沉默circ_0000218靶向miR-140-3p影响皮肤鳞状细胞癌细胞恶性生物学行为

目的探讨circ_0000218对皮肤鳞状细胞癌(cSCC)细胞恶性生物学行为的影响及可能机制。方法收集21例cSCC组织和21例正常皮肤组织,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测组织中circ_0000218和微小RNA-140-3p(miR-140-3p)表达。体外培养cSCC SCL-1细胞,分别转染si-circ_0000218、miR-140-3p mimics、共转染si-circ_0000218与anti-miR-140-3p后,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法和克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞中活化的胱天蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证circ_0000218和miR-140-3p调控关系。结果cSCC组织中circ_0000218表达量高于正常皮肤组织(P<0.05),而miR-140-3p表达量低于正常皮肤组织(P<0.05);转染si-circ_0000218或miR-140-3p mimics后,cSCC SCL-1细胞光密度(OD)值、集落形成数及划痕愈合率降低(P<0.05),而凋亡率和细胞中Cleaved caspase-3蛋白表达量升高(P<0.05)。circ_0000218靶向负调控miR-140-3p。与转染si-circ_0000218的SCL-1细胞比较,共转染si-circ_0000218与anti-miR-140-3p的SCL-1细胞OD值、集落形成数及划痕愈合率升高(P<0.05),而凋亡率和细胞中Cleaved caspase-3蛋白表达量降低(P<0.05)。结论circ_0000218在cSCC组织中呈高表达,其可能通过靶向抑制miR-140-3p促进cSCC细胞增殖和迁移,而阻碍细胞凋亡,有可能成为cSCC治疗的分子靶点。

Circ_0000218通过调节miR-139-3p/SOX2分子轴促进肾癌发展

目的:探究环状RNA(circRNA)0000218(circ_0000218)/miR-139-3p/SRY盒转录因子2(SOX2)分子轴在调节肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)细胞增殖和转移的作用及其机制。方法:采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肾癌组织和细胞中circ_0000218和miR-139-3p的表达水平,以及肾癌细胞中二者的调控关系,并对43例肾癌患者组织中circ_0000218和miR-139-3p的表达水平进行相关性分析。采用CCK-8和Transwell实验分别检测过表达circ_0000218或miR-139-3p模拟物在细胞中增殖和迁移侵袭的作用。采用StarBase数据库预测miR-139-3p在肾癌样本中的表达与其生存预后信息。采用蛋白质印迹法检测肾癌细胞中circ_0000218或miR-139-3p对SOX2表达水平的影响。最后采用CircInteractome和TargetScan预测,双荧光素酶报告基因实验验证circ_0000218与miR-139-3p,miR-139-3p和SOX2之间的靶向关系。结果:Circ_0000218在肾癌患者癌组织以及细胞系中均显著上调,同时其高表达水平和T分期级别增加,局部淋巴结转移和远处转移显著相关。过表达circ_0000218促进肾癌细胞增殖和转移。而miR-139-3p在肾癌组织和细胞中低表达,且StarBase数据库预测其低表达与肾癌患者生存期呈正相关。Circ_0000218与miR-139-3p表达呈负相关,潜在的机制表明circ_0000218通过调节miR-139-3p/SOX2轴促进肾癌增殖和转移。结论:在RCC中,circ_0000218通过调节miR-139-3p/SOX2轴促进RCC细胞的增殖和转移,并有可能作为诊断性生物标志物和治疗靶点。

circ_0000218靶向miR-1278调控肺癌H1299细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨circ_0000218对肺癌H1299细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法选取2017年1月至2019年1月30例肺癌组织及匹配的癌旁组织;体外培养H1299细胞,分为si-NC组、si-circ_0000218组、miR-NC组、miR-1278组、si-circ_0000218+anti-miR-NC组、si-circ_0000218+anti-miR-1278组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测circ_0000218和miR-1278的表达;MTT、免疫印迹法(Western blot)分别检测细胞活性和相关蛋白表达;Transwell检测细胞的迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因实验检测circ_0000218和miR-1278的靶向关系。结果与癌旁组织比较,肺癌组织中circ_0000218表达水平显著升高miR-1278表达水平显著降低(P<0.05)。干扰circ_0000218表达或过表达miR-1278均显著降低H1299细胞的OD值、迁移和侵袭细胞数以及CyclinD1、MMP-2、MMP-9表达水平,升高p21表达水平(P<0.05)。circ_0000218靶向调控miR-1278表达(P<0.05)。下调miR-1278逆转了干扰circ_0000218表达对H1299细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。结论干扰circ_0000218表达可能通过靶向上调miR-1278抑制肺癌H1299细胞的增殖、迁移和侵袭。