P<0.01),OGTT不同时间点血糖降低,血清GLU、GSP、TG、TC、LDL-C、FINS、FFA和结肠组织TNF-α、IL-6、IL-22、LPS含量显著降低,血清HDL-C和结肠组织SIgA含量显著升高(P<0.05,P<0.01),结肠组织结构明显改善,炎性细胞浸润减少,结肠组织TLR4、NF-κB p65、p-NF-κB p65、p-IκBα、MyD88蛋白表达显著降低,IκBα、ZO-1蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论大黄糖络丸可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路激活,减少炎症因子释放,改善肠道炎症损伤,恢复肠道内环境稳态,进而改善糖脂代谢,发挥治疗T2DM作用。

TNF-α-NF-κB对成骨细胞分化过程中BMP-2-Smad1信号通路的影响

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)-NF-κB信号通路通过骨形态发生蛋白-2(BMP-2)-Smad1信号通路对成骨细胞分化影响的分子机制。方法应用BMP-2体外诱导鼠肌源细胞C2C12向成骨细胞分化模型,瞬时转染表达其下游效应物,通过实时RT-PCR以及蛋白电泳和免疫印迹技术(Western-blot),检测其下游效应物Smad1与核转录因子(NF-kB)及其抑制剂(IκBα),研究TNF-α和NF-κB对BMP-2-Smad1信号通路的影响。结果 TNF-α能够将Smad1(BMP-2的下游效应物)的活性从对照组的2.04倍降低至0.63倍。NF-κB过表达则将Smad1活性从2.04倍降低至0.39倍。蛋白质印迹实验可见,TNF-α能明显降低BMP2活化的C2C12细胞中磷酸化Smad1的含量,而RT-PCR研究发现其并不能改变Smad1的mRNA丰度。结论 TNF-α抑制成骨细胞分化其分子机制是通过TNF-α激活NF-kB而降低BMP-2信号通路中磷酸化的Smad1,进而抑制BMP-2-Smad1通路活性而发挥作用。提示持续性的炎症反应能直接抑制成骨细胞的分化和骨形成。

人肝再生增强因子对体外单个核细胞PKCα-NF-κB及IL-2的影响

目的观察人肝再生增强因子(human augmenter of liver regeneration,hALR)对人外周血单个核细胞(periph-eral blood mononuclear cell,PBMC)PKCα-NF-κB及IL-2的影响,探讨hALR免疫抑制机制。方法用梯度离心法分离正常人PBMC,分成正常对照组、刀豆蛋白A(ConA)刺激组(ConA组)和hALR干预组(ConA+hALR组)。ConA组用5μg/mlConA刺激细胞增殖和分泌细胞因子IL-2;ConA+hALR组用30μg/mlhALR对ConA刺激进行干预。于细胞培养0、8、16、32、40h时,用MTT法测定细胞增殖程度,Westonblot检测细胞内信号通路PKCα-NF-κB表达含量,Fluo-3AM装载检测胞内钙离子浓度,用双抗夹心酶联法检测上清细胞因子IL-2含量。结果ConA组细胞增殖逐渐加强,16h时与正常对照组比较具有统计学意义(P<0.05);PKCα、NF-κB表达上调及上清IL-2含量增加趋势一致,在16h达到高峰(P<0.05)。ConA+hALR组细胞没有增殖,PKCα-NF-κB表达及上清IL-2含量最高峰后移至32h。每个时间点各组细胞内Ca2+浓度没有差别。结论hALR可能通过抑制PKCα-NF-κB通路阻碍IL-2的产生速度进而抑制免疫。

芍药汤联合美沙拉嗪调控TRL4-ERK1/2-NF-κB信号通路改善溃疡性结肠炎的作用机制研究

目的 观察芍药汤(SYD)联合美沙拉嗪(MES)对溃疡性结肠炎(UC)大鼠的保护作用机制是否与其抑制Toll样受体4(TRL4)介导的细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的激活有关。方法 60只Sprague Dawley大鼠随机分为正常组(NG)、模型组(MG)、SYD 20 ml·kg^(-1)组、MES 0.2 g·kg^(-1)组及SYD 20 ml·kg^(-1)+MES 0.2 g·kg^(-1)组,每组各12只。5%葡聚糖硫酸钠溶液连续喂养7天制备UC大鼠模型,造模后连续灌胃给药14天,给药后第7天和第14天进行大鼠疾病活动指数(DAI)评分。ELISA检测大鼠血浆炎症介质白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和炎症小体NLR家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)的含量。HE观察结肠病理变化,免疫组化法检测结肠黏蛋白2(MUC2)蛋白表达。qPCR检测结肠MUC2、NLRP3、IL-1β和IL-6 mRNA的表达。Western Blot检测结肠NLRP3、IL-1β、IL-6、TRL4、髓样分化因子88(MyD88)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、磷酸化核因子κB抑制因子α(p-ⅠκBα)和磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达及细胞核内NF-κB p65水平。结果 与MG相比,SYD组及MES组肠黏膜病理损伤明显减轻、DAI评分显著降低、TRL4和MyD88的蛋白表达及ERK1/2、ⅠκBα和NF-κB p65磷酸化水平明显降低,同时NF-κB p65核转移显著减少、炎症因子IL-1β、IL-6和NLRP3的水平明显降低、MUC2蛋白的表达明显升高(P<0.05、P<0.01)。但与SYD组或MES组相比,SYD 20 ml·kg^(-1)+MES 0.2 g·kg^(-1)组肠黏膜损伤程度、DAI评分及NLRP3、IL-1β和IL-6的表达水平进一步降低,MUC2蛋白表达进一步升高,同时TRL4、MyD88的蛋白表达及ERK1/2、ⅠκBα和NF-κB p65磷酸化水平及NF-κB p65的核转移程度进一步降低(P<0.05)。结论 芍药汤联合美沙拉嗪对UC的疗效都优于单用美沙拉嗪或芍药汤,其机制可能与其抑制TRL4受体介导的ERK1/2、NF-κB信号通路活化,进而抑制炎症因子NLRP3、IL-1β和IL-6的表达、上调黏蛋白-2的表达有关。

白藜芦醇通过ERK1/2和NF-κB通路调节NADPH氧化酶表达改善急性肺损伤

目的探讨白藜芦醇对急性肺损伤大鼠NADPH氧化酶的影响,并分析相关信号通路机制。方法将50只雄性SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组、低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组,每组10只。对照组和模型组给予生理盐水干预,地塞米松组、低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组分别给予2 mg/kg地塞米松、100 mg/kg白藜芦醇、500 mg/kg白藜芦醇干预,1次/d,连续干预14 d。干预结束后,除对照组外,其余组别大鼠构建急性肺损伤模型。比较各组大鼠肺组织病理状态、肺湿重/干重比(W/D)、肺损伤评分,采用ELISA法检测肺泡灌洗液白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;采用RT-PCR法检测各组NADPH氧化酶亚基p47^(phox)、p22^(phox),及ERK、NF-κB mRNA水平;采用Western bloting法检测各组p47^(phox)、p22^(phox)、p-ERK1/2、ERK1/2、p-NF-κB、NF-κB蛋白水平。结果模型组、地塞米松组、低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组W/D及肺损伤评分、MDA水平、p22^(phox)、p47^(phox)、ERK1/2、NF-κB mRNA、p47^(phox)蛋白、p-ERK/ERK、p-NF-κB/NF-κB、IL-6、IL-8、TNF-α水平高于对照组,而SOD、GSH-Px水平低于对照组(P<0.05)。结论白藜芦醇可改善LPS诱导的急性肺损伤大鼠NADPH氧化酶及氧化应激状态,其作用机制可能与ERK1/2-NF-κB通路有关。

黄芩苷对干酵母致热大鼠的解热作用及血清TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE_(2)、cAMP和脑组织NF-κB表达的影响

目的:观察黄芩苷对干酵母致热大鼠的解热作用并探讨其作用机制。方法:采用背部皮下注射干酵母构建大鼠发热模型,SD雄性大鼠随机分为正常对照,模型组,阳性组(阿司匹林,0.1 g/kg),黄芩苷高、中、低剂量组(160、80、40 mg/kg),连续给药3 d,测定各组大鼠肛温的变化;酶联免疫法(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、前列腺素E_(2)(PGE_(2))与环磷酸腺苷(cAMP)水平;Western Blot检测各组大鼠脑组织NF-κB p65(核转录因子-κB p65)蛋白表达。结果:黄芩苷高剂量组有显著解热效果(P<0.01),黄芩苷各剂量组均可不同程度降低大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE 2和cAMP含量;与正常组比较,模型组脑组织NF-κB p65蛋白表达增多,黄芩苷高剂量组可明显降低大鼠脑组织NF-κB p65表达(P<0.05)。结论:黄芩苷可显著性降低干酵母引起的体温升高,解热机制可能与抑制TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE_(2)与cAMP的分泌和减少脑组织NF-κB p65蛋白表达有关。

BMAL1减轻H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞损伤机制研究

目的探讨脑和肌肉组织芳香烃受体核转运蛋白的类似蛋白1(BMAL1)通过核因子E2相关因子2(NRF2)调节活性氧(ROS)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体通路对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的心肌细胞损伤的影响。方法体外培养H9c2细胞和BMAL1稳定过表达的H9c2细胞,建立H_(2)O_(2)诱导的H9c2细胞损伤模型,并将细胞分为对照(Control)组、H_(2)O_(2)组、BMAL1过表达(BMAL1-OE)组、BMAL1过表达+H_(2)O_(2)(BMAL1-OE+H_(2)O_(2))组、BMAL1过表达+NRF2抑制剂(BMAL1-OE+ML385)组、BMAL1过表达+NRF2抑制剂+H_(2)O_(2)(BMAL1-OE+ML385+H_(2)O_(2))组。采用CCK-8法检测细胞活力,荧光探针2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯检测ROS生成,Western blot检测BMAL1、NRF2和NLRP3蛋白表达,酶联免疫吸附试验法检测白细胞介素(IL)-1β释放。结果与Control组相比,H_(2)O_(2)组H9c2心肌细胞活力减弱,ROS生成增多,BMAL1和NRF2蛋白表达水平降低,NLRP3蛋白表达水平升高,IL-1β释放增多(P<0.05);与H_(2)O_(2)组相比,BMAL1-OE+H_(2)O_(2)组H9c2心肌细胞活力升高,ROS生成减少,BMAL1和NRF2蛋白表达水平升高,NLRP3蛋白表达水平降低,IL-1β释放减少(P<0.05)。与BMAL1-OE+H_(2)O_(2)组相比,BMAL1-OE+ML385+H_(2)O_(2)组H9c2心肌细胞活力减弱,ROS生成增多,NLRP3蛋白表达水平升高,IL-1β释放增多(P<0.05)。结论BMAL1可减轻H_(2)O_(2)诱导的H9c2心肌细胞损伤,其机制可能与NRF2调节ROS/NLRP3炎症小体通路有关。

FHL2通过NF-κB信号通路调节THP-1巨噬细胞泡沫化

目的 明确4个半LIM结构域蛋白(FHL2)是否能够通过调节核因子κB(NF-κB)信号通路影响巨噬细胞泡沫化。方法 构建FHL2过表达质粒及合成FHL2小干扰RNA(si-FHL2),分别转染至人单核/巨噬细胞系THP-1中,Western blot检测FHL2表达;使用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激细胞,ELISA检测细胞IL-6、IL-1β、TNF-α等细胞因子的表达;油红O染色检测细胞泡沫化程度;Western blot检测NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果 转染过表达FHL2质粒的细胞中FHL2表达量升高(P<0.01),而转染si-FHL2的细胞表达量降低(P<0.05);敲低FHL2能够下调炎性细胞因子的分泌(P<0.01);FHL2下调能够缓解THP-1巨噬细胞泡沫化;同时,FHL2下调抑制NF-κB信号通路的活化(P<0.05),而在过表达FHL2组中结果呈相反趋势。结论 下调FHL2的表达可通过抑制NF-κB信号通路活化,降低炎性细胞因子的分泌,缓解巨噬细胞的泡沫化。

丙泊酚联合热毒宁注射液对内毒素所致大鼠急性肺损伤及ERK1/2-NF-κB通路的影响

目的探讨丙泊酚联合热毒宁注射液对内毒素所致大鼠急性肺损伤及ERK1/2-NF-κB通路的影响。方法选取SD大鼠100只,随机分为对照组、模型组、丙泊酚组、热毒宁组、联合组,每组20只。模型组、丙泊酚组、热毒宁组、联合组经脂多糖诱导大鼠急性肺损伤模型,建模成功后,丙泊酚组给予丙泊酚50.0 mg/kg、热毒宁组给予热毒宁50.0 mg/kg、联合组给予丙泊酚和热毒宁各50.0 mg/kg;对照组和模型组给予等体积生理盐水,均持续给药7 d。在第7天处死大鼠,分离肺组织进行肺/体重测定及肺损伤评分,测定5组肺组织ERK1/2和NF-κB的mRNA及蛋白表达水平,比较5组肺组织白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组肺/体比值、肺损伤评分、ERK1/2和NF-κB的mRNA表达水平、ERK1/2、NF-κB、IL-2、IL-6、TNF-α的蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,丙泊酚组、热毒宁组、联合组肺/体比值、肺损伤评分、ERK1/2和NF-κB的mRNA表达水平、ERK1/2、NF-κB、IL-2、IL-6、TNF-α的蛋白表达水平显著降低,且联合组上述指标显著低于丙泊酚组、热毒宁组(P<0.05)。结论丙泊酚联合热毒宁注射液可减轻内毒素所致大鼠急性肺损伤引发的炎症反应;其机制与丙泊酚联合热毒宁注射液抑制ERK1/2-NF-κB通路基因蛋白及其下游炎性因子的表达有关。

淫羊藿次苷Ⅱ通过下调ERK1/2-NF-κB信号通路抗野百合碱所致大鼠肺动脉重构

目的研究淫羊藿次苷Ⅱ(ICSⅡ)对野百合碱(MCT)所致大鼠肺动脉重构的作用,并探讨其对ERK1/2-NF-κB信号通路的影响。方法 SD大鼠随机分为对照组(Control)、ICS II单纯给药组(Control+ICSⅡ-H,16 mg/kg)、模型组(Model)、ICS II低、中、高剂量组(ICS II-L、ICS II-M、ICS II-H,4、8、16 mg/kg),每组6只。Model组和ICSⅡ低、中、高剂量组经颈背部一次性皮下注射MCT(50 mg/kg)诱导肺动脉重构模型。造模后第1天开始给药至第28天结束。H&E染色观察肺小动脉病理改变;免疫组织化学法检测肺小动脉PCNA、p-ERK1/2、p-NF-κB蛋白的表达。结果与Control组比较,Model组肺小动脉中膜明显肥厚;PCNA、p-ERK1/2、p-NF-κB蛋白的水平明显升高(P<0.05)。与Model组相比,ICSⅡ-M、ICSⅡ-H剂量组肺动脉中膜肥厚显著改善;PCNA、p-ERK1/2、p-NF-κB蛋白的水平明显降低(P<0.05)。结论 ICSⅡ具有抗MCT所致大鼠肺动脉重构的作用,其机制可能与抑制ERK1/2-NF-κB信号通路有关。

基于PKCβ/Erk1/2/NF-κB信号通路探讨补中益气汤对自身免疫性甲状腺炎小鼠的影响

目的观察补中益气汤对自身免疫性甲状腺炎(AIT)小鼠PKCβ/Erk1/2/NF-κB信号通路的影响,探讨其治疗AIT的作用机制。方法80只8周龄NOD.H-2^(h4)小鼠随机分为对照组、模型组、中药组和硒酵母片组,每组20只。对照组饮用蒸馏水,其余各组予0.05%碘化钠溶液自由饮用8周建立AIT小鼠模型。各给药组灌胃给予相应药物给药8周。HE染色观察甲状腺组织形态,ELISA测定血清甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)含量,RT-qPCR检测甲状腺组织蛋白激酶Cβ(PKCβ)、细胞外信号调节蛋白激酶1/2(Erk1/2)、核因子(NF)-κBp65、维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)和白细胞介素(IL)-17 mRNA表达,Western blot检测甲状腺组织PKCβ、Erk1/2、NF-κBp65、RORγt、IL-17蛋白表达。结果与对照组比较,模型组小鼠甲状腺组织出现大量淋巴细胞浸润,血清TGAb、TPOAb含量明显升高(P<0.001),甲状腺组织PKCβ、Erk1/2、NF-κBp65、RORγt、IL-17 mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.001);与模型组比较,中药组和硒酵母片组小鼠甲状腺组织淋巴细胞浸润减轻,血清TGAb、TPOAb含量明显降低(P<0.001),甲状腺组织PKCβ、Erk1/2、NF-κBp65、RORγt、IL-17 mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.001),中药组与硒酵母片组各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论补中益气汤可能通过调控PKCβ/Erk1/2/NF-κB信号通路减轻AIT小鼠炎症反应,改善甲状腺组织淋巴细胞浸润状态。

H_(2)O_(2)-纳滤组合工艺深度处理地表水试验

尽管纳滤膜技术适用于地表水处理领域,但在处理过程中会受到膜污染和可溶性有机物截留率低等问题的限制。为了解决以上问题,研究研发了一种新的组合工艺(H_(2)O_(2)-纳滤组合工艺),旨在增加地表水处理效果和缓解纳滤膜污染。文章研究了H_(2)O_(2)处理作为纳滤处理地表水前的预处理,进行过滤试验以评估H_(2)O_(2)氧化预处理对膜处理地表水的截留性能、纳滤膜污染的影响。结果表明,相比于单独的H_(2)O_(2)氧化处理和单独的纳滤膜过滤处理,H_(2)O_(2)-纳滤组合工艺对地表水的处理效果增强,对UV254、总有机碳(TOC)的最高去除率分别为97.6%、98.5%,对TDS和电导率的最高去除率分别为51.1%和50.9%。H_(2)O_(2)氧化可以将地表水中的大分子有机污染物氧化为小分子或CO_(2)和H_(2)O等无机物,所以将H_(2)O_(2)氧化作为膜前预处理减轻了58.5%的膜通量降低,缓解了纳滤膜表面大部分的膜污染。此外,该工艺对地表水的荧光类有机物也具有显著的去除率。基于该组合工艺出色的工艺性能,可以得出结论,H_(2)O_(2)-纳滤工艺在处理地表水方面具有相当大的应用潜力。

利拉鲁肽通过NRF2改善高糖诱导的内皮细胞损伤

目的探讨利拉鲁肽对高糖诱导的血管内皮细胞损伤的作用及机制。方法培养脐静脉内皮细胞(HUVECs),将细胞分为4组:对照组、高糖刺激组(HG组)、利拉鲁肽组、利拉鲁肽+HG组。采用ELISA法检测各组炎症细胞因子的分泌,采用试剂盒检测细胞内活性氧(ROS)的水平;采用试剂盒检测各组超氧化物歧化酶2(SOD2)和Gpx4的活性以及丙二醛(MDA)的水平;采用试剂盒检测一氧化氮(NO)含量;采用免疫印迹和免疫荧光染色法检测NRF2的核转位情况。结果HG组细胞肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)、白细胞介素(IL-1)和IL-6的水平相比对照组升高;细胞内ROS的水平增加,MDA水平增加,SOD2和Gpx4的活性减少;NO的含量减少;NRF2的核转位也明显减少。与HG组的细胞相比,利拉鲁肽+HG组细胞TNF⁃α、IL-1、IL-6的水平降低,细胞内的ROS水平降低,MDA水平降低,SOD2和Gpx4的活性增加;NO的含量增加;NRF2的核转位也明显增加。结论利拉鲁肽通过增加NRF2的核转位抑制高糖诱导的内皮细胞损伤。

红景天苷调控NF-κB、Bcl-2信号通路对烟雾暴露大鼠氧化应激及肺血管内皮细胞凋亡的影响

目的探究红景天苷(SDS)通过调控B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对烟雾暴露大鼠氧化应激及肺血管内皮细胞凋亡的机制。方法选取60只大鼠分为对照组、模型组、SDS 10 mg/kg、SDS 40 mg/kg、SDS 70 mg/kg、醋酸泼尼松(PNS)组,每组10只,除对照组外,其余均建立烟雾致肺损伤模型,对照组与模型组大鼠每日采用等量生理盐水灌胃;SDS高、中、低剂量组分别按70、40、10 mg/kg剂量给予SDS混悬液2 mL灌胃;PNS组给予PNS混悬液3.6 mg/kg灌胃,均每日1次,连续21 d。结果与对照组比较,模型组大鼠血清中丙二醛(MDA)、Bcl-2相关X因子(Bax)、NF-κB、p-NF-κB及细胞凋亡升高,超氧化物歧化酶(SOD)、Bcl-2降低(P<0.05);与模型组比较,SDS各剂量组MDA、Bax、NF-κB、p-NF-κB及细胞凋亡均有所降低,SOD、Bcl-2也有所升高(P<0.05),且模型组与SDS 10 mg/kg组比较无明显差异(P>0.05),SDS 40 mg/kg组与PNS组比较无明显差异(P>0.05)。对照组大鼠肺组织良好;模型组肺损伤严重;药物干预后各组肺损伤均减轻。结论SDS可改善烟雾暴露大鼠肺损伤、氧化应激及血管内皮细胞凋亡,其机制可能与调控Bax/Bcl-2及NF-κB相关。

木糖醇通过调节PI3K/Akt/FoxO1/NF-κB通路改善2型糖尿病小鼠肾损伤

目的探究木糖醇改善2型糖尿病(T2DM)肾损伤的作用机制。方法将小鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病对照组(DC组)、10%木糖醇组(DX10组)、20%木糖醇组(DX20组),每组6只。除NC组外,其余各组小鼠均用链脲佐菌素(40 mg/kg)构建T2DM模型。造模成功后,在正常饲料中加入不同比例的木糖醇连续喂养8周。通过试剂盒检测小鼠空腹血糖(FBG);采用ELISA法测定血清中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;比色法检测肾组织过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)和总抗氧化能力(T-AOC);苏木精-伊红(H-E)染色观察肾组织的形态学变化;Western-blot法检测小鼠肾组织p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-FoxO1、FoxO1、NF-κB、ICAM-1、Bcl-2和Bax蛋白的表达情况。结果(1)与NC组比较,DC组FBG升高(P<0.01),木糖醇干预后下降,且DX20组下降更显著(P<0.05);(2)与NC组比较,DC组IL-6和TNF-α分泌增加(P<0.0001),木糖醇干预后均下降,且DX20组下降更显著(P<0.0001);(3)与NC组比较,DC组CAT和T-AOC活性下降、MDA含量升高(P<0.01),木糖醇干预后,CAT和T-AOC活性升高而MDA含量降低(P<0.05),且DX20组变化更显著(P<0.05);(4)H-E染色显示,木糖醇干预可改善小鼠糖尿病肾损伤,且DX20组效果更佳(P<0.05);(5)Western-blot检测显示,与NC组比较,DC组小鼠肾组织中p-PI3K、p-Akt、p-FoxO1和Bcl-2/Bax均降低(P<0.0001,P<0.001,P<0.01,P<0.001)、NF-κB入核增多(P<0.0001)、ICAM-1升高(P<0.01);与DC组比较,木糖醇干预可逆转相关蛋白的变化,且DX20组变化更显著(P<0.05)。结论木糖醇可通过活化PI3K/Akt/FoxO1及抑制NF-κB通路改善T2DM小鼠肾损伤。

海藻糖激活核因子E2相关因子2改善缺氧复氧诱导的H9C2心肌细胞损伤的研究

目的通过建立氧糖剥夺-缺氧复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤模型模拟心肌缺血再灌注损伤,探讨海藻糖对OGD/R大鼠H9C2心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法H9C2细胞分为对照组、OGD/R组、海藻糖组(OGD/R+海藻糖)、联合组(OGD/R+海藻糖+ML385)。四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖能力,并通过检测乳酸脱氢酶及Hoechst/丙啶碘化物染色检测细胞膜受损情况。Western blot检测核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)及其下游相关蛋白表达;活性氧、线粒体膜电位检测氧化应激水平;Western blot检测凋亡相关蛋白表达。结果与对照组比较,OGD/R组细胞活力明显降低。与OGD/R组比较,不同浓度海藻糖干预能显著提升细胞活力,与海藻糖浓度呈正相关(P<0.01);与OGD/R组比较,海藻糖组线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、Nrf2、血红素加氧酶1和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸醌氧化还原酶1、Bcl-2、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)表达明显增高,活性氧、丙二醛、应答元素结合蛋白1、Bax、Bax/Bcl-2、裂解型Caspase-3表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与海藻糖组比较,联合组活性氧、丙二醛及肿瘤坏死因子α、白细胞介素(interleukin,IL)1βmRNA、IL-6 mRNA表达明显增高,MMP、GSH水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);联合组Bax、Bax/Bcl-2、裂解型Caspase-3表达明显高于海藻糖组(1.77±0.08 vs 1.20±0.20,3.41±1.45 vs 0.99±0.15,4.10±1.05 vs 1.79±0.52,P<0.01),Bcl-2、Caspase-3表达明显低于海藻糖组(0.58±0.21 vs 1.23±0.25,0.87±0.25 vs 1.45±0.31,P<0.01)。结论海藻糖可以被视为一种Nrf2激活剂,通过激活Nrf2抑制氧化应激和凋亡,改善OGD/R诱导的心肌细胞损伤。

SARS-CoV-2 ORF7a通过靶向IKKβ激活NF-κB信号通路促进细胞炎症因子释放

目的:探究SARS-CoV-2辅助蛋白ORF7a介导NF-κB激活,进而诱导炎症因子产生的分子机制。方法:双荧光素酶报告基因试验检测ORF7a对NF-κB激活的影响,qRT-PCR检测ORF7a对细胞中炎症因子表达的影响,Western blot、核质分离及免疫荧光技术检测ORF7a蛋白对p65磷酸化及入核的影响,免疫共沉淀及免疫荧光技术检测ORF7a的作用靶标蛋白。结果:报告基因试验表明ORF7a显著激活NF-κB启动子活性,并呈剂量依赖性(P<0.001),而对AP-1报告基因的激活无明显影响。ORF7a显著上调细胞因子TNF-α、IL-β及IL-8 mRNA表达(P<0.05)。Western blot结果显示ORF7a显著增强p65蛋白磷酸化(P<0.05)及p65的入核(P<0.01)。免疫共沉淀实验发现ORF7a与NF-κB信号通路分子IKKβ蛋白存在相互作用,免疫荧光实验也证实ORF7a与IKKβ具有共定位。结论:SARS-CoV-2 ORF7a通过靶向IKKβ激活NF-κB信号通路,进而促进细胞中炎症因子的释放。

PCV2感染对仔猪肝脏MyD88-NF-κB信号途径的影响

选取31头经检测猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原和抗体均为阴性的5周龄断奶仔猪,随机分为对照组16头和试验组15头,对照组仔猪每头滴鼻4 mL PBS,试验组仔猪每头滴鼻4 mL 5×105TCID50.mL-1PCV2悬液。于PCV2接种当天剖杀4头仔猪作为对照组,分别于14、21和35 d剖杀4头对照组和5头试验组仔猪,采集肝脏。用激光共聚焦显微镜检测核因子κB/P65(NF-κB/P65)蛋白的核易位变化;蛋白提取法分别提取肝脏细胞核蛋白和胞浆蛋白,Western blot定量检测细胞核中NF-κB/P65和细胞浆中p-IκBα、MyD88蛋白含量的变化;电泳迁移率(EMSA)法检测细胞核中NF-κB DNA的结合率变化。检测结果显示,PCV2接种仔猪,肝脏中NF-κB/P65蛋白核易位逐渐增多,到21 d达到峰值;p-IκBα、MyD88、NF-κB/P65 DNA结合率在接种后均先升高后趋于恢复,并于21 d达到高峰。与对照组仔猪相比,肝脏中MyD88和NF-κB/P65蛋白含量以及NF-κB DNA结合率在14和21 d试验组均显著升高(P<0.05),35 d含量变化不显著;21 d时试验组p-IκBα蛋白含量显著升高。相关性分析显示,NF-κB/P65蛋白含量与MyD88含量、NF-κB DNA结合率之间存在显著正相关,相关系数分别是0.566和0.528。结果表明,PCV2可通过激活MyD88启动NF-κB信号途径;通过IκBα的磷酸化降解激活NF-κB,并促进其进行核易位,使NF-κB与DNA发生结合,调控相关炎性细胞因子的转录和表达。

基于Nrf2/ARE抗氧化应激途径探究乌梅丸对溃疡性结肠炎小鼠的作用机制

目的探究乌梅丸基于核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)抗氧化应激途径对溃疡性结肠炎(UC)小鼠的作用机制。方法将70只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、UC组、美沙拉嗪组(MES组,0.82 g/kg MES)、乌梅丸低剂量组(WMW-L组,按生药5 g/kg)、乌梅丸中剂量组(WMW-M组,按生药10 g/kg)、乌梅丸高剂量组(WMW-H组,按生药20 g/kg)和乌梅丸高剂量+Nrf2抑制剂ML-385组(WMW-H+ML-385组,乌梅丸按生药20 g/kg+20 mg/kg ML-385),每组10只。末次给药后,对小鼠进行疾病活动指数(DAI)评分及结肠黏膜损伤评分。HE染色观察小鼠结肠黏膜组织的病理学变化。酶联免疫吸附试验(ELISA)测定小鼠血清和结肠组织白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6水平。硫代巴比妥酸比色法(TBA)测定小鼠血清和结肠组织丙二醛(MDA)含量。黄嘌呤氧化酶法测定小鼠血清和结肠组织超氧化物歧化酶(SOD)活性。二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)直接法测定小鼠血清和结肠组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)活力。免疫组织化学染色法观察小鼠结肠组织中Nrf2的阳性表达。Western blot检测小鼠结肠组织血红素加氧酶1(HO-1)和NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)蛋白的表达情况。结果与对照组相比,UC组小鼠DAI评分、结肠黏膜损伤评分、结肠组织病理学评分升高,血清和结肠组织中IL-1β、TNF-α、IL-6、MDA水平升高,结肠组织Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达升高,血清和结肠组织中SOD、GSH-px水平降低(P<0.05),结肠黏膜损伤严重。与UC组相比,MES组、WMW-M组、WMW-H组小鼠相应指标变化与上述相反,而结肠组织Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达升高(P<0.05),结肠黏膜损伤减轻。WMW-L组、WMW-M组、WMW-H组各指标变化呈剂量依赖性。WMW-H组与MES组差异无统计学意义;ML-385减弱了高剂量乌梅丸对UC小鼠结肠黏膜损伤的改善作用。结论乌梅丸可能通过激活Nrf2/ARE抗氧化应激途径减轻UC小鼠的结肠黏膜损伤。