基于DNA-BSA重测序和SSR技术的番茄ty-5基因分子标记的筛选

利用DNA-BSA重测序和SSR标记技术对番茄黄化曲叶病毒抗病基因ty-5开展定位研究。DNA-BSA重测序获得7个与番茄ty-5基因相关的侯选区域,分别位于1,4,9号染色体上,总长度为21.68Mb。利用SSR标记获得C_2at4g34700和SSR383标记,与番茄抗黄化曲叶病毒病基因ty-5紧密连锁,并且没有发现重组单株。最后,对DNA-BSA重测序和SSR标记结果联合分析,标记C_2at4g34700和SSR383位于重测序关联分析的1号和9号染色体的抗病关联区域附近。由此初步认定,这2个标记可以作为番茄抗黄化曲叶病毒病ty-5基因的分子标记。

经典水墨动画运用于幼儿园中华优秀传统文化教育中的可为、难为与应为

极具民族文化特色的经典水墨动画兼具飘逸空灵的艺术表现形式、丰富鲜活的中国故事和“游”“悟”的精神境界,具有唤美、启智和养性的整全性教育价值,是幼儿园中华优秀传统文化教育中精气神兼备的可用资源。当前,幼儿园传统文化教育是落实立德树人根本任务和铸牢中华民族共同体意识的奠基性教育工程,应充分运用包括经典水墨动画在内的中华优秀传统文化资源。然而,目前经典水墨动画在幼儿园的运用却面临缺乏运用意识、缺少运用资源和欠缺运用能力等困境。因此,应重塑价值,立教育意识;优化条件,拓教育资源;畅通成长,强教育能力。

“大思政课”视域下大学生就业能力培养的困境与路径研究

“大思政课”视域下大学生就业能力培养的研究,是基于深化高等教育改革创新、提升高校人才培养实效的战略考量,是新时代中国特色社会主义教育强国建设的重要探索与实践。文章分析了“大思政课”视域下大学生就业能力培养的内涵,指出“大思政课”视域下大学生就业能力培养面临着与专业教育教学、校园文化、网络文化建设以及与社会实践有机结合不充分等困境。通过对困境的分析,文章提出提升大学生就业能力包括将大学生就业能力培养融入课程教育教学、融入校园文化、融入网络文化建设以及融入社会实践这样几条路径。

多重PCR技术鉴定番茄Ty-2和Ty-3基因及田间验证

本研究采用多重PCR方法对与抗番茄黄化曲叶病毒病(tomato yellow leafcurl virus,TYLCV)的Ty-2和Ty-3基因紧密连锁的共显性SCAR标记进行扩增筛选,不同基因型(Ty-2/Ty-2,Ty-2/ty-2,ty-2/ty-2,ty-3/ty-3)的材料扩增出不同长度的特异片段,建立了一种快速检测抗TYLCV基因的技术。利用该技术对22份番茄材料进行检测,同时利用普通PCR对上述材料进行检测,两者结果完全吻合。最后用田间自然发病的方法在大田对这些材料抗性进行验证,符合率达86.4%。

多重PCR技术鉴定番茄Ty-1和Mi基因

利用同一PCR反应体系,对分别与番茄(Lycopersion esculentum)抗黄化曲叶病毒(Tomato YellowLeaf Curl virus)病的Ty-1基因和番茄抗根结线虫(root-knot nematode)的Mi基因紧密连锁的SCAR标记进行同时扩增筛选,扩增的特异性片段与单引物扩增片段完全吻合。与Ty-1基因紧密连锁的SCAR1标记为共显性标记,抗感材料均产生398bp的特异片段,纯合和杂合抗病基因型存在Taq I酶切位点,酶切后分别产生了303bp和95bp以及398bp、303bp和95bp的特异性片段,而感病基因型无此酶切位点。与Mi基因紧密连锁的SCAR2标记也为共显性标记,抗感材料均产生750bp的特异片段,纯合和杂合抗病基因型存在Taq I酶切位点,酶切后分别产生了570bp和180bp以及750bp、570bp和180bp的特异性片段,而感病基因型无此酶切位点。酶切结果仍为750bp的产物。经反复验证,结果准确可靠,可以用于在同一PCR反应体系中对两个抗病基因进行同时筛选鉴定。

利用多重PCR反应同时筛选番茄Ty-1和cf-5基因

利用同一PCR反应体系同时扩增、筛选分别与番茄抗黄化曲叶病毒病的Ty-1基因和番茄抗叶霉病的cf-5基因紧密连锁的SCAR标记,扩增的特异性片段与单引物扩增片段完全吻合。与Ty-1基因紧密连锁的SCAR1标记为共显性标记,抗感材料均产生398bp的特异片段,纯合和杂合抗病基因型存在TaqI酶切位点,酶切后分别产生了303bp和95bp以及398、303bp和95bp的特异性片段,而感病基因型无此酶切位点,酶切后仍呈现398bp的特异带。与cf-5基因紧密连锁的SCAR2标记扩增后抗感材料均产生960bp的特异片段,用限制性内切酶TaqI酶切后,含cf-5基因的材料产生一条256bp的特异带,而不含cf-5基因的材料产生一条225bp的特异带。

含Ty-5基因番茄材料的引进、评价及利用

本文引进了含有Ty-5基因的栽培番茄材料,并对材料进行了抗性鉴定、评价及分子标记的检测,结果显示,Ty-5基因对TYLCV具有较高的抗性,该基因的利用为番茄新品种选育奠定了基础。

番茄抗病基因Ty-1的CAPS标记及检测

为了获得番茄抗病基因Ty-1的分子标记,利用特异引物对3份抗病纯合材料(基因型Ty-1/Ty-1)和3份感病纯合材料(基因型ty-1/ty-1)进行PCR扩增,抗病、感病材料均产生400bp的PCR扩增片段,感病和杂合抗病材料的酶切产物存在RsaⅠ酶切位点,酶切后分别产生了350、50bp以及400、350、50bp的片段,而抗病纯合材料的扩增产物无此酶切位点,酶切后仍为400bp的片段。该标记能够区分抗病材料、感病材料及杂合抗病材料,是与番茄黄化曲叶病毒病抗病基因Ty-1紧密连锁的共显性标记。利用该标记对33份番茄F1进行检测,有20份材料含有抗病基因Ty-1,13份材料不含抗病基因Ty-1。利用该标记对国内的24份番茄自交系进行检测,24份材料均不含抗病基因Ty-1。经反复验证,结果准确可靠,该标记可以用于对番茄抗病基因Ty-1的筛选鉴定。

抗番茄黄化曲叶病基因ty-5序列变异及表达分析

番茄黄化曲叶病是番茄的主要病害之一,选育抗病品种是抵御该病害的重要途径。本研究对目前应用较少的抗番茄黄化曲叶病基因(ty-5)进行研究,对克隆片段进行序列分析,确定该基因在启动子区域和转录区域均存在碱基突变,并利用含有该基因的抗病材料AVTO1227对ty-5的表达进行分析,不同材料中ty-5及其等位基因Ty-5的表达量在接种番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)前后均没有显著变化。本研究为下一步针对ty-5翻译区域内单核苷酸变异导致其功能变化的研究提供了依据,同时也为抗番茄黄化曲叶病育种提供了有效的连锁标记。

抗TY红果番茄新品种长丰10号的选育

番茄新品种长丰10号是以R025自交系为母本,以R018自交系为父本于2011年配制的杂交一代良种。无限生长红果类型,生长势强,叶片较大,中早熟。坐果率高,连续结果能力强,平均每667 m2产量7 600 kg左右。萼片基平,果实高圆形,果柄短,无绿色果肩,果脐小,表面光滑,外形美观。果实硬度好,耐贮运,货架寿命长,单果质量200 g左右,大小均匀。可溶性固形物含量5.7%,总糖3.34%,总酸0.335%。含有Ty-1、Ty-3基因,抗番茄黄化曲叶病毒病(抗TY)。适宜在陕西省及同等生态区日光温室和塑料大棚栽培。

抗番茄黄化曲叶病基因Ty-2的SSR新标记

采用集合分离分析法(Bulked segregant analysis,BSA),结合SSR分子标记技术筛选与抗病基因Ty-2连锁的标记。将感病材料TMXA48-4-0与含有Ty-2的抗病材料CLN2777A杂交,获得F2分离群体。利用前人初步定位的结果及构建的番茄SSR遗传图谱,选择11号染色体上TG36与TG393标记之间的SSR标记对构建的抗感池进行筛选分析,结果得到1个与Ty-2紧密连锁的呈共显性的分子标记TES0344,遗传距离为6.7 cM。利用F2分离群体和10份同源材料进一步验证了SSR标记TES0344的可靠性和稳定性,因此该标记可用于今后抗番茄黄化曲叶病毒病育种的辅助选择。

番茄黄化曲叶病毒病抗病基因TY-1的PCR检测

利用特异引物对3份抗病纯合材料(基因型Ty-1/Ty-1)和4份感病纯合材料(基因型ty-1/ty-1)进行PCR扩增,抗、感材料均产生398bp的PCR扩增片段,抗病和杂合抗病材料的酶切产物存在Taq I酶切位点,酶切后分别产生了303和98bp以及398、303和98bp的片段,而纯合感病材料的扩增产物无此酶切位点,酶切后仍为398bp的片段。该标记能够区分抗病材料、感病材料及抗病杂合材料,是与番茄黄化曲叶病毒病抗病基因Ty-1紧密连锁的共显性标记。利用该标记对13份番茄杂交种进行检测,有8份杂交种含有Ty-1抗病基因,3份材料不含Ty-1抗病基因。利用这条标记对国内的13份番茄自交系进行检测,13份材料均不含Ty-1抗病基因。

番茄黄化卷叶病毒病抗病基因Ty-1的CAPS标记建立

本研究旨在筛选获得与番茄黄化卷叶病毒抗病基因Ty-1紧密连锁的分子标记,为番茄抗病育种提供技术支撑。根据与抗病基因Ty-1紧密连锁的RFLP标记序列设计特异引物,以抗病杂合体(Ty-1/ty-1)、抗病纯合体(Ty-1/Ty-1)和感病纯合体(ty-1/ty-1)材料提取的DNA为模板,进行PCR扩增,而后经不同的核酸内切酶酶切处理,筛选获得与Ty-1基因紧密连锁的CAPS标记。结果显示从4个标记中筛选获得了2个稳定可靠的CAPS标记,即TG97和Mi23。TG97标记在抗病杂合体产生398bp、303bp和95bp3个特异片段,抗病纯合体产生303bp和95bp2个特异片段,感病纯合体产生398bp1个特异片段。Mi23标记在抗病杂合体产生402bp和354bp2个特异片段,抗病纯合体产生402bp1个特异片段,感病纯合体产生354bp1个特异片段。研究结果表明TG97和Mi23这2个CAPS标记均为共显性标记,可用于番茄抗病育种的辅助选择中。

抗TY粉果番茄新品种郑番12158的选育

郑番12158是以自交系10Y153-混1为母本,以品11为父本配制而成的早熟番茄一代杂种。无限生长类型,生长势较强。7-8片叶着生第1花序,花序间隔3片叶。果实近圆形,幼果微具绿果肩,成熟果粉红色,果肉硬,连续坐果能力强。平均单果质量189g,平均畸裂果率6.9%,商品果率高。果实可溶性固形物含量4.9%,口感酸甜适中,品质优良。每667m2产量5433kg左右,含有抗番茄黄化曲叶病毒病的Ty-1基因及抗叶霉病的cf-9基因,综合抗性强。适合河南省春季和早秋保护地栽培。

番茄种质抗黄化曲叶病毒病Ty-1基因的分子标记分析与田间抗病评价

利用SNP分子标记对12份番茄种质的Ty-1基因连锁标记进行检测,同时采用田间鉴定方法,综合评价番茄种质资源的对番茄黄化曲叶病毒病的抗病性。结果表明FQSH1、FQSH4、FQSH5、FQSH10、FQSH11和FQSH25为纯合抗病资源(基因型Ty-1/Ty-1),田间表现为抗番茄黄化曲叶病毒病;FQZJ6和FQSH34为杂合抗病资源(基因型Ty-1/ty-1),田间表现为抗番茄黄化曲叶病毒病。野生2、FQZJ4、FQZJ9和野生3为感病纯合资源(基因型ty-1/ty-1),其中FQZJ4田间表现为抗病,其他为感病。分子标记分析结果与田间鉴定结果基本一致。

温室番茄‘TY196’品种的选育

‘TY196’是以‘S7’为母本、‘ST16’为父本组配而成的抗番茄黄化曲叶病毒(TY)病的番茄新品种,该品种含有ty1、ty3基因。生长势强,中早熟,粉红果。耐低温弱光,硬度高,单果质量250g,可溶性固形物含量平均为4.7%,高抗番茄黄化曲叶病毒病,兼抗烟草花叶病毒、枯萎病、叶霉病、根结线虫、根腐病。适宜于南北方早秋、早春日光温室和大棚越夏栽培。

番茄抗性基因Ty-1的PCR快速检测

利用国内外已发表的10对标记引物对抗番茄黄化曲叶病毒病纯合系"JZ-108"(Ty-1/Ty-1)、感病纯合系"1712"(ty-1/ty-1)及杂交F1代的Ty-1抗性基因进行PCR扩增筛选,筛选出一对特异性引物SSR47,在抗病纯合材料中产生750 bp的扩增片段,感病材料中产生640 bp的片段,抗病杂合材料中同时产生750 bp和640 bp的扩增片段,标记结果与田间鉴定完全一致,证明该标记能够区分抗病材料、感病材料及杂合抗病材料,是与抗番茄黄化曲叶病毒病基因Ty-1紧密连锁的共显性标记。利用该标记对"JZ-108×1712"F2代的48个单株进行检测,有8株为抗病纯合基因型,19株为感病纯合基因型,21株为抗病杂合基因型,其中抗病纯合株与抗病杂合株田间表现均为抗病。经反复验证,结果准确可靠,该标记可用于对番茄抗病基因Ty-1的快速筛选鉴定。

番茄抗病基因Sw-5和Ty-3a的多重PCR检测体系的建立

以含有斑萎病毒和黄化曲叶病毒抗病基因和感病基因的番茄为试材,采用多重PCR方法,建立番茄抗斑萎病毒Sw?5和抗番茄黄化曲叶病毒的Ty?3a基因同时扩增的体系,以期为番茄分子标记抗病育种提供更省时、省力、经济的方法。结果表明:多重PCR扩增的特异性片段与单引物扩增片段完全一致,与Sw?5基因紧密连锁的SCAR标记,在抗病基因型中可扩增出574bp的条带,感病基因型中扩增出464bp的条带;与Ty?3a基因紧密连锁的SCAR标记,在抗病基因型中可扩增出630bp的条带,感病基因型中扩增出320bp的条带,多重PCR体系可在同一PCR反应体系中对2个抗病基因进行筛选鉴定及苗期早期辅助选育。

番茄抗黄化曲叶病毒基因Ty-3的AFLP标记

以感病材料10981为父本(P1),抗病材料10032为母本(P2),通过自交、杂交和回交,获得P1、P2两个亲本和F1、F2、BC1及BC2群体,接种鉴定各世代发病情况。选用288对Eco RⅠ/MseⅠ引物组合对P1、P2两个亲本,F1和F2代群体进行AFLP分析。卡方测验结果表明,抗源材料10032对黄化曲叶病毒的抗性表现为单基因显性遗传。经AFLP引物筛选及遗传连锁分析,获得与抗病基因Ty-3紧密连锁的标记E40/M49,遗传距离为3.4 cM。该研究可为番茄抗TYLCV分子标记辅助选择和抗TYLCV育种奠定基础。

番茄抗黄化曲叶病基因Ty-1的遗传分析与AFLP标记

研究以番茄黄化曲叶病抗病品种"10033"与感病品种"10981"为亲本配制杂交组合,利用P1、P2、F1、F2、BC1P1和BC1P26个世代进行番茄黄化曲叶病抗性基因Ty-1的遗传规律分析。用288对AFLP引物对215株F2代分离群体进行连锁分析。得到4个与番茄黄化曲叶病抗病基因Ty-1连锁的AFLP标记分别是E62M37-D、E51M 44-C、E45M61-E、E40M60-A,与抗病基因Ty-1的连锁遗传距离分别为8.9、17.5、19.6和30.8 cM。