circ_0010729靶向miR-654-3p介导高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡及炎症反应

目的:探讨circ_0010729对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响。方法:将人肾小球系膜细胞HMCL分为对照组、高糖(high glucose,HG)组、HG+si-NC组、HG+si-circ_0010729组、H G+m i R-N C组、 HG+miR-654-3p组、HG+si-circ_0010729+anti-miR-NC组、HG+si-circ_0010729+anti-miR-654-3p组。Real-time PCR检测circ_0010729和miR-654-3p的表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA检测白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;双荧光素酶报告实验验证circ_0010729和miR-654-3p的靶向关系。结果:与对照组比较,HG组circ_0010729表达水平升高,miR-654-3p表达水平降低,细胞凋亡率升高,TNF-α、IL-6水平升高(P<0.05)。抑制circ_0010729表达或过表达miR-654-3p后,高糖诱导的人肾小球系膜细胞中细胞凋亡率降低,TNF-α、IL-6水平降低(P<0.05)。circ_0010729靶向调控miR-654-3p;干扰miR-654-3p表达逆转了抑制circ_0010729表达对高糖诱导的人肾小球系膜细胞凋亡及炎症反应的作用。结论:抑制circ_0010729表达可能通过靶向上调miR-654-3p表达抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡及炎症反应。

地黄多糖调控环状RNA 0010729/miR-326通路对海马神经元缺氧复氧损伤的影响

目的探讨地黄多糖对海马神经元缺氧复氧损伤的影响及其保护机制是否与调控环状RNA 0010729(circ_0010729)和微小RNA-326(microRNA-326,miR-326)表达有关。方法体外培养大鼠海马神经元建立缺氧复氧损伤模型;将大鼠海马神经元分为对照组、模型组、模型+地黄多糖低剂量组、模型+地黄多糖中剂量组、模型+地黄多糖高剂量组、模型+小干扰RNA阴性对照(Small interfering RNA negative control, si-NC)组、模型+si-circ_0010729组、模型+地黄多糖高剂量+空载质粒(Empty plasmid, pcDNA)组、模型+地黄多糖高剂量+pcDNA-circ_0010729组;流式细胞术检测细胞凋亡;试剂盒检测丙二醛(Malonaldehyde, MDA)水平和超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)活性;实时定量聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction, PCR)检测circ_0010729,miR-326表达水平;荧光素酶报告实验确定circ_0010729和miR-326靶向关系。结果与对照组比较,模型组细胞凋亡率、MDA水平、circ_0010729表达水平升高(P<0.05),SOD活性、miR-326表达水平降低(P<0.05);与模型组比较,模型+地黄多糖低剂量组、模型+地黄多糖中剂量组、模型+地黄多糖高剂量组细胞凋亡率、MDA水平、circ_0010729表达水平降低(P<0.05),SOD活性、miR-326表达水平升高(P<0.05);与模型+si-NC组比较,模型+si-circ_0010729组细胞凋亡率、MDA水平降低(P<0.05),SOD活性升高(P<0.05);与模型+地黄多糖高剂量+pcDNA组比较,模型+地黄多糖高剂量+pcDNA-circ_0010729组细胞凋亡率、MDA水平升高(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05)。结论地黄多糖能够有效抑制缺氧复氧诱导的大鼠海马神经元凋亡和氧化损伤,其机制可能与抑制circ_0010729/miR-326通路有关。

circ_0010729通过靶向调控miR-330-5p影响IL-1β诱导的软骨细胞损伤

目的:探讨环状RNA 0010729(circ_0010729)是否靶向调控miR-330-5p影响白细胞介素(IL-1β)诱导的软骨细胞损伤。方法:实时定量PCR(RT-qPCR)分析IL-1β诱导后软骨细胞中circ_0010729和miR-330-5p表达量。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR确定circ_0010729对miR-330-5p的靶向调控作用。流式细胞术分析circ_0010729和miR-330-5p表达对IL-1β诱导软骨细胞凋亡的影响。试剂盒测定IL-6和γ干扰素(IFN-γ)水平。蛋白质印迹法(Western blotting)分析Bcl-2和Bax表达量。结果:IL-1β诱导后软骨细胞中circ_0010729表达量显著升高(P<0.05),而miR-330-5p表达量显著降低(P<0.05)。circ_0010729可通过与miR-330-5p特异性结合并负调控miR-330-5p表达。抑制circ_0010729或过表达miR-330-5p显著降低IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,下调Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,降低IL-6和IFN-γ水平(P<0.05)。下调miR-330-5p表达显著减弱抑制circ_0010729对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡以及炎症反应的影响(P<0.05)。结论:抑制circ_0010729通过靶向miR-330-5p能够减弱IL-1β诱导的软骨细胞损伤。